Эффективный и сбалансированный двунаправленный промотор - RU2018143810A

1. Молекула рекомбинантной нуклеиновой кислоты, содержащая двунаправленный промотор, функционально связанный с первым трансгеном в одном направлении и со вторым трансгеном в противоположном направлении, при этом двунаправленный промотор содержит основной немедленно-ранний энхансер цитомегаловируса в качестве энхансерного структурного блока, фланкированный основным немедленно-ранним промотором цитомегаловируса человека (промотором hCMV) в качестве первого промоторного структурного блока и промотором бета-актина курицы в качестве второго промоторного структурного блока, с гибридным интроном бета-актина курицы/бета-глобина кролика в качестве первого интронного структурного блока, смежным с промотором бета-актина курицы и расположенным ниже него, и с интроном аполипопротеина A-1 человека в качестве второго интронного структурного блока, смежным с промоторным структурным блоком hCMV и расположенным ниже него, при этом двунаправленный промотор содержит последовательность, которая на по меньшей мере 90%, предпочтительно по меньшей мере 95% идентична SEQ ID NO: 4.

2. Молекула рекомбинантной нуклеиновой кислоты по п. 1, где двунаправленный промотор содержит SEQ ID NO: 4.

3. Молекула рекомбинантной нуклеиновой кислоты по любому из пп. 1-2, где первый и второй трансгены являются разными, и по меньшей мере один из них кодирует антиген.

4. Рекомбинантный вектор или рекомбинантный вирус, содержащий молекулу рекомбинантной нуклеиновой кислоты по любому из пп. 1-3.

5. Рекомбинантный вектор по п. 4, где вектор представляет собой плазмидный вектор.

6. Рекомбинантный вирус по п. 4, где вирус представляет собой аденовирус.

7. Рекомбинантный аденовирус по п. 6, где аденовирус предусматривает делецию в участке E1.

8. Рекомбинантный аденовирус по п. 6 или 7, где аденовирус представляет собой аденовирус человека серотипа 35 или аденовирус человека серотипа 26.

9. Способ получения генетически стабильного рекомбинантного аденовируса, содержащего первый и второй трансгены, где каждый из них эффективно экспрессируется, в случае если аденовирус инфицирует целевую клетку, при этом способ включает:

a) получение конструкции, содержащей двунаправленный промотор, определенный в п. 1, функционально связанный с первым трансгеном в одном направлении и со вторым трансгеном в противоположном направлении; и b) встраивание указанной конструкции в геном рекомбинантного аденовируса.

10. Способ по п. 9, где рекомбинантный аденовирус предусматривает делецию в участке E1 его генома.

11. Способ по любому из пп. 9-10, где первый и второй трансгены являются разными, и по меньшей мере один из них кодирует антиген.

12. Способ по любому из пп. 9-11, где рекомбинантный аденовирус представляет собой аденовирус человека серотипа 35 или аденовирус человека серотипа 26.

13. Способ экспрессирования по меньшей мере двух трансгенов в клетке, при этом способ включает доставку в клетку рекомбинантного вектора или рекомбинантного вируса по любому из пп. 4-8.

14. Способ индуцирования иммунного ответа против по меньшей мере двух антигенов, при этом способ включает введение субъекту рекомбинантного вектора или рекомбинантного вируса по любому из пп. 4-8.

15. Молекула рекомбинантной ДНК, содержащая геном рекомбинантного аденовируса по любому из пп. 6-8.

16. Фармацевтическая композиция, содержащая рекомбинантный вектор или рекомбинантный вирус по любому из пп. 4-8 и фармацевтически приемлемые носитель или вспомогательное вещество.