Культивирование эпителиальных стволовых клеток в жидких питательных средах - RU2015140912A
Код документа: RU2015140912A
Формула
1. Способ культивирования в жидких питательных средах (а) эпителиальных стволовых клеток и/или (b) выделенных фрагментов эпителиальной ткани, включающих эпителиальные стволовые клетки, при этом способ включает культивирование эпителиальных стволовых клеток и/или выделенных фрагментов ткани в жидкой клеточной культуре, включающей базальную питательную среду для клеток животных или человека, в которую добавлен (i) ингибитор Костного Морфогенетического Белка (BMP), (ii) митогенный фактор роста, (iii) агонист Wnt и (iv), по меньшей мере, 4% в/об внеклеточного матрикса (ЕСМ).
2. Способ получения и/или выращивания крипты, при этом способ включает инкубирование эпителиальных стволовых клеток и/или выделенных фрагментов ткани в жидкой клеточной культуре, включающей базальную питательную среду для клеток животных или человека, в которую добавлен (i) ингибитор Костного Морфогенетического Белка (BMP), (ii) митогенный фактор роста, (iii) агонист Wnt и (iv), по меньшей мере, 4% в/об внеклеточного матрикса (ЕСМ).
3. Способ по любому из пп. 1 и 2, отличающийся тем, что ингибитор BMP представляет собой Noggin, DAN и/или DAN-подобные белки, включая Cerberus и Gremlin.
4. Способ по п. 3, отличающийся тем, что ингибитор BMP представляет собой Noggin.
5. Способ по любому из пп. 1, 2 и 4, отличающийся тем, что ингибитор BMP содержится в концентрации от около 5 до около 500 нг/мл в жидкой клеточной культуре (например, от около 50 до около 100 нг/мл).
6. Способ по любому из пп. 1, 2 и 4, отличающийся тем, что агонист Wnt представляет собой Wnt, R-спондин (RSPO), Norrin и/или GSK-ингибитор.
7. Способ по п. 6, отличающийся тем, что агонист Wnt представляет собой RSPO.
8. Способ по любому из пп. 1, 2, 4, 7, отличающийся тем, что агонист Wnt содержится в концентрации от около 500 нг/мл до около 5 мкг/мл в жидкой клеточной культуре (например, от около 500 до около 1500 нг/мл).
9. Способ по любому из пп. 1, 2, 4, 7, отличающийся тем, что митогенный фактор роста представляет собой эпидермальный фактор роста (EGF), трансформирующий фактор роста-альфа (TGF-α), основный фибробластный фактор роста (bFGF), нейротропный фактор мозга (BDNF) и кератиноцитный фактор роста (KGF).
10. Способ по п. 9, отличающийся тем, что митогенный фактор роста представляет
собой EGF.
11. Способ по любому из пп. 1, 2, 4, 7, 10, отличающийся тем, что митогенный фактор роста содержится в концентрации от около 5 до около 500 нг/мл в жидкой клеточной культуре (например, от около 5 до около 50 нг/мл).
12. Способ по любому из пп. 1, 2, 4, 7, 10, отличающийся тем, что ЕСМ представляет собой ЕСМ без фактора роста.
13. Способ по любому из пп. 1, 2, 4, 7, 10, отличающийся тем, что ЕСМ представляет собой matrigel.
14. Способ по любому из пп. 1, 2, 4, 7, 10, отличающийся тем, что ЕСМ содержится в концентрации от около 4% до около 10% в/об в жидкой клеточной культуре.
15. Способ по любому из пп. 1, 2, 4, 7, 10, отличающийся тем, что культуральчая среда также включает ингибитор Rock (Rho-киназы).
16. Способ по любому из пп. 1, 2, 4, 7, 10, отличающийся тем, что культуральная среда также включает агонист Notch.
17. Способ по любому из пп. 1, 2, 4, 7, 10, отличающийся тем, что эпителиальные стволовые клетки и/или фрагменты эпителиальной ткани представляют собой желудочно-кишечные стволовые клетки и/или фрагменты желудочно-кишечной ткани.
18. Способ по п. 17, отличающийся тем, что желудочно-кишечные стволовые клетки и/или фрагменты желудочно-кишечной ткани представляют собой стволовые клетки тонкого кишечника и/или фрагменты ткани тонкого кишечника.
19. Крипта, полученная с помощью способов по любому из пп. 1-18.
20. Применение крипты по п. 19 в рамках лекарственного скрининга, анализа токсичности или в регенеративной медицине.
