Укороченный фисферлин для лечения фисферлинопатии - RU2019100990A
Код документа: RU2019100990A
Формула
1. Полинуклеотид, кодирующий укороченный полипептид дисферлина млекопитающего, где по меньшей мере значительная часть каждого из доменов C2D и C2F полипептида делетирована.
2. Полинуклеотид по п.1, где по меньшей мере значительная часть домена C2E полипептида делетирована.
3. Полинуклеотид по п.1 или 2, где полипептид содержит по меньшей мере значительную часть доменов C2A, C2C, FerA, DysF, C2G и TM.
4. Полинуклеотид по любому из пп. 1-3, где полипептид содержит по меньшей мере значительную часть доменов C2A, C2B, C2C, FerA, DysF, C2G и TM.
5. Полинуклеотид по любому из пп. 1-4, где полипептид дисферлина представляет собой полипептид дисферлина человека.
6. Полинуклеотид по любому из пп. 1-5, где полинуклеотид представляет собой:
(a) полинуклеотид, содержащий последовательность, по меньшей мере на 80% идентичную любой из SEQ ID NO: 1-5;
(b) полинуклеотид, содержащий последовательность, кодирующую полипептид, по меньшей мере на 80% идентичный любой из SEQ ID NO:6-10; или
(c) полинуклеотид, который отличается от полинуклеотида из (a) или (b) из-за вырожденности кодонов.
7. Полинуклеотид по любому из пп. 1-6, где полинуклеотид представляет собой:
(a) полинуклеотид, содержащий последовательность, идентичную любой из SEQ ID NO: 1-5;
(b) полинуклеотид, содержащий последовательность, кодирующую полипептид, идентичный любой из SEQ ID NO:6-10; или
(c) полинуклеотид, который отличается от полинуклеотида из (a) или (b) из-за вырожденности кодонов.
8. Экспрессирующая кассета, содержащая полинуклеотид по любому из пп. 1-7.
9. Экспрессирующая кассета по п.8, где полинуклеотид является функционально связанным с промотором.
10. Вектор, содержащий полинуклеотид по любому из пп. 1-7 или экспрессирующую кассету по п.8 или 9.
11. Вектор по п.10, представляющий собой вирусный вектор.
12. Вектор по п.11, представляющий собой аденоассоциированный вирусный (AAV) вектор.
13. Трансформированная клетка, содержащая полинуклеотид по любому из пп. 1-7, экспрессирующую кассету по п.8 или 9, и/или вектор по любому из пп. 10-12.
14. Трансгенное животное, содержащее полинуклеотид по любому из пп. 1-7, экспрессирующую кассету по п.8 или 9, вектор по любому из пп. 10-12 и/или трансформированную клетку по п.13.
15. Укороченный полипептид дисферлина млекопитающего, где по меньшей мере значительная часть каждого из доменов C2D и C2F полипептида делетирована.
16. Полипептид по п.15, где по меньшей мере значительная часть домена C2E полипептида делетирована.
17. Полипептид по п.15 или 16, где полипептид содержит по меньшей мере значительную часть доменов C2A, C2C, FerA, DysF, C2G и TM.
18. Полипептид по любому из пп. 15-17, где полипептид содержит по меньшей мере значительную часть доменов C2A, C2B, C2C, FerA, DysF, C2G и TM.
19. Полипептид по любому из пп. 15-18, где полипептид дисферлина представляет собой полипептид дисферлина человека.
20. Полипептид по любому из пп. 15-19, где полипептид представляет собой:
(a) полипептид, кодируемый полинуклеотидом, содержащим последовательность, по меньшей мере на 80% идентичную любой из SEQ ID NO: 1-5; или
(b) полипептид, содержащий последовательность, по меньшей мере на 80% идентичную любой из SEQ ID NO:6-10.
21. Полипептид по любому из пп. 15-20, где полипептид представляет собой:
(a) полипептид, кодируемый полинуклеотидом, содержащим последовательность, идентичную любой из SEQ ID NO: 1-5; или
(b) полипептид, содержащий последовательность, идентичную любой из SEQ ID NO:6-10.
22. Рекомбинантная частица AAV, содержащая полинуклеотид по любому из пп. 1-7 или экспрессирующую кассету по п.8 или 9.
23. Способ получения рекомбинантной частицы AAV, включающий предоставление клетке, пермиссивной по репликации AAV:
(a) рекомбинантной матрицы AAV, содержащей (i) полинуклеотид по любому из пп. 1-7 или экспрессирующую кассету по п.8 или 9, и (ii) инвертированный концевой повтор (ITR);
(b) полинуклеотида, содержащего кодирующие последовательности Rep и кодирующие последовательности Cap;
в условиях, подходящих для репликации и упаковки рекомбинантной матрицы AAV;
посредством чего рекомбинантные частицы AAV продуцируются в клетке.
24. Способ по п.23, где кодирующие последовательности Rep и Cap не могут быть упакованы в рекомбинантные частицы AAV.
25. Способ по пп.23 или 24, где кодирующие последовательности Rep и/или Cap предоставлены посредством плазмиды.
26. Способ по пп. 23 или 24, где кодирующие последовательности Rep и/или Cap предоставлены посредством вирусного вектора.
27. Способ по п.26, где вирусный вектор выбран из группы, состоящей из аденовирусного вектора, вектора на основе вируса герпеса, вектора на основе вируса Эпштейна-Барр и бакуловирусного вектора.
28. Способ по любому из пп. 23-27, где кодирующие последовательности Rep являются стабильно интегрированными в клетку.
29. Способ по любому из пп. 23-28, где кодирующие последовательности Cap являются стабильно интегрированными в клетку.
30. Способ по любому из пп. 23-29, где рекомбинантная матрица AAV предоставлена посредством плазмиды или вирусного вектора или является стабильно интегрированной в клетку в форме провируса.
31. Способ доставки дисферлина в клетку, включающий приведение клетки в контакт с рекомбинантной частицей AAV по п.22, таким образом, доставку дисферлина в клетку.
32. Способ по п.31, где клетка выбрана из группы, состоящей из гладкомышечной клетки, клетки скелетной мышцы, клетки сердечной мышцы, зародышевой клетки, клетки-предшественника и стволовой клетки.
33. Способ введения дисферлина субъекту-млекопитающему, включающий введение субъекту-млекопитающему клетки, которую приводили в контакт с рекомбинантной частицей AAV по п.22, таким образом, введение дисферлина субъекту-млекопитающему.
34. Способ лечения дисферлинопатии у нуждающегося в этом субъекта-млекопитающего, включающий введение субъекту-млекопитающему клетки, которую приводили в контакт с рекомбинантной частицей AAV по п.22, таким образом, лечение дисферлинопатии.
35. Способ введения дисферлина субъекту-млекопитающему включающий введение субъекту-млекопитающему рекомбинантной частицы AAV по п.22, таким образом, введение дисферлина субъекту-млекопитающему.
36. Способ лечения дисферлинопатии у нуждающегося в этом субъекта млекопитающего, включающий введение субъекту-млекопитающему рекомбинантной частицы AAV по п.22, таким образом, лечение дисферлинопатии.
37. Способ по любому из пп. 33-36, где субъект представляет собой субъекта-человека.
38. Способ по любому из пп. 35-37, где частицу AAV вводят способом, выбранным из группы, состоящей из перорального, ректального, чресслизистого, чрескожного, ингаляционного, внутривенного, подкожного, внутрикожного, интракраниального, внутримышечного, интраэндотелиального, внутрисуставного введения и местной перфузии конечности.
39. Способ по любому из пп. 35-37, где частицу AAV вводят в участок, выбранный из группы, состоящей из скелетной мышцы, гладкой мышцы, сердца и диафрагмы.
