Среда для формирования колоний и её применение - RU2018133339A
Код документа: RU2018133339A
Формула
1. Мезенхимальная стволовая клетка (MSC), экспрессирующая miR-145-5p, miR-181b-5p и miR-214-3р, но не miR-127-3р или miR-299-5p.
2. Мезенхимальная стволовая клетка (MSC) по п. 1, имеющая фенотип CD73+CD105+CD90+CD146+CD44+CD10+CD31-CD45.
3. Способ получения мезенхимальной стволовой клетки (MSC), включающий:
а) культивирование первичной мезодермальной клетки, возможно первичной мезодермальной клетки с мезенхимоангиобластным (МСА) потенциалом, возможно первичной мезодермальной клетки с МСА-потенциалом, которая имеет фенотипEMHlin-KDR+APLNR+PDGFRaльфa+, в среде для формирования мезенхимальных колоний (M-CFM), содержащей LiCl и FGF2, но в отсутствие PDGF, в условиях с нормальным содержанием кислорода в течение достаточного времени для формирования мезенхимальной колонии; и
б) культивирование мезенхимальной колонии со стадии (а) в адгезивном состоянии с получением MSC,
где MSC со стадии (б) обладает улучшенными свойствами иммуносупрессии Т-клеток, возможно супрессии пролиферации Т-хелперных (CD4+) лимфоцитов, по сравнению с MSC, не продуцированной в указанной M-CFM.
4. Способ по п. 3, где достаточное время для формирования мезенхимальных колоний составляет от примерно 8 суток до примерно 14 суток, от примерно 10 суток до примерно 14 суток, от примерно 11 до примерно 13 суток или примерно 12 суток.
5. Способ по п. 3, где свойства иммуносупрессии Т-клеток MSC определяют относительно MSC, полученной способом, включающим:
а') культивирование первичной мезодермальной клетки в среде, содержащей FGF2 и возможно PDGF, но в отсутствие LiCl, в условиях с нормальным содержанием кислорода в течение достаточного времени для формирования мезенхимальных колоний; и
б') культивирование мезенхимальных колоний со стадии (а') в адгезивном состоянии с получением MSC,
возможно, где свойства иммуносупрессии Т-клеток MSC определяют относительно MSC, полученной из первичной мезодермальной клетки, дифференцированной из PSC (плюрипотентная стволовая клетка) в среде для дифференцировки, содержащей FGF2, ВМР4, Активны А и LiCl, в гипоксических условиях в течение примерно двух суток.
6. Способ по п. 3, где M-CFM содержит:
примерно 1 мМ LiCl; или от примерно 5 нг/мл до примерно 100 нг/мл FGF2, или от примерно 10 нг/мл до примерно 50 нг/мл FGF2, примерно 10 нг/мл FGF2 или примерно 20 нг/мл FGF2; или примерно 1 мМ LiCl и примерно 10 нг/мл FGF2, или примерно 1 мМ LiCl и примерно 20 нг/мл FGF2.
7. Способ по п. 3, дополнительно включающий, перед культивированием первичной мезодермальной клетки, дифференцировку плюрипотентной стволовой клетки (PSC), возможно индуцированной PSC (iPSC), в первичную мезодермальную клетку, включающую:
культивирование PSC в среде для дифференцировки, содержащей FGF2, ВМР4, активин А и LiCl, в гипоксических условиях в течение примерно двух суток с образованием первичной мезодермы; и
замену среды для дифференцировки на M-CFM, содержащую LiCl и FGF2, но в отсутствие PDGF.
8. Способ по п. 3, где клетки являются человеческими клетками.
9. Способ по п. 7, где среда для дифференцировки содержит:
от примерно 10 нг/мл до примерно 50 нг/мл FGF2, или примерно 50 нг/мл FGF2;
от примерно 50 нг/мл до примерно 250 нг/мл ВМР4, или примерно 50 нг/мл ВМР4;
от примерно 1 нг/мл до примерно 15 нг/мл активина А, от примерно 10 нг/мл до примерно 15 нг/мл активина А, примерно 12,5 нг/мл активина А, или примерно 1,5 нг/мл активина А; и/или
от примерно 1 мМ до примерно 2 мМ LiCl.
10. Способ по п. 7, где среда для дифференцировки содержит:
примерно 50 нг/мл FGF2;
примерно 50 нг/мл ВМР4; примерно 1,5 нг/мл активина А; и
примерно 2 мМ LiCl.
11. Способ по п. 3, включающий культивирование на коллагене IV и/или тенасцине С.
12. Способ по п. 3, дополнительно включающий пассирование мезенхимальной колонии и/или MSC, возможно где пассирование включает:
культивирование мезенхимальной колонии и/или MSC в течение примерно 3 суток;
культивирование мезенхимальной колонии и/или MSC на фибронектине и/или коллагене I; и/или
1, 2, 3, 4, 5 или 6 пассажей.
13. Популяция MSC, содержащая MSC по п. 1 или полученная способом по п. 3.
14. Терапевтическая композиция, содержащая MSC по п. 1 или полученную способом по п. 3, или популяцию MSC по п. 13.
15. Способ лечения состояния, возможно реакции «трансплантат против хозяина», системной красной волчанки (SLE), болезни Крона, мультисистемной атрофии, рассеянного склероза, бокового амиотрофического склероза, инсульта, сердечнососудистых расстройств, ортопедических расстройств или отторжения трансплантированных солидных органов, включающий введение субъекту MSC по п. 1, популяции MSC по п. 13 или терапевтической композиции по п. 14.
