Материал стволовых клеток и способ его получения - RU2017123284A
Код документа: RU2017123284A
Формула
1. Линия мезенхимальных стволовых клеток, задепонированная во Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов (ВКПМ) под регистрационным номером Н-154.
2. Линия мезенхимальных стволовых клеток, имеющая, по меньшей мере, одну из следующих характеристик: при посеве 0,7×106 клеток в флакон площадью 75 см2 и культивировании в течение, по меньшей мере, 96 часов: (а) клетки продуцируют, по меньшей мере, 4,5 мМ лактата в течение 24 часов после замены среды; (b) клетки продуцируют, по меньшей мере, 150 пг/мл GRO/KC в течение 24 часов после замены среды; (с) клетки продуцируют менее чем 250 пг/мл OPG через 24 часа после замены среды; или (d) клетки продуцируют менее чем 80 пг/мл TGF-β3 через 24 часа после замены среды.
3. Линия стволовых клеток по п. 2, в которой эти клетки происходят из костного мозга.
4. Линия стволовых клеток по п. 3, в которой эти клетки происходят из костного мозга крыс линии Вистар.
5. Линия стволовых клеток по п. 2, в которой эти клетки удваивают свою популяцию по меньшей мере один раз при рН ниже 7,05.
6. Линия стволовых клеток по п. 2, в которой эти клетки имеют, по меньшей мере, одну из следующих дополнительных характеристик, когда 0,7×106клеток высевают в флакон площадью 75 см2 и культивируют в течение, по меньшей мере, 150 часов: (е) рН культуральной среды снижается до уровня ниже 7,0 в течение 24 часов после замены культуральной среды; или (f) рН культуральной среды снижается, по меньшей мере, на 0,4 единицы в течение 24 часов после замены культуральной среды по сравнению с рН культуральной среды в отсутствие клеток.
7. Линия стволовых клеток по п. 6, в которой эти клетки культивируют в культуральной среде RPMI-1640 в присутствии 5% СО2.
8. Линия стволовых клеток по п. 2, в которой эти клетки продуцируют, по меньшей мере, 460 пг/мл GRO/KC в течение 24 часов после замены среды.
9. Линия стволовых клеток по п. 2, в которой эти клетки продуцируют менее чем 90 пг/мл OPG через 24 часа после замены среды.
10. Линия стволовых клеток по п. 2, в которой эти клетки продуцируют менее чем 40 пг/мл TGF-β3 через 24 часа после замены среды.
11. Линия стволовых клеток по п. 2, имеющая, по меньшей мере, две характеристики, перечисленные в п. 2.
12. Линия стволовых клеток по п. 2, имеющая, по меньшей мере, три характеристики, перечисленные в пункте 2.
13. Линия стволовых клеток по п. 2, в которой эти клетки характеризуются положительной экспрессией маркеров CD29 и CD44 и отрицательной экспрессией маркеров CD11b и CD45.
14. Линия стволовых клеток по п. 2, в которой по меньшей мере, 90% этих клеток демонстрируют кареотип 2n=42.
15. Кондиционированная среда, полученная с помощью процесса, включающего следующие этапы:
обеспечение культуральной среды;
поддержание множества стволовых клеток из линии стволовых клеток по п. 1 в культуральной среде в течение периода кондиционирования, таким образом кондиционируя культуральную среду; и
сбор кондиционированной среды.
16. Кондиционированная среда, полученная с помощью процесса, включающего следующие этапы:
обеспечение культуральной среды;
поддержание клеток по п. 2 в культуральной среде в течение периода кондиционирования, таким образом кондиционируя культуральную среду; и
сбор кондиционированной среды.
17. Кондиционированная среда по п. 16, в которой эта культуральная среда представляет собой RPMI-1640 в присутствии 5% СО2.
18. Кондиционированная среда по п. 16, в которой эти клетки поддерживаются при атмосферной концентрации СО2.
19. Кондиционированная среда по п. 16, в которой эти клетки поддерживаются в гипоксических условиях.
20. Кондиционированная среда по п. 16, в которой эти клетки происходят из костного мозга крыс линии Вистар.
21. Кондиционированная среда по п. 16, в которой этот период кондиционирования составляет, по меньшей мере, 12 часов.
22. Кондиционированная среда по п. 16, в которой этот период кондиционирования является периодом времени, достаточным для того, чтобы кондиционированная среда содержала, по меньшей мере, 150 пг/мл GRO/KC.
23. Кондиционированная среда, содержащая культуральную среду, кондиционированную множеством мезенхимальных стволовых клеток, в которой эта кондиционированная среда содержит, по меньшей мере, одно из следующего: (а) по меньшей мере, 500 пг/мл GRO/KC; (b) по меньшей мере, 4000 пг/мл VEGF; (с) менее чем 250 пг/мл OPG; или (d) менее чем 80 пг/мл TGF-β3.
24. Кондиционированная среда по п. 23, в которой эта кондиционированная среда содержит, по меньшей мере, 2500 пг/мл GRO/KC.
25. Кондиционированная среда по п. 23, в которой эта кондиционированная среда содержит, по меньшей мере, 8000 пг/мл VEGF.
26. Кондиционированная среда по п. 23, в которой эта кондиционированная среда содержит менее чем 50 пг/мл OPG.
27. Кондиционированная среда по п. 23, в которой эта кондиционированная среда содержит менее чем 50 пг/мл TGF-β3.
28. Кондиционированная среда по п. 23, в которой эта кондиционированная среда может быть лиофилизирована и восстановлена, и отличающаяся тем, что восстановленная кондиционированная среда имеет коэффициент концентрации в диапазоне от 1 до 100.
29. Композиция, содержащая
кондиционированную среду по п. 15; и приемлемый носитель.
30. Композиция по п. 29, в которой общее количество этой кондиционированной среды в композиции может изменяться от 0,00001 до 99,99% по объему.
31. Композиция, содержащая кондиционированную среду по п. 16 и приемлемый носитель.
32. Композиция по п. 31, которая дополнительно содержит вторую культуральную среду, кондиционированную клетками по п. 2 в течение второго периода кондиционирования.
33. Композиция по п. 31, в которой общее количество этой кондиционированной среды в композиции может изменяться от 0,00001 до 99,99% по объему.
34. Композиция по п. 31, в которой эту кондиционированную среду дополнительно обрабатывают для удаления из кондиционированной среды, по меньшей мере, 90% клеток.
35. Композиция по п. 31, в которой клетки, использованные для кондиционирования среды, происходят из костного мозга крыс линии Вистар.
36. Композиция по п. 31, в которой клетки, использованные для кондиционирования среды, характеризуются положительной экспрессией маркеров CD29 и CD44 и отрицательной экспрессией маркеров CD11b и CD45.
37. Композиция по п. 31, которая дополнительно содержит множество клеток по пункту 2.
38. Композиция по п. 31, в которой этот носитель представляет собой жидкость, крем, аэрозоль, лосьон, мазь или гидрогель.
39. Композиция, содержащая культуральную среду, кондиционированную множеством мезенхимальных стволовых клеток, и
приемлемый носитель, в которой эта композиция содержит менее чем 250 пг/мл OPG или менее чем 80 пг/мл TGF-β3.
40. Композиция по п. 39, в которой эта композиция дополнительно содержит, по меньшей мере, 150 пг/мл TGF-β2.
41. Композиция по п. 39, в которой эта композиция дополнительно содержит, по меньшей мере, 250 пг/мл GRO/KC.
42. Композиция по п. 39, в которой эта культуральная среда кондиционирована в течение, по меньшей мере, 12 часов.
43. Способ использования кондиционированной среды по п. 15, включающий применение субъекту кондиционированной среды по п. 15.
44. Способ использования композиции по п. 29, включающий применение субъекту композиции по п. 29.
45. Способ использования композиции по п. 39, включающий применение субъекту композиции по п. 39.
46. Устройство для лечения, представляющее собой аппликатор, содержащий композицию по п. 29, в котором аппликатор включает шовный материал, перевязочный материал, вязаную сетку, имплант, стент, трансплантат, влажную салфетку или периодонтальную прокладку.
47. Кондиционированная среда по п. 23, которая используется для лечения ожогов, в уходе за кожей, для ангиогенеза, васкулогенеза, для репарации органов и тканей, в косметических средствах, при воспалении тканей, бактериальных инфекциях, для лечения ран, при диабете, для фармацевтических и офтальмологических видов применения, снижения рубцевания, стимулирования роста волос, иммунотерапии и иммунокоррекции, трансплантации органов, кожи, костного мозга или для лечения органов или тканей.
48. Кондиционированная среда по п. 23, в которой эту кондиционированную среду применяют при помощи инъекции, имплантирования или местного нанесения кондиционированной среды.
49. Композиция по п. 29, которая используется для лечения ожогов, в уходе за кожей, для ангиогенеза, васкулогенеза, репарации органов и тканей, в косметических средствах, при воспалении тканей, бактериальных инфекциях, для лечения ран, при диабете, для фармацевтических и офтальмологических видов применения, снижения рубцевания, стимулирования роста волос, иммунотерапии и иммунокоррекции, трансплантации органов, кожи, костного мозга или для лечения органов или тканей.
50. Композиция по п. 29, отличающаяся тем, что композицию вводят при помощи инъекции, имплантирования или местного нанесения композиции.
51. Композиция по п. 39, которая используется для лечения ожогов, в уходе за кожей, для ангиогенеза, васкулогенеза, репарации органов и тканей, в косметических средствах, при воспалении тканей, бактериальных инфекциях, лечения ран, при диабете, для фармацевтических и офтальмологических видов применения, снижения рубцевания, стимулирования роста волос, иммунотерапии и иммунокоррекции, трансплантации органов, кожи, костного мозга или для лечения органов или тканей.
52. Композиция по п. 39, отличающаяся тем, что композицию вводят при помощи инъекции, имплантирования или местного нанесения композиции.
53. Линия мезенхимальных стволовых клеток по п. 1, в которой одна или более этих стволовых клеток из линии стволовых клеток используется для лечения ожогов, в уходе за кожей, для ангиогенеза, васкулогенеза, репарации органов и тканей, в косметических средствах, при воспалении тканей, бактериальных инфекциях, для лечения ран, при диабете, для фармацевтических и офтальмологических видов применения, снижения рубцевания, стимулирования роста волос, иммунотерапии и иммунокоррекции, трансплантации органов, кожи, костного мозга, для лечения органов или тканей.
54. Линия мезенхимальных стволовых клеток по п. 1, отличающаяся тем, что одну или более стволовых клеток вводят при помощи инъекции, имплантирования или местного нанесения стволовых клеток.
55. Линия мезенхимальных стволовых клеток по п. 2, отличающаяся тем, что одну или более стволовых клеток из линии стволовых клеток применяют для лечения ожогов, в уходе за кожей, для ангиогенеза, васкулогенеза, репарации органов и тканей, в косметических средствах, при воспалении тканей, бактериальных инфекциях, заживлении ран, при диабете, для фармацевтических и офтальмологических видов применения, снижения рубцевания, стимулирования роста волос, для иммунотерапии и иммунокоррекции, трансплантации органов, кожи, костного мозга, для лечения органов или тканей.
56. Линия мезенхимальных стволовых клеток по п. 2, отличающаяся тем, что одну или более стволовых клеток вводят при помощи инъекции, имплантирования или местного нанесения стволовых клеток.
57. Композиция по п. 31, дополнительно содержащая консервант и поверхностно-активное вещество.
58. Композиция по п. 39, дополнительно содержащая консервант и поверхностно-активное вещество.
59. Композиция по п. 58, в которой консервант представляет собой один или несколько из тимеросола, крезолов, формалина, бензалкониумхлорида или бензилового спирта, и в которой поверхностно-активное вещество представляет собой Triton Х-100.
