Флуоресцирующие белки из веслоногих ракообразных и способы их применения - RU2005123689A

Реферат

1. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая флуоресцирующий белок и выбранная из группы, состоящей из

(а) нуклеиновой кислоты, кодирующей белок, содержащий аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26 или 28;

(b) нуклеиновой кислоты, содержащей нуклеотидную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25 или 27;

(с) нуклеиновой кислоты, гибридизующейся в жестких условиях с нуклеиновой кислотой (а) или (b), описанной выше;

(d) нуклеиновой кислоты, кодирующей белок, имеющий последовательность, которая, по крайней мере, примерно на 60% идентична аминокислотной последовательности (а), описанной выше;

(е) нуклеиновой кислоты, имеющей последовательность, которая, по крайней мере, примерно на 55% идентична нуклеотидной последовательности (b), описанной выше;

(f) нуклеиновой кислоты, кодирующей белок, имеющий, по крайней мере, одну аминокислотную замену, делецию или инсерцию в аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26 или 28;

(g) производного или миметика нуклеиновых кислот (а), (b), (с), (d), (е) или (f), описанных выше;

(h) мутанта нуклеиновой кислоты (а), (b), (с), (d) или (е), описанной выше;

(i) нуклеиновой кислоты, отличающейся от нуклеиновой кислоты (b), (с), (d), (е), (f), (g) или (h), описанной выше, вследствие вырожденности ее генетического кода: и

(j) фрагмента нуклеиновой кислоты (а) или (b), описанной выше, который кодирует пептид, имеющий длину, по крайней мере, в 10 аминокислотных остатков.

2. Молекула нуклеиновой кислоты по п.1, где указанная нуклеиновая кислота выделена из организма типа Arthropoda.

3. Молекула нуклеиновой кислоты по п.1, где указанная нуклеиновая кислота выделена из организма подкласса Copepoda.

4. Молекула нуклеиновой кислоты по п.1, где указанная нуклеиновая кислота выделена из организма семейства Pontellidae.

5. Вектор, содержащий молекулу нуклеиновой кислоты по п.1.

6. Экспрессионный кластер, содержащий (а) молекулу нуклеиновой кислоты по п.1; и (b) регуляторные элементы для экспрессии указанной молекулы нуклеиновой кислоты в нужной клетке-хозяине.

7. Клетка, содержащая молекулу нуклеиновой кислоты по п.1, вектор по п.5 или экспрессионный кластер по п.6.

8. Стабильная клеточная линия, содержащая молекулу нуклеиновой кислоты по п.1, вектор по п.5 или экспрессионный кластер по п.6.

9. Трансгенное растение, содержащее молекулу нуклеиновой кислоты по п.1, вектор по п.5 или экспрессионный кластер по п.6.

10. Трансгенное животное, содержащее молекулу нуклеиновой кислоты по п.1, вектор по п.5 или экспрессионный кластер по п.6.

11. Способ продуцирования флуоресцирующего белка, предусматривающий: (а) получение молекулы нуклеиновой кислоты по п.1, функционально связанной с подходящими элементами регуляции экспрессии, (b) экспрессию флуоресцирующего белка из указанной молекулы нуклеиновой кислоты и (с) выделение белка по существу не содержащего других белков.

12. Молекула нуклеиновой кислоты, содержащая фрагмент молекулы нуклеиновой кислоты по п.1, где указанный фрагмент кодирует пептид, имеющий длину, по крайней мере, в 100 аминокислот.

13. Молекула нуклеиновой кислоты, имеющая последовательность по существу аналогичную или идентичную нуклеотидной последовательности молекулы нуклеиновой кислоты по п.1, имеющей длину, по крайней мере, в 300 остатков.

14. Выделенный флуоресцирующий белок, выбранный из группы, состоящей из:

(а) белка, содержащего аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26 или 28;

(b) белка, кодируемого молекулой нуклеиновой кислоты, содержащей нуклеотидную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25 или 27;

(с) белка, имеющего аминокислотную последовательность, которая, по крайней мере, примерно на 60% идентична аминокислотной последовательности (а) или (b), описанной выше;

(d) мутанта белка (а), (b) или (с), описанного выше;

(е) белка, имеющего, по крайней мере, одну аминокислотную замену, делецию или инсерцию в аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26 или 28;

(f) производного белка (а), (b), (с), (d) или (е), описанного выше;

(g) фрагмента белка (а), (b), (с), (d), (е) или (f), описанных выше, и имеющего длину, по крайней мере, в 10 аминокислотных остатков;

(h) белка, имеющего последовательность по существу аналогичную или идентичную аминокислотной последовательности белка (а) или (b), описанного выше, и имеющего длину, по крайней мере, в 100 остатков.

15. Гибридный белок, содержащий белок по п.14.

16. Антитело, специфически связывающееся с белком по п.14.

17. Набор, содержащий нуклеиновую кислоту по п.1, вектор по п.5, экспрессионный кластер по п.6, белок по п.14, гибридный белок по п.15, или средство для их получения.

18. Олигонуклеотидный зонд или праймер, содержащий нуклеотидную последовательность, способную гибридизоваться с нуклеотидной последовательностью, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27.

19. Способ мечения биологической молекулы, предусматривающий связывание указанной биологической молекулы с белком по п.14.

20. Способ мечения клетки, предусматривающий продуцирование белка по п.14 в указанной клетке.

21. Способ мечения клеточной органеллы, предусматривающий продуцирование белка по п.14, связанного с подходящим субклеточным сигналом локализации в указанной клетке.

22. Способ анализа биологической молекулы, клетки или клеточной органеллы, предусматривающий детекцию флуоресцирующего сигнала от белка по п.14 или 15.

23. Способ анализа биологической молекулы, клетки или клеточной органеллы, предусматривающий экспрессию молекулы нуклеиновой кислоты по п.1 в клетке.

24. Способ детекции биологической молекулы, предусматривающий детекцию флуоресцирующего сигнала от белка по п.14 или 15.