Молекулы нуклеиновой кислоты и пути их применения - RU2020109872A

1. Молекула нуклеиновой кислоты, содержащая первый инвертированный концевой повтор (ITR), второй ITR и генную кассету;

где первый ITR и/или второй ITR представляют собой ITR вируса, отличного от аденоассоциированного вируса (вируса, отличного от AAV), при этом генная кассета расположена между первым ITR и вторым ITR, и где генная кассета кодирует терапевтический белок, miRNA или как терапевтический белок, так и miRNA.

2. Молекула нуклеиновой кислоты по п.1, где терапевтический белок включает фактор свертывания крови.

3. Молекула нуклеиновой кислоты по п.1 или 2, где вирус, отличный от AAV, выбран из группы, состоящей из представителя семейства вирусов Parvoviridae.

4. Молекула нуклеиновой кислоты по любому из пп. 1-3, где первый ITR и второй ITR представляют собой ITR вируса, отличного от AAV.

5. Молекула нуклеиновой кислоты по п.3 или 4, где представитель семейства вирусов Parvoviridae выбран из группы, состоящей из представителей родов Bocavirus, Dependovirus, Erythrovirus, Amdovirus, Parvovirus, Densovirus, Iteravirus, Contravirus, Aveparvovirus, Copiparvovirus, Protoparvovirus, Tetraparvovirus, Ambidensovirus, Brevidensovirus, Hepandensovirus, Penstyldensovirus, штамма парвовируса мускусных уток (MDPV), парвовируса свиней (U44978), мелкого вируса мышей (U34256), парвовируса собак (M19296) и вируса энтерита норок (D00765).

6. Молекула нуклеиновой кислоты по любому из пп. 3-5, гдепредставителем семейства вирусов Parvoviridae является эритровирус, представляющий собой парвовирус B19 (вирус человека).

7. Молекула нуклеиновой кислоты по любому из пп. 3-5, где вирус семейства Parvoviridae представляет собой штамм парвовируса гусей (GPV) рода Dependovirus.

8. Молекула нуклеиновой кислоты по любому из пп. 1-7, которая дополнительно содержит тканеспецифический промотор.

9. Молекула нуклеиновой кислоты по п.8, где промотор управляет экспрессией терапевтического белка в гепатоцитах, эндотелиальных клетках, мышечных клетках, синусоидальных клетках или любой их комбинации.

10. Молекула нуклеиновой кислоты по п.8 или 9, где промотор выбран из группы, состоящей из промотора тиретина мыши (mTTR), эндогенного промотора фактора VIII человека (F8), промотора альфа-1-антитрипсина человека (hAAT), минимального промотора альбумина человека, промотора альбумина мыши, промотора тристетрапролина (TTP), промотора CASI, промотора CAG, промотора цитомегаловируса (CMV), промотора α1-антитрипсина (AAT), мышечной креатинкиназы (MCK), тяжелой цепи миозина альфа (αMHC), миоглобина (MB), десмина (DES), SPc5-12, 2R5Sc5-12, dMCK, tMCK и фосфоглицераткиназы (PGK).

11. Молекула нуклеиновой кислоты по любому из пп. 1-10, где нуклеотидная последовательность дополнительно содержит

(a) интронную последовательность,

(b) посттранскрипционный регуляторный элемент,

(c) последовательность poly(А)-хвоста 3'-UTR,

(d) энхансерную последовательность или

(e) любую комбинацию (a)-(d).

12. Молекула нуклеиновой кислоты по п.11, где

(a) интронная последовательность расположена в направлении 5' относительно последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей фактор свертывания крови;

(b) посттранскрипционный регуляторный элемент предусматривает мутантный посттранскрипционный регуляторный элемент вируса гепатита сурков (WPRE), сайт связывания microRNA, последовательность, направляющую ДНК к ядру, или любую их комбинацию;

(c) последовательность poly(А)-хвоста 3'-UTR выбрана из группы, состоящей из poly(A) bGH, poly(A) актина, poly(A) гемоглобина и любой их комбинации; или

(d) любая комбинация (a)-(c).

13. Молекула нуклеиновой кислоты по п.12, где

(a) интронная последовательность предусматривает SEQ ID NO: 115;

(b) сайт связывания microRNA предусматривает сайт связывания с miR142-3p;

(c) последовательность poly(А)-хвоста 3'-UTR предусматривает poly(A) bGH; или

(d) любая комбинация (a)-(c).

14. Молекула нуклеиновой кислоты по любому из пп. 1-13, где молекула нуклеиновой кислоты содержит в следующем порядке:

(a) первый ITR, который представляет собой ITR вируса, отличного от AAV, являющегося представителем семейства Parvoviridae;

(b) последовательность тканеспецифического промотора, которая предусматривает промотор TTP;

(c) интрон, который представляет собой синтетический интрон;

(d) нуклеотидную последовательность, которая кодирует фактор свертывания крови;

(e) посттранскрипционный регуляторный элемент, который предусматривает WPRE;

(f) последовательность poly(А)-хвоста 3'-UTR, которая предусматривает bGHpA; и

(g) второй ITR, который представляет собой ITR вируса, отличного от AAV, являющегося представителем семейства Parvoviridae.

15. Молекула нуклеиновой кислоты по любому из пп. 2-14, где фактор свертывания крови включает фактор I (FI), фактор II (FII), фактор V (FV), фактор VII (FVII), фактор VIII (FVIII), фактор IX (FIX), фактор X (FX), фактор XI (FXI), фактор XII (FXII), фактор XIII (FVIII), фактор фон Виллебранда (VWF), прекалликреин, высокомолекулярный кининоген, фибронектин, антитромбин III, кофактор гепарина II, белок C, белок S, белок Z, ингибитор белок Z-подобной протеазы (ZPI), плазминоген, альфа-2-антиплазмин, тканевой активатор плазминогена (tPA), урокиназу, ингибитор активатора плазминогена 1 (PAI-1), ингибитор активатора плазминогена 2 (PAI2) или любую их комбинацию.

16. Молекула нуклеиновой кислоты по п.15, где FVIII содержит аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере приблизительно 70%, по меньшей мере приблизительно 75%, по меньшей мере приблизительно 80%, по меньшей мере приблизительно 85%, по меньшей мере приблизительно 90%, по меньшей мере приблизительно 95%, по меньшей мере приблизительно 96%, по меньшей мере приблизительно 97%, по меньшей мере приблизительно 98%, по меньшей мере приблизительно 99% или 100% идентична аминокислотной последовательности, представленной последовательностью, выбранной из SEQ ID NO: 71, 106, 107 и 109.

17. Молекула нуклеиновой кислоты по любому из пп. 1-16, где фактор свертывания крови содержит гетерологичный компонент, выбранный из группы, состоящей из альбумина или его фрагмента, Fc-области иммуноглобулина, C-концевого пептида (CTP) β-субъединицы хорионического гонадотропина человека, последовательности PAS, последовательности HAP, трансферрина или его фрагмента, альбумин-связывающего компонента, их производного или любой их комбинации.

18. Молекула нуклеиновой кислоты по любому из пп. 15-17, где FVIII дополнительно содержит партнера по связыванию FcRn.

19. Молекула нуклеиновой кислоты по любому из пп. 1-18, где молекула нуклеиновой кислоты составлена со средством доставки, включающим липидную наночастицу.

20. Фармацевтическая композиция, содержащая молекулу нуклеиновой кислоты по любому из пп. 1-19 и фармацевтически приемлемый носитель.

21. Способ обеспечения экспрессии фактора свертывания крови у пациента, включающий введение пациенту молекулы нуклеиновой кислоты по любому из пп. 1-19 или фармацевтической композиции по п.20.