Совместная дифференцировка моноцитов от аллогенных доноров - RU2015119164A
Код документа: RU2015119164A
Формула
1. Способ получения неистощенных незрелых дендритных клеток (ДК), включающий следующие этапы:
- получение смеси аллогенных лейкоцитов, где указанные аллогенные лейкоциты получены от по меньшей мере двух различных, аллогенных доноров;
- выделение аллогенных моноцитов из указанной смеси аллогенных лейкоцитов с получением обогащенных моноцитами аллогенных лейкоцитов;
- получение неистощенных незрелых ДК из указанных обогащенных моноцитами аллогенных лейкоцитов, причем получение неистощенных незрелых дендритных клеток (ДК) осуществляют путем совместного культивирования указанных обогащенных моноцитами аллогенных лейкоцитов в течение от 2 до 7 дней в водной клеточной культуральной среде без примесей сыворотки нечеловеческого происхождения с добавлением интерлейкина-4 (IL-4) и гранулоцитарно-макрофагального колониестимулирующего фактора (ГМ-КСФ).
2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что указанная клеточная культуральная среда содержит по меньшей мере один человеческий полипептид.
3. Способ по п. 2, отличающийся тем, что указанный человеческий полипептид выбран из группы, состоящей из трансферрина, альбумина и инсулина.
4. Способ по п. 1, отличающийся тем, что указанные обогащенные моноцитами аллогенные лейкоциты включают аллогенные нейтрофилы.
5. Способ по п. 1, отличающийся тем, что указанную смесь аллогенных лейкоцитов получают объединением по меньшей мере двух лейкоцитарных пленок, содержащих лейкоциты, причем указанные объединяемые лейкоцитарные пленки получены от по меньшей мере двух различных, аллогенных доноров.
6. Способ по п. 5, отличающийся тем, что указанные объединяемые лейкоцитарные пленки содержат тромбоциты или характеризуются сниженным количеством тромбоцитов.
7. Способ по п. 1, отличающийся тем, что указанную смесь аллогенных лейкоцитов получают путем:
- элюирования лейкоцитов из по меньшей мере двух лейкоцитарных фильтров, соответственно, которые ранее были использованы для выделения лейкоцитов из цельной крови, причем указанная цельная кровь была получена от по меньшей мере двух различных, аллогенных доноров;
- объединения полученных лейкоцитов с получением указанной смеси аллогенных лейкоцитов;
или путем
- элюирования лейкоцитов из лейкоцитарного фильтра, который был использован для выделения лейкоцитов из объединенных лейкоцитарных пленок, которые были получены от двух разных, аллогенных доноров.
8. Способ по п. 1, отличающийся тем, что указанные аллогенные моноциты выделены путем элютриации или выделения с использованием антител/гранул.
9. Способ по п. 1, отличающийся тем, что совместное культивирование проводят в течение приблизительно 5 дней.
10. Способ по п. 1, дополнительно включающий стадию нагрузки неистощенных незрелых ДК антигеном.
11. Смесь аллогенных неистощенных незрелых дендритных клеток (ДК), полученная от по меньшей мере двух различных, аллогенных доноров, причем указанные дендритные клетки (ДК) получаются способом по любому из пп. 1-10.
12. Способ получения провоспалительных ДК, включающий этапы:
- получения неистощенных незрелых ДК по любому из пп. 1-10;
- активации неистощенных незрелых ДК с получением провоспалительных ДК.
13. Способ по п. 12, отличающийся тем, что указанную активацию осуществляют путем добавления лиганда Toll-подобного рецептора 3 (TLR3) поли(I):поли(C), лиганда TLR7/8 и гамма-интерферона (ИФН-γ), что приводит к индукции активации.
14. Способ по п. 13, отличающийся тем, что указанный лиганд TLR7/8 выбран из резиквимода, гардиквимода и имиквимода.
15. Способ по п. 13, отличающийся тем, что активация дополнительно включает добавление по меньшей мере одного вещества выбранного из группы, состоящей из лигандов TLR2, лигандов TLR4, лигандов TLR9, интерферона-альфа (ИФН-α), интерлейкина 1β (IL-1β) и фактора некроза опухоли альфа (ФНО-α), что приводит к индукции активации.
16. Способ по п. 13, в котором указанная активация не включает добавление простагландина Е2 (PGE2).
17. Способ по п. 13, отличающийся тем, что указанные незрелые ДК подвергаются воздействию факторов активации в течение от 8 до 24 часов, после чего факторы активации по существу полностью вымывают.
18. Смесь аллогенных провоспалительных дендритных клеток, полученных по меньшей мере от двух различных, аллогенных доноров, причем указанные дендритные клетки получаются способом по любому из пп. 12-17.
19. Фармацевтическая композиция, содержащая смесь аллогенных провоспалительных дендритных клеток по п. 18 и по меньшей мере один фармацевтически приемлемый носитель.
20. Способ лечения рака, включающий введение смеси аллогенных провоспалительных дендритных клеток по п. 18 или композиции по п. 19 пациенту, нуждающемуся в таком лечении.
