Гематоэнцефалический барьер, содержащий сконструированные эндотелиальные клетки - RU2019110742A
Код документа: RU2019110742A
Формула
1. Система гематоэнцефалического барьера (ВВВ) in vitro, содержащая E40RF1+ эндотелиальные клетки.
2. Система по п. 1, отличающаяся тем, что эндотелиальные клетки представляют собой мышиные эндотелиальные клетки.
3. Система по п. 1, отличающаяся тем, что эндотелиальные клетки представляют собой человеческие эндотелиальные клетки.
4. Система по п. 1, отличающаяся тем, что эндотелиальные клетки представляют собой эндотелиальные клетки головного мозга.
5. Система по п. 4, отличающаяся тем, что эндотелиальные клетки головного мозга представляют собой микроваскулярные эндотелиальные клетки головного мозга.
6. Система по п. 4, отличающаяся тем, что эндотелиальные клетки головного мозга получены из опухоли головного мозга.
7. Система по п. 4, отличающаяся тем, что эндотелиальные клетки головного мозга получены из глиомы.
8. Система по п. 4, отличающаяся тем, что эндотелиальные клетки головного мозга получены из глиобластомы (GBM).
9. Система по п. 1, отличающаяся тем, что E40RF1+ эндотелиальные клетки расположены на проницаемой твердой подложке.
10. Система по п. 9, отличающаяся тем, что проницаемая твердая подложка представляет собой мембрану или фильтр.
11. Система по п. 9, отличающаяся тем, что проницаемая твердая подложка содержит полиэфир, поликарбонат, нитроцеллюлозу, целлюлозу или стекловолокно.
12. Система по п. 9, отличающаяся тем, что проницаемая твердая подложка покрыта одним или несколькими компонентами внеклеточного матрикса.
13. Система по п. 12, отличающаяся тем, что компоненты внеклеточного матрикса выбраны из группы, состоящей из внеклеточного матрикса астроцитов, ламинина, витронектина, фибронектина, коллагена и матригеля.
14. Система по п. 1, кроме того, содержащая дополнительный тип клеток, выбранный из группы, состоящей из астроцитов, перицитов и нервных стволовых клеток/клеток-предшественников (NSPC).
15. Система по п. 14, отличающаяся тем, что астроциты представляют собой мышиные астроциты.
16. Система по п. 14, отличающаяся тем, что астроциты представляют собой человеческие астроциты.
17. Система по п. 14, отличающаяся тем, что астроциты находятся в прямом контакте с эндотелиальными клетками.
18. Система по п. 1, отличающаяся тем, что эндотелиальные клетки присутствуют по существу в конфлюэнтном эндотелиальном монослое.
19. Система по п. 1, содержащая по существу конфлюэнтный монослой астроцитов.
20. Система по п. 18, отличающаяся тем, что монослой эндотелиальных клеток имеет трансэндотелиальное электрическое сопротивление (TEER) более чем около 25 Ом⋅см2 или более чем около 50 Ом⋅см2, или более чем около 75 Ом⋅см2, или более чем около 100 Ом⋅см2, или более чем около 125 Ом⋅см2, или более чем около 150 Ом⋅см2, или более чем около 175 Ом⋅см2, или более чем около 200 Ом⋅см2.
21. Система по п. 18, отличающаяся тем, что монослой эндотелиальных клеток имеет коэффициент проницаемости (Рс), полученный с помощью Lucifer Yellow менее чем около 2,5×10-6 см/сек.
22. Применение системы по п. 1 в способе оценки способности агента-кандидата проникать через гематоэнцефалический барьер.
23. Способ оценки способности агента-кандидата проникать через гематоэнцефалический барьер, при этом способ включает приведение в контакт эндотелиальных клеток в системе по п. 1 с агентом-кандидатом.
24. Способ оценки способности агента-кандидата проникать через гематоэнцефалический барьер, при этом способ включает: (а) приведение в контакт одной стороны монослоя эндотелиальных клеток в системе ВВВ по п. 1 с агентом-кандидатом, и (b) определение присутствия агента-кандидата на другой стороне монослоя эндотелиальных клеток, при этом, если агент-кандидат присутствует на другой стороне монослоя эндотелиальных клеток, то агент способен пересекать гематоэнцефалический барьер, и при этом, если агент-кандидат не присутствует на другой стороне монослоя эндотелиальных клеток, то агент не способен пересекать гематоэнцефалический барьер.
25. Применение системы по п. 1 в способе оценки эффекта агента на проницаемость гематоэнцефалического барьера.
26. Способ оценки эффекта агента на проницаемость гематоэнцефалического барьера, при этом способ включает: приведение в контакт эндотелиальных клеток в системе по п. 1 с агентом-кандидатом.
27. Способ оценки эффекта агента на проницаемость гематоэнцефалического барьера, при этом способ включает: (а) приведение в контакт эндотелиальных клеток в системе ВВВ по п. 1 с агентом-кандидатом, и (b) определение трансэндотелиального электрического сопротивления (TEER) системы ВВВ, при этом, если агент-кандидат понижает значение TEER системы ВВВ по сравнению со значением TEER в отсутствие агента-кандидата, то этот агент-кандидат увеличивает проницаемость ВВВ, и если агент-кандидат повышает значение TEER системы ВВВ по сравнению со значением TEER в отсутствие агента-кандидата, то этот агент-кандидат уменьшает проницаемость ВВВ.
28. Способ оценки эффекта агента на проницаемость гематоэнцефалического барьера, при этом способ включает: приведение в контакт эндотелиальных клеток в системе ВВВ по п. 1 с агентом-кандидатом и определение коэффициента проницаемости (Рс) системы ВВВ, при этом, если агент-кандидат понижает значение Рс системы ВВВ по сравнению со значением Рс в отсутствие агента-кандидата, то этот агент-кандидат уменьшает проницаемость ВВВ, и если агент-кандидат повышает значение Рс системы ВВВ по сравнению со значением Рс в отсутствие агента-кандидата, то этот агент-кандидат увеличивает проницаемость ВВВ.
29. Композиция, содержащая E40RF1+ эндотелиальные клетки и астроциты, и необязательно также содержащая (а) перициты и/или (b) нервные стволовые клетки/клетки-предшественники (NSPC).
30. Композиция по п. 29, отличающаяся тем, что эндотелиальные клетки представляют собой E40RF1+ эндотелиальные клетки мышей.
31. Композиция по п. 29, отличающаяся тем, что E40RF1+ эндотелиальные клетки представляют собой E40RF1+ эндотелиальные клетки человека.
32. Композиция по п. 29, отличающаяся тем, что E40RF1+ эндотелиальные клетки представляют собой эндотелиальные клетки головного мозга.
33. Композиция по п. 32, отличающаяся тем, что эндотелиальные клетки представляют собой микроваскулярные эндотелиальные клетки головного мозга.
34. Композиция по п. 32, отличающаяся тем, что эндотелиальные клетки головного мозга получены из опухоли головного мозга.
35. Композиция по п. 32, отличающаяся тем, что эндотелиальные клетки головного мозга получены из глиомы.
36. Композиция по п. 32, отличающаяся тем, что эндотелиальные клетки головного мозга получены из глиобластомы.
37. Композиция по п. 29, отличающаяся тем, что астроциты представляют собой мышиные астроциты.
38. Композиция по п. 29, отличающаяся тем, что астроциты представляют собой человеческие астроциты.
39. Композиция по п. 29, отличающаяся тем, что астроциты находятся в прямом контакте с эндотелиальными клетками.
40. Композиция по любому из предшествующих пунктов, отличающаяся тем, что эндотелиальные клетки присутствуют по существу в конфлюэнтном эндотелиальном монослое.
41. Композиция по любому из предшествующих пунктов, отличающаяся тем, что астроциты присутствуют по существу в конфлюэнтном монослое.
42. Композиция по любому из пп. 29-41, отличающаяся тем, что композиция представляет собой терапевтическую композицию.
43. Композиция по п. 42, отличающаяся тем, что композиция, кроме того, содержит один или несколько фармацевтически приемлемых разбавителей.
44. Способ лечения дефекта, заболевания или нарушения гематоэнцефалического барьера, при этом способ включает введение субъекту, нуждающемуся в этом, композиции, содержащей E40RF1+ эндотелиальные клетки.
45. Способ по п. 44, отличающийся тем, что субъектом является мышь и эндотелиальные клетки представляют собой мышиные эндотелиальные клетки.
46. Способ по п. 44, отличающийся тем, что субъектом является человек и эндотелиальные клетки представляют собой человеческие эндотелиальные клетки.
47. Способ по п. 44, отличающийся тем, что эндотелиальные клетки представляют собой эндотелиальные клетки головного мозга.
48. Способ по п. 47, отличающийся тем, что эндотелиальные клетки головного мозга представляют собой микроваскулярные эндотелиальные клетки головного мозга.
49. Способ по п. 47, отличающийся тем, что эндотелиальные клетки головного мозга получены из опухоли головного мозга.
50. Способ по п. 47, отличающийся тем, что эндотелиальные клетки головного мозга получены из глиомы.
51. Способ по п. 47, отличающийся тем, что эндотелиальные клетки головного мозга получены из глиобластомы.
52. Способ по п. 44, отличающийся тем, что эндотелиальные клетки представляют собой аутологичные эндотелиальные клетки.
53. Способ по п. 44, отличающийся тем, что эндотелиальные клетки представляют собой аллогенные эндотелиальные клетки.
54. Способ по п. 44, кроме того, включающий введение субъекту композиции, содержащей астроциты.
55. Способ по п. 54, отличающийся тем, что астроциты и эндотелиальные клетки присутствуют в одной и той же композиции.
56. Способ по п. 54, отличающийся тем, что астроциты и эндотелиальные клетки присутствуют в отдельных композициях.
57. Способ по п. 54, отличающийся тем, что субъектом является мышь, и астроциты представляют собой мышиные астроциты.
58. Способ по п. 54, отличающийся тем, что субъектом является человек, и астроциты представляют собой человеческие астроциты.
59. Способ по п. 54, отличающийся тем, что астроциты представляют собой аутологичные астроциты.
60. Способ по п. 54, отличающийся тем, что астроциты представляют собой аллогенные астроциты.
