Композиции, повышающие число копий вектора (чкв), и способы их применения - RU2021103425A
Код документа: RU2021103425A
Формула
1. Культура, содержащая: (1) популяцию CD34+гематопоэтических стволовых клеток или клеток-предшественников, (2) культуральную среду, (3) лентивирусный вектор, (4) агент, который усиливает передачу сигналов рецептора простагландина EP, выбранный из PGE2, 16,16-диметил-PGE2, или его аналог и (5) полоксамер, выбранный из группы, состоящей из: полоксамера 288, полоксамера 335, полоксамера 338 и полоксамера 407.
2. Культура по п. 1, где:
(a) лентивирусный вектор присутствует при МИ от приблизительно 10 до приблизительно 30;
(b) лентивирусный вектор присутствует при МИ от приблизительно 10 до приблизительно 25;
(c) лентивирусный вектор присутствует при МИ от приблизительно 10 до приблизительно 20; или
(d) лентивирусный вектор присутствует при МИ, составляющей приблизительно 10, приблизительно 11, приблизительно 12, приблизительно 13, приблизительно 14, приблизительно 15, приблизительно 16, приблизительно 17, приблизительно 18, приблизительно 19, приблизительно 20, приблизительно 21, приблизительно 22, приблизительно 23, приблизительно 24, приблизительно 25, приблизительно 26, приблизительно 27, приблизительно 28, приблизительно 29 или приблизительно 30.
3. Культура по любому из пп. 1-2, где агент, который усиливает передачу сигналов рецептора простагландина EP, представляет собой PGE2.
4. Культура по любому из пп. 1-3, где полоксамер представляет собой полоксамер 338.
5. Культура по любому из пп. 1-4, где:
(a) лентивирусный вектор получен из лентивируса, выбранного из группы, состоящей из: ВИЧ (вируса иммунодефицита человека; включая ВИЧ типа 1 и ВИЧ типа 2); вируса висна-маеди (VMV); вируса козьего артрита-энцефалита (CAEV); вируса инфекционной анемии лошадей (EIAV); вируса иммунодефицита кошек (FIV); вируса иммунодефицита крупного рогатого скота (BIV) и вируса иммунодефицита обезьян (SIV);
(b) лентивирусный вектор получен из лентивируса ВИЧ;
(c) лентивирусный вектор получен из лентивируса ВИЧ-1;
(d) лентивирусный вектор кодирует полипептид представителя 1 подсемейства D белков с АТФ-связывающей кассетой (ABCD1);
(e) лентивирусный вектор содержит энхансер миелопролиферативного вируса саркомы, промотор (MND) с удаленной областью отрицательного контроля и с заменой участка связывания праймера на d1587rev или его транскрипционно активный фрагмент, функционально связанный с полинуклеотидом, кодирующим полипептид представителя 1 подсемейства D белков с АТФ-связывающей кассетой (ABCD1);
(f) лентивирусный вектор содержит полинуклеотид, кодирующий аденозиндезаминазу;
(g) лентивирусный вектор содержит промотор фактора элонгации 1 альфа, функционально связанный с полинуклеотидом, кодирующим аденозиндезаминазу;
(h) лентивирусный вектор кодирует рецептор интерлейкина-2 гамма;
(i) лентивирусный вектор содержит промотор фактора элонгации 1 альфа, функционально связанный с полинуклеотидом, кодирующим рецептор интерлейкина-2 гамма;
(j) лентивирусный вектор кодирует трипептидилпептидазу 1;
(k) лентивирусный вектор содержит промотор фактора элонгации 1 альфа или содержит энхансер миелопролиферативного вируса саркомы, промотор (MND) с удаленной областью отрицательного контроля и с заменой участка связывания праймера на d1587rev, функционально связанный с полинуклеотидом, кодирующим трипептидилпептидазу 1;
(l) лентивирусный вектор кодирует альфа-L-идуронидазу;
(m) лентивирусный вектор содержит промотор фактора элонгации 1 альфа или содержит энхансер миелопролиферативного вируса саркомы, промотор (MND) с удаленной областью отрицательного контроля и с заменой участка связывания праймера на d1587rev, функционально связанный с полинуклеотидом, кодирующим альфа-L-идуронидазу;
(n) лентивирусный вектор кодирует идуронат-2-сульфатазу;
(o) лентивирусный вектор содержит промотор фактора элонгации 1 альфа или содержит энхансер миелопролиферативного вируса саркомы, промотор (MND) с удаленной областью отрицательного контроля и с заменой участка связывания праймера на d1587rev, функционально связанный с полинуклеотидом, кодирующим идуронат-2-сульфатазу; или
(p) лентивирусный вектор представляет собой вектор AnkT9W, вектор T9Ank2W, вектор TNS9, вектор LentiGlobin HPV569, вектор LentiGlobin BB305, вектор BG-1, вектор BGM-1, вектор d432βAγ, вектор mLARβΔγV5, вектор GLOBE, вектор G-GLOBE, вектор βAS3-FB, вектор V5, вектор V5m3, вектор V5m3-400, вектор G9 и вектор BCL11A shmir.
6. Культура по любому из пп. 1-5, где лентивирусный вектор содержит:
a) 5´-длинный концевой повтор (LTR);
b) сигнал упаковки Psi (Ψ);
c) элемент экспорта РНК;
d) центральный полипуриновый тракт (cPPT) лентивируса;
e) промотор, функционально связанный с представляющим интерес полинуклеотидом; и
f) 3´-LTR SIN.
7. Культура по п. 6, где:
(a) 5’-LTR представляет собой модифицированный 5’-LTR, который дополнительно содержит делецию относительно 5’-LTR дикого типа;
(b) промотор 5’-LTR заменяют на гетерологичный промотор, выбранный из группы, состоящей из: промотора цитомегаловируса (CMV), промотора вируса саркомы Рауса (RSV) или промотора вируса обезьян 40 (SV40);
(c) элемент экспорта РНК включает посттранскрипционный регуляторный элемент вируса гепатита B (PRE) или Rev-чувствительный регуляторный элемент вируса иммунодефицита человека (ВИЧ);
(d) 3’-LTR содержит последовательность полиаденилирования;
(e) промотор содержит один или более элементов LCR β-глобина человека;
(f) промотор содержит гиперчувствительные к ДНКазе I участки 2, 3 и 4 из LCR β-глобина человека; или
(g) лентивирусный вектор дополнительно содержит 3’-энхансерный элемент β-глобина человека.
8. Культура по п. 6 или 7, где представляющий интерес полинуклеотид кодирует белок, предотвращающий образование серповидноклеточных эритроцитов, или ген глобина.
9. Культура по п. 8, где ген глобина выбран из группы, состоящей из: белка β-глобина человека, белка δ-глобина человека, белка γ-глобина человека, белка βA-T87Q-глобина человека, белка βA-G16D/E22A/T87Q-глобина человека и белка βA-T87Q/K95E/K120E-глобина человека.
10. Культура по любому из пп. 1-9, где:
(a) популяцию гематопоэтических клеток трансдуцируют в течение по меньшей мере приблизительно 2 ч;
(b) популяцию гематопоэтических клеток трансдуцируют в течение по меньшей мере приблизительно 24 ч или
(c) популяцию гематопоэтических клеток трансдуцируют в течение от приблизительно 2 ч до приблизительно 24 ч.
11. Культура по любому из пп. 1-10, где проводят селекцию CD34+гематопоэтических стволовых клеток или клеток-предшественников по экспрессии CD34+ перед трансдукцией.
12. Популяция CD34+гематопоэтических стволовых клеток или клеток-предшественников (ГСПК), трансдуцированная в культуру по любому из пп. 1- 11, где (1) по меньшей мере 75% ГСПК трансдуцрованы, (2) среднее число копий вектора (ЧКВ) ГСПК составляет по меньшей мере 1,5, и (3) уровень эндотоксина в указанной популяции ГСПК составляет не больше, чем 5,0 ЕЭ/мл.
13. Популяция ГСПК по п. 12, где лентивирусный вектор кодирует полипептид представителя 1 подсемейства D белков с АТФ-связывающей кассетой (ABCD1), белок, предотвращающий образование серповидноклеточных эритроцитов, ген глобина, белок β-глобина, вариант β-глобина человека, βA-T87Q человека, белок δ-глобина человека или белок γ-глобина человека.
14. Композиция, содержащая популяцию CD34+ гематопоэтических стволовых клеток или клеток-предшественников по п. 12 или 13.
15. Фармацевтическая композиция, содержащая популяцию CD34+ гематопоэтических стволовых клеток или клеток-предшественников по п. 12 или 13 и фармацевтически приемлемый носитель.
16. Способ лечения гемоглобинопатии у субъекта, включающий введение указанному субъекту популяции клеток по п. 12 или 13.
17. Способ по п. 16, где гемоглобинопатия представляет собой β-талассемию или серповидноклеточную болезнь.
18. Способ лечения гемоглобинопатия у субъекта, включающий введение указанному субъекту композиции по п. 15.
19. Способ по п. 18, где гемоглобинопатия представляет собой β-талассемию или серповидноклеточную болезнь.
