Смеси олигосахаридов, являющихся производными гепарина, способ их получения и содержащие их фармацевтические композиции - RU2006105384A

Реферат

1. Смеси олигосахаридов, имеющие общую структуру конститутивных полисахаридов гепарина и обладающие следующими характеристиками:

средняя молекулярная масса от 1800 до 2400 Дальтон,

активность анти-Ха, от 190 М.ед./мг до 450 М.ед./мг,

активность анти-IIa равна нулю или практически равна нулю;

причем конститутивные олигосахариды этих смесей

содержат 2-16 сахаридных звеньев

имеют звено 2-0-сульфат-4,5-ненасыщенной уроновой кислоты на одном из их концов,

и содержат гексасахарид следующей формулы:

в форме соли щелочного или щелочноземельного металла.

2. Смеси олигосахаридов по п.1, отличающиеся тем, что солями щелочного или щелочно-земельного металла являются соли натрия, калия, кальция и магния.

3. Смеси олигосахаридов по п.1 или 2, отличающиеся тем, что они содержат 20-100%, в частности, 30-60% гексасахаридной фракции.

4. Смесь олигосахаридов по п.3, отличающаяся тем, что гексасахаридная фракция содержит 20-70%, в частности, 25-50% гексасахарида Δ IIa-IIs-Is, который описан в п.1.

5. Смесь олигосахаридов по п.1, отличающаяся тем, что она имеет среднюю молекулярную массу 1900-2200, в частности, 1950-2150 Дальтон.

6. Смесь олигосахаридов по п.1, отличающаяся тем, что она имеет активность анти-Ха, равную 190-410 М.ед./мг, в частности, равную 200-300 М.ед./мг и нулевую или практически нулевую активность анти-IIa.

7. Смесь олигосахаридов по п.1, отличающаяся тем, что она имеет следующие характеристики:

среднюю молекулярную массу 1950-2150 Дальтон,

активность анти-Ха, равную 190-410 М.ед./мг и активность анти-IIa, равную нулю или практически равную нулю,

включают 30-60% гексасахаридной фракции, которая содержит 25-55% фракции ΔIIa-IIs-Is.

8. Способ получения смесей олигосахаридов по любому из пп.1-7, отличающийся тем, что гепарин очень низкой молекулярной массы, имеющий активность аХа выше 140 М.ед./мг, активность aIIa ниже 5 М.ед./мг и среднюю молекулярную массу 2000-3000 Дальтон, подвергают следующим химическим реакциям:

a) превращению одной соли в другую при действии хлорида бензетония для получения гепарината бензетония,

b) этерификации полученного гепарината бензетония под действием бензилхлорида и обработке для получения соли натрия сложного бензилового эфира гепарина очень низкой молекулярной массы,

с) превращению соли полученного сложного бензилового эфира и получению соли четвертичного аммония,

d) деполимеризации посредством сильного органического основания с pka, предпочтительно, выше 20 с получением деполимеризованного гепарина очень низкой молекулярной массы,

e) превращению соли четвертичного аммония деполимеризованного гепарина очень низкой молекулярной массы в соль натрия,

f) омылению остаточных сложноэфирных функций и, возможно, очистке.

9. Способ получения по п.8, отличающийся тем, что молярное соотношение сильное основание/сложный эфир, используемое на стадии деполимеризации d), составляет 0,2-5, предпочтительно, 0,6-2.

10. Способ получения по п.8 или 9, отличающийся тем, что стадию деполимеризации d) осуществляют с использованием производного фосфазена в качестве основания.

11. Способ получения по п.8, отличающийся тем, что стадию деполимеризации d) осуществляют при содержании воды ниже 0,3%, если используют 1 молярный эквивалент фосфазенового основания по отношению к соли бензетония сложного бензилового эфира НТВТМ.

12. Способ получения по п.10, отличающийся тем, что основания, относящиеся к семейству фосфазенов, используемые на стадии деполимеризации d), имеют предпочтительно формулу:

в которой радикалы R₁-R₇, одинаковые или разные, означают алкильные линейные, разветвленные или циклические радикалы, содержащие 1-6 атомов углерода, при этом R₃ и R₄ могут, при желании, образовывать с группой -N-P-N-, с которой они связаны, 6-ти членный гетероцикл.

13. Способ получения по п.10, отличающийся тем, что основание, относящееся к семейству фосфазенов, используемое на стадии деполимеризации, представляет собой 2-трет.бутилимино-2-диэтиламино-1,З-диметилпергидро-1,3,2-диаза-фосфорин.

14. Способ получения по п.8, отличающийся тем, что степень этерификации соли четвертичного аммония сложного бензилового эфира гепарина на стадии b) составляет 40-100%, предпочтительно, 70-90%.

15. Способ получения по п.8, отличающийся тем, что превращение соли четвертичного аммония сложного эфира гепарина очень низкой молекулярной массы, полученного на стадии b) способа по п.8, в соль натрия осуществляют путем обработки реакционной среды спиртовым раствором ацетата натрия предпочтительно 10% раствором ацетата натрия в метаноле (масса/объем) при температуре 15-25°С.

16. Способ получения по п.15, отличающийся тем, что массовый эквивалент ацетата натрия, вводимого на стадии этерификации b), составляет трехкратное количество массы соли четвертичного аммония сложного бензилового эфира гепарина, вводимой в реакцию деполимеризации.

17. Способ по п.8 получения смесей олигосахаридов, отличающийся тем, что соль четвертичного аммония сложного бензилового эфира гепарина очень низкой молекулярной массы, полученная на стадии с), предпочтительно, представляет собой соль бензетония, цетилпиридиния или цетилтриметиламмония.

18. Способ получения по п.8, отличающийся тем, что омыление на стадии f) осуществляют при помощи гидроксида щелочного металла, такого как гидроксид натрия, гидроксид калия, гидроксид лития, в водной среде при температуре 0-20°С, предпочтительно, 0-10°С.

19. Способ получения по п.18, отличающийся тем, что используют 1-5 молярных эквивалентов гидроксида щелочного металла, более конкретно, 1-2 молярных эквивалента гидроксида щелочного металла.

20. Способ по п.8 получения смесей олигосахаридов, описанных в любом из пп.1-5, обладающих повышенной селективностью в отношении фактора Ха смесей олигосахаридов, отличающийся тем, что дополнительно осуществляют удаление дисахаридных и тетрасахаридных фракций путем хроматографии, в частности, на колонках, наполненных гелем агар-полиакриламидного типа.

21. Способ по п.8 получения смесей олигосахаридов по любому из пп.1-7, отличающийся тем, что в качестве исходного продукта используют гепарин низкой молекулярной массы или гепарин очень низкой молекулярной массы (1500-3000 Да), имеющие активность анти-Ха 100-140 М.ед./мг, вместо гепарина очень низкой молекулярной массы, описанного в п.8.

22. Способ по п.8 получения смесей олигосахаридов по любому из пп.1-7, отличающийся тем, что в качестве исходного продукта используют гепарин очень низкой молекулярной массы (1500-4000 Да), имеющий активность анти-Ха 100-140 М.ед./мг, вместо гепарина очень низкой молекулярной массы, описанного в п.8.

23. Способ получения по п.21, отличающийся тем, что гепарин низкой молекулярной массы выбирают из эноксапарина, фраксипарина, фрагмина, иннохепа (или логипарина), нормифло, эмболекса (или сандопарина), флюксума (или минидальтона), кливарина и хибора.

24. Смеси олигосахаридов по п.1, которые могут быть получены способом, описанным в любом из пп.8-23.

25. Смеси олигосахаридов по любому из пп.1-7 в качестве лекарственного средства, обладающего антитромботической активностью.

26. Лекарственное средство по п.25 для лечения или профилактики венозных или артериальных тромбозов, глубокого венозного тромбоза, эмболии легких, нестабильной стенокардии, инфаркта миокарда, ишемической болезни сердца, окклюзивных заболеваний периферических артерий и мерцательной аритмии, пролиферации клеток гладкой мускулатуры, атеросклероза и артериосклероза, лечения и профилактики рака путем модулирования ангиогенеза и факторов роста, а также для лечения и профилактики нарушений диабетического происхождения, таких как диабетические ретинопатии и нефропатии.

27. Фармацевтическая композиция, содержащая по меньшей мере одно лекарственное средство, описанное в п.25, и один или несколько фармацевтически инертных эксципиентов или носителей, или добавок.

28. Фармацевтическая композиция по п.21, отличающаяся тем, что она представляет собой раствор для инъекций, вводимый подкожным путем или внутривенно.

29. Фармацевтическая композиция по п.27, отличающаяся тем, что она представляет собой состав для ингаляции, предназначенный для введения через легкие.

30. Фармацевтическая композиция по п.27, отличающаяся тем, что она представляет собой состав, предназначенный для перорального введения.

31. Способ определения активности анти-Ха смесей олигосахаридов по любому из пп.1-7, отличающийся тем, что используют амидолитический метод на хромогенном субстрате, в котором восстанавливающим буфером является полиэтиленгликоль 6000 (ПЭГ 6000).