Гепарансульфаты - RU2015153735A
Код документа: RU2015153735A
Формула
1. Выделенный или, по существу, очищенный гепарансульфат HS8, при этом указанный HS8 способен связываться с пептидом или полипептидом, состоящим из аминокислотной последовательности YCKNGGF (SEQ ID NO: 2) и имеющим от 0 до 20 дополнительных аминокислот на одном или на обоих концах указанной аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 2.
2. Выделенный или, по существу, очищенный гепарансульфат HS8 по п. 1, отличающийся тем, что указанный пептид или полипептид содержит или состоит из аминокислотной последовательности GHFKDPKRLYCKNGGF (SEQ ID NO: 1).
3. Выделенный или. по существу, очищенный гепарансульфат HS8 по п. 1, отличающийся тем, что после расщепления гепаринлиазами I, II и III с последующим исследованием полученных дисахаридных фрагментов методом капиллярного электрофореза указанный гепарансульфат HS8 имеет следующий дисахаридный состав:
при этом необязательно после расщепления гепаринлиазами I, II и III с последующим исследованием полученных дисахаридных фрагментов методом капиллярного электрофореза указанный гепарансульфат HS8 имеет следующий дисахаридный состав:
4. Выделенный или, по существу, очищенный гепарансульфат HS8 по п. 1, полученный с помощью способа, включающего:
(i) обеспечение твердой подложки, содержащей прикрепленные молекулы полипептида, содержащего гепаринсвязывающий домен, содержащий аминокислотную последовательность YCKNGGF; при этом необязательно указанный полипептид содержит или состоит из аминокислотной последовательности, выбранной из GHFKDPKRLYCKNGGF (SEQ ID NO: 1);
(ii) приведение указанных молекул полипептида в контакт со смесью, содержащей гликозаминогликаны, в условиях, обеспечивающих образование комплексов полипептид-гликозаминогликан, при этом необязательно указанная смесь, содержащая гликозаминогликаны, представляет собой препарат гепарансульфата, полученный из слизистой оболочки кишечника свиней;
(iii) отделение комплексов полипептид-гликозаминогликан от остальной части смеси;
(iv) диссоциацию гликозаминогликанов из указанных комплексов полипептид-гликозаминогликан;
(v) сбор указанных диссоциированных гликозаминогликанов.
5. Композиция, содержащая выделенный или по существу очищенный гепарансульфат HS8 по любому из пп. 1-4, и дополнительно содержащая фактор роста, предпочтительно ФРФ2.
6. Фармацевтическая композиция, содержащая выделенный или, по существу, очищенный гепарансульфат HS8 по любому из пп. 1-4, при этом указанная фармацевтическая композиция дополнительно содержит белок ФРФ2 и/или мезенхимальные стволовые клетки.
7. Применение выделенного или, по существу, очищенного гепаран сульфата HS8 по любому из пп. 1-4 в способе заживления ран в условиях in vivo.
8. Применение выделенного или, по существу, очищенного гепарансульфата HS8 по любому из пп. 1-4 в способе терапевтического лечения, при этом указанный способ терапевтического лечения включает восстановление и/или регенерацию ткани, предпочтительно костной ткани.
9. Применение выделенного или, по существу, очищенного гепарансульфата HS8 по любому из пп. 1-4 для лечения заболевания, состояния или травмы ткани, причем указанный способ включает восстановление и/или регенерацию ткани, предпочтительно костной ткани.
10. Способ лечения заболевания, состояния или травмы ткани у пациента, включающий введение указанному пациенту терапевтически эффективного количества выделенного или, по существу, очищенного гепарансульфата HS8 по любому из пп. 1-4, что ведет к восстановлению и/или регенерации ткани, предпочтительно костной ткани.
11. Способ по п. 10, включающий введение выделенного или, по существу, очищенного гепарансульфата HS8 в ткань в области раны или в окружающую рану ткань, или в место на теле пациента, в котором требуется регенерация или восстановление ткани.
12. Способ по п. 10 или 11, отличающийся тем, что указанный способ дополнительно включает введение указанному пациенту белка ФРФ2.
13. Способ лечения заболевания, состояния или травмы ткани у пациента, указанный способ включает имплантацию хирургическим путем биосовместимого имплантата или протеза, содержащего биоматериал и выделенный или, по существу, очищенный гепарансульфат HS8 по любому из пп. 1-4, в ткань пациента, расположенную в очаге заболевания, состояния или травмы, или окружающую указанный очаг, что ведет к восстановлению и/или регенерации ткани.
14. Биосовместимый имплантат или протез, содержащий биоматериал и выделенный или, по существу, очищенный гепарансульфат HS8 по любому из пп. 1-4.
15. Способ получения биосовместимого имплантата или протеза, указанный способ включает этап покрытия или пропитки биоматериала выделенным или, по существу, очищенным гепарансульфатом HS8 по любому из пп. 1-4.
16. Способ лечения перелома кости у пациента, указанный способ включает введение указанному пациенту терапевтически эффективного количества выделенного или, по существу, очищенного гепарансульфата HS8 по любому из пп. 1-4.
17. Способ по п. 16, включающий введение указанного выделенного или по существу очищенного гепарансульфата HS8 в ткань, окружающую указанный перелом или введение указанного выделенного или по существу очищенного гепарансульфата HS8, которое включает инъекцию указанного гепарансульфата в ткань, окружающую указанный перелом.
18. Способ по п. 16, отличающийся тем, что указанный способ включает имплантацию хирургическим путем биосовместимого имплантата или протеза, содержащего биоматериал и терапевтически эффективное количество выделенного или, по существу, очищенного гепарансульфата HS8 по любому из пп. 1-4, в ткань указанного пациента в месте перелома или в ткань указанного пациента, окружающую область перелома.
19. Способ по п. 16 или 17, отличающийся тем, что указанный выделенный или, по существу, очищенный гепарансульфат HS8 изготовлен в виде фармацевтической композиции или лекарственного средства, содержащего указанный гепарансульфат и фармацевтически приемлемый носитель, адъювант или разбавитель.
20. Способ культивирования стволовых клеток в условиях in vitro, указанный способ включает культивирование указанных стволовых клеток в условиях in vitro совместно с выделенным или, по существу, очищенным гепарансульфатом HS8 по любому из пп. 1-4.
21. Способ обогащения колониеобразующими единицами (КОЕ-Ф) культуры мезенхимальных стволовых клеток (МСК), указанный способ включает культивирование МСК в условиях in vitro в контакте с выделенным или, по существу, очищенным гепарансульфатом HS8 по любому из пп. 1-4.
22. Способ по п. 21, отличающийся тем, что культивируемые клетки пролиферируют, и популяция МСК размножается, причем указанная размноженная популяция МСК характеризуется тем, что
≤2% указанной популяции МСК экспрессируют любой из CD45, CD34, CD14, CD19, HLA-DR; и
≥95% указанной популяции МСК экспрессируют CD105, CD73 и CD90; и
≥40% указанной популяции МСК экспрессируют CD49a, и/или
≥50% указанной популяции МСК экспрессируют SSEA-4, и/или
≥20% указанной популяции МСК экспрессируют STRO-1.
23. Способ по п. 21, дополнительно включающий пассирование указанных МСК, причем после одного или более пассажей популяция МСК характеризуется тем, что
≤2% указанной популяции МСК экспрессируют любой из CD45, CD34, CD14, CD19, HLA-DR; и
≥95% указанной популяции МСК экспрессируют CD105, CD73 и CD90; и
≥40% указанной популяции МСК экспрессируют CD49a, и/или
- ≥50% указанной популяции МСК экспрессируют SSЕA-4, и/или
- ≥20% указанной популяции МСК экспрессируют STRO-1.
24. Культуральная среда, содержащая выделенный или, по существу, очищенный гепарансульфат HS8 по любому из пп. 1-4.
25. Культуральная среда по п. 24, дополнительно содержащая ФРФ2.
26. Набор компонентов, включающий заранее определенное количество выделенного или, по существу, очищенного гепарансульфата HS8 по любому из пп. 1-4 и заранее определенное количество ФРФ2.
27. Продукты, содержащие терапевтически эффективные количества
i) выделенного или, по существу, очищенного гепарансульфата HS8 по любому из пп. 1-4, и один или оба из
ii) белка ФРФ2;
iii) мезенхимальных стволовых клеток,
для одновременного, раздельного или последовательного применения в способе терапевтического лечения.
28. Способ увеличения стабильности фактора роста, предпочтительно ФРФ2, указанный способ включает приведение фактора роста, предпочтительно ФРФ2, в контакт с выделенным или, по существу, очищенным гепарансульфатом HS8 по любому из пп. 1-4.
