Белки урокортина и их применения - RU2003105897A

Реферат

1. ДНК, кодирующая урокортин II, выбранная из группы, состоящей из:

(a) изолированной и очищенной ДНК, которая кодирует белок урокортина II;

(b) изолированной и очищенной ДНК, которая в условиях высокой жесткости гибридизуется с антисмысловой последовательностью, комплементарной изолированной ДНК, указанной выше в (а), где условия высокой жесткости характеризуются как промывка мембраны при высокой температуре и низкой концентрации соли, функционально эквивалентных 0,1×SSC при 65°С, при этом указанная ДНК кодирует белок урокортина II; и

(c) изолированной и очищенной ДНК, отличающейся от указанных выше изолированных ДНК по (а) и (b), по последовательности кодонов вследствие вырожденности генетического кода, и которая кодирует белок урокортина II.

2. ДНК по п.1, где указанная ДНК кодирует пептидный предшественник белка урокортина II с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 10.

3. ДНК по п.1, где указанная ДНК кодирует белок урокортина II, причем указанный белок имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 11.

4. Вектор, способный экспрессировать ДНК по п.1, где указанный вектор содержит указанную ДНК и регуляторные элементы, необходимые для экспрессии указанной ДНК в клетке.

5. Вектор по п.4, где указанная ДНК кодирует белок

урокортина II, имеющий аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID NO: 11.

6. Клетка-хозяин, трансфицированная вектором по п.4, причем указанный вектор экспрессирует белок урокортина II.

7. Клетка-хозяин по п.6, где указанная клетка выбрана из группы, состоящей из бактериальных клеток, клеток млекопитающих, растительных клеток и клеток насекомых.

8. Клетка-хозяин по п.7, где указанной бактериальной клеткой является Е.coli.

9. Выделенный и очищенный белок урокортина II, кодируемый ДНК, выбранной из группы, состоящей из:

(a) изолированной и очищенной ДНК, которая кодирует белок урокортина II;

(b) изолированной и очищенной ДНК, которая в условиях высокой жесткости гибридизуется с антисмысловой последовательностью, комплементарной изолированной ДНК, указанной выше в (а), где условия высокой жесткости характеризуются как промывка мембраны при высокой температуре и низкой концентрации соли, функционально эквивалентных 0,1×SSC при 65°С, при этом указанная ДНК кодирует белок урокортина II; и

(c) изолированной и очищенной ДНК, отличающейся от указанных выше изолированных ДНК по (а) и (b), по последовательности кодонов вследствие вырожденности генетического кода, и которая кодирует белок урокортина II.

10. Выделенный и очищенный белок урокортина II по п.9, имеющий аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID

NO: 11.

11. Антитело, направленное против белка урокортина II по п.9.

12. Антитело по п.11, где указанное антитело является моноклональным антителом.

13. Фармацевтическая композиция, содержащая белок урокортина II по п.9 и фармацевтически приемлемый носитель.

14. Способ лечения патофизиологического состояния, включающий в себя стадию введения фармацевтической композиции по п.13 индивидууму, который нуждается в таком лечении.

15. Способ по п.14, где указанное патофизиологическое состояние выбрано из группы, состоящей из высокой температуры тела, нарушения аппетита, застойной сердечной недостаточности, стресса, тревожного состояния и нежелательно низких уровней секреции АКТГ.

16. ДНК, кодирующая родственный урокортину пептид человека, выбранная из группы, состоящей из:

(a) изолированной и очищенной ДНК, которая кодирует белок родственного урокортину пептида человека;

(b) изолированной и очищенной ДНК, которая в условиях высокой жесткости гибридизуется с антисмысловой последовательностью, комплементарной изолированной ДНК, указанной выше в (а), где условия высокой жесткости характеризуются как промывка мембраны при высокой температуре и низкой концентрации соли, функционально эквивалентных 0,1×SSC при 65°С, при этом указанная ДНК кодирует белок родственного урокортину пептида человека; и

(с) изолированной и очищенной ДНК, отличающейся от указанных выше изолированных ДНК по (а) и (b), по последовательности кодонов вследствие вырожденности генетического кода, и которая кодирует белок родственного урокортину пептида человека.

17. ДНК по п.16, где указанная ДНК имеет последовательность, указанную в SEQ ID NO: 1.

18. ДНК по п.16, где указанная ДНК кодирует белок-предшественник родственного урокортину пептида человека с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 2.

19. ДНК по п.16, где указанная ДНК кодирует белок родственного урокортину пептида человека, причем указанный белок имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 3.

20. ДНК по п.16, где указанная ДНК кодирует белок родственного урокортину пептида человека, причем указанный белок имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4.

21. Вектор, способный экспрессировать ДНК по п.16, где указанный вектор содержит указанную ДНК и регуляторные элементы, необходимые для экспрессии указанной ДНК в клетке.

22. Вектор по п.21, где указанная ДНК кодирует белок родственного урокортину пептида человека, имеющий аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID NO: 3.

23. Вектор по п.21, где указанная ДНК кодирует белок родственного урокортину пептида человека, имеющий аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID NO: 4.

24. Клетка-хозяин, трансфицированная вектором по п.21, причем указанный вектор экспрессирует белок родственного урокортину пептида человека.

25. Клетка-хозяин по п.24, где указанная клетка выбрана из группы, состоящей из бактериальных клеток, клеток млекопитающих, растительных клеток и клеток насекомых.

26. Клетка-хозяин по п.25, где указанной бактериальной клеткой является Е.coli.

27. Выделенный и очищенный родственный урокортину пептид человека, кодируемый ДНК, выбранной из группы, состоящей из:

(a) изолированной и очищенной ДНК, которая кодирует белок родственного урокортину пептида человека;

(b) изолированной и очищенной ДНК, которая в условиях высокой жесткости гибридизуется с антисмысловой последовательностью, комплементарной изолированной ДНК, указанной выше в (а), где условия высокой жесткости характеризуются как промывка мембраны при высокой температуре и низкой концентрации соли, функционально эквивалентных 0,1×SSC при 65°С, при этом указанная ДНК кодирует белок родственного урокортину пептида человека; и

(c) изолированной и очищенной ДНК, отличающейся от указанных выше изолированных ДНК по (а) и (b),по последовательности кодонов вследствие вырожденности генетического кода, и которая кодирует белок родственного урокортину пептида человека.

28. Выделенный и очищенный белок родственного урокортину пептида человека по п.27, имеющий аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID NO: 3.

29. Выделенный и очищенный белок родственного урокортину пептида человека по п.27, имеющий аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID NO: 4.

30. Антитело, направленное против белка родственного урокортину пептида человека по п.27.

31. Антитело по п.30, где указанное антитело является моноклональным антителом.

32. Фармацевтическая композиция, содержащая белок родственного урокортину пептида человека по п.27 и фармацевтически приемлемый носитель.

33. Фармацевтическая композиция по 32, где родственный урокортину пептид человека имеет аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID NO: 4.

34. Способ лечения патофизиологического состояния, включающий в себя стадию введения фармацевтической композиции по п.32 индивидууму, который нуждается в таком лечении.

35. Способ по п.34, где указанное патофизиологические состояние выбрано из группы, состоящей из высокой температуры тела, нарушения аппетита, застойной сердечной недостаточности, стресса, тревожного состояния и нежелательно низких уровней секреции АКТГ.

36. Модифицированный белок, где указанный белок выбран из группы, состоящей из урокортина II и родственного урокортину пептида человека.

37. Белок по п.36, где указанный белок был мутирован так, чтобы он содержал остаток тирозина.

38. Белок по п.36, где указанный белок был модифицирован присоединением последовательности, состоящей из Tyr-Gly, к

N-концу указанного белка.

39. Белек по п.36, где указанный белок был модифицирован N-концезой делецией, где указанная делеция включает в себя аминокислоты, выбранные из группы, состоящей из первой аминокислоты, первой и второй аминокислот, с первой по третью аминокислоту, с первой по четвертую аминокислоту и с первой по пятую аминокислоту.

40. Белок по п.36, где указанный белок выбран из группы, состоящей, из белков с последовательностью SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4 и SEQ ID NO: 11, и где остаток изолейцина, соответствующий положению 9 указанного белка, заменен изомером аминокислоты в “D-форме”.

41. Белок по п.40, где указанный изомер аминокислоты в “D-форме” выбран из группы, состоящей из D-изолейцина, D-фенилаланина и D-лейцина.

42. Белок по п.36, где указанный белок выбран из группы, состоящей из урокортина II с последовательностью SEQ ID NO: 11 и родственного урокортину белка человека с последовательностью SEQ ID NO: 4, где остаток глутаминовой кислоты, соответствующей положению 17 указанного белка, заменен D-глутаминовой кислотой.

43. Белок по п.36, где аминокислоты заменены нестандартными аминокислотами, известными в данной области.

44. Белок по п.43, где указанная нестандартная аминокислота выбрана из группы, состоящей из Сα-метилированного лейцина, Сα-метилированного аланина, N-im-бензилгистидина, 4-гидроксипролина, 5-гидроксилизина, 3-

метилгистидина, гомосерина и орнитина.

45. Белек по п.36, где указанный белок ацилирован на N-конце указанного белка.

46. Белек по п.36, где указанный белок ацилирован жирной кислотой.

47. Белок по п.36, где указанный белок модифицирован так, чтобы он содержал флуоресцентную метку.

48. Конъюгат белка по п.36 с токсином.

49. Конъюгат белка по п.36 с комплексообразующим агентом для радионуклидов.

50. Конъюгат по п.49 в комплексе с радионуклидом.