Генетически модифицированный бактериальный штамм wsj-ia i, продуцирующий изовалерилспирамицин с высоким содержанием и высоким выходом - RU2012158029A

Реферат

1. Высокопродуктивный штамм генетически модифицированной бактерии, продуцирующий компонент изовалерилспирамицин I с высоким содержанием, причем указанная генетически модифицированная бактерия представляет собой клональный штамм с геном изовалерилтрансферазы ist и связанным с ним регуляторным геном acyB2, которые совместно экспрессируются в бактерии WSJ-2, продуцирующей изовалерилспирамицин I.2. Способ конструирования генетически модифицированной бактерии по п.1, отличающийся тем, что:A) применяя тотальную ДНК термоустойчивых Streptomyces (Streptomyces thermotolarences CGMCC4.1501) в качестве матрицы, создают праймеры в соответствии с последовательностью ist-acyB2, опубликованной в NCBI, проводят ПЦР с получением связанного генного сегмента ist-acyB2, встраивают подходящие сайты рестрикции; или также лигируют фрагменты генов ist и acyB2 соответственно, с помощью вектора интеграции, переносимого в штамм бактерии, продуцирующей изовалерилспирамицин I, с получением рекомбинантной плазмиды, содержащей ген ist-acyB2;B) рекомбинантную плазмиду, содержащую ist-acyB2, переносят в бактерию WSJ-2, продуцирующую изовалерилспирамицин I, путем скрининга на устойчивость получают трансформант, после последовательных пассажей в условиях без внесения антибиотика и тестирования с внесением антибиотика с получают бактерию, продуцирующей изовалерилспирамицин I со стабильной экспрессией, содержащую рекомбинантную плазмиду, конструируют штамм, названный WSJ-IA, номер в коллекции культур CGMCC No. 3942.3. Способ конструирования генетически модифицированной бактерии по п.2, отличающийся тем, что для полученного штамма WSJ-IA подтверждают присутствие последовательности ist-acyB2 на генном ур