Композиции на основе rnai serpina1 и способы их применения - RU2015154721A
Код документа: RU2015154721A
Формула
1. Двухнитевое средство для RNAi для ингибирования экспрессии Serpina1 в клетке, где указанное двухнитевое средство для RNAi содержит смысловую нить иантисмысловую нить, образующие двухнитевой участок, где указанная смысловая нить содержит по меньшей мере 15 смежных нуклеотидов, отличающихся не более чем 3 нуклеотидами от любой из нуклеотидных последовательностей SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:2 или SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:7, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:9, SEQ ID NO:10 или SEQ ID NO:11, и указанная антисмысловая нить содержит по меньшей мере 15 смежных нуклеотидов, отличающихся не более чем 3 нуклеотидами от любой из нуклеотидных последовательностей SEQ ID NO:15, SEQ ID NO:16 или SEQ ID NO:17, SEQ ID NO:18, SEQ ID NO:19, SEQ ID NO:20, SEQ ID NO:21, SEQ ID NO:22, SEQ ID NO:23, SEQ ID NO:24 или SEQ ID NO:25,
где практически все нуклеотиды указанной смысловой нити и практически все нуклеотиды указанной антисмысловой нити являются модифицированными нуклеотидами, и
где указанная смысловая нить конъюгирована с лигандом, присоединенным на 3’-конце.
2. Двухнитевое средство для RNAi по п.1, где одно из отличий по 3 нуклеотидам в нуклеотидной последовательности антисмысловой нити заключается в ошибочном спаривании нуклеотидов в затравочной области антисмысловой нити.
3. Двухнитевое средство для RNAi по п.2, где антисмысловая нить содержит универсальное основание в ошибочно спаренном нуклеотиде.
4. Двухнитевое средство для RNAi по п.1, где все нуклеотиды указанной смысловой нити и все нуклеотиды указанной антисмысловой нити являются модифицированными нуклеотидами.
5. Двухнитевое средство для RNAi по п.1, где указанная смысловая нить и указанная антисмысловая нить содержат участок комплементарности, который содержит по меньшей мере 15 смежных нуклеотидов, отличающихся не более чем 3 нуклеотидами от любой из последовательностей, приведенных в любой из таблиц 1, 2, 5, 7, 8 и 9.
6. Двухнитевое средство для RNAi по любому из пп.1-5, где по меньшей мере один из указанных модифицированных нуклеотидов выбран из группы, состоящей из 3’-концевого нуклеотида дезокси-тимин (dT), 2'-O-метил-модифицированного нуклеотида, 2'-фтор-модифицированного нуклеотида, 2'-дезокси-модифицированного нуклеотида, запертого нуклеотида, лишенного азотистого основания нуклеотида, 2’-амино-модифицированного нуклеотида, 2’-алкил-модифицированного нуклеотида, морфолинового нуклеотида, фосфорамидата, содержащего синтетическое основание нуклеотида, нуклеотида, содержащего 5'-фосфоротиоатную группу, и концевого нуклеотида, соединенного с холестериловым производным или бисдециламидной группой додекановой кислоты.
7. Двухнитевое средство для RNAi по п.1, где по меньшей мере одна нить содержит 3’-выступающий конец по меньшей мере из 1 нуклеотида.
8. Двухнитевое средство для RNAi по п.1, где по меньшей мере одна нить содержит 3’-выступающий конец по меньшей мере из 2 нуклеотидов.
9. Двухнитевое средство для RNAi, способное ингибировать экспрессию Serpina1 в клетке, где указанное двухнитевое средство для RNAi содержит смысловую нить, практически комплементарную антисмысловой нити, где указанная антисмысловая нить содержит участок, практически комплементарный части mRNA, кодирующей Serpina1, где каждая нить составляет в длину от приблизительно 14 до приблизительно 30 нуклеотидов, где указанное двухнитевое средство для RNAi представлено формулой (III):
где каждый из i, j, k и l независимо равняется 0 или 1;
каждый из p, p’, q и q′ независимо равняется 0-6;
каждый Na и Na′ независимо представляет собой олигонуклеотидную последовательность, содержащую 0-25 нуклеотидов, которые являются либо модифицированными, либо немодифицированными, либо их комбинациями, при этом каждая последовательность содержит по меньшей мере два по-разному модифицированных нуклеотида;
каждый Nb и Nb′ независимо представляет собой олигонуклеотидную последовательность, содержащую 0-10 нуклеотидов, которые являются либо модифицированными, либо немодифицированными, либо их комбинациями;
каждый np, np′, nq и nq′, каждый из которых может присутствовать или отсутствовать, независимо представляет собой выступающий нуклеотид;
каждый из XXX, YYY, ZZZ, X′X′X′, Y′Y′Y′ и Z′Z′Z′ независимо представляет собой один мотив из трех идентичных модификаций трех последовательных нуклеотидов;
модификации Nb отличаются от модификации Y, а модификации Nb′ отличаются от модификации Y′; и
где смысловая нить конъюгирована по меньшей мере с одним лигандом.
10. Двухнитевое средство для RNAi по п.9, где Na’ содержит 1-25 нуклеотидов, и где один из 1-25 нуклеотидов в одном из положений 2-9 от 5’-конца характеризуется ошибочным спариванием нуклеотидов.
11. Двухнитевое средство для RNAi по п.10, содержащее универсальное основание в ошибочно спаренном нуклеотиде.
12. Двухнитевое средство для RNAi по п.9, где i равняется 0; j равняется 0; i равняется 1; j равняется 1; как i, так и j равняются 0; или как i, так и j равняются 1.
13. Двухнитевое средство для RNAi по п.9, где k равняется 0; l равняется 0; k равняется 1; l равняется 1; как k, так и l равняются 0; или как k, так и l равняются 1.
14. Двухнитевое средство для RNAi по п.9, где XXX комплементарен X′X′X′, YYY комплементарен Y′Y′Y′, и ZZZ комплементарен Z′Z′Z′.
15. Двухнитевое средство для RNAi по п.9, где мотив YYY находится в сайте расщепления смысловой нити или рядом с ним.
16. Двухнитевое средство для RNAi по п.9, где мотив Y′Y′Y′ находится в 11, 12 и 13 положениях антисмысловой нити от 5'-конца.
17. Двухнитевое средство для RNAi по п.16, где Y′ представляет собой 2′-O-метил.
18. Двухнитевое средство для RNAi по п.9, где формула (III) представлена формулой (IIIa):
19. Двухнитевое средство для RNAi по п.9, где формула (III) представлена формулой (IIIb):
где каждый Nb и Nb′ независимо представляет собой олигонуклеотидную последовательность, содержащую 1-5 модифицированных нуклеотидов.
20. Двухнитевое средство для RNAi по п.9, где формула (III) представлена формулой (IIIc):
где каждый Nb и Nb′ независимо представляет собой олигонуклеотидную последовательность, содержащую 1-5 модифицированных нуклеотидов.
21. Двухнитевое средство для RNAi по п.9, где формула (III) представлена формулой (IIId):
где каждый Nb и Nb′ независимо представляет собой олигонуклеотидную последовательность, содержащую 1-5 модифицированных нуклеотидов, а каждый Na и Na′ независимо представляет собой олигонуклеотидную последовательность, содержащую 2-10 модифицированных нуклеотидов.
22. Двухнитевое средство для RNAi по п.1 или 9, где двухнитевой участок составляет в длину 15-30 пар нуклеотидов.
23. Двухнитевое средство для RNAi по п.22, где двухнитевой участок составляет в длину 17-23 пары нуклеотидов.
24. Двухнитевое средство для RNAi по п.22, где двухнитевой участок составляет в длину 17-25 пар нуклеотидов.
25. Двухнитевое средство для RNAi по п.22, где двухнитевой участок составляет в длину 23-27 пар нуклеотидов.
26. Двухнитевое средство для RNAi по п.22, где двухнитевой участок составляет в длину 19-21 пару нуклеотидов.
27. Двухнитевое средство для RNAi по п.22, где двухнитевой участок составляет в длину 21-23 пары нуклеотидов.
28. Двухнитевое средство для RNAi по п.1 или 9, где каждая нить содержит 15-30 нуклеотидов.
29. Двухнитевое средство для RNAi по п.1 или 9, где каждая нить содержит 19-30 нуклеотидов.
30. Двухнитевое средство для RNAi по п.9, где модификации нуклеотидов выбраны из группы, состоящей из LNA, HNA, CeNA, 2ʹ-метоксиэтила, 2ʹ-O-алкила, 2ʹ-O-аллила, 2ʹ-C-аллила, 2ʹ-фтора, 2ʹ-дезокси, 2’-гидроксила и их комбинаций.
31. Двухнитевое средство для RNAi по п.30, где модификации нуклеотидов представляют собой 2ʹ-O-метил- или 2ʹ-фтор-модификации.
32. Двухнитевое средство для RNAi по п.1 или 9, где лигандом является одно или несколько производных GalNAc, присоединенных посредством двухвалентного или трехвалентного разветвленного линкера.
33. Двухнитевое средство для RNAi по п.1 или 9, где лигандом является
34. Двухнитевое средство для RNAi по п.1 или 9, где лиганд присоединен к 3ʹ-концу смысловой нити.
35. Двухнитевое средство для RNAi по п.34, где средство для RNAi конъюгировано с лигандом, как показано на следующей схеме:
где X представляет собой O или S.
36. Двухнитевое средство для RNAi по п.1 или 9, где указанное средство дополнительно содержит по меньшей мере одну фосфоротиоатную или метилфосфонатную межнуклеотидную связь.
37. Двухнитевое средство для RNAi по п.36, где фосфоротиоатная или метилфосфонатная межнуклеотидная связь находится на 3’-конце одной нити.
38. Двухнитевое средство для RNAi по п.37, где указанная нить является антисмысловой нитью.
39. Двухнитевое средство для RNAi по п.37, где указанная нить является смысловой нитью.
40. Двухнитевое средство для RNAi по п.36, где фосфоротиоатная или метилфосфонатная межнуклеотидная связь находится на 5’-конце одной нити.
41. Двухнитевое средство для RNAi по п.40, где указанная нить является антисмысловой нитью.
42. Двухнитевое средство для RNAi по п.40, где указанная нить является смысловой нитью.
43. Двухнитевое средство для RNAi по п.36, где фосфоротиоатная или метилфосфонатная межнуклеотидная связь находится как на 5’-, так и на 3’-конце одной нити.
44. Двухнитевое средство для RNAi по п.43, где указанная нить является антисмысловой нитью.
45. Двухнитевое средство для RNAi по п.36, где указанное средство для RNAi содержит 6-8 фосфоротиоатных межнуклеотидных связей.
46. Двухнитевое средство для RNAi по п.45, где антисмысловая нить содержит две фосфоротиоатные межнуклеотидные связи на 5’-конце и две фосфоротиоатные межнуклеотидные связи на 3’-конце, а смысловая нить содержит по меньшей мере две фосфоротиоатные межнуклеотидные связи либо на 5’-конце, либо на 3’-конце.
47. Двухнитевое средство для RNAi по п.1 или 9, где парой оснований в 1 положении 5ʹ-конца антисмысловой нити дуплекса является пара оснований AU.
48. Двухнитевое средство для RNAi по п.9, где нуклеотиды Y имеют 2ʹ-фтор-модификацию.
49. Двухнитевое средство для RNAi по п.9, где нуклеотиды Yʹ имеют 2ʹ-O-метил-модификацию.
50. Двухнитевое средство для RNAi по п.9, где p′>0.
51. Двухнитевое средство для RNAi по п.9, где p′=2.
52. Двухнитевое средство для RNAi по п.51, где q’=0, p=0, q=0, а выступающие нуклеотиды p’ комплементарны целевой mRNA.
53. Двухнитевое средство для RNAi по п.51, где q’=0, p=0, q=0, а выступающие нуклеотиды p’ не комплементарны целевой mRNA.
54. Двухнитевое средство для RNAi по п.51, где смысловая нить содержит в общей сложности 21 нуклеотид, а антисмысловая нить содержит в общей сложности 23 нуклеотида.
55. Двухнитевое средство для RNAi по любому из пп.50-54, где по меньшей мере один np′ связан с соседним нуклеотидом посредством фосфоротиоатной связи.
56. Двухнитевое средство для RNAi по п.55, где все np′ связаны с соседними нуклеотидами посредством фосфоротиоатных связей.
57. Двухнитевое средство для RNAi по п.1 или 9, где указанное средство для RNAi выбрано из группы средств для RNAi, приведенных в любой из таблиц 1, 2, 5, 7, 8 и 9.
58. Двухнитевое средство для RNAi по п.1 или 7, где указанное средство для RNAi выбрано из группы, состоящей из AD-58681, AD-59054, AD-61719 и AD-61444.
59. Двухнитевое средство для RNAi для ингибирования экспрессии Serpina1 в клетке,
где указанное двухнитевое средство для RNAi содержит смысловую нить и антисмысловую нить, образующие двухнитевой участок,
где указанная смысловая нить содержит по меньшей мере 15 смежных нуклеотидов, отличающихся не более чем 3 нуклеотидами от любой из нуклеотидных последовательностей SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:2 или SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:7, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:9, SEQ ID NO:10 или SEQ ID NO:11, и указанная антисмысловая нить содержит по меньшей мере 15 смежных нуклеотидов, отличающихся не более чем 3 нуклеотидами от любой из нуклеотидных последовательностей SEQ ID NO:15, SEQ ID NO:16 или SEQ ID NO:17, SEQ ID NO:18, SEQ ID NO:19, SEQ ID NO:20, SEQ ID NO:21, SEQ ID NO:22, SEQ ID NO:23, SEQ ID NO:24 или SEQ ID NO:25,
где практически все нуклеотиды указанной смысловой нити имеют модификацию, выбранную из группы, состоящей из 2’-O-метил-модификации и 2’-фтор-модификации,
где указанная смысловая нить содержит две фосфоротиоатные межнуклеотидные связи на 5’-конце,
где практически все нуклеотиды указанной антисмысловой нити имеют модификацию, выбранную из группы, состоящей из 2’-O-метил-модификации и 2’-фтор-модификации,
где указанная антисмысловая нить содержит две фосфоротиоатные межнуклеотидные связи на 5’-конце и две фосфоротиоатные межнуклеотидные связи на 3’-конце, и
где указанная смысловая нить конъюгирована с одним или несколькими производными GalNAc, присоединенными посредством разветвленного двухвалентного или трехвалентного линкера на 3'-конце.
60. Двухнитевое средство для RNAi по п.59, где одно из отличий по 3 нуклеотидам в нуклеотидной последовательности антисмысловой нити заключается в ошибочном спаривании нуклеотидов в затравочной области антисмысловой нити.
61. Двухнитевое средство для RNAi по п.60, где антисмысловая нить содержит универсальное основание в ошибочно спаренном нуклеотиде.
62. Двухнитевое средство для RNAi по п.59, где все нуклеотиды указанной смысловой нити и все нуклеотиды указанной антисмысловой нити имеют модификацию.
63. Двухнитевое средство для RNAi, способное ингибировать экспрессию Serpina1 в клетке, где указанное двухнитевое средство для RNAi содержит смысловую нить, практически комплементарную антисмысловой нити, где указанная антисмысловая нить содержит участок, практически комплементарный части mRNA, кодирующей Serpina1, где каждая нить составляет в длину от приблизительно 14 до приблизительно 30 нуклеотидов, где указанное двухнитевое средство для RNAi представлено формулой (III)
где каждый из i, j, k и l независимо равняется 0 или 1;
каждый из p, p’, q и q′ независимо равняется 0-6;
каждый Na и Na′ независимо представляет собой олигонуклеотидную последовательность, содержащую 0-25 нуклеотидов, которые являются либо модифицированными, либо немодифицированными, либо их комбинациями, при этом каждая последовательность содержит по меньшей мере два по-разному модифицированных нуклеотида;
каждый Nb и Nb′ независимо представляет собой олигонуклеотидную последовательность, содержащую 0-10 нуклеотидов, которые являются либо модифицированными, либо немодифицированными, либо их комбинациями;
каждый np, np′, nq и nq′, каждый из которых может присутствовать или отсутствовать, независимо представляет собой выступающий нуклеотид;
каждый из XXX, YYY, ZZZ, X′X′X′, Y′Y′Y′ и Z′Z′Z′ независимо представляет собой один мотив из трех идентичных модификаций трех последовательных нуклеотидов, и где модификациями являются 2ʹ-O-метил- или 2ʹ-фтор-модификации;
модификации Nb отличаются от модификации Y, а модификации Nb′ отличаются от модификации Y′; и
где смысловая нить конъюгирована по меньшей мере с одним лигандом.
64. Двухнитевое средство для RNAi, способное ингибировать экспрессию Serpina1 в клетке, где указанное двухнитевое средство для RNAi содержит смысловую нить, практически комплементарную антисмысловой нити, где указанная антисмысловая нить содержит участок, практически комплементарный части mRNA, кодирующей Serpina1, где каждая нить составляет в длину от приблизительно 14 до приблизительно 30 нуклеотидов, где указанное двухнитевое средство для RNAi представлено формулой (III)
где каждый из i, j, k и l независимо равняется 0 или 1;
каждый np, nq и nq′, каждый из которых может присутствовать или отсутствовать, независимо представляет собой выступающий нуклеотид;
каждый из p, q и q′ независимо равняется 0-6;
np′>0, и по меньшей мере один np′ связан с соседним нуклеотидом посредством фосфоротиоатной связи;
каждый Na и Na′ независимо представляет собой олигонуклеотидную последовательность, содержащую 0-25 нуклеотидов, которые являются либо модифицированными, либо немодифицированными, либо их комбинациями, при этом каждая последовательность содержит по меньшей мере два по-разному модифицированных нуклеотида;
каждый Nb и Nb′ независимо представляет собой олигонуклеотидную последовательность, содержащую 0-10 нуклеотидов, которые являются либо модифицированными, либо немодифицированными, либо их комбинациями;
каждый из XXX, YYY, ZZZ, X′X′X′, Y′Y′Y′ и Z′Z′Z′ независимо представляет собой один мотив из трех идентичных модификаций трех последовательных нуклеотидов, и где модификациями являются 2ʹ-O-метил- или 2ʹ-фтор-модификации;
модификации Nb отличаются от модификации Y, а модификации Nb′ отличаются от модификации Y′; и
где смысловая нить конъюгирована по меньшей мере с одним лигандом.
65. Двухнитевое средство для RNAi, способное ингибировать экспрессию Serpina1 в клетке, где указанное двухнитевое средство для RNAi содержит смысловую нить, практически комплементарную антисмысловой нити, где указанная антисмысловая нить содержит участок, практически комплементарный части mRNA, кодирующей Serpina1, где каждая нить составляет в длину от приблизительно 14 до приблизительно 30 нуклеотидов, где указанное двухнитевое средство для RNAi представлено формулой (III)
где каждый из i, j, k и l независимо равняется 0 или 1;
каждый np, nq и nq′, каждый из которых может присутствовать или отсутствовать, независимо представляет собой выступающий нуклеотид;
каждый из p, q и q′ независимо равняется 0-6;
np′>0, и по меньшей мере один np′ связан с соседним нуклеотидом посредством фосфоротиоатной связи;
каждый Na и Na′ независимо представляет собой олигонуклеотидную последовательность, содержащую 0-25 нуклеотидов, которые являются либо модифицированными, либо немодифицированными, либо их комбинациями, при этом каждая последовательность содержит по меньшей мере два по-разному модифицированных нуклеотида;
каждый Nb и Nb′ независимо представляет собой олигонуклеотидную последовательность, содержащую 0-10 нуклеотидов, которые являются либо модифицированными, либо немодифицированными, либо их комбинациями;
каждый из XXX, YYY, ZZZ, X′X′X′, Y′Y′Y′ и Z′Z′Z′ независимо представляет собой один мотив из трех идентичных модификаций трех последовательных нуклеотидов, и где модификациями являются 2ʹ-O-метил- или 2ʹ-фтор-модификации;
модификации Nb отличаются от модификации Y, а модификации Nb′ отличаются от модификации Y′; и
где смысловая нить конъюгирована по меньшей мере с одним лигандом, где лигандом является одно или несколько производных GalNAc, присоединенных посредством двухвалентного или трехвалентного разветвленного линкера.
66. Двухнитевое средство для RNAi, способное ингибировать экспрессию Serpina1 в клетке, где указанное двухнитевое средство для RNAi содержит смысловую нить, практически комплементарную антисмысловой нити, где указанная антисмысловая нить содержит участок, практически комплементарный части mRNA, кодирующей Serpina1, где каждая нить составляет в длину от приблизительно 14 до приблизительно 30 нуклеотидов, где указанное двухнитевое средство для RNAi представлено формулой (III):
где каждый из i, j, k и l независимо равняется 0 или 1;
каждый np, nq и nq′, каждый из которых может присутствовать или отсутствовать, независимо представляет собой выступающий нуклеотид;
каждый из p, q и q′ независимо равняется 0-6;
np′>0, и по меньшей мере один np′ связан с соседним нуклеотидом посредством фосфоротиоатной связи;
каждый Na и Na′ независимо представляет собой олигонуклеотидную последовательность, содержащую 0-25 нуклеотидов, которые являются либо модифицированными, либо немодифицированными, либо их комбинациями, при этом каждая последовательность содержит по меньшей мере два по-разному модифицированных нуклеотида;
каждый Nb и Nb′ независимо представляет собой олигонуклеотидную последовательность, содержащую 0-10 нуклеотидов, которые являются либо модифицированными, либо немодифицированными, либо их комбинациями;
каждый из XXX, YYY, ZZZ, X′X′X′, Y′Y′Y′ и Z′Z′Z′ независимо представляет собой один мотив из трех идентичных модификаций трех последовательных нуклеотидов, и где модификациями являются 2ʹ-O-метил- или 2ʹ-фтор-модификации;
модификации Nb отличаются от модификации Y, а модификации Nb′ отличаются от модификации Y′;
где смысловая нить содержит по меньшей мере одну фосфоротиоатную связь; и
где смысловая нить конъюгирована по меньшей мере с одним лигандом, где лигандом является одно или несколько производных GalNAc, присоединенных посредством двухвалентного или трехвалентного разветвленного линкера.
67. Двухнитевое средство для RNAi, способное ингибировать экспрессию Serpina1 в клетке, где указанное двухнитевое средство для RNAi содержит смысловую нить, практически комплементарную антисмысловой нити, где указанная антисмысловая нить содержит участок, практически комплементарный части mRNA, кодирующей Serpina1, где каждая нить составляет в длину от приблизительно 14 до приблизительно 30 нуклеотидов, где указанное двухнитевое средство для RNAi представлено формулой (III)
где каждый np, nq и nq′, каждый из которых может присутствовать или отсутствовать, независимо представляет собой выступающий нуклеотид;
каждый из p, q и q′ независимо равняется 0-6;
np′>0, и по меньшей мере один np′ связан с соседним нуклеотидом посредством фосфоротиоатной связи;
каждый Na и Na′ независимо представляет собой олигонуклеотидную последовательность, содержащую 0-25 нуклеотидов, которые являются либо модифицированными, либо немодифицированными, либо их комбинациями, при этом каждая последовательность содержит по меньшей мере два по-разному модифицированных нуклеотида;
каждый из YYY и Y′Y′Y′ независимо представляет собой один мотив из трех идентичных модификаций трех последовательных нуклеотидов, и где модификации являются 2ʹ-O-метил- или 2ʹ-фтор-модификациями;
где смысловая нить содержит по меньшей мере одну фосфоротиоатную связь; и
где смысловая нить конъюгирована по меньшей мере с одним лигандом, где лигандом является одно или несколько производных GalNAc, присоединенных посредством двухвалентного или трехвалентного разветвленного линкера.
68. Двухнитевое средство для RNAi по любому из пп.63-67, где Na’ содержит 1-25 нуклеотидов, и где один из 1-25 нуклеотидов в одном из положений 2-9 от 5’-конца характеризуется ошибочным спариванием нуклеотидов.
69. Двухнитевое средство для RNAi по п.68, содержащее универсальное основание в ошибочно спаренном нуклеотиде.
70. Средство для RNAi, выбранное из группы средств для RNAi, приведенных в любой из таблиц 1, 2, 5, 7, 8 и 9.
71. Композиция, содержащая средство на основе модифицированного антисмыслового полинуклеотида, где указанное средство способно ингибировать экспрессию Serpina1 в клетке и содержит последовательность, комплементарную смысловой последовательности, выбранной из группы последовательностей, приведенных в любой из таблиц 1, 2, 5, 7, 8 и 9, где полинуклеотид составляет в длину от приблизительно 14 до приблизительно 30 нуклеотидов.
72. Вектор, содержащий двухнитевое средство для RNAi по любому из пп.1, 9, 59 и 63-70.
73. Клетка, содержащая двухнитевое средство для RNAi по любому из пп.1, 9, 59 и 63-70.
74. Фармацевтическая композиция, содержащая двухнитевое средство для RNAi по любому из пп.1, 9, 59 и 63-70.
75. Фармацевтическая композиция по п.74, где средство для RNAi вводится в небуферном растворе.
76. Фармацевтическая композиция по п.75, где указанный небуферный раствор представляет собой солевой раствор или воду.
77. Фармацевтическая композиция по п.74, где указанная siRNA вводится с буферным раствором.
78. Фармацевтическая композиция по п.77, где указанный буферный раствор содержит ацетат, цитрат, проламин, карбонат или фосфат или любую их комбинацию.
79. Фармацевтическая композиция по п.78, где указанный буферный раствор представляет собой забуференный фосфатом солевой раствор (PBS).
80. Способ ингибирования экспрессии Serpina1 в клетке, при этом способ предусматривает
(a) приведение клетки в контакт с двухнитевым средством для RNAi по любому из пп.1, 9, 59 и 63-70, композицией по п.71, вектором по п.72 или фармацевтической композицией по любому из пп.74-79 и
(b) поддержание клетки, полученной на стадии (a), в течение времени, достаточного для обеспечения расщепления mRNA-транскрипта гена Serpina1, с ингибированием тем самым экспрессии гена Serpina1 в клетке.
81. Способ по п.80, где указанная клетка находится в субъекте.
82. Способ по п.81, где субъектом является человек.
83. Способ по любому из пп.80-82, где экспрессию Serpina1 ингибируют по меньшей мере приблизительно на 30%, приблизительно на 40%, приблизительно на 50%, приблизительно на 60%, приблизительно на 70%, приблизительно на 80%, приблизительно на 90%, приблизительно на 95%, приблизительно на 98% или приблизительно на 100%.
84. Способ лечения субъекта с ассоциированным с Serpina1 заболеванием, предусматривающий введение субъекту терапевтически эффективного количества двухнитевого средства для RNAi по любому из пп.1, 9, 59 и 63-70, композиции по п.71, вектора по п.72 или фармацевтической композиции по любому из пп.74-79 с лечением тем самым указанного субъекта.
85. Способ лечения субъекта с Serpina1-ассоциированным нарушением, предусматривающий подкожное введение субъекту терапевтически эффективного количества двухнитевого средства для RNAi,
где указанное двухнитевое средство для RNAi содержит смысловую нить и антисмысловую нить, образующие двухнитевой участок,
где указанная смысловая нить содержит по меньшей мере 15 смежных нуклеотидов, отличающихся не более чем 3 нуклеотидами от любой из нуклеотидных последовательностей SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:2 или SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:7, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:9, SEQ ID NO:10 или SEQ ID NO:11, и указанная антисмысловая нить содержит по меньшей мере 15 смежных нуклеотидов, отличающихся не более чем 3 нуклеотидами от любой из нуклеотидных последовательностей SEQ ID NO:15, SEQ ID NO:16 или SEQ ID NO:17, SEQ ID NO:18, SEQ ID NO:19, SEQ ID NO:20, SEQ ID NO:21, SEQ ID NO:22, SEQ ID NO:23, SEQ ID NO:24 или SEQ ID NO:25,
где практически все нуклеотиды указанной антисмысловой нити имеют модификацию, выбранную из группы, состоящей из 2’-O-метил-модификации и 2’-фтор-модификации,
где указанная антисмысловая нить содержит две фосфоротиоатные межнуклеотидные связи на 5’-конце и две фосфоротиоатные межнуклеотидные связи на 3’-конце,
где практически все нуклеотиды указанной смысловой нити имеют модификацию, выбранную из группы, состоящей из 2’-O-метил-модификации и 2’-фтор-модификации,
где указанная смысловая нить содержит две фосфоротиоатные межнуклеотидные связи на 5’-конце, и
где указанная смысловая нить конъюгирована с одним или несколькими производными GalNAc, присоединенными посредством разветвленного двухвалентного или трехвалентного линкера на 3’-конце, с лечением тем самым субъекта.
86. Способ по п.85, где одно из отличий по 3 нуклеотидам в нуклеотидной последовательности антисмысловой нити заключается в ошибочном спаривании нуклеотидов в затравочной области антисмысловой нити.
87. Способ по п.86, где антисмысловая нить содержит универсальное основание в ошибочно спаренном нуклеотиде.
88. Способ по п.85, где все нуклеотиды указанной смысловой нити и все нуклеотиды указанной антисмысловой нити имеют модификацию.
89. Способ по п.84 или 85, где субъектом является человек.
90. Способ по п.84 или 85, где ассоциированным с Serpina1 заболеванием является нарушение печени.
91. Способ по п.90, где нарушение печени выбрано из группы, состоящей из хронической болезни печени, воспаления печени, цирроза, фиброза печени и/или печеночно-клеточной карциномы.
92. Способ по п.84 или 85, где двухнитевое средство для RNAi вводят в дозе от приблизительно 0,01 мг/кг до приблизительно 10 мг/кг или от приблизительно 0,5 мг/кг до приблизительно 50 мг/кг.
93. Способ по п.92, где двухнитевое средство для RNAi вводят в дозе от приблизительно 10 мг/кг до приблизительно 30 мг/кг.
94. Способ по п.92, где двухнитевое средство для RNAi вводят в дозе приблизительно 3 мг/кг.
95. Способ по п.92, где двухнитевое средство для RNAi вводят в дозе приблизительно 10 мг/кг.
96. Способ по п.92, где двухнитевое средство для RNAi вводят в дозе приблизительно 0,5 мг/кг два раза в неделю.
97. Способ по п.92, где двухнитевое средство для RNAi вводят в дозе приблизительно 10 мг/кг один раз в две недели.
98. Способ по п.92, где двухнитевое средство для RNAi вводят в дозе приблизительно 0,5-1 мг/кг один раз в неделю.
99. Способ по п.92, где двухнитевое средство для RNAi вводят подкожно.
100. Способ по п.92, где двухнитевое средство для RNAi вводят внутривенно.
101. Способ по п.92, где указанное средство для RNAi вводят двумя или более дозами.
102. Способ по п.101, где указанное средство для RNAi вводят с интервалами, выбранными из группы, состоящей из одного раза приблизительно каждые 12 ч, одного раза приблизительно каждые 24 ч, одного раза приблизительно каждые 48 ч, одного раза приблизительно каждые 72 ч и одного раза приблизительно каждые 96 ч.
103. Способ по п.101, где указанное средство для RNAi вводят два раза в неделю.
104. Способ по п.101, где указанное средство для RNAi вводят один раз в две недели.
105. Способ ингибирования развития печеночно-клеточной карциномы у субъекта с дефектным вариантом Serpina1, предусматривающий введение субъекту терапевтически эффективного количества двухнитевого средства для RNAi по любому из пп.1, 9, 59 и 63-70, композиции по п.71, вектора по п.72 или фармацевтической композиции по любому из пп.74-79 с ингибированием тем самым развития печеночно-клеточной карциномы у субъекта.
106. Способ ингибирования развития печеночно-клеточной карциномы у субъекта с дефектным вариантом Serpina1, предусматривающий подкожное введение субъекту терапевтически эффективного количества двухнитевого средства для RNAi,
где указанное двухнитевое средство для RNAi содержит смысловую нить и антисмысловую нить, образующие двухнитевой участок,
где указанная смысловая нить содержит по меньшей мере 15 смежных нуклеотидов, отличающихся не более чем 3 нуклеотидами от любой из нуклеотидных последовательностей SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:2 или SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:7, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:9, SEQ ID NO:10 или SEQ ID NO:11, и указанная антисмысловая нить содержит по меньшей мере 15 смежных нуклеотидов, отличающихся не более чем 3 нуклеотидами от любой из нуклеотидных последовательностей SEQ ID NO:15, SEQ ID NO:16 или SEQ ID NO:17, SEQ ID NO:18, SEQ ID NO:19, SEQ ID NO:20, SEQ ID NO:21, SEQ ID NO:22, SEQ ID NO:23, SEQ ID NO:24 или SEQ ID NO:25,
где практически все нуклеотиды указанной антисмысловой нити имеют модификацию, выбранную из группы, состоящей из 2’-O-метил-модификации и 2’-фтор-модификации,
где указанная антисмысловая нить содержит две фосфоротиоатные межнуклеотидные связи на 5’-конце и две фосфоротиоатные межнуклеотидные связи на 3’-конце,
где практически все нуклеотиды указанной смысловой нити имеют модификацию, выбранную из группы, состоящей из 2’-O-метил-модификации и 2’-фтор-модификации,
где указанная смысловая нить содержит две фосфоротиоатные межнуклеотидные связи на 5’-конце, и
где указанная смысловая нить конъюгирована с одним или несколькими производными GalNAc, присоединенными посредством разветвленного двухвалентного или трехвалентного линкера на 3’-конце, с ингибированием тем самым развития печеночно-клеточной карциномы у субъекта с дефектным вариантом Serpina1.
107. Способ по п.106, где одно из отличий по 3 нуклеотидам в нуклеотидной последовательности антисмысловой нити заключается в ошибочном спаривании нуклеотидов в затравочной области антисмысловой нити.
108. Способ по п.107, где антисмысловая нить содержит универсальное основание в ошибочно спаренном нуклеотиде.
109. Способ по п.106, где все нуклеотиды указанной смысловой нити и все нуклеотиды указанной антисмысловой нити имеют модификацию.
110. Способ по п.105 или 106, где субъектом является примат или грызун.
111. Способ по п.105 или 106, где субъектом является человек.
112. Способ по п.105 или 106, где двухнитевое средство для RNAi вводят в дозе от приблизительно 0,01 мг/кг до приблизительно 10 мг/кг или от приблизительно 0,5 мг/кг до приблизительно 50 мг/кг.
113. Способ по п.112, где двухнитевое средство для RNAi вводят в дозе от приблизительно 10 мг/кг до приблизительно 30 мг/кг.
114. Способ по п.112, где указанное средство для RNAi вводят двумя или более дозами.
115. Способ по п.112, где указанное средство для RNAi вводят с интервалами, выбранными из группы, состоящей из одного раза приблизительно каждые 12 часов, одного раза приблизительно каждые 24 часа, одного раза приблизительно каждые 48 часов, одного раза приблизительно каждые 72 часа и одного раза приблизительно каждые 96 часов.
116. Способ по п.112, где указанное средство для RNAi вводят два раза в неделю.
117. Способ по п.112, где указанное средство для RNAi вводят один раз в две недели.
118. Способ по п.112, где двухнитевое средство для RNAi вводят подкожно.
119. Способ по п.112, где двухнитевое средство для RNAi вводят внутривенно.
120. Способ снижения накопления неправильно свернутого Serpina1 в печени субъекта с дефектным вариантом Serpina1, предусматривающий введение субъекту терапевтически эффективного количества двухнитевого средства для RNAi по любому из пп.1, 9, 59 и 63-70, композиции по п.71, вектора по п.72 или фармацевтической композиции по любому из пп.74-79 со снижением тем самым накопления неправильно свернутого Serpina1 в печени субъекта.
121. Способ снижения накопления неправильно свернутого Serpina1 в печени субъекта с дефектным вариантом Serpina1, предусматривающий подкожное введение субъекту терапевтически эффективного количества двухнитевого средства для RNAi,
где указанное двухнитевое средство для RNAi содержит смысловую нить и антисмысловую нить, образующие двухнитевой участок,
где указанная смысловая нить содержит по меньшей мере 15 смежных нуклеотидов, отличающихся не более чем 3 нуклеотидами от любой из нуклеотидных последовательностей SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:2 или SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:7, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:9, SEQ ID NO:10 или SEQ ID NO:11, и указанная антисмысловая нить содержит по меньшей мере 15 смежных нуклеотидов, отличающихся не более чем 3 нуклеотидами от любой из нуклеотидных последовательностей SEQ ID NO:15, SEQ ID NO:16 или SEQ ID NO:17, SEQ ID NO:18, SEQ ID NO:19, SEQ ID NO:20, SEQ ID NO:21, SEQ ID NO:22, SEQ ID NO:23, SEQ ID NO:24 или SEQ ID NO:25,
где практически все нуклеотиды указанной антисмысловой нити имеют модификацию, выбранную из группы, состоящей из 2’-O-метил-модификации и 2’-фтор-модификации,
где указанная антисмысловая нить содержит две фосфоротиоатные межнуклеотидные связи на 5’-конце и две фосфоротиоатные межнуклеотидные связи на 3’-конце,
где практически все нуклеотиды указанной смысловой нити имеют модификацию, выбранную из группы, состоящей из 2’-O-метил-модификации и 2’-фтор-модификации,
где указанная смысловая нить содержит две фосфоротиоатные межнуклеотидные связи на 5’-конце, и
где указанная смысловая нить конъюгирована с одним или несколькими производными GalNAc, присоединенными посредством разветвленного двухвалентного или трехвалентного линкера на 3’-конце, со снижением тем самым накопления неправильно свернутого Serpina1 в печени субъекта с дефектным вариантом Serpina1.
122. Способ по п.121, где одно из отличий по 3 нуклеотидам в нуклеотидной последовательности антисмысловой нити заключается в ошибочном спаривании нуклеотидов в затравочной области антисмысловой нити.
123. Способ по п.122, где антисмысловая нить содержит универсальное основание в ошибочно спаренном нуклеотиде.
124. Способ по п.121, где все нуклеотиды указанной смысловой нити и все нуклеотиды указанной антисмысловой нити имеют модификацию.
125. Способ по п.120 или 121, где субъектом является примат или грызун.
126. Способ по п.120 или 121, где субъектом является человек.
127. Способ по п.120 или 121, где двухнитевое средство для RNAi вводят в дозе от приблизительно 0,01 мг/кг до приблизительно 10 мг/кг или от приблизительно 0,5 мг/кг до приблизительно 50 мг/кг.
128. Способ по п.127, где двухнитевое средство для RNAi вводят в дозе от приблизительно 10 мг/кг до приблизительно 30 мг/кг.
129. Способ по п.127, где указанное средство для RNAi вводят двумя или более дозами.
130. Способ по п.127, где указанное средство для RNAi вводят два раза в неделю.
131. Способ по п.127, где указанное средство для RNAi вводят один раз в две недели.
132. Способ по п.127, где указанное средство для RNAi вводят с интервалами, выбранными из группы, состоящей из одного раза приблизительно каждые 12 ч, одного раза приблизительно каждые 24 ч, одного раза приблизительно каждые 48 ч, одного раза приблизительно каждые 72 ч и одного раза приблизительно каждые 96 ч.
133. Способ по п.127, где двухнитевое средство для RNAi вводят подкожно.
134. Способ по п.127, где двухнитевое средство для RNAi вводят внутривенно.
