Способ получения стрептокиназы - SU643531A1

I

Изобретение относится к медищшской промышленности , а нменно к получеинто препаратов, которые могут найти применение при инфаркте кшскарда, острых закупорках артернн конечностей , свежих тромбозах вен и эмболии легких.

Известен способ получек1ш стре1 токш азы путем вьграиошания продуцента на среде, содержащей источники углерода, азота и ьвднеральные соли, с последующим выделением целевого продукта 1}.

Однако этот способ не обеспечивает высокого выхода целевого продукта.

Целью изобретения является поБышеш{е выхода целевого продукта.

Эта цель достигается тем, что в качестве продуцента используют иггамм Streptococcus equisJmlHs IMET 8 377 и выращивание осуществляют на питательной среде, содержащей в качестве источ1тка азота дрожжевой автолизат или кукурузный экстракт с содерхганием азота 0,1-0,8% к объему питательной среды.

Прнменяютлпшся в способе штамм StraptoCOCCUS equisimihs IMET В 377 предсгавляет собой грамополож5ггелъный микроорганизм.

Ю1етки шаров1здиая (коккн), диаметр 0,8-1,1) (0,6-1,2). После успешного деления клеткн остаются склеенными друг с другом в ввде жемчужного ожерелья, так что образутатся цепеобразные соединения. Длина цепей разная и зав нет большей частью 011В1тательной среды. В предлагаемом способе цепь состоит из 4-8 отделысых звеньев. На прочной щ тательной среде с кровью штам.м растет неболышсмн колошиши диаметром 1-2 мм. 0|ш имеют кpvглyю форму, гладкие по краям и слегка пылуклые. СНттимум роста вдет при температуре 37°С. При росте наЪлтательной среде с кровью у штамма происходят характерные нзменешш. Вокруг колон1ш развивается прозрачньа осадок, в котором растворены красные клетки крови (эритроциты).

Способ поясняется след 1ощнк«1 примерами.

Пример. Жадкую питательную среду,

состоящ}то из 20 г на 1 л панкреат1 ческого пептона из мяса или рыбы, 5 г/л поварешюй солн,2%

говяжей сыворотки или дрожжевого автолизата с

содержанием ОД% азота, вместе с Ж51дкой гтитателы он средой, зал}шают в колбу Эрлейнмейера

объемом 200 мл, ){зуют и с 0 мл суспензии 36435 . стрептококка эквизиг-шлис (стреи/гококк группь G) засевают в физиологическом раслворе поварфниой соли. После ипкуба1ши а течение 16 ч при 20мл этой первой предварэтельной кулыуры пересенванот в аппараты с MeujajjKOH, содержа- S щкг 2000 мг питательно } средь (вторая нредварИтельнад культура)или в кггчестве шгакулу ла применяют для основной культурь;, Жидкая ии.гательная .среда состоит кэ дрожжевого автопазяла с 0,2% coAepx ajiHfl азота, а также различным 55 т (КН2Р04), К2НРО4, CHsCOONa, NajHCOj, MgS04, FeSO4 (N44)2304, MnClj, Выравдшшете культуры ведут около 18 ч при 2:8° С, При 37°С продолжительноспз культквироврлня составляет 7 ч. Эта вторая предварительная кул.ыур8 может. QbJTb использована в качестве носезиого мате )3кала длл последующей основной культуры, Жидкая питательная среда Пример lypOU Пр ПОлеШЛВаНгП, ;ри TCMIiejHil upoixonKarrejUuiOCTii куллингиюнания со ч1-чи;иТся на 12- -16 ц. ()Д сфепток1г 1Я ы соситл ;: до 14000ед/Ш1. 11 р и ;i е р 3. Пыращинапио иоссши го материала гфоискодит как в примере 1. В питательной среде осноиной кулиурь в качсс;йе исюншка азота применяют жидкий кукурузи г экстракт 3S-2SO iл/л, что соотиекгвует cuiHp йзота от 0,1-0,8% в скидке пиг;ие;п.иом среде. Солевой рйствор. тот же, что и в црпгч срс 2, Пойте регул1тро1зан- к pli и культцвцроп;5 ия :ак в примере 2 получают вглход, стгрптокитазь; 45000 ед/лш при засеве с иреднпригельной стандйртпой культурой и 8000 при 3;;C5J,e с 0редЕаритсльп:ой кушлурой ;л е Л1ваи -1к.

сновной культуры имеет следуюилии состав, г/л: Дрояо1 :евой автоматнзат15 -120

Солевой растворКН2Р042 ,50

К2НРО42,50

СНзСООЫа-ЗКгО1,00

МаНСОз1,00

MgSO4-7H2O0,40

Ге5О4 (NN4)28040,02

MnClj- 4Ii2O0,02

Глюкоза 10,00

Затем проводят стерютизацию солевого растора и дролокевого автолнзатз. После зт-аго добавляют СТерИЛИЗОВШШЫЙ раствор ПНОКОЗ;Л.

рожжевой автолизат фильтруют стертгльпс,

После cjfHBa в ферментер засевают в KOJS:-

чественном соотношении 1/100 объемных часпщ

первой или второй предварю-ельиой купшуръ-. Культуру доводат до тем гературы щ,ч

помешиванш при 100-300 оСУмин. рН нодцержзь

вашт на уровне 7,2-7,4.

Продолжительность сулинЕИрован1ш cocissляет 20-24 ч при засеве с нредвй-рительной к:уш обест ечийяет иысотсин

Способ получения стрсптоюгназы путем ьтрццншатииг гфоду1Ш.та на среде, содержащей ttcro4кнкк углйрода, азота и мниерацыгые со;пи с аоследуютииту выделением целевого прояуктя, отличаю Hi и и с я TS;.;, ю. с целью понмшо itHJi выходя ucJiOBoro нр(здукта; Б кзместйе праг уценги йснользуюг пиамгл StsKptoooociss GquiKirniiis i-vlET 8377 к вь рЗ Ш ваттс осушествляют на пптатйльной среде. содер;кящей в качестай нсточклка азога дрои;женой автолязги кп К курузиь Й экс1) с содаржанйсм азота i,1-0,0% к otjhesiiy Пггсатедыйш средь.