Микроорганизм, продуцирующий o-ацетилгомосерин, и способ получения o-ацетилгомосерина с использованием этого микроорганизма - RU2017144551A

1. Полипептид, обладающий активностью по высвобождению О-ацетилгомосерина, где по меньшей мере одна аминокислота, выбранная из группы, состоящей из валина в положении 1, фенилаланина в положении 30, лейцина в положении 95 и фенилаланина в положении 165 аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 1, заменена на другую аминокислоту.

2. Полипептид по п. 1, где валин в положении 1 аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 1 заменен на метионин; фенилаланин в положении 30 аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 1 заменен на любую аминокислоту, выбранную из группы, состоящей из аланина, триптофана, лейцина, валина, глицина, серина, аспарагина, аспарагиновой кислоты и гистидина; лейцин в положении 95 аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 1 заменен на любую аминокислоту, выбранную из группы, состоящей из валина, фенилаланина, аланина, глицина, треонина, аспарагина, аспарагиновой кислоты и гистидина; или фенилаланин в положении 165 аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 1 заменен на любую аминокислоту, выбранную из группы, состоящей из аланина, триптофана, лейцина, валина, глицина, серина, аспарагина, аспарагиновой кислоты и гистидина.

3. Полипептид по п. 1, где валин в положении 1 аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 1 заменен на метионин; и фенилаланин в положении 30, лейцин в положении 95 или фенилаланин в положении 165 аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 1 заменен на другую аминокислоту.

4. Полипептид по п. 1, выбранный из группы, состоящей из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 2, 133, 134, 137, 138, 141 и 142.

5. Полинуклеотид, кодирующий полипептид, обладающий активностью по высвобождению О-ацетилгомосерина, по п. 1.

6. Полинуклеотид по п. 5, где стартовый кодон полинуклеотида дополнительно заменен на ATG.

7. Полинуклеотид по п. 5, выбранный из группы, состоящей из последовательностей нуклеиновых кислот SEQ ID NO: 4, 135, 136, 139, 140, 143 и 144.

8. Микроорганизм рода Escherichia, продуцирующий О-ацетилгомосерин, в котором содержится или сверхэкспрессируется полипептид, состоящий из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 1, или его модифицированный полипептид.

9. Микроорганизм по п. 8, где в модифицированном полипептиде по меньшей мере одна аминокислота, выбранная из группы, состоящей из валина в положении 1, фенилаланина в положении 30, лейцина в положении 95 и фенилаланина в положении 165 аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 1, заменена на другую аминокислоту.

10. Микроорганизм по п. 8, где в модифицированном полипептиде валин в положении 1 аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 1 заменен на метионин; фенилаланин в положении 30 аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 1 заменен на любую аминокислоту, выбранную из группы, состоящей из аланина, триптофана, лейцина, валина, глицина, серина, аспарагина, аспарагиновой кислоты и гистидина; лейцин в положении 95 аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 1 заменен на любую аминокислоту, выбранную из группы, состоящей из валина, фенилаланина, аланина, глицина, треонина, аспарагина, аспарагиновой кислоты и гистидина; или фенилаланин в положении 165 аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 1 заменен на любую аминокислоту, выбранную из группы, состоящей из аланина, триптофана, лейцина, валина, глицина, серина, аспарагина, аспарагиновой кислоты и гистидина.

11. Микроорганизм по п. 8, где в модифицированном полипептиде валин в положении 1 аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 1 заменен на метионин; и фенилаланин в положении 30, лейцин в положении 95 или фенилаланин в положении 165 аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 1 заменен на другую аминокислоту.

12. Микроорганизм по п. 8, где микроорганизм рода Escherichia представляет собой Escherichia coli.

13. Микроорганизм по п. 8, где дополнительно активность цистатионин-синтазы инактивирована.

14. Микроорганизм по п. 8, где дополнительно активность гомосерин-киназы инактивирована.

15. Микроорганизм по п. 8, где дополнительно активность гомосерин-ацетилтрансферазы повышена по сравнению с таковой у немодифицированного микроорганизма.

16. Микроорганизм по п. 8, где дополнительно активности аспартат-полуальдегид-дегидрогеназы, трансгидрогеназы пиридиновых нуклеотидов или их комбинации повышены по сравнению с таковыми у немодифицированного микроорганизма.

17. Способ получения О-ацетилгомосерина, включающий:

культивирование микроорганизма рода Escherichia, продуцирующего О-ацетилгомосерин, по любому из пп. 8-16 в среде; и

выделение О-ацетилгомосерина из культивированного микроорганизма или из культуральной среды.

18. Способ получения L-метионина, включающий:

культивирование микроорганизма рода Escherichia, продуцирующего О-ацетилгомосерин, по любому из пп. 8-16 в среде; и

превращение О-ацетилгомосерина в L-метионин путем обработки культивированного микроорганизма, или культуральной среды, или О-ацетилгомосерина, выделенного из культивированного микроорганизма или из культуральной среды, метилмеркаптаном и метионин-превращающим ферментом.

19. Способ по п. 18, где метионин-превращающий фермент представляет собой О-ацетилгомосерин-сульфгидрилазу.