Модифицированная аденилатциклаза bordetella, содержащая домен взаимодействия cd11b/сd18 или лишенная домена взаимодействия cd11b/cd18, и ее применение - RU2006101326A

Реферат

1. Белок, состоящий из аденилатциклазы Bordetella, которая модифицирована в домене взаимодействия CD11b/CD18 одной или несколькими аминокислотными делециями, заменами или инсерциями, где указанный белок является дефектным в отношении связывания CD11b/CD18 и специфически реактивным с антисыворотками, узнающими аденилатциклазу Bordetella дикого типа.

2. Белок по п.1, где указанная аденилатциклаза Bordetella модифицирована полной делецией домена взаимодействия CD11b/CD18.

3. Белок по п.1, где домен взаимодействия CD11b/CD18 модифицирован инсерцией в него пептида.

4. Белок по п.1, где аденилатциклаза Bordetella дополнительно модифицирована инсерцией, делецией или заменой одной или нескольких аминокислот в N-концевом каталитическом домене, где указанная модифицированная аденилатциклаза Bordetella имеет каталитическую активность, которая является уменьшенной в сравнении с активностью аденилатциклазы Bordetella дикого типа.

5. Белок по п.4, где указанная аденилатциклаза Bordetella модифицирована делецией по меньшей мере аминокислотных остатков 1-300 N-концевого каталитического домена и предпочтительно делецией аминокислотных остатков 1-373.

6. Белок по п.4, где указанная аденилатциклаза Bordetella модифицирована в аминокислотах, которые ацилированы посттрансляционно, причем эти аминокислоты соответствуют Lys 983 и Lys 860 аденилатциклазы B. pertussis.

7. Белок по п.1, где указанной аденилатциклазой Bordetella является аденилатциклаза Bordetella pertussis.

8. Фармацевтическая композиция, содержащая белок по любому из пп.1-7 в комбинации с фармацевтически приемлемым носителем.

9. Фармацевтическая композиция для применения в качестве вакцины, содержащая белок по любому из пп.1-7 в комбинации с фармацевтически приемлемым носителем, где указанный белок содержится в иммунопротективном и нетоксичном количестве.

10. Фармацевтическая композиция для применения в качестве вакцины, содержащая белок по любому из пп.1-7 в комбинации с фармацевтически приемлемым носителем, где указанный белок содержится в иммунопротективном количестве, указанная композиция дополнительно содержит один или несколько подходящих праймирующих адъювантов.

11. Применение белка по любому из пп.1-7 в приготовлении лекарственного средства для профилактики или лечения, у человека или у животного, симптомов заболевания, ассоциированных с коклюшем, и/или для защиты человека или животного от симптомов заболевания, ассоциированных с инфекцией Bordetella.

12. Полипептид, способный связываться с CD11b/CD18, причем указанный полипептид является или

а. фрагментом аденилатциклазы Bordetella, имеющим 30-500 аминокислот, предпочтительно 50-300 и более предпочтительно 50-150 аминокислот, причем указанный фрагмент содержит домен взаимодействия CD11b/CD18 указанной аденилатциклазы Bordetella дикого типа или содержит фрагмент указанного домена взаимодействия CD11b/CD18 дикого типа, достаточный для сохранения способности связывания с CD11b/CD18, или

b. вариантом указанного фрагмента, имеющим по меньшей мере 70% идентичность, предпочтительно по меньшей мере 80% идентичность и более предпочтительно по меньшей мере 90% идентичность с указанным фрагментом, причем указанный вариант сохраняет способность связывания CD11b/CD18.

13. Полипептид по п.12, где указанный полипептид способен индуцировать антитела, узнающие специфически аденилатциклазу вида Bordetella, предпочтительно аденилатциклазу Bordetella pertussis.

14. Полипептид по п.12, где указанный полипептид является фрагментом аденилатциклазы Bordetella pertussis, предпочтительно фрагментом, простирающимся от аминокислоты 1166 до аминокислоты 1281 аденилатциклазы B. pertussis, и более предпочтительно фрагментом, содержащим район, простирающийся от аминокислоты 1208 до аминокислоты 1243 аденилатциклазы B. pertussis.

15. Полипептид по п.12, который дополнительно содержит домен ацилирования аденилатциклазы и/или гидрофобный домен.

16. Полипептид по п.12, где указанный полипептид является нетоксичным при введении in vivo млекопитающему.

17. Применение полипептида по любому из пп.12-16 в приготовлении лекарственного средства для профилактики или лечения, у человека или у животного, симптомов заболевания, ассоциированных с коклюшем, и/или для защиты человека или животного от симптомов заболевания, ассоциированных с инфекцией Bordetella.

18. Применение полипептида по любому из пп.12-16 в приготовлении вектора для нацеливания представляющей интерес молекулы специфически на экспрессирующие CD11b клетки.

19. Вектор для нацеливания представляющей интерес молекулы на экспрессирующие CD11b/CD18 клетки, характеризующийся тем, что указанный вектор содержит полипептид, способный связываться с CD11b/CD18 по п.12, связанный с представляющей интерес молекулой.

20. Вектор для нацеливания представляющей интерес молекулы на экспрессирующие CD11b/CD18 клетки, характеризующийся тем, что указанный вектор содержит полипептид, способный связываться с CD11b/CD18 по любому из пп.12-16, связанный с представляющей интерес молекулой.

21. Вектор для нацеливания представляющей интерес молекулы на экспрессирующие CD11b/CD18 клетки, характеризующийся тем, что указанный вектор содержит полипептид, способный связываться с CD11b/CD18 по любому из пп.12-16, связанный с представляющей интерес молекулой, и где указанная представляющая интерес молекула выбрана из группы, состоящей из пептидов, гликопептидов, липопептидов, полисахаридов, олигосахаридов, нуклеиновых кислот, липидов и химических веществ.

22. Вектор для нацеливания представляющей интерес молекулы на экспрессирующие CD11b/CD18 клетки, характеризующийся тем, что указанный вектор содержит полипептид, способный связываться с CD11b/CD18 по любому из пп.12-16, связанный с представляющей интерес молекулой, и где указанной представляющей интерес молекулой является активное (действующее) начало лекарственного средства.

23. Вектор для нацеливания представляющей интерес молекулы на экспрессирующие CD11b/CD18 клетки, характеризующийся тем, что указанный вектор содержит полипептид, способный связываться с CD11b/CD18 по любому из пп.12-16, связанный с представляющей интерес молекулой, и где указанная представляющая интерес молекула связана химической связью.

24. Вектор для нацеливания представляющей интерес молекулы на экспрессирующие CD11b/CD18 клетки, характеризующийся тем, что указанный вектор содержит полипептид, способный связываться с CD11b/CD18 по любому из пп.12-16, связанный с представляющей интерес молекулой, и где указанная представляющая интерес молекула содержит антиген или эпитоп.

25. Вектор для нацеливания представляющей интерес молекулы на экспрессирующие CD11b/CD18 клетки, характеризующийся тем, что указанный вектор содержит полипептид, способный связываться с CD11b/CD18 по любому из пп.12-16, связанный с представляющей интерес молекулой, и где указанной представляющей интерес молекулой является пептид или полипептид, содержащий антиген или эпитоп.

26. Нуклеиновая кислота, которая кодирует один из следующих полипептидов:

а. белок по любому из пп.1-7;

b. полипептид по любому из пп.12-16;

с. вектор по п.19.

27. Рекомбинантная нуклеиновая кислота, состоящая из нуклеиновой кислоты по п.26, клонированной в экспрессирующий вектор, подходящий для экспрессии кодируемого полипептида в клетке-хозяина.

28. Рекомбинантная нуклеиновая кислота, состоящая из нуклеиновой кислоты по п.26, клонированной в экспрессирующий вектор, подходящий для экспрессии кодируемого полипептида в клетке-хозяина, где указанным экспрессирующим вектором является плазмида, космида, фагмида или вирусная ДНК.

29. Клетка-хозяин, содержащая нуклеиновую кислоту по п.26.

30. Клетка-хозяин, содержащая рекомбинантную нуклеиновую кислоту по п.27.

31. Фармацевтическая композиция, содержащая полипептид по п.12 в комбинации с фармацевтически приемлемым носителем.

32. Фармацевтическая композиция, содержащая вектор по п.19 в комбинации с фармацевтически приемлемым носителем.

33. Фармацевтическая композиция, содержащая вектор по п.19, где представляющей интерес молекулой является активное начало лекарственного средства.

34. Фармацевтическая композиция, содержащая вектор по п.19, где представляющей интерес молекулой является активное начало лекарственного средства, и где указанная композиция является вакциной.

35. Поликлональная сыворотка, получаемая иммунизацией животного или человека полипептидом по п.12 или композицией по п.31 или 32.

36. Моноклональное антитело, направленное специфически против полипептидов по пп.12-16.

37. Поликлональная сыворотка по п.35, где указанная поликлональная сыворотка способна блокировать связывание аденилатциклазы с CD11b/CD18.

38. Моноклональное антитело по п.36, где указанное моноклональное антитело способно блокировать связывание аденилатциклазы с CD11b/CD18.

39. Фармацевтическая композиция, содержащая поликлональную сыворотку по п.35, в комбинации с фармацевтически приемлемым носителем.

40. Фармацевтическая композиция, содержащая моноклональное антитело по п.36, в комбинации с фармацевтически приемлемым носителем.

41. Применение поликлональной сыворотки по п.35 в приготовлении лекарственного средства для профилактики или лечения, у человека или у животного, симптомов заболевания, ассоциированных с коклюшем, и/или для защиты человека или животного от симптомов заболевания, ассоциированных с инфекцией Bordetella.

42. Применение моноклонального антитела по п.36 в приготовлении лекарственного средства для профилактики или лечения, у человека или у животного, симптомов заболевания, ассоциированных с коклюшем, и/или для защиты человека или животного от симптомов заболевания, ассоциированных с инфекцией Bordetella.

43. Способ нацеливания in vitro представляющей интерес молекулы на экспрессирующие CD11b клетки, предусматривающий

а. обеспечение экспрессирующих CD11b клеток, экстрагированных из живого организма, и

b. культивирование указанных экспрессирующих CD11b клеток с вектором по п.19 при подходящих условиях для нацеливания указанного вектора на указанные экспрессирующие CD11b клетки.

44. Способ по п.43, где указанная представляющая интерес молекула содержит антиген или эпитоп.

45. Способ по п.43, где указанными экспрессирующими CD11b клетками являются миелоидные дендритные клетки.

46. Экспрессирующие CD11b клетки, содержащие представляющую интерес молекулу, получаемую способом по любому из пп.43-45.

47. Экспрессирующие CD11b клетки, содержащие антиген или эпитоп, получаемый способом по п.44.

48. Продукт клеточной терапии для иммунизации человека или животного против антигена, характеризующийся тем, что он содержит эффективное количество экспрессирующих CD11b клеток по п.47 в комбинации с фармацевтически приемлемым носителем.

49. Применение экспрессирующих CD11b клеток по п.47 в приготовлении продукта клеточной терапии для иммунизации человека или животного против антигена.

50. Способ иммунизации пациента против антигена, предусматривающий

а. экстрагирование экспрессирующих CD11b клеток из указанного пациента,

b. культивирование in vitro указанных экспрессирующих CD11b клеток с вектором по п.24 при условиях, подходящих для нацеливания указанного вектора на указанные клетки,

с. повторное введение эффективного количества указанных клеток, содержащих указанный вектор, в указанного пациента для праймирования CD4⁺ и/или CD8⁺ реакции, тем самым, иммунизируя указанного пациента к указанному антигену.

51. Способ по п.50, где указанными экспрессирующими CD11b клетками являются миелоидные дендритные клетки.