Выделенный рекомбинантный вирус гриппа и способы его получения - RU2351651C2
Код документа: RU2351651C2
Чертежи
Показать все 28 чертежа(ей)
Описание
Текст описания приведен в факсимильном виде.
Реферат
Изобретение относится к области молекулярной биологии, вирусологии и генетической инженерии. Предлагаются способ получения рекомбинантного вируса гриппа с мутантным геном NB мембранного белка, рекомбинантный вирус гриппа, полученный этим способом, и композиция векторов на основе частей рекомбинантного вируса гриппа. Изобретение может быть использовано для получения вакцины для индуцирования иммунного ответа против вируса гриппа. 5 н. и 19 з.п. ф-лы, 8 ил.
Формула
1. Выделенный рекомбинантный вирус гриппа, предназначенный для изготовления вакцины, содержащий сегмент гена вируса гриппа, включающий мутантный ген NB мембранного белка вируса гриппа, который не способен кодировать функциональный NB мембранный белок или его функциональный участок, и включающий ген NA белка вируса гриппа, который кодирует функциональный NA белок, причем мутантный ген NB мембранного белка содержит, по меньшей мере, две мутации в соответствующем гене NB мембранного белка, который кодирует функциональный NB мембранный белок, одна из этих мутаций находится за пределами области гена NB мембранного белка, соответствующей трансмембранному домену, одна мутация в мутантном гене NB мембранного белка находится в инициирующем метиониновом кодоне для NB мембранного белка или между инициирующим метиониновым кодоном для NB мембранного белка и инициирующим метиониновым кодоном для NA и мутации не изменяют кодирующей области для NA.
2. Выделенный рекомбинантный вирус по п.1, отличающийся тем, что мутантный ген NB мембранного белка кодирует, по меньшей мере, одну аминокислотную замену.
3. Выделенный рекомбинантный вирус по п.2, отличающийся тем, что, по меньшей мере, одна мутация кодирует замещение в кодоне для инициирующего метионина.
4. Выделенный рекомбинантный вирус по п.1, отличающийся тем, что одна мутация в мутантном гене NB мембранного белка является стоп кодоном в кодоне инициирующего метионина.
5. Выделенный рекомбинантный вирус по п.1, отличающийся тем, что мутантный ген NB мембранного белка включает делецию одного или нескольких нуклеотидов.
6. Выделенный рекомбинантный вирус по п.5, отличающийся тем, что делеция изменяет рамку считывания NB мембранного белка, но не для NA.
7. Выделенный рекомбинантный вирус по п.1, отличающийся тем, что мутантный ген NB мембранного белка включает инсерцию одного или нескольких нуклеотидов.
8. Выделенный рекомбинантный вирус по п.7, отличающийся тем, что инсерция изменяет рамку считывания NB мембранного белка, но не для NA.
9. Выделенный рекомбинантный вирус по п.1, отличающийся тем, что мутантный ген NB мембранного белка включает делецию одного или нескольких нуклеотидов и кодирует аминокислотную замену.
10. Выделенный рекомбинантный вирус по п.1, отличающийся тем, что мутантный ген NB мембранного белка включает инсерцию одного или нескольких нуклеотидов и кодирует аминокислотную замену.
11. Выделенный рекомбинантный вирус по п.1, отличающийся тем, что по крайней мере одна мутация не меняет in vitro репликации вируса, но связана с аттенуированием вируса in vivo.
12. Способ получения рекомбинантного вируса гриппа, включающего мутантный ген NB мембранного белка, который не способен кодировать функциональный NB мембранный белок или его функциональную часть, включающий:
(i) контактирование хозяйской клетки с рядом векторов, включающих части вирусов гриппа с получением рекомбинантного вируса гриппа, причем ряд векторов включает: вектор, включающий промотор, операбельно связанный с кДНК РА вируса гриппа, связанной с последовательностью терминации транскрипции, вектор, включающий промотор, операбельно связанный с кДНК РВ 1 вируса гриппа, связанной с последовательностью терминации транскрипции, вектор, включающий промотор, операбельно связанный с кДНК РВ 2 вируса гриппа, связанной с последовательностью терминации транскрипции, вектор, включающий промотор, операбельно связанный с кДНК НА вируса гриппа, связанной с последовательностью терминации транскрипции, вектор, включающий промотор, операбельно связанный с кДНК NP вируса гриппа, связанной с последовательностью терминации транскрипции, вектор, включающий промотор, операбельно связанный с кДНК NB и NA вируса гриппа, связанной с последовательностью терминации транскрипции, вектор, включающий промотор, операбельно связанный с кДНК М вируса гриппа, связанной с последовательностью терминации транскрипции, вектор, включающий промотор, операбельно связанный с кДНК NS вируса гриппа, связанной с последовательностью терминации транскрипции, причем последовательность кДНК NB и NA содержит, по меньшей мере, две мутации в NB последовательности по сравнению с соответствующим NB геном, который кодирует функциональный NB мембранный белок, и одна из этих мутаций не относится к области, соответствующей трансмембранному домену, наличие которой в мутантном гене при транскрипции и трансляции его в хозяйской клетке не приводит к получению функционального мембранного белка или его функциональной части, а приводит к получению функционального NA белка, и векторы, выбранные из вектора, включающего промотор, операбельно связанный с ДНК-сегментом, кодирующим РА вируса гриппа, вектора, включающего промотор, операбельно связанный с ДНК-сегментом, кодирующим РВ 1 вируса гриппа, вектора, включающего промотор, операбельно связанный с ДНК-сегментом, кодирующим РВ 2 вируса группа, вектора, включающего промотор, операбельно связанный с ДНК-сегментом, кодирующим NP вируса гриппа, вектора, включающего промотор, операбельно связанный с ДНК-сегментом, кодирующим НА вируса гриппа, вектора, включающего промотор, операбельно связанный с ДНК-сегментом, кодирующим NA вируса гриппа, вектора, включающего промотор, операбельно связанный с ДНК-сегментом, кодирующим М вируса гриппа, вектора, включающего промотор, операбельно связанный с ДНК-сегментом, кодирующим NS2 вируса гриппа, причем одна мутация в мутантном гене NB мембранного белка находится в инициирующем метиониновом кодоне для NB мембранного белка или между инициирующим метиониновым кодоном для NB мембранного белка и инициирующим метиониновым кодоном для NA и мутации не изменяют кодирующей области для NA; и (ii) выделение вируса.
(i) контактирование хозяйской клетки с рядом векторов, включающих части вирусов гриппа с получением рекомбинантного вируса гриппа, причем ряд векторов включает: вектор, включающий промотор, операбельно связанный с кДНК РА вируса гриппа, связанной с последовательностью терминации транскрипции, вектор, включающий промотор, операбельно связанный с кДНК РВ 1 вируса гриппа, связанной с последовательностью терминации транскрипции, вектор, включающий промотор, операбельно связанный с кДНК РВ 2 вируса гриппа, связанной с последовательностью терминации транскрипции, вектор, включающий промотор, операбельно связанный с кДНК НА вируса гриппа, связанной с последовательностью терминации транскрипции, вектор, включающий промотор, операбельно связанный с кДНК NP вируса гриппа, связанной с последовательностью терминации транскрипции, вектор, включающий промотор, операбельно связанный с кДНК NB и NA вируса гриппа, связанной с последовательностью терминации транскрипции, вектор, включающий промотор, операбельно связанный с кДНК М вируса гриппа, связанной с последовательностью терминации транскрипции, вектор, включающий промотор, операбельно связанный с кДНК NS вируса гриппа, связанной с последовательностью терминации транскрипции, причем последовательность кДНК NB и NA содержит, по меньшей мере, две мутации в NB последовательности по сравнению с соответствующим NB геном, который кодирует функциональный NB мембранный белок, и одна из этих мутаций не относится к области, соответствующей трансмембранному домену, наличие которой в мутантном гене при транскрипции и трансляции его в хозяйской клетке не приводит к получению функционального мембранного белка или его функциональной части, а приводит к получению функционального NA белка, и векторы, выбранные из вектора, включающего промотор, операбельно связанный с ДНК-сегментом, кодирующим РА вируса гриппа, вектора, включающего промотор, операбельно связанный с ДНК-сегментом, кодирующим РВ 1 вируса гриппа, вектора, включающего промотор, операбельно связанный с ДНК-сегментом, кодирующим РВ 2 вируса группа, вектора, включающего промотор, операбельно связанный с ДНК-сегментом, кодирующим NP вируса гриппа, вектора, включающего промотор, операбельно связанный с ДНК-сегментом, кодирующим НА вируса гриппа, вектора, включающего промотор, операбельно связанный с ДНК-сегментом, кодирующим NA вируса гриппа, вектора, включающего промотор, операбельно связанный с ДНК-сегментом, кодирующим М вируса гриппа, вектора, включающего промотор, операбельно связанный с ДНК-сегментом, кодирующим NS2 вируса гриппа, причем одна мутация в мутантном гене NB мембранного белка находится в инициирующем метиониновом кодоне для NB мембранного белка или между инициирующим метиониновым кодоном для NB мембранного белка и инициирующим метиониновым кодоном для NA и мутации не изменяют кодирующей области для NA; и (ii) выделение вируса.
13. Способ по п.12, отличающийся тем, что мутантный ген NB мембранного белка кодирует, по меньшей мере, одну аминокислотную замену.
14. Способ по п.12, отличающийся тем, что одна мутация в мутантном гене мембранного белка является стоп кодоном для кодона инициирующего метионина.
15. Способ по п.12, отличающийся тем, что мутантный ген NB мембранного белка включает делецию одного или нескольких нуклеотидов.
16. Способ по п.15, отличающийся тем, что делеция изменяет рамку считывания NB мембранного белка, но не для NA.
17. Способ по п.12, отличающийся тем, что мутантный ген NB мембранного белка включает инсерцию одного или нескольких нуклеотидов.
18. Способ по п.17, отличающийся тем, что инсерция изменяет рамку считывания NB мембранного белка, но не для NA.
19. Способ по п.12, отличающийся тем, что по меньшей мере, одна мутация кодирует замещение в положении инициирующего метионина.
20. Способ по п.12, отличающийся тем, что мутантный ген NB мембранного белка включает делецию одного или нескольких нуклеотидов и кодирует по меньшей мере, одну аминокислотную замену.
21. Способ по п.12, отличающийся тем, что мутантный ген NB мембранного белка включает инсерцию одного или нескольких нуклеотидов и кодирует аминокислотную замену.
22. Композиция векторов, включающая ряд векторов, включающих части вирусов гриппа, содержащая вектор, включающий промотор, операбельно связанный с кДНК РА вируса гриппа, связанной с последовательностью терминации транскрипции, вектор, включающий промотор, операбельно связанный с кДНК РВ 1 вируса гриппа, связанной с последовательностью терминации транскрипции, вектор, включающий промотор, операбельно связанный с кДНК РВ 2 вируса гриппа, связанной с последовательностью терминации транскрипции, вектор, включающий промотор, операбельно связанный с к ДНК НА вируса гриппа, связанной с последовательностью терминации транскрипции, вектор, включающий промотор, операбельно связанный с кДНК NP вируса гриппа, связанной с последовательностью терминадии транскрипции, вектор, включающий промотор, операбельно связанный с кДНК NB и NA вируса гриппа, связанной с последовательностью терминации транскрипции, вектор, включающий промотор, операбельно связанный с кДНК М вируса гриппа, связанной с последовательностью терминации транскрипции, и вектор, включающий промотор, операбельно связанный с кДНК NS вируса гриппа, связанной с последовательностью терминации транскрипции, причем последовательность кДНК NB и NA содержит, по меньшей мере, две мутации в NB последовательности по сравнению с соответствующим NB геном, который кодирует функциональный мембранный белок, и одна из этих мутаций не относится к области, соответствующей трансмембранному домену, наличие которой в мутантном гене, при транскрипции и трансляции его в хозяйской клетке, не приводит к получению функционального NB мембранного белка или его функциональной части, а приводит к получению функционального NA белка,и одна мутация в мутантном гене NB мембранного белка находится в инициирующем метиониновом кодоне NB мембранного белка или между инициирующим кодоном NB мембранного белка и инициирующим метиониновым кодоном NA, и мутации не изменяют кодирующей области для NA, и
векторы, включающие вектор, содержащий промотор, операбельно связанный с ДНК-сегментом, кодирующим РА вируса гриппа, вектор, содержащий промотор, операбельно связанный с ДНК-сегментом, кодирующим РВ 1 вируса гриппа, вектор, содержащий промотор, операбельно связанный с ДНК-сегментом, кодирующим РВ 2 вируса группа, вектор, содержащий промотор, операбельно связанный с ДНК-сегментом, кодирующим NP вируса гриппа, вектор, содержащий промотор, операбельно связанный с ДНК-сегментом, кодирующим НА вируса гриппа, вектор, содержащий промотор, операбельно связанный с ДНК-сегментом, кодирующим NA вируса гриппа, вектор, содержащий промотор, операбельно связанный с ДНК-сегментом, кодирующим М вируса гриппа, вектор, содержащий промотор, операбельно связанный с ДНК-сегментом, кодирующим мутантный NB вируса гриппа, и вектор, содержащий промотор, операбельно связанный с ДНК-сегментом, кодирующим NS2 вируса гриппа.
векторы, включающие вектор, содержащий промотор, операбельно связанный с ДНК-сегментом, кодирующим РА вируса гриппа, вектор, содержащий промотор, операбельно связанный с ДНК-сегментом, кодирующим РВ 1 вируса гриппа, вектор, содержащий промотор, операбельно связанный с ДНК-сегментом, кодирующим РВ 2 вируса группа, вектор, содержащий промотор, операбельно связанный с ДНК-сегментом, кодирующим NP вируса гриппа, вектор, содержащий промотор, операбельно связанный с ДНК-сегментом, кодирующим НА вируса гриппа, вектор, содержащий промотор, операбельно связанный с ДНК-сегментом, кодирующим NA вируса гриппа, вектор, содержащий промотор, операбельно связанный с ДНК-сегментом, кодирующим М вируса гриппа, вектор, содержащий промотор, операбельно связанный с ДНК-сегментом, кодирующим мутантный NB вируса гриппа, и вектор, содержащий промотор, операбельно связанный с ДНК-сегментом, кодирующим NS2 вируса гриппа.
23. Выделенный рекомбинантный вирус гриппа для индуцирования иммунного ответа, полученный способом по п.12.
24. Клетка-хозяин, трансформированная вирусом по п.12.
