Выделенный рекомбинантный вирус гриппа и способы его получения - RU2005136233A

Реферат

1. Выделенный рекомбинантный вирус гриппа, включающий мутантный ген мембранного белка, который не кодирует функциональный мембранный белок или его функциональную часть, причем мутантный ген мембранного белка содержит, по меньшей мере, две мутации относительно соответствующего гена мембранного белка, который кодирует функциональный мембранный белок, а одна из указанных мутаций не относится к области гена мембранного белка, соответствующей трансмембранному домену.

2. Выделенный рекомбинантный вирус по п.1, отличающийся тем, что мутантный ген мембранного белка кодирует, по меньшей мере, одну аминокислотную замену.

3. Выделенный рекомбинантный вирус по п.2, отличающийся тем, что, по меньшей мере, одна мутация кодирует замещение в кодоне для инициирующего метионина.

4. Выделенный рекомбинантный вирус по п.1, отличающийся тем, что одна мутация в мутантном гене мембранного белка является стоп кодоном для кодона инициирующего метионина.

5. Выделенный рекомбинантный вирус по п.1, отличающийся тем, что одна мутация в мутантном гене мембранного белка является стопкодоном в кодирующей области для мембранного белка.

6. Выделенный рекомбинантный вирус по п.1, отличающийся тем, что мутантный ген мембранного белка включает делецию одного или нескольких нуклеотидов.

7. Выделенный рекомбинантный вирус по п.6, отличающийся тем, что делеция изменяет рамку считывания мембранного белка.

8. Выделенный рекомбинантный вирус по п.1, отличающийся тем, что мутантный ген мембранного белка включает инсерцию одного или нескольких нуклеотидов.

9. Выделенный рекомбинантный вирус по п.8, отличающийся тем, что инсерция изменяет рамку считывания мембранного белка.

10. Выделенный рекомбинантный вирус по п.1, отличающийся тем, что мутантный ген мембранного белка включает делецию одного или нескольких нуклеотидов и кодирует аминокислотную замену.

11. Выделенный рекомбинантный вирус по п.1, отличающийся тем, что мутантный ген мембранного белка включает инсерцию одного или нескольких нуклеотидов и кодирует аминокислотную замену.

12. Выделенный рекомбинантный вирус по п.1, отличающийся тем, что мембранный белок представляет собой М2 белок вируса гриппа А.

13. Выделенный рекомбинантный вирус по п.1, отличающийся тем, что мембранный белок представляет собой NB белок вируса гриппа В.

14. Выделенный рекомбинантный вирус по п.1, отличающийся тем, что мембранный белок представляет собой СМ1 белок вируса гриппа С.

15. Выделенный рекомбинантный вирус по п.1, который дополнительно включает гетерологичный иммуногенный белок патогена или белок терапевтического назначения.

16. Выделенная рекомбинантный вирус по п.1, который дополнительно содержит ген гетерологачного иммуногенного белка патогена или ген белка терапевтического назначения.

17. Выделенный рекомбинантный вирус по п.1, отличающийся тем, что по крайней мере одна мутация не меняет in vitro репликации вируса, но связана с аттенуированием вируса in vivo.

18. Вакцина, включающая выделенный рекомбинантный вирус по п.1.

19. Способ получения рекомбинантного вируса гриппа, включающего мутантный ген мембранного белка, который не кодирует функциональный мембранный белок или его функциональную часть, включающий

(i) контактирование хозяйской клетки с рядом векторов - частей вирусов гриппа с получением рекомбинантного вируса гриппа, причем ряд векторов включает: а) по меньшей мере, два вектора, выбранных из вектора, включающего промотор, операбельно связанный с кДНК РА вируса гриппа, связанной с последовательностью терминации транскрипции, вектора, включающего промотор, операбельно связанный с кДНК РВ1 вируса гриппа, связанной с последовательностью терминации транскрипции, вектора, включающего промотор, операбельно связанный с кДНК РВ2 вируса гриппа, связанной с последовательностью терминации транскрипции, вектора, включающего промотор, операбельно связанный с кДНК НА вируса гриппа, связанной с последовательность терминации транскрипции, вектора, включающего промотор, операбельно связанный с кДНК NP вируса гриппа, связанной с последовательностью терминации транскрипции, вектора, включающего промотор, операбельно связанный с кДНК NB и NA вируса гриппа, связанной с последовательностью терминации транскрипции, вектора, включающего промотор, операбельно связанный с кДНК М вируса гриппа, связанной с последовательностью терминации транскрипции, вектора, включающего промотор, операбельно связанный с кДНК NS вируса гриппа, связанной с последовательностью терминации транскрипции, причем последовательность кДНК NB и NA содержит, по меньшей мере, две мутации в NB последовательности по сравнению с соответствующим NB геном, который кодирует функциональный мембранный белок, и одна из этих мутаций не относится к области, соответствующей трансмембранному домену, наличие которой в мутантном гене, при транскрипции и трансляции его в хозяйской клетке, не приводит к получению функционального мембранного белка или его функциональной части, а может приводить к получению функционального NA белка, и b), по меньшей мере, два вектора, выбранные из вектора, включающего промотор, операбельно связанный с ДНК-сегментом, кодирующим РА вируса гриппа, вектора, включающего промотор, операбельно связанный с ДНК-сегментом, кодирующим РВ1 вируса гриппа, вектора, включающего промотор, операбельно связанный с ДНК-сегментом, кодирующим РВ2 вируса группа вектора, включающего промотор, операбельно связанный с ДНК-сегментом, кодирующим NP вируса гриппа, вектора, включающего промотор, операбельно связанный с ДНК-сегментом, кодирующим НА вируса гриппа, вектора, включающего промотор, операбельно связанный с ДНК-сегментом, кодирующим NA вируса гриппа, вектора, включающего промотор, операбельно связанный с ДНК-сегментом, кодирующим М вируса гриппа, вектора, включающего промотор, операбельно связанный с ДНК-сегментом, кодирующим NS2 вируса гриппа; и

(ii) выделение рекомбинантного вируса гриппа.

20. Способ получения рекомбинантного вируса гриппа, включающего мутантный ген мембранного белка, который не кодирует функциональный мембранный белок или его функциональную часть, включающий

(i) контактирование хозяйской клетки с рядом векторов - частей вирусов гриппа с получением рекомбинантного вируса гриппа, причем ряд векторов включает: а) по меньшей мере два вектора, выбранных из вектора, включающего промотор, операбельно связанный с кДНК РА вируса гриппа, связанной с последовательностью терминации транскрипции, вектора, включающего промотор, операбельно связанный с кДНК РВ1 вируса гриппа, связанной с последовательностью терминации транскрипции, вектора, включающего промотор, операбельно связанный с кДНК РВ2 вируса гриппа, связанной с последовательностью терминации транскрипции, вектора, включающего промотор, операбельно связанный с кДНК НА вируса гриппа, связанной с последовательность терминации транскрипции, вектора, включающего промотор, операбельно связанный с кДНК NP вируса гриппа, связанной с последовательностью терминации транскрипции, вектора, включающего промотор, операбельно связанный с кДНК NA вируса гриппа, связанной с последовательностью терминации транскрипции, вектора, включающего промотор, операбельно связанный с кДНК M1 вируса гриппа, связанной с последовательностью терминации транскрипции, вектора, включающего промотор, операбельно связанный с кДНК NS вируса гриппа, связанной с последовательностью терминации транскрипции, вектора, включающего промотор, операбельно связанный с кДНК мутантного М2, связанной с последовательностью терминации транскрипции, причем кДНК мутантного М2 содержит, по меньшей мере, две мутации по сравнению с соответствующим М2 геном, который кодирует функциональный мембранный белок, и одна из этих мутаций не относится к области, соответствующей трансмембранному домену, наличие которой в мутантном гене, при транскрипции и трансляции его в хозяйской клетке, не приводит к получению функционального мембранного белка или его функциональной части, и b) по меньшей мере, два вектора, выбранные из вектора, включающего промотор, операбельно связанный с ДНК-сегментом, кодирующим РА вируса гриппа, вектора, включающего промотор, операбельно связанный с ДНК-сегментом, кодирующим РВ1 вируса гриппа, вектора, включающего промотор, операбельно связанный с ДНК-сегментом, кодирующим РВ2 вируса группа, вектора, включающего промотор, операбельно связанный с ДНК-сегментом, кодирующим NP вируса гриппа, вектора, включающего промотор, операбельно связанный с ДНК-сегментом, кодирующим НА вируса гриппа, вектора, включающего промотор, операбельно связанный с ДНК-сегментом, кодирующим NA вируса гриппа, вектора, включающего промотор, операбельно связанный с ДНК-сегментом, кодирующим M1 вируса гриппа, вектора, включающего промотор, операбельно связанный с ДНК-сегментом, кодирующим NS2 вируса гриппа; и

(ii) выделение рекомбинантного вируса гриппа.

21. Способ по п.19 или 20, отличающийся тем, что мутантный ген мембранного белка кодирует, по меньшей мере, одну аминокислотную замену.

22. Способ по п.19 или 20, отличающийся тем, что одна мутация в мутантном гене мембранного белка является стоп кодоном для кодона инициирующего метионина.

23. Способ по п.19 или 20, отличающийся тем, что одна мутация в мутантном гене мембранного белка является стопкодоном в кодирующей области для мембранного белка.

24. Способ по п.19 или 20, отличающийся тем, что мутантный ген мембранного белка включает делению одного или нескольких нуклеотидов.

25. Способ по п.24, отличающийся тем, что деления изменяет рамку считывания мембранного белка.

26. Способ по п.19 или 20, отличающийся тем, что мутантный ген мембранного белка включает инсерцию одного или нескольких нуклеотидов.

27. Способ по п.26, отличающийся тем, что инсерция* изменяет рамку считывания мембранного белка.

28. Способ по п.19 или 20, отличающийся тем, что по меньшей мере, одна мутация кодирует замещение в положении инициирующего метионина.

29. Способ по п.19 или 20, отличающийся тем, что мутантный ген мембранного белка включает делецию одного или нескольких нуклеотидов и кодирует по меньшей мере, одну аминокислотную замену.

30. Способ по п.19 или 20, отличающийся тем, что мутантный ген мембранного белка включает инсерцию одного или нескольких нуклеотидов и кодирует аминокислотную замену.

31. Способ иммунизации позвоночного, предусматривающий воздействие эффективного количества рекомбинантного вируса по любому из пп.1-17 на позвоночное животное.

32. Способ по п.31, отличающийся тем, что позвоночное животное является птицей.

33. Способ по п.31, отличающийся тем, что позвоночное животное является млекопитающим.

34. Способ по п.31, отличающийся тем, что позвоночное животное является человеком.

35. Композиция, включающая ряд векторов - частей вируса гриппа, содержащая

а) по меньшей мере, два вектора, выбранных из вектора, включающего промотор, операбельно связанный с кДНК РА вируса гриппа, связанной с последовательностью терминации транскрипции, вектора, включающего промотор, операбельно связанный с кДНК РВ1 вируса гриппа, связанной с последовательностью терминации транскрипции, вектора, включающего промотор, операбельно связанный с кДНК РВ2 вируса гриппа, связанной с последовательностью терминации транскрипции, вектора, включающего промотор, операбельно связанный с кДНК НА вируса гриппа, связанной с последовательностью терминации транскрипции, вектора, включающего промотор, операбельно связанный с кДНК NP вируса гриппа, связанной с последовательностью терминадии транскрипции, вектора, включающего промотор, операбельно связанный с кДНК NB и NA вируса гриппа, связанной с последовательностью терминации транскрипции, вектора, включающего промотор, операбельно связанный с кДНК М вируса гриппа, связанной с последовательностью терминации транскрипции, и вектора, включающего промотор, операбельно связанный с кДНК NS вируса гриппа, связанной с последовательностью терминации транскрипции, причем последовательность кДНК NB и NA содержит, по меньшей мере, две мутации в NB последовательности по сравнению с соответствующим NB геном, который кодирует функциональный мембранный белок, и одна из этих мутаций не относится к области, соответствующей трансмембранному домену, наличие которой в мутантном гене, при транскрипции и трансляции его в хозяйской клетке, не приводит к получению функционального мембранного белка или его функциональной части, а может приводить к получению функционального NA белка,

и b), по меньшей мере, два вектора, выбранные из вектора, включающего промотор, операбельно связанный с ДНК-сегментом, кодирующим РА вируса гриппа, вектора, включающего промотор, операбельно связанный с ДНК-сегментом, кодирующим РВ1 вируса гриппа, вектора, включающего промотор, операбельно связанный с ДНК-сегментом, кодирующим РВ2 вируса гриппа, вектора, включающего промотор, операбельно связанный с ДНК-сегментом, кодирующим NP вируса гриппа, вектора, включающего промотор, операбельно связанный с ДНК-сегментом, кодирующим НА вируса гриппа, вектора, включающего промотор, операбельно связанный с ДНК-сегментом, кодирующим NA вируса гриппа, вектора, включающего промотор, операбельно связанный с ДНК-сегментом, кодирующим М вируса гриппа, вектора, включающего промотор, операбельно связанный с ДНК сегментом, кодирующим мутантный NB вируса гриппа, и вектора, включающего промотор, операбельно связанный с ДНК-сегментом, кодирующим NS2 вируса гриппа.

36. Композиция, включающая ряд векторов - частей вирусов гриппа, содержащая

а) по меньшей мере, два вектора, выбранных из вектора, включающего промотор, операбельно связанный с кДНК РА вируса гриппа, связанной с последовательностью терминации транскрипции, вектора, включающего промотор, операбельно связанный с кДНК РВ1 вируса гриппа, связанной с последовательностью терминации транскрипции, вектора, включающего промотор, операбельно связанный с кДНК РВ2 вируса гриппа, связанной с последовательностью терминации транскрипции, вектора, включающего промотор, операбельно связанный с кДНК НА вируса гриппа, связанной с последовательность терминации транскрипции, вектора, включающего промотор, операбельно связанный с кДНК NP вируса гриппа, связанной с последовательностью терминации транскрипции, вектора, включающего промотор, операбельно связанный с кДНК NA вируса гриппа, связанной с последовательностью терминации транскрипции, вектора, включающего промотор, операбельно связанный с кДНК M1 вируса гриппа, связанной с последовательностью терминации транскрипции, вектора, включающего промотор, операбельно связанный с кДНК NS вируса гриппа, связанной с последовательностью терминации транскрипции, вектора, включающего промотор, операбельно связанный с кДНК сегментом мутантного М2, связанным с последовательностью (терминации) транскрипции, причем кДНК мутантного М2 содержит, по меньшей мере, две мутации по сравнению с соответствующим М2 геном, который кодирует функциональный мембранный белок, и одна из этих мутаций не относится к области, соответствующей трансмембранному домену, наличие которой в мутантном гене, при транскрипции и трансляции его в хозяйской клетке, не приводит к получению функционального мембранного белка или его функциональной части, и b) по меньшей мере, два вектора, выбранные из вектора, включающего промотор, операбельно связанный с ДНК-сегментом, кодирующим РА вируса гриппа, вектора, включающего промотор, операбельно связанный с ДНК-сегментом, кодирующим РВ1 вируса гриппа, вектора, включающего промотор, операбельно связанный с ДНК-сегментом, кодирующим РВ2 вируса группа, вектора, включающего промотор, операбельно связанный с ДНК-сегментом, кодирующим NP вируса гриппа, вектора, включающего промотор, операбельно связанный с ДНК-сегментом, кодирующим НА вируса гриппа, вектора, включающего промотор, операбельно связанный с ДНК-сегментом, кодирующим NA вируса гриппа, вектора, включающего промотор, операбельно связанный с ДНК-сегментом, кодирующим M1 вируса гриппа, вектора, включающего промотор, операбельно связанный с ДНК-сегментом, кодирующим NS2 вируса гриппа.

37. Композиция по п.35 или 36, дополнительно включающая вектор, включающий промотор, операбельно связанный с ДНК фрагментом, важным в плане антисмысловой ориентации.

38. Композиция по п.37, отличающаяся тем, что вектор включает ДНК фрагмент, кодирующий иммуногенный полипептид или пептид патогена или белок терапевтического назначения.

39. Выделенный вирус, полученный способом по п.19 или 20.

40. Клетка-хозяин, контактирующая с вирусом по п.1 или 39.

41. Выделенный полинуклеотид, включающий сегмент нуклеиновой кислоты, включающий последовательности, кодирующие, по крайней мере, один белок вируса гриппа B/Lee или его часть, или комплемент полинуклеотида, причем выделенный полинуклеотид кодирует НА, NA, PB1, РВ2, PA, NP, M1, NB или NS или часть каждого из них, обладающую практически такой же активностью как и соответствующий полипептид согласно одной из последовательностей SEQ ID NOs:1-8.

42. Выделенный полинуклеотид, включающий сегмент нуклеиновой кислоты, включающий последовательности, кодирующие, по крайней мере, один белок вируса гриппа B/Lee или его часть, или комплемент полинуклеотида, причем выделенный полинуклеотид кодирует НА, NA, PB1, РВ2, PA, NP, M1, NB или NS или часть каждого из них и который гибридизуется с одной из последовательностей SEQ ID NOs:1-8 или комплементарной им последовательностью.

43. Выделенный полинуклеотид по п.42, отличающийся тем, что он имеет практически такую же нуклеотидную последовательность, что и указанные SEQ ID NOs:1-8 или комплементарную им.

44. Выделенный полинуклеотид по п.42, отличающийся тем, что он кодирует полипептид, который имеет практически такую же активность, что и полипептид, кодируемый одной из SEQ ID NOs:1-8.