Способ повышения экспрессии рнк в клетке - RU2020112249A
Код документа: RU2020112249A
Формула
1. Способ экспрессии пептида или белка в клетке, включающий стадии (i) введения РНК, кодирующей пептид или белок, в клетку и (ii) предоставление фактора вирусного происхождения, содержащего NSs белок Toscana virus или функциональный вариант NSs белка Toscana virus, в клетку.
2. Способ по п. 1, в котором фактор вирусного происхождения является NSs белком Toscana virus.
3. Способ по п. 1 или 2, согласно которому РНК вводится в клетку повторно.
4. Способ по любому из пп. 1-3, согласно которому РНК вводится в клетку с помощью электропорации или липофекции.
5. Способ по любому из пп.1-4, согласно которому РНК является in vitro транскрибированной РНК.
6. Способ по любому из пп.1-5, согласно которому предоставление фактора вирусного происхождения в клетку включает введение РНК, кодирующей фактор вирусного происхождения, в клетку.
7. Способ по любому из пп.1-6, дополнительно содержащий предоставление вируса осповакцины B18R и/или вируса осповакцины E3 в клетку.
8. Способ по п. 7, согласно которому предоставление вируса осповакцины B18R и/или вируса осповакцины E3 в клетку включает введение РНК, кодирующей вирус осповакцины B18R, и/или РНК, кодирующей вирус осповакцины E3, в клетку.
9. Способ по любому из пп.1-8, согласно которому предоставление фактора вирусного происхождения в клетку повышает устойчивость и/или экспрессию РНК в клетке.
10. Способ по п. 9, согласно которому повышение экспрессии РНК в клетке включает увеличение уровня экспрессии и/или увеличение продолжительности экспрессии РНК в клетке.
11. Способ по любому из пп.1-10, согласно которому предоставление фактора вирусного происхождения в клетку повышает жизнеспособность клетки.
12. Способ по любому из пп.1-11, в котором клетка является клеткой, обладающей барьерной функцией.
13. Способ по любому из пп.1-12, в котором клетка является фибробластом, кератиноцитом, эпителиальной клеткой или эндотелиальной клеткой.
14. Способ по любому из пп.1-11, в котором клетка является T-клеткой или антиген-презентирующей клеткой.
15. Способ по любому из пп.1-14, в котором клетка является человеческой клеткой.
16. Способ предоставления клеток, имеющих характеристики стволовых клеток, включающий стадии (i) предоставления клеточной популяции, содержащей соматические клетки, (ii) предоставления фактора вирусного происхождения, содержащего NSs белок Toscana virus или функциональный вариант NSs белка Toscana virus, в соматические клетки, (iii) введение РНК, кодирующей один или более факторов перепрограммирования в соматические клетки, и (iv) обеспечения возможности развития клеток, имеющих характеристики стволовых клеток.
17. Способ по п. 16, согласно которому фактор вирусного происхождения содержит NSs белок Toscana virus.
18. Способ по п. 16 или 17, согласно которому предоставление фактора вирусного происхождения в соматические клетки включает введение РНК, кодирующей фактор вирусного происхождения, в клетку.
19. Способ по любому из пп.16-18, который дополнительно содержит введение в соматические клетки микроРНК, повышающей перепрограммирование соматических клеток в клетки, имеющие характеристики стволовых клеток.
20. Способ по любому из пп.16-19, согласно которому один или более факторов перепрограммирования включают OCT4 и SOX2.
21. Способ по п. 20, согласно которому один или более перепрограммирующих факторов дополнительно содержат KLF4 и/или c-MYC.
22. Способ по п. 20 или 21, согласно которому один или более перепрограммирующих факторов дополнительно содержат NANOG и/или LIN28.
23. Способ по любому из пп.16-21, согласно которому один или более перепрограммирующих факторов включают OCT4, SOX2, KLF4 и c-MYC.
24. Способ по п. 23, согласно которому один или более перепрограммирующих факторов дополнительно содержит LIN28 и необязательно NANOG.
25. Способ по любому из пп.16 - 20, согласно которому один или более перепрограммирующих факторов включают OCT4, SOX2, NANOG и LIN28.
26. Способ по любому из пп.16-25, дополнительно включающий стадию культивирования соматических клеток в присутствии по меньшей мере одного ингибитора гистодеацетилазы.
27. Способ по п. 26, согласно которому, по меньшей мере, один ингибитор гистодеацетилазы включает вальпроевую кислоту.
28. Способ по любому из пп.16-27, согласно которому стадия обеспечения возможности развития клеток, обладающих характеристиками стволовой клетки, включает культивирование соматических клеток при условиях культивирования эмбриональных стволовых клеток.
29. Способ по любому из пп.16-28, согласно которому характеристики стволовой клетки включают морфологию эмбриональной стволовой клетки.
30. Способ по любому из пп.16-29, согласно которому клетки, обладающие характеристиками стволовой клетки, имеют нормальные кариотипы, проявляют теломеразную активность, экспрессируют маркеры клеточной поверхности, являющиеся характерными для эмбриональных стволовых клеток, и/или экспрессируют гены, являющиеся характерными для эмбриональных стволовых клеток.
31. Способ по любому из пп.16-30, согласно которому клетки, обладающие характеристиками стволовой клетки, демонстрируют плюрипотентный статус.
32. Способ по любому из пп.16-31, согласно которому клетки, имеющие характеристики стволовой клетки, обладают дифференцировочным потенциалом, чтобы дифференцировать в развитые производные всех трех зародышевых листков.
33. Способ по любому из пп.16-32, согласно которому соматические клетки выбирают из группы, состоящей из фибробластов, кератиноцитов и эндотелиальных клеток-предшественников.
34. Способ по п. 33, согласно которому фибробласты являются фибробластами легких, фибробластами крайней плоти или фибробластами кожи.
35. Способ по любому из пп.16-34, согласно которому соматические клетки являются человеческими клетками.
36. Способ предоставления дифференцированных типов клеток, содержащий стадии (i) предоставления клеток, имеющих характеристики стволовых клеток, с помощью способа по любому из пп.16-35, и (ii) культивирования клеток, обладающих характеристиками стволовой клетки, при условиях, вызывающих или прямую частичную или полную дифференцировку в дифференцированный тип клеток.
