Модифицированные капсидные белки для улучшения доставки парвовирусных векторов - RU2018125937A
Код документа: RU2018125937A
Формула
1. Парвовирусный капсидный белок, содержащий аминокислотную последовательность капсидного белка, происходящего от серотипа аденоассоциированного вируса (AAV) или любого другого парвовируса с икосаэдрической капсидной структурой Т=1, где петля вариабельной области 1 (VR1), содержащая аминокислотные остатки 258-272 капсидного белка AAV1 или соответствующие аминокислотные остатки другого AAV или парвовирусного капсидного белка, модифицируют путем делеции и/или замены одного или более аминокислотных остатков, что будет приводить к дестабилизации области петли из-за нацеленной деструкции паттернов водородных связей, создаваемых этими остатками, и где капсидный белок, содержащий такую модификацию, позволяет получить вирусный вектор, содержащий капсидный белок, повышающий эффективность трансдукции и/или обладающий модифицированной тканеспецифичностью по сравнению с вирусным вектором, включающим капсидный белок, который не содержит такую модификацию.
2. Капсидный белок по п.1, где один или более аминокислотных остатков 258-272 капсидного белка AAV1 или соответствующие аминокислотные остатки капсидного белка другого AAV или парвовируса были делетированы.
3. Капсидный белок по п.1, где один или более аминокислотных остатков 261-269 капсидного белка AAV1 или соответствующие аминокислотные остатки капсидного белка другого AAV или парвовируса были делетированы.
4. Капсидный белок по п.1, где аминокислотный остаток 265 капсидного белка AAV1 или соответствующий аминокислотный остаток капсидного белка другого AAV или парвовируса был делетирован.
5. Капсидный белок по п.1, где указанный капсидный белок содержит аминокислотную последовательность серотипа AAV или другого парвовируса, который связывается с сульфатом гепарина, где один или более аминокислотных остатков, которые опосредуют связывание капсидного белка с сульфатом гепарина, были заменены и/или делетированы, и где связывание капсидного белка с сульфатом гепарина существенно снижается.
6. Капсидный белок по п.5, где указанный капсидный белок содержит аминокислотную последовательность серотипа AAV3a, AAV3b, AAV6 или AAV8.
7. Капсидный белок по п.5, где указанный капсидный белок содержит аминокислотную последовательность серотипа AAV6, и где аминокислотный остаток 531 был заменен в целях значительного снижения уровня связывания с сульфатом гепарина.
8. Капсидный белок по п.7, где аминокислотный остаток 531 был заменен глутаминовой кислотой.
9. Капсидный белок аденоассоциированного вируса (AAV), содержащий аминокислотную последовательность серотипа AAV3a, AAV3b, AAV6 или AAV8, где один или более аминокислотных остатков, которые опосредуют связывание капсидного белка с сульфатом гепарина, были заменены и/или делетированы, что приводит к значительному снижению уровня связывания капсидного белка с сульфатом гепарина.
10. Капсидный белок по п.9, где указанный капсидный белок содержит аминокислотную последовательность серотипа AAV6, где аминокислотный остаток 531 был заменен в целях значительного снижения уровня связывания с сульфатом гепарина.
11. Капсидный белок по п.10, где аминокислотный остаток 531 был заменен глутаминовой кислотой.
12. Капсидный белок по любому из пп. 1-11, где трансдукция в мышцу увеличивалась по меньшей мере приблизительно на 10% по сравнению с вирусным вектором, содержащим капсидный белок, не имеющий модификации.
13. Капсидный белок по любому из пп. 1-12, где трансдукция в печень уменьшалась по меньшей мере приблизительно на 10% по сравнению с вирусным вектором, содержащим капсидный белок, не имеющий модификации.
14. Капсидный белок по любому из пп. 1-13, где по меньшей мере один тирозиновый остаток был заменен для повышения эффективности трансдукции в сердечную мышку.
15. Капсидный белок по п.14, где указанный капсидный белок содержит аминокислотную последовательность серотипа AAV1 или AAV6, а тирозиновой заменой является Y445F.
16. Полинуклеотид, кодирующий капсидный белок по любому из пп. 1-15.
17. Парвовирусный капсид, содержащий капсидный белок по любому из пп. 1-15.
18. Вирусный вектор, включающий:
(a) парвовирусный капсид по п.17; и
(b) нуклеиновую кислоту, содержащую рекомбинантную вирусную матрицу, где нуклеиновая кислота инкапсидирована в парвовирусном капсиде.
19. Вирусный вектор по п.18, который представляет собой вектор AAV.
20. Вирусный вектор по п.18 или 19, где вирусный вектор обладает системным тропизмом к скелетной мышце, сердечной мышце и/или мышце диафрагмы.
21. Вирусный вектор по п.20, где вирусный вектор обладает системным тропизмом к скелетной мышце.
22. Вирусный вектор по любому из пп. 18-21, где вирусный вектор обладает пониженным тропизмом к печени по сравнению с вирусным вектором, содержащим капсидный белок дикого типа.
23. Вирусный вектор по любому из пп. 18-21, где вирусный вектор обладает повышенным тропизмом к печени по сравнению с вирусным вектором, содержащим капсидный белок дикого типа.
24. Фармацевтическая композиция, содержащая вирусный вектор по любому из п.п. 18-23 в фармацевтически приемлемом носителе.
25. Способ доставки нуклеиновой кислоты в клетку, включающий контактирование клетки с вирусным вектором по любому из пп. 18-23 или с фармацевтической композицией по п.24 в условиях, достаточных для проникновения нуклеиновой кислоты в клетку.
26. Способ доставки нуклеиновой кислоты индивидууму, включающий введение индивидууму вирусного вектора по любому из пп. 18-23 или фармацевтической композиции по п.24.
27. Способ доставки нуклеиновой кислоты индивидууму, включающий введение индивидууму клетки, которая контактирует с вирусным вектором по любому из пп. 18-23 или с фармацевтической композицией по п.24 в условиях, достаточных для проникновения нуклеиновой кислоты в клетку.
28. Способ по п.26 или 27, где индивидуумом является человек.
29. Способ по любому из пп. 26-28, где индивидуум страдает расстройством или подвергается риску развития у него расстройства, выбранного из группы, состоящей из мышечной дистрофии, мышечной дистрофии Дюшенна, мышечной дистрофии Беккера, гемофилии А, гемофилии B, рассеянного склероза, сахарного диабета, болезни Гуше, болезни Фабри, болезни Помпе, рака, артрита, мышечного истощения, болезни сердца, застойной сердечной недостаточности, заболевания периферической артерии, гиперплазии внутренних органов, нервного расстройства, эпилепсии, болезни Гентингтона, болезни Паркинсона, болезни Альцгеймера, аутоиммунного заболевания, кистозного фиброза, талассемии, синдрома Хеллера, синдрома Слая, синдрома Шейе, синдрома Хеллера-Шейе, синдрома Хантера, синдрома Санфилиппо А, В, С, D, синдрома Моркио, синдрома Марото-Лэми, болезни Краббе, фенилкетонурии, болезни Баттена, атаксии спинного мозга, дефицита рецептора ЛНП, гипераммониемии, анемии, артрита, дегенеративного расстройства сетчатки, дегенерации желтого пятна и дефицита аденозин-дезаминазы.
30. Способ по любому из пп. 26-29, где вирусный вектор или фармацевтическую композицию вводят в скелетную мышцу, сердечную мышцу и/или мышцу диафрагмы.
31. Способ по любому из пп. 26-29, где вирусный вектор или фармацевтическую композицию вводят в глаза.
32. Способ по любому из пп. 26-29, где вирусный вектор или фармацевтическую композицию вводят в головной мозг.
33. Способ по любому из пп. 26-29, где вирусный вектор или фармацевтическую композицию вводят внутривенно.
34. Способ по любому из пп. 26-29, где индивидуум страдает мышечной дистрофией или подвергается риску развития у него мышечной дистрофии.
35. Способ по любому из пп. 26-29, где индивидуум страдает болезнью сердца или подвергается риску развития у него болезни сердца.
36. Способ по любому из пп. 26-29, где индивидуум страдает застойной сердечной недостаточностью или заболеванием периферической артерии или подвергается риску развития у него этих заболеваний.
37. Способ по любому из пп. 26-29, где индивидуум страдает метаболическим расстройством или подвергается риску развития у него указанного расстройства.
38. Способ продуцирования рекомбинантной парвовирусной частицы, включающий введение в клетку, подходящую для репликации парвовируса:
(а) рекомбинантной парвовирусной матрицы, включающей (i) гетерологичную нуклеиновую кислоту и (ii) по меньшей мере один инвертированный концевой повтор; и
(b) полинуклеотида, содержащего репликацирующуюся(иеся) белок-кодирующую(ие) последовательность(и) и последовательность(и), кодирующую(ие) капсидный белок по любому из пп. 1-15;
в условиях, достаточных для репликации и упаковки рекомбинантной парвовирусной матрицы,
и тем самым для продуцирования рекомбинантных парвовирусных частиц в клетке.
