Конъюгаты антител с полипептидами-производными апротинина - RU2015121818A
Код документа: RU2015121818A
Формула
1. Белковый конъюгат, содержащий фрагмент антитела и полипептид, имеющий аминокислотную последовательность Thr1-Phe2-Phe3-Tyr4-Gly5-Gly6-Cys7/Ser7-Arg8-Gly9-Lys10-Arg11-Asn12-Asn13-Phe14-Lys15-Thr16-Glu17-Glu18-Tyr19 (SEQ ID NO: 117), или его биологически активный аналог или фрагмент, причем антитело конъюгировано с полипептидом в одном или нескольких из следующих положений на полипептиде: N-концевой аминокислотный остаток; С-концевой аминокислотный остаток; или остаток лизина между N-концом и С-концом.
2. Белковый конъюгат по п. 1, дополнительно содержащий линкер между фрагментом антитела и полипептидом.
3. Белковый конъюгат по п. 2, причем линкер содержит группу, реагирующую с первичным амином.
4. Белковый конъюгат по п. 2, причем линкер представляет собой монофторзамещенный циклооктин (MFCO), бицикло[6.1.0]нонин (BCN), N-сукцинимидил-S-ацетилтиотиоацетат (SATA), N-сукцинимидил-S-ацетилтиопропионат (SATP), малеимидо- или дибензоциклооктин (DBCO).
5. Конъюгат по п. 1, причем полипептид содержит аминокислотную последовательность Thr1-Phe2-Phe3-Tyr4-Gly5-Gly6-Cys7-Arg8-Gly9-Lys10-Arg11-Asn12-Asn13-Phe14-Lys15-Thr16-Glu17-Glu18-Tyr19 (SEQ ID NO: 67).
6. Конъюгат по п. 1, причем полипептид содержит аминокислотную последовательность Thr1-Phe2-Phe3-Tyr4-Gly5-Gly6-Ser7-Arg8-Gly9-Lys10-Arg11-Asn12-Asn13-Phe14-Lys15-Thr16-Glu17-Glu18-Tyr19 (SEQ ID NO: 97).
7. Конъюгат по п. 1, причем конъюгат содержит аналог SEQ ID NO: 117.
8. Конъюгат по п. 7, причем аналог SEQ ID NO: 117 содержит по меньшей мере 13 аминокислотных остатков, которые являются инвариантными по отношению к SEQ ID NO: 117.
9. Конъюгат по п. 7, причем аналог SEQ ID NO: 117 содержит последовательность, в которой Lys10 и/или Lys15 остаются инвариантными.
10. Конъюгат по п. 7, причем в аналоге SEQ ID NO: 117 Asn12 замещен Gln, Asn13 замещен Gln и/или Phe14 замещен Tyr или Trp.
11. Конъюгат по п. 7, причем аналог SEQ ID NO: 117 имеет последовательность Phe3-Tyr4-Gly5-Gly6-Cys7/Ser7-Arg8-Gly9-Lys10-Arg11-Asn12-Asn13-Phe14-Lys15-Thr16-Glu17-
Glu18-Tyr19-Cys (SEQ ID NO: 118); Gly5-Gly6-Ser7-Arg8-Gly9-Lys10-Arg11-Asn12-Asn13-Phe14-Lys15-Thr16-Glu17-Glu18-Tyr19-Cys (SEQ ID NO: 119); Ser7-Arg8-Gly9-Lys10-Arg11-Asn12-Asn13-Phe14-Lys15-Thr16-Glu17-Glu18-Tyr19-Cys (SEQ ID NO: 120); Gly9-Lys10-Arg11-Asn12-Asn13-Phe14-Lys15-Thr16-Glu17-Glu18-Tyr19-Cys (SEQ ID NO: 121); или Lys10-Arg11-Asn12-Asn13-Phe14-Lys15-Tyr19-Cys (SEQ ID NO: 122).
12. Конъюгат по п. 1, причем полипептид содержит фрагмент SEQ ID NO: 117.
13. Конъюгат по п. 12, причем фрагмент содержит по меньшей мере шесть аминокислотных остатков SEQ ID NO: 117.
14. Конъюгат по п. 13, причем фрагмент представляет собой Lys10-Arg11-Asn12-Asn13-Phe14-Lys15 (SEQ ID NO: 123).
15. Конъюгат по п. 12, причем фрагмент содержит 6-18 смежных аминокислотных остатков последовательности SEQ ID NO: 117.
16. Конъюгат по п. 1, причем полипептид содержит аминокислотные остатки в D-форме, L-форме или обеих формах.
17. Конъюгат по п. 1, причем конъюгат содержит 1-10 полипептидов и один фрагмент антитела.
18. Конъюгат по п. 17, причем конъюгат содержит 2-6 полипептидов и один фрагмент антитела.
19. Конъюгат по п. 1, причем каждый полипептид связан через линкер с фрагментом антитела и ни один полипептид не связан через линкер или иным образом с другим полипептидом.
20. Конъюгат по п. 1, причем фрагмент антитела представляет собой тетрамерное антитело или его биологически активный вариант.
21. Конъюгат по п. 1, причем фрагмент антитела представляет собой одноцепочечное антитело (scFv), Fab-фрагмент или F(ab')2-фрагмент.
22. Конъюгат по п. 1, причем фрагмент антитела содержит человеческое, химерное или гуманизированное антитело или его биологически активный вариант.
23. Конъюгат по п. 1, причем фрагмент антитела представляет собой моноклональное антитело или поликлональное антитело.
24. Конъюгат по п. 20 или 21, причем тетрамерное антитело, его биологически активный вариант, scFv, Fab-фрагмент или F(ab')2-фрагмент специфически связывается с рецептором ростового фактора или рецептором интерлейкина.
25. Конъюгат по п. 24, причем рецептор ростового фактора является представителем семейства рецепторов эпидермального фактора роста (EGFR).
26. Конъюгат по п. 25, причем фрагмент антитела представляет собой трастузумаб, цетуксимаб или панитумумаб, или его биологически активный вариант.
27. Конъюгат по п. 24, причем рецептор ростового фактора представляет собой рецептор фактора роста эндотелия сосудов (VEGFR).
28. Конъюгат по п. 27, причем фрагмент антитела представляет собой бевацизумаб или ранибизумаб, или его биологически активный вариант.
29. Конъюгат по п. 24, причем рецептор интерлейкина представляет собой рецептор ИЛ-2.
30. Конъюгат по п. 29, причем фрагмент антитела представляет собой базиликсимаб или даклизумаб, или его биологически активный вариант.
31. Конъюгат по п. 24, причем рецептор интерлейкина представляет собой рецептор ИЛ-6.
32. Конъюгат по п. 31, причем фрагмент антитела представляет собой тоцилизумаб или его биологически активный вариант.
33. Конъюгат по п. 24, причем рецептор ростового фактора представляет собой рецептор TNF-α.
34. Конъюгат по п. 33, причем фрагмент антитела представляет собой адалимумаб, цертолизумаб пегол, голимумаб или инфликсимаб.
35. Конъюгат по п. 1, причем фрагмент антитела представляет собой химиотерапевтическое средство.
36. Конъюгат по п. 1, причем фрагмент антитела представляет собой противовоспалительное средство.
37. Фармацевтическая композиция, содержащая конъюгат по п. 1 и фармацевтически приемлемый носитель.
38. Фармацевтическая композиция по п. 37, причем композиция приготовлена для внутривенного введения.
39. Способ лечения пациента, который страдает от злокачественной опухоли центральной нервной системы, причем способ включает:
идентификацию пациента, нуждающегося в лечении; и
введение пациенту терапевтически эффективного количества фармацевтической композиции по п. 37.
40. Способ по п. 39, причем пациентом является человек.
41. Способ по п. 39, причем злокачественная опухоль представляет собой злокачественную опухоль головного мозга или метастаз в головной мозг.
42. Способ конъюгации фрагмента антитела с полипептидом, содержащим аминокислотную последовательность Thr1-Phe2-Phe3-Tyr4-Gly5-Gly6-Cys7/Ser7-Arg8-Gly9-Lys10-Arg11-Asn12-Asn13-Phe14-Lys15-Thr16-Glu17-Glu18-Tyr19 (SEQ ID NO: 117), или его биологически активным аналогом или фрагментом, причем способ включает:
(а) получение связанного линкером фрагмента антитела;
(б) получение полипептида в модифицированной форме; и
(в) экспонирование связанного линкером фрагмента антитела для взаимодействия с полипептидом в модифицированной форме в условиях, которые обеспечивают получение белкового конъюгата, содержащего фрагмент антитела, линкер и полипептид.
43. Способ по п. 42, причем получение связанного линкером фрагмента антитела включает:
(а) получение фрагмента антитела; и
(б) экспонирование фрагмента антитела для взаимодействия с линкером в условиях, которые обеспечивают получение связанного линкером фрагмента антитела.
44. Способ по п. 42, причем получение полипептида в модифицированной форме включает:
(а) получение полипептида; и
(б) экспонирование полипептида для взаимодействия с реакционноспособной химической группой, реагирующей с линкером в условиях, которые обеспечивают получение модифицированного полипептида.
45. Способ по п. 42 или 43, причем линкер содержит циклический октин.
46. Способ по п. 44, причем химическое вещество, реагирующее с линкером, содержит азидную группу.
47. Способ по п. 43, причем линкер представляет собой монофторзамещенный циклооктин (MFCO), бицикло[6.1.0]нонин (BCN), N-сукцинимидил-S-ацетилтиотиоацетат (SATA), N-сукцинимидил-S-ацетилтиопропионат (SATP), малеимидо- или дибензоциклооктин (DBCO).
48. Способ по п. 42, причем экспонирование связанного линкером фрагмента антитела для взаимодействия с полипептидом в модифицированной форме происходит в защищенной от света среде в течение приблизительно 8-24 часов при комнатной температуре.
49. Способ по п. 42, дополнительно включающий стадию (г), на которой: конъюгат подвергают очистке с помощью колоночной хроматографии.
50. Способ по п. 49, причем очистка конъюгата с помощью колоночной хроматографии включает пропускание конъюгата через колонку с белком А и элюирование конъюгата с помощью цитратного буфера с рН приблизительно 3,0.
