Способ непрерывного элюирования продукта из хроматографических колонок - RU2017143436A

1. Способ непрерывного элюирования биофармацевтического, биологического, макромолекулярного продукта более чем из одной хроматографической колонки, который включает следующие стадии:

(a) подачу потока продукта через впускное отверстие,

(b) одновременное заполнение потоком продукта n фронтальных хроматографических колонок в зоне заполнения с временем заполнения t_B, причем выходный поток n фронтальных хроматографических колонок в зоне регенерации одновременно распределяется по меньшей мере на n-1 регенерационных хроматографических колонок, причем n находится между 1 и 5, причем n фронтальных хроматографических колонок к данному моменту времени характеризуются разным временем заполнения t_B, составляющим от 0 до L₁, от L₁ до L₂ и от L_n-1 до L_n, и причем каждая фронтальная хроматографическая колонка характеризуется общим временем заполнения L_n,

отличающийся тем, что периодически после постоянного времени переключения (t_S) L_n-L_n-1 фронтальные хроматографические колонки n выходят из зоны заполнения, и одна регенерационная хроматографическая колонка из зоны регенерации входит в зону заполнения,

(c) промывку заполненной продуктом на стадии (b) колонки по меньшей мере одним промывным буфером,

(d) элюирование продукта из промытой на стадии (с) колонки в течение времени элюирования t_E, составляющего ≥80% от времени переключения t_S,

и что по меньшей мере одна хроматографическая колонка более 80% от общего технологического времени t_G непрерывно находится на стадии элюирования (d).

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что после стадии элюирования (d) элюированный продукт на стадии гомогенизации (е) перемешивают предпочтительно посредством контура рециркуляции с рециркуляционным резервуаром, посредством контура рециркуляции без рециркуляционного резервуара или посредством одноразового статического смесителя.

3. Способ по п. 1 или 2, отличающийся тем, что он дополнительно включает стадию регенерации (f) элюированной на стадии (d) колонки.

4. Способ п. 1 или 2, отличающийся тем, что фронтальные хроматографические колонки и регенерационные хроматографические колонки предпочтительно связывают продукт согласно принципу сродства, посредством ионных взаимодействий, металлохелатного связывания, гидрофобных взаимосвязей или ван-дер-ваальсовых сил, причем при связывании согласно принципу сродства фронтальные хроматографические колонки и регенерационные хроматографические колонки включают лиганд, предпочтительно выбранный из группы, состоящей из белка А, белка G, белка L, IgM, IgG и рекомбинатного белка, отличающегося от белка А, белка G, белка L, IgM и IgG и обладающего сродством к продукту.

5. Способ п. 1 или 2, отличающийся тем, что биофармацевтический, биологический макромолекулярный продукт является белком или пептидом, или включает ДНК или РНК, причем белок или пептид выбран из группы, состоящей из моноклональных антител, поликлональных антител, рекомбинатных белков и белковых вакцин, и причем ДНК или РНК является частью активного вещества или вакцины ДНК и/или РНК.

6. Способ п. 1 или 2, отличающийся тем, что показатель рН элюированного на стадии (d) продукта предпочтительно перед стадией гомогенизации (е) или на стадии гомогенизации (е) дополнительно устанавливают средством для установления рН.

7. Способ п. 1 или 2, отличающийся тем, что гомогенизированный на стадии (е) продукт пропускают через определенную зону пребывания, предпочтительно через спиральный инвертор потока.

8. Способ по п. 1 или 2, отличающийся тем, что общее технологическое время t_G осуществления способа составляет по меньшей мере 4 часа, предпочтительно по меньшей мере 8 часов, предпочтительно по меньшей мере 12 часов, предпочтительно по меньшей мере 24 часа, более предпочтительно по меньшей мере 48 часов, более предпочтительно по меньшей мере 7 дней, более предпочтительно по меньшей мере 4 недели и особенно предпочтительно по меньшей мере 8 недель.

9. Способ по п. 1 или 2, отличающийся тем, что стадии (a)-(d), предпочтительно стадии (a)-(f), реализуют с сокращением количества микроорганизмов, причем количество микроорганизмов сокращают пригодным методом предпочтительно для всех используемых элементов, контактирующих с продуктом, в частности для фронтальных хроматографических колонок и регенерационных хроматографических колонок.

10. Способ по п. 9, отличающийся тем, что пригодные методы сокращения количества микроорганизмов выбраны из группы, состоящей из гамма-облучения, бета-облучения, автоклавирования, обработки этиленоксидом, обработки озоном (О₃), обработки пероксидом водорода (Н₂О₂) и стерилизации паром на месте (SIP).

11. Способ по п. 1 или 2, отличающийся тем, что количество микроорганизмов сокращают во всех используемых в способе жидкостях, газах и твердых веществах, причем сокращение количества микроорганизмов предпочтительно осуществляют посредством фильтрования через фильтр с размерами пор предпочтительно ≤0,45 мкм, и причем предпочтительно во время осуществления способа технологическую стерилизацию не выполняют.

12. Способ по п. 1 или 2, отличающийся тем, что перед стадией (b) выполняют дегазацию всех текучих сред, направляемых на хроматографическую колонку, причем дегазацию предпочтительно осуществляют посредством по меньшей мере одного устройства для улавливания газовых пузырьков и/или по меньшей мере одной гидрофобной микрофильтрационной мембраны под вакуумом и/или обработки ультразвуком и/или барботирования гелия.