Способ пептидного синтеза и устройство для осуществления способа твердофазного пептидного синтеза - RU2017113219A

1. Применение защитного агента,

где защитный агент включает

I. структуру основной цепи,

II. по меньшей мере одну функциональную группу, повышающую водорастворимость, и

III. по меньшей мере одну реакционноспособную группу,

где структура основной цепи включает фрагмент, выбранный из группы, состоящей из 9-метилфлуорена, трет-бутана и/или моно-, ди- или трифенилметана,

где функциональную группу, повышающую водорастворимость, выбирают из группы, состоящей из SO₃^-, РО₃^2-, N(CH₃)₂, N(CH₃)₃⁺, CN, OSO₃^- сложного эфира, OPO₃^2- сложного эфира и их комбинаций, и

где функциональная группа, повышающая водорастворимость, и реакционноспособная группа присоединены к структуре основной цепи по меньшей мере одной ковалентной связью,

для защиты функциональной группы в химической реакции.

2. Применение по п. 1, где агент используют для образования защитных групп на функциональных группах пептида и/или аминокислоты в ходе пептидного синтеза в водной среде.

3. Применение по п. 1 или 2, где защищаемую функциональную группу выбирают из аминной, спиртовой, тиольной и карбоксильной групп.

4. Применение по п. 1 или 2, где реакционноспособную группу выбирают из группы, состоящей из оксикарбонилгалогенидной, сложного эфира оксикарбонила Oxyma (этил(гидроксиимино)цианоацетат), оксикарбонил-О-сукцинимидной, оксикарбонилангидридной, галогенидной, гидроксильной и тиольной групп.

5. Применение по п. 1 или 2, где функциональная группа, повышающая растворимость в воде, представляет собой SO₃^-.

6. Применение по п. 1, где защищаемая функциональная группа находится на аминокислоте, пептиде или белке, и химическая реакция представляет собой пептидный или белковый синтез в растворителе, выбранном из воды, спирта или смеси воды и спирта.

7. Защитный агент, подходящий для образования защитных групп на функциональных группах пептида и/или аминокислоты в ходе пептидного синтеза в водной среде,

где защитный агент включает

I. структуру основной цепи,

II. по меньшей мере одну функциональную группу, повышающую водорастворимость, и

III. по меньшей мере одну реакционноспособную группу,

где структура основной цепи включает фрагмент, выбранный из группы, состоящей из 9-метилфлуорена, трет-бутана и/или моно-, ди- или трифенилметана,

где функциональную группу, повышающую водорастворимость, выбирают из группы, состоящей из SO₃^-, РО₃^2-, N(CH₃)₂, N(CH₃)₃⁺, CN, OSO₃^- сложного эфира, OPO₃^2- сложного эфира и их комбинаций, и

где функциональная группа, повышающая водорастворимость, и реакционноспособная группа присоединены к структуре основной цепи по меньшей мере одной ковалентной связью.

8. Защитный агент по п. 7, включающий по меньшей мере две функциональные группы, повышающие водорастворимость.

9. Способ пептидного синтеза, включающий стадии взаимодействия первой аминокислоты или первого пептида со второй аминокислотой или вторым пептидом, защищенными по α-аминогруппе, в растворителе, выбранном из группы, состоящей из воды, спирта и смеси воды и спирта, и удаления защитной группы α-аминогруппы с помощью раствора для снятия защиты, отличающийся тем, что защитную группу α-аминогруппы образуют путем взаимодействия защитного агента по п. 7 или 8 с функциональной группой аминокислоты или пептида.

10. Способ по п. 9, отличающийся тем, что С-конец указанной первой аминокислоты или первого пептида прикреплен к нерастворимой подложке, и тем, что он дополнительно включает стадию отщепления полученного пептида или белка от полимерной подложки с помощью отщепляющей композиции.

11. Способ по п. 9 или 10, отличающийся тем, что любую реакционноспособную функциональную группу боковой цепи указанной первой аминокислоты или первого пептида и указанной второй аминокислоты или второго пептида защищают с помощью защитной группы боковой цепи, включающей по меньшей мере одну функциональную группу, повышающую водорастворимость, и тем, что он дополнительно включает стадию удаления защитных групп боковой цепи.

12. Способ по п. 9 или 10, где защитная группа α-аминогруппы включает флуоресцентную структуру, дополнительно включающий стадию наблюдения за степенью образования пептидных связей и/или наблюдения за степенью удаления защитной группы α-аминогруппы путем измерения флуоресценции, генерируемой защитными группами α-аминогрупп, присоединенными к первой аминокислоте или первому пептиду.

13. Устройство для осуществления способа твердофазного пептидного или белкового синтеза по п. 9 или 12, содержащее реакционную емкость для приема нерастворимого материала подложки и флуориметр, предназначенный для наблюдения за изменениями в интенсивности флуоресценции, генерируемой защитной группой, присоединенной к нерастворимому материалу подложки.

14. Модифицированная аминокислота, пептид, белок или их соль, включающая защитную группу, образованную путем взаимодействия одного из защитных агентов по п. 7 или 8 с функциональной группой аминокислоты, пептида или белка, где функциональную группу выбирают из α-аминогруппы, аминогруппы боковой цепи, тиольной, карбоксильной и гидроксильной групп.

15. Блокирующий агент, включающий

I. структуру основной цепи,

II. по меньшей мере одну функциональную группу, повышающую водорастворимость, и

III. по меньшей мере одну реакционноспособную группу,

где структура основной цепи включает фрагмент, выбранный из группы, состоящей из короткоцепочечного алкила, предпочтительно С₁-С₈ алкила, циклических алкильных цепей или ароматических соединений, более предпочтительно С₁-С₄ алкила или бензила,

где функциональную группу, повышающую водорастворимость, выбирают из группы, состоящей из SO₃^-, РО₃^2-, N(СН₃)₂, N(СН₃)₃⁺, CN, OSO₃^- сложного эфира, ОРО₃^2- сложного эфира и их комбинаций, и

где функциональная группа, повышающая водорастворимость, и реакционноспособная группа присоединены к структуре основной цепи по меньшей мере одной ковалентной связью.

16. Применение блокирующего агента по п. 15 для блокирования свободных аминов в способе пептидного синтеза.

17. Способ, включающий стадии взаимодействия первой аминокислоты или первого пептида со второй аминокислотой или вторым пептидом, защищенными по α-аминогруппе, в растворителе, и удаления защитной группы α-аминогруппы с помощью раствора для снятия защиты, отличающийся тем, что блокирующий агент по п. 15 добавляют к реакционной смеси для блокирования свободных аминов, и где после завершения взаимодействия реакционную смесь пропускают через аффинную колонку.