Применение пептидилглицин-α-амидирующей монооксидазы (рам) для с-концевого амидирования - RU2016129516A

1. Способ амидирования полипептида по С-концевому аминокислотному остатку в условиях in vivo, отличающийся тем, что как полипептид, так и пептидилглицин-α-амидирующую монооксидазу (РАМ) человека коэкспрессируют в клетках млекопитающих в обоих случаях с использованием технологии рекомбинантных ДНК.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что пептидилглицин-α-амидирующей монооксидазой (РАМ) человека является РАМ3 (SEQ ID NO: 02).

3. Способ по п. 1 или п. 2, отличающийся тем, что клетка млекопитающих содержит первую нуклеиновую кислоту, кодирующую полипептид, и вторую нуклеиновую кислоту, кодирующую РАМ.

4. Способ по п. 3, отличающийся тем, что соотношение первой нуклеиновой кислоты и второй нуклеиновой кислоты составляет от приблизительно 90:10 до приблизительно 40:60.

5. Способ по п. 3, отличающийся тем, что соотношение первой нуклеиновой кислоты и второй нуклеиновой кислоты составляет от приблизительно 70:30 до приблизительно 60:40.

6. Способ по п. 1 или 2, отличающийся тем, что полипептид слит с С-концевым аминокислотным остатком тяжелой цепи антитела или Fc-области антитела.

7. Способ по п. 1 или 2, отличающийся тем, что полипептидом является нейрокинин, аллатостатин, Lem-KI, тиреотропин-высвобождающий гормон (TRH), гормон, концентрирующий красный пигмент, кальцитонин, кортикотропин-высвобождающий фактор (CRF), лютеинизирующий релизинг-гормон (LHRH), лейкопирокинин, гастрин-1, пигмент-диспергирующий гормон, дерморфин, окситоцин, вещество Р, нейропептид Y (NPY), FMRFамид, бомбезин, амилин, [Arg8]вазопрессин, BId-GrTH, кальцитонин, Cam-HrTH-II, гастрин-высвобождающий пептид, нейромедин В, панкреастатин, конотоксин M1, секретин,

фактор, стимулирующий выделение гормона роста (GHRF), мелиттин, саркотоксин 1A, вазоактивный интестинальный пептид (VIP), α-меланоцит-стимулирующий гормон (α-MSH) или меланотропин-ингибирующий фактор 1 (MIF-1).

8. Способ по п. 1 или 2, отличающийся тем, что полипептидом является пептид YY (PYY 3-36, SEQ ID NO: 05).

9. Способ получения рекомбинантного полипептида, амидированного по С-концевому аминокислотному остатку, отличающийся тем, что как полипептид, так и пептидилглицин-α-амидирующую монооксидазу (РАМ) человека коэкспрессируют в клетках млекопитающих в обоих случаях с использованием технологии рекомбинантных ДНК.

10. Способ по п. 9, отличающийся тем, что пептидилглицин-α-амидирующей монооксидазой (РАМ) человека является РАМ3 (SEQ ID NO: 02).

11. Способ по п. 9 или 10, отличающийся тем, что клетка млекопитающих содержит первую нуклеиновую кислоту, кодирующую полипептид, и вторую нуклеиновую кислоту, кодирующую РАМ.

12. Способ по п. 11, отличающийся тем, что соотношение первой нуклеиновой кислоты и второй нуклеиновой кислоты составляет от приблизительно 90:10 до приблизительно 40:60.

13. Способ по п. 11, отличающийся тем, что соотношение первой нуклеиновой кислоты и второй нуклеиновой кислоты составляет от приблизительно 70:30 до приблизительно 60:40.

14. Способ по п. 9 или 10, отличающийся тем, что полипептид слит с С-концевым аминокислотным остатком тяжелой цепи антитела или Fc-области антитела.

15. Способ по п. 9 или 10, отличающийся тем, что полипептидом является нейрокинин, аллатостатин, Lem-KI, тиреотропин-высвобождающий гормон (TRH), гормон, концентрирующий красный пигмент, кальцитонин, кортикотропин-высвобождающий

фактор (CRF), лютеинизирующий релизинг-гормон (LHRH), лейкопирокинин, гастрин-1, пигмент-диспергирующий гормон, дерморфин, окситоцин, вещество Р, нейропептид Y (NPY), FMRFамид, бомбезин, амилин, [Arg8]вазопрессин, BId-GrTH, кальцитонин, Cam-HrTH-II, гастрин-высвобождающий пептид, нейромедин В, панкреастатин, конотоксин M1, секретин, фактор, стимулирующий выделение гормона роста (GHRF), мелиттин, саркотоксин 1A, вазоактивный интестинальный пептид (VIP), α-меланоцит-стимулирующий гормон (α-MSH) или меланотропин-ингибирующий фактор 1 (MIF-1).

16. Способ по п. 9 или п. 10, отличающийся тем, что полипептидом является пептид YY (PYY 3-36, SEQ ID NO: 05).

17. Применение пептидилглицин-α-амидирующей монооксидазы (РАМ) человека для получения рекомбинантного полипептида, амидированного по С-концевому аминокислотному остатку, при этом как полипептид, так и пептидилглицин-α-амидирующую монооксидазу человека коэкспрессируют в клетках млекопитающих в обоих случаях с использованием технологии рекомбинантных ДНК.