Модифицированные суперспиральные белки с улучшенными свойствами - RU2015126105A
Код документа: RU2015126105A
Формула
1. Модифицированный белок, содержащий (i) белок, имеющий суперспиральный домен и (ii), по меньшей мере, один положительно заряженный пептид, связанный с суперспиральным доменом, причем этот положительно заряженный пептид имеет последовательность такую, как показано в SEQ ID NO: 1: ZXBBBBZ, где:
- Z представляет собой любую аминокислоту или отсутствует;
- X представляет собой любую аминокислоту;
- В представляет собой аргинин (R) или лизин (K).
2. Модифицированный белок по п. 1, в котором положительно заряженный пептид имеет последовательность, выбранную из группы, состоящую из пептидных последовательностей, представленных в SEQ ID NO: 2 (SPRRRRS), SEQ ID NO: 3 (GRRRR), SEQ ID NO: 4 (SPKKKK), SEQ ID NO: 5 (GKKKK), и SEQ ID NO: 36 (GRRRRRS).
3. Модифицированный белок по п. 1, в котором положительно заряженный пептид является результатом слияния двух положительно заряженных пептидов SEQ ID NO: 1.
4. Модифицированный белок по п. 3, в котором пептид, слитый из двух положительно заряженных пептидов SEQ ID NO: 1, имеет последовательность, выбранную из группы, состоящую из пептидных последовательностей SEQ ID NO: 37 (SPRRRRRRRRRS) и SEQ ID NO: 40 (GRRRRRRRRRRS).
5. Модифицированный белок по любому из пп. 1-4, где белок, имеющий суперспиральный домен, выполняет функцию белка-носителя.
6. Модифицированный белок по п. 5, в котором суперспиральный белок образует гептамеры, в частности, выбранные из гептамеров IMX313, IMX313T, IMX313P и IMX108.
7. Модифицированный белок по п. 5, в котором суперспиральный белок образует тримеры, в частности гемагглютинин вируса гриппа.
8. Модифицированный белок по п. 5, в котором белок-носитель имеет последовательность такую, как показано в SEQ ID NO: 42 (IMX313P) или в SEQ ID NO: 7 (IMX313T).
9. Модифицированный белок по п. 1, в котором белок, имеющий суперспиральный домен, является антигеном.
10. Модифицированный белок по п. 5, в котором белок, имеющий суперспиральный домен, является антигеном.
11. Модифицированный белок по п. 9, в котором антиген выбран из группы, состоящей из: гемагглютинина вируса гриппа НА2, гликопротеина F респираторно-синцитиального вируса, гликопротеинов gp41 вируса иммунодефицита человека ВИЧ-1, гликопротеинов gp41 вируса иммунодефицита человека ВИЧ-2, гликопротеина gp1,2 эболавируса Ebolavirus, NadA из Neisseria meningitidis; YadA из Yersinia enterocolitica; UspA2 из Moraxella catarrhalis; BadA из Bartonella henselae и HadA из Haemophilus influenzae.
12. Слитый белок, включающий модифицированный белок-носитель по пп. 5, 6 или 8 и один или более антигенов.
13. Слитый белок по п. 12, в котором антиген выбран из группы, состоящей из протеина A Staphylococcus aureus, микобактериального антигена 85А и нуклеопротеина вируса гриппа.
14. Слитый белок по п. 12, который содержит один или более стафилококковых антигенов, слитых с модифицированным белком IMX313, как определено в одном из пп. 1-6, и предпочтительно выбранных из группы, состоящей из SpA, Hla, ClfB и сортазы А; в частности, для применения этого слитого белка в лечении и профилактике стафилококковых инфекций.
15. Слитый белок по п. 12, который содержит один или несколько антигенов вируса гриппа, таких как нуклеопротеин вируса гриппа, слитый с модифицированными белками IMX313, определенными в пп. 1-6, в частности, для применения его в лечении и профилактике гриппа.
16. Слитый белок по п.12, который содержит один или более аутоантигенов, таких как GnRH, конденсированный с модифицированным белком IMX313, как определено в пп. 1-6.
17. Слитый белок по п. 12 для его применения в иммунизации домашней птицы, содержащий антиген, слитый с модифицированным белком IMX108 или модифицированным доменом белка C4bp млекопитающих, как определено в одном из пп. 1-6.
18. Иммуногенная композиция, содержащая модифицированный белок по любому из пп. 1-11, или слитый белок по любому из пп. 12-17, и лиганды внутриклеточных толл-подобных рецепторов ТПР на основе нуклеиновых кислот.
19. Способ повышения способности к связыванию с подложкой белка, содержащего суперспиральный домен, при этом способ включает связывание, по меньшей мере, одного положительно заряженного пептида с суперспиральным доменом белка, в котором пептид имеет последовательность, как показано в SEQ ID NO: 1: ZXBBBBZ, где:
- Z представляет собой любую аминокислоту или отсутствует;
- X представляет собой любую аминокислоту;
- В представляет собой аргинин (R) или лизин (K).
20. Способ повышения иммуногенности антигена или белка-носителя, содержащего суперспиральный домен, причем этот способ включает связывание, по меньшей мере, одного положительно заряженного пептида с суперспиральным доменом белка, в котором пептид имеет последовательность, как показано в SEQ ID NO: 1: ZXBBBBZ, в где:
- Z представляет собой любую аминокислоту или отсутствует;
- X представляет собой любую аминокислоту;
- В представляет собой аргинин (R) или лизин (K).
21. Способ повышения иммуногенности антигена, в частности иммуногенности Т-хелперов Th1, включающий:
- получение модифицированного белка-носителя в соответствии со способом по п. 20; и
- связывание этого антигена с модифицированным белком-носителем и отрицательно заряженными полимерами, такими как лиганды внутриклеточных ТПР на основе нуклеиновых кислот или гепарин.
22. Модифицированный белок по любому из пп. 8-11, или слитый белок по любому из пп. 12-17 или иммуногенная композиция по п. 18 для применения в качестве вакцины.
23. Молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующие модифицированные белки по любому из пп. 1-11 или кодирующие слитый белок по любому из пп. 12-17.
24. Вакцинная композиция, содержащая, по меньшей мере, одну молекулу нуклеиновой кислоты по п. 23.
25. Способ очистки модифицированного белка по любому из пп. 1-11, включающий следующие последовательные стадии:
- нанесение модифицированного белка на хроматографическую колонку с гепарин-сефарозой, и
- вымывание этого белка элюентом с концентрацией соли, превосходящей 500 мМ.
