Композиции и способы для экспрессии нескольких биологически активных полипептидов с одного вектора для лечения заболеваний сердца и других патологий - RU2018117674A

1. Полинуклеотид, содержащий последовательность, кодирующую полипептид кальций-связывающего белка S100 (S100), полипептид фактора стромальной клетки (SDF), и полипептид фактора роста эндотелия сосудов (VEGF), или их фрагменты и варианты.

2. Полинуклеотид по п. 1, отличающийся тем, что указанный полипептид S100 представляет собой полипептид S100A1, или его фрагмент или вариант.

3. Полинуклеотид по п. 1, отличающийся тем, что указанный полипептид SDF выбран из группы, состоящей из SDF1, SDF-1α, SDF-1β, их фрагментов и вариантов.

4. Полинуклеотид по п. 1, отличающийся тем, что указанный полипептид VEGF выбран из группы, состоящей из VEGF121, VEGF121b, VEGF145, VEGF165, VEGF165b, VEGF189, VEGF191, VEGF206; или их фрагментов и вариантов.

5. Полинуклеотид по любому из пп. 1-4, отличающийся тем, что указанный полипептид S100 содержит последовательность SEQ ID NO: 104, указанный полипептид SDF содержит последовательность SEQ ID NO: 102, указанный полипептид VEGF содержит последовательность SEQ ID NO: 106.

6. Полинуклеотид по любому из пп. 1-5, отличающийся тем, что по меньшей мере два из указанных полипептида S100, полипептида SDF и полипептида VEGF соединены одним или более линкером.

7. Полинуклеотид по п. 6, отличающийся тем, что указанный по меньшей мере один линкер выбран из группы, состоящей из жесткий линкер, гибкий линкер, расщепляемый линкер, линкер, способный к саморасщеплению, пептидный линкер, линкер, расщепляемый путем рибосомного перепрыгивания или любую их комбинацию.

8. Полинуклеотид по любому из пп. 6-7, отличающийся тем, что указанный один или более линкер выбран из группы, состоящей из линкера RAKR, линкера fp2a, линкера р2а, линкера GSG-p2a, и линкера fmdv, или любой их комбинации.

9. Полинуклеотид по любому из пп. 6-8, отличающийся тем, что указанный по меньшей мере один линкер содержит последовательность SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 34, SEQ ID NO: 36, SEQ ID NO: 38, или SEQ ID NO: 40.

10. Полинуклеотид по любому из пп. 6-8, отличающийся тем, что указанный по меньшей мере один линкер содержит последовательность, выбранную из группы, состоящей из APVKQ (SEQ ID NO: 42), GPVKQ (SEQ ID NO: 43), VPVKQ (SEQ ID NO: 44), IPVKQ (SEQ ID NO: 45), MPVKQ (SEQ ID NO: 46), APIKQ (SEQ ID NO: 47), GPIKQ (SEQ ID NO: 48), VPIKQ (SEQ ID NO: 49), IPIKQ (SEQ ID NO: 50), MPIKQ (SEQ ID NO: 51), APAKQ (SEQ ID NO: 52), GPAKQ (SEQ ID NO: 53), VPAKQ (SEQ ID NO: 54), IPAKQ (SEQ ID NO: 55), MPAKQ (SEQ ID NO: 56), APVRQ (SEQ ID NO: 57), GPVRQ (SEQ ID NO: 58), VPVRQ (SEQ ID NO: 59), IPVRQ (SEQ ID NO: 60), MPVRQ (SEQ ID NO: 61), APIRQ (SEQ ID NO: 62), GPIRQ (SEQ ID NO: 63), VPIRQ (SEQ ID NO: 64), IPIRQ (SEQ ID NO: 65), MPIRQ (SEQ ID NO: 66), APARQ (SEQ ID NO: 67), GPARQ (SEQ ID NO: 68), VPARQ (SEQ ID NO: 69), IPARQ (SEQ ID NO: 70), MPARQ (SEQ ID NO: 71), APVKN (SEQ ID NO: 72), GPVKN (SEQ ID NO: 73), VPVKN (SEQ ID NO: 74), IPVKN (SEQ ID NO: 75), MPVKN (SEQ ID NO: 76), APIKN (SEQ ID NO: 77), GPIKN (SEQ ID NO: 78), VPIKN (SEQ ID NO: 79), IPIKN (SEQ ID NO: 80), MPIKN (SEQ ID NO: 81), APAKN (SEQ ID NO: 82), GPAKN (SEQ ID NO: 83), VPAKN (SEQ ID NO: 84), IPAKN (SEQ ID NO: 85), IVIPAKN (SEQ ID NO: 86), APVRN (SEQ ID NO: 87), GPVRN (SEQ ID NO: 88), VPVRN (SEQ ID NO: 89), IPVRN (SEQ ID NO: 90), IVIPVRN (SEQ ID NO: 91), APIRN (SEQ ID NO: 92), GPIRN (SEQ ID NO: 93), VPIRN (SEQ ID NO: 94), IPIRN (SEQ ID NO: 95), MPIRN (SEQ ID NO: 96), APARN (SEQ ID NO: 97), GPARN (SEQ ID NO: 98), VPARN (SEQ ID NO: 99), IPARN (SEQ ID NO: 100) или MPARN (SEQ ID NO: 101).

11. Полинуклеотид, кодирующий первую полипептидную конструкцию, содержащую полипептид кальций-связывающего белка S100 (S100), второй полипептид, при этом указанный второй полипептид представляет собой по меньшей мере одно из цитокина, хемокина, ангиогенного полипептида и любого их функционального варианта, при этом указанный первый полипептид и указанный второй полипептид соединены расщепляемым линкером.

12. Полинуклеотид по п. 11, дополнительно содержащий третий полипептид, при этом указанный третий полипептид представляет собой по меньшей мере одно из цитокина, хемокина, ангиогенного полипептида и любого их функционального варианта, при этом указанный третий полипептид отличается от указанного второго полипептида, и указанный третий полипептид соединен с указанным вторым полипептидом расщепляемым линкером.

13. Полинуклеотид по любому из пп. 11-12, отличающийся тем, что указанный по меньшей мере один расщепляемый линкер содержит фурин и 2А-полипептид.

14. Полинуклеотид по п. 13, отличающийся тем, что указанный по меньшей мере один расщепляемый линкер содержит фурин и Р2А, где указанный 2А-пептид содержит последовательность (Р2А), которая опосредует трансляцию по механизму «рибосомного перепрыгивания».

15. Полинуклеотид по п. 11, отличающийся тем, что указанный расщепляемый линкер содержит последовательность SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 34, SEQ ID NO: 36, SEQ ID NO: 38, или SEQ ID NO: 40, или SEQ ID NO: 42.

16. Полипептид, кодируемый полинуклеотидом по любому из пп. 1-15.

17. Клетка, содержащая полинуклеотид по любому из пп. 1-15, или полипептид, кодируемый указанным полинуклеотидом.

18. Вектор экспрессии, содержащий полинуклеотид по любому из пп. 1-15, при этом указанный полинуклеотид функционально связан с промотором.

19. Вектор экспрессии по п. 18, отличающийся тем, что указанный промотор представляет собой конститутивный промотор, тканеспецифичный промотор или индуцируемый промотор.

20. Вектор экспрессии по п. 19, отличающийся тем, что указанный индуцируемый промотор представляет собой индуцируемый низкомолекулярным лигандом переключатель гена на основе двухполипептидного рецептора экдизона.

21. Вектор экспрессии по любому из пп. 18-20, отличающийся тем, что указанный вектор экспрессии представляет собой вектор для экспрессии в сердце.

22. Фармацевтическая композиция, содержащая полинуклеотид по любому из пп. 1-15, полипептид, кодируемый указанным полинуклеотидом по любому из пп. 1-15 или вектор экспрессии по любому из пп. 18-21 и фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество.

23. Способ, включающий: приведение в контакт по меньшей мере одной клетки сердца с полинуклеотидом по любому из пп. 1-15, полипептидом, кодируемым указанным полинуклеотидом по любому из пп. 1-15 или вектором экспрессии по любому из пп. 18-21.

24. Способ по п. 23, в котором указанная клетка представляет собой клетку миокарда.

25. Способ лечения патологии сердца у субъекта, включающий: обеспечение указанного субъекта терапевтически эффективным количеством фармацевтической композиции по п. 22.

26. Способ по п. 25, в котором указанная патология сердца представляет собой кардиомиопатию, васкулогенез, застойную сердечную недостаточность, аритмию, заболевание перикарда, заболевание аорты, синдром марфана или заболевание коронарной артерии.

27. Способ по любому из пп. 23-26, в котором указанный субъект представляет собой человека.

28. Способ лечения патологии сердца у субъекта, включающий:

введение указанного субъекту терапевтически эффективного количества композиции, содержащей микропузырек, причем указанный комплекс, содержащий микропузырек, содержит липид, газ и плазмиду, содержащую полинуклеотид по любому из пп. 1-15;

осуществления воздействия на указанный комплекс, содержащий микропузырек, энергии ультразвука, достаточной для того, чтобы обеспечить нацеленное разрушение микропузырька (UTMD).

29. Способ по п. 28, в котором указанный липид образует оболочку, окружающую указанный газ и плазмиду.

Заявитель отмечает, что измененная формула изобретения полностью основана на первоначальных материалах заявки, в частности в соответствии с таблицей, представленной ниже.