Способы внутриклеточного превращения одноцепочечных белков в их двухцепочечную форму - RU2012136227A

Реферат

1. Внутриклеточный способ превращения одноцепочечного клостридиального токсина, содержащего двуцепочечный петлевой участок, в его двуцепочечную форму, включающий следующие этапы:а) выращивание клетки, содержащей двойной экспрессионный конструкт при 37°С в течение около 3,5 ч, двойной экспрессионный конструкт содержит;i) открытую рамку считывания, кодирующую одноцепочечный клостридиальный токсин, одноцепочечный клостридиальный токсин содержит энзимный домен, транслокационный домен, домен связывания и двуцепочечный петлевой участок, содержащий сайт расщепления TEV протеазой; иii) открытую рамку считывания, кодирующую TEV протеазу;б) выращивание клетки при 22°С в течение от около 16 до около 18 ч,при этом рост на этапе (б) индуцирует экспрессию одноцепочечного клостридиального токсина и TEV протеазы из двойного экспрессионного конструкта; ипроизводимая TEV протеаза расщепляет одноцепочечный клостридиальный токсин в сайте расщепления экзогенной протеазой, находящемся внутри двуцепочечного петлевого участка, тем самым превращая одноцепочечный клостридиальный токсин в его двуцепочечную форму.2. Внутриклеточный способ по п.1, отличающийся тем, что одноцепочечный клостридиальный токсин содержит следующую линейную амино-карбоксильную очередность одного полипептида порядка: 1) энзимного домена клостридиального токсина, двуцепочечный петлевой участок которого содержит сайт расщепления TEV протеазой, транслокационного домена, клостридиального токсина и связывающего домена клостридиального токсина; 2) энзимного домена клостридиального токсина, двуцепочечный петлевой участок которого содержит сайт расщепления TEV п