Ротавирусные частицы с химерными поверхностными белками - RU2016103770A
Код документа: RU2016103770A
Формула
1. Композиция, содержащая химерный поверхностный белок, содержащий поверхностный белок ротавируса, связанный с гетерологичным белком, при этом поверхностный белок ротавируса связан с гетерологичным белком нековалентно состоящей из двух частей адаптерной системой, при этом одна часть адаптерной системы связана с поверхностным белком ротавируса, а другая часть адаптера связана с гетерологичным белком, при этом обе части адаптерной системы образуют стабильный комплекс друг с другом.
2. Химерный поверхностный белок по п. 1, в котором одна часть адаптера образована первым адаптерным полипептидом, а другая часть адаптера образована вторым адаптерным полипептидом, при этом первый адаптерный полипептид и второй адаптерный полипептид взаимодействуют друг с другом с образованием стабильного комплекса.
3. Химерный поверхностный белок по п. 2, в котором первый адаптерный полипептид слит с поверхностным белком ротавируса, необязательно через линкерную последовательность, и в котором второй адаптерный полипептид слит с гетерологичным белком, необязательно через линкерную последовательность.
4. Химерный поверхностный белок по п. 2 или 3, в котором первый адаптерный полипептид и второй адаптерный полипептид содержат гептадную повторяющуюся последовательность.
5. Ротавирусная частица, содержащая химерный поверхностный белок по любому из пп. 1-4.
6. Ротавирусная частица по п. 5 для применения в качестве лекарственного средства.
7. Композиция нуклеиновой кислоты, содержащей:
(a) открытую рамку считывания, кодирующую модифицированный поверхностный белок ротавируса содержащий поверхностный белок ротавируса, первый адаптерный полипептид и, необязательно, линкерную последовательность; и
(b) открытую рамку считывания, кодирующую слитый белок, содержащий гетерологичный белок, второй адаптерный полипептид и, необязательно, линкерную последовательность;
при этом необязательно открытая рамка считывания оперативно связана с промоторной последовательностью.
8. Композиция нуклеиновой кислоты по п. 7, в котором адаптерный полипептид содержит гептадную повторяющуюся последовательность.
9. Набор, содержащий:
(a) первую нуклеиновую кислоту, кодирующую модифицированный поверхностный белок ротавирус, содержащий поверхностный белок ротавируса и первый адаптерный полипептид, и вторую нуклеиновую кислоту, содержащую нуклеотидную последовательность, кодирующую второй адаптерный полипептид и сайт множественного клонирования, и при этом инсерция кодирующей области для гетерологичного белка в сайт множественного клонирования дает открытую рамку считывания, кодирующую слитый белок, содержащий гетерологичный белок и второй адаптерный полипептид; или
(b) первую нуклеиновую кислоту, кодирующую модифицированный поверхностный белок ротавируса, содержащий поверхностный белок ротавируса и первый адаптерный полипептид, и вторую нуклеиновую кислоту, кодирующую слитый белок, содержащий гетерологичный белок и второй адаптерный полипептид;
при этом первый адаптерный полипептид и второй адаптерный полипептид способны образовывать стабильный комплекс,
необязательно при этом набор дополнительно содержит ротавирусную частицу, при этом частица получена из того же вида ротавируса, что и поверхностный белок ротавируса, или из другого вида ротавируса.
10. Способ получения ротавирусной частицы по п. 5, при этом способ включает в себя размножение ротавирусной частицы, содержащей наружный слой, в клетке, выращиваемой в культуральной среде, очистку ротавирусной частицы из культуральной среды, удаление наружного слоя из ротавирусной частицы с получением двухслойной ротавирусной частицы (DLP), и рекапсидацию ротавирусной DLP химерным поверхностным белком по любому из пп. 1-4 с получением ротавирусной частицы по п. 5.
11. Способ получения ротавирусной частицы по п. 5, при этом способ включает в себя размножение ротавирусной частицы, содержащей наружный слой, в клетке, выращиваемой в культуральной среде, очистку ротавирусной частицы из культуральной среды, удаление наружного слоя из ротавирусной частицы с получением ротавирусной DLP и рекапсидацию ротавирусной DLP первым слитым белком, содержащим образующий тример поверхностный белок ротавируса, гептадную повторяющуюся последовательность и необязательно линкерную последовательность, и смешивание рекапсидированной ротавирусной DLP со вторым слитым белком, содержащим образующий тример гетерологичный белок, гептадную повторяющуюся последовательность и необязательно линкерную последовательность, с получением ротавирусной частицы по п. 5.
12. Способ получения ротавирусной частицы по п. 5, включающий в себя смешивание ротавирусной частицы, содержащей первый слитый белок, содержащий образующий тример поверхностный белок ротавируса, гептадную повторяющуюся последовательность и необязательно линкерную последовательность, со вторым слитым белком, содержащим образующий тример гетерологичный белок, гептадную повторяющуюся последовательность и необязательно линкерную последовательность.
13. Способ определения структуры гетерологичного белка, при этом способ включает в себя стадии: (i) рекапсидации ротавирусной DLP химерным поверхностным белком, содержащим весь или часть гетерологичного белка, с получением суспензии ротавирусных частиц, представляющих в виде дисплея химерный поверхностный белок, (ii) замораживания суспензии, (iii) визуализации ротавирусных частиц с использованием крио-ЭМ с получением множества микрофотографий и (iv) анализа множества микрофотографий с получением трехмерной модели химерного поверхностного белка.
14. Способ определения структуры гетерологичного белка в комплексе с молекулой, при этом способ включает в себя стадии: (i) рекапсидации ротавирусной DLP химерным поверхностным белком, содержащим весь или часть гетерологичного белка, с получением суспензии ротавирусных частиц, представляющих в виде дисплея химерный поверхностный белок, (ii) добавления к суспензии молекулы, которая специфично связывается с гетерологичным белком, при этом молекула образует комплекс с химерным поверхностным белком, (iii) замораживания суспензии, (iv) визуализации ротавирусных частиц с использованием крио-ЭМ с получением множества микрофотографий и (vi) анализа множества микрофотографий с получением трехмерной модели химерного поверхностного белка в комплексе с молекулой.
15. Способ по п. 14, в котором молекула представляет собой белковую молекулу, например (a) антитело или его фрагмент, при этом антитело или его фрагмент специфично связывает гетерологичный белок; или (b) рецептор клеточной поверхности, при этом гетерологичным белком является вирусный белок проникновения в клетку, и белковая молекула связывается вирусным белком проникновения в клетку.
