Иммуномодулирующие слитые белки и пути их применения - RU2017133637A
Код документа: RU2017133637A
Формула
1. Слитый белок, содержащий (а) внеклеточный компонент, состоящий из связывающего домена, который специфически связывает мишень, (b) внутриклеточный компонент, состоящий из внутриклеточного сигнального домена, и (с) гидрофобный компонент, соединяющий внеклеточный и внутриклеточный компоненты, где внеклеточная часть комплекса, образованного путем специфического связывания слитого белка с мишенью (комплекс слитый белок::мишень), имеет размер или охватывает расстояние: (i) не превышающие приблизительную величину расстояния между двумя клеточными мембранами иммунологического синапса, (ii) практически такие же, как расстояние, охватываемое внеклеточной частью комплекса между Т-клеточным рецептором (TCR) и комплексом MHC-пептид, специфически связанным с TCR, или не превышающие приблизительную величину этого расстояния, (iii) практически такие же, как расстояние, охватываемое внеклеточной частью комплекса между природной молекулой, содержащей связывающий домен, и ее когнатным партнером по связыванию, или не превышающие приблизительную величину этого расстояния; (iii) не превышающие приблизительно 40 нм, 25 нм, 20 нм, 15 нм или 14 нм или меньше этих значений; или (iv) предусматривающие любую их комбинацию.
2. Слитый белок по п. 1, где комплекс слитый белок::мишень локализуется в супрамолекулярном активационном кластере (SMAC).
3. Слитый белок по п. 1 или 2, где комплекс слитый белок::мишень локализуется в центральной области супрамолекулярного активационного кластера (cSMAC).
4. Слитый белок по п. 2 или 3, где SMAC имеет ширину Т-клеточного рецептора (TCR), связанного с комплексом антиген::лейкоцитарный антиген человека (HLA).
5. Слитый белок по любому из пп. 1-4, где внеклеточный компонент связан с отрицательным сигналом, а внутриклеточный компонент связан с положительным сигналом.
6. Слитый белок, содержащий (а) внеклеточный компонент, состоящий из связывающего домена, который специфически связывает мишень, (b) внутриклеточный компонент, состоящий из внутриклеточного сигнального домена, и (с) гидрофобный компонент, соединяющий внеклеточный и внутриклеточный компоненты,
где связывающий домен представляет собой связывающий домен ингибирующей молекулы или характеризуется по меньшей мере 95% идентичностью с ним, и внутриклеточный сигнальный домен представляет собой связывающий домен костимулирующей или стимулирующей молекулы или характеризуется по меньшей мере 95% идентичностью с ним, и
где ингибирующая молекула не является представителем суперсемейства B7-CD28, не является CTLA4, не является PD1, не связывается с B7, представляет собой гликопротеин или предусматривает любую их комбинацию.
7. Слитый белок по любому из пп. 1-6, где экспрессия слитого белка в Т-клетке, содержащей TCR или химерный антигенный рецептор, специфичный в отношении антигена, приводит к по меньшей мере 1,5-кратному, 2-кратному или 3-кратному увеличению показателя выживания, размножения, цитотоксичности, секреции цитокинов и/или ответа на несколько циклов стимуляции у Т-клетки в ответ на связывание антигена и/или после введения субъекту, и/или приводит к по меньшей мере 1,5-кратному, 2-кратному или 3-кратному увеличению показателя времени выживания, выживаемости без признаков заболевания или уменьшению интенсивности одного или более симптомов заболевания у субъекта, которому вводится клетка, по сравнению с клеткой по существу такой же, как Т-клетка, но не содержащей слитый белок.
8. Слитый белок по любому из пп. 1-7, где в случае экспрессии в Т-клетке слитый белок способен колокализоваться с TCR или CAR, экспрессируемыми Т-клеткой.
9. Слитый белок по любому из пп. 6-8, где связывающий домен и/или ингибиторная молекула специфически связываются с CD200 или CD47.
10. Слитый белок по любому из пп. 6-9, где связывающий домен получен из CD200R, SIRPα, TIM3, CD2, CD95 (Fas), CD223 (LAG3), A2aR, KIR, TIM3, CD300 или LPA5, и/или ингибиторная молекула представляет собой CD200R, SIRPα, TIM3, CD2, CD95 (Fas), CD223 (LAG3), A2aR, KIR, TIM3, CD300 или LPA5.
11. Слитый белок по любому из пп. 6-9, где ингибиторная молекула представляет собой CD200R или содержит его.
12. Слитый белок по любому из пп. 6-9, где ингибиторная молекула представляет собой SIRPα или содержит его.
13. Слитый белок по любому из пп. 1-12, где связывающий домен представляет собой связывающий фрагмент антитела, эктодомен рецептора, цитокин или лиганд.
14. Слитый белок по любому из пп. 1-13, где внеклеточный компонент содержит внеклеточную часть CD200R, SIRPα, CD279 (PD-1), CD2, CD95 (Fas), CD152 (CTLA4), CD223 (LAG3), CD272 (BTLA), A2aR, KIR, TIM3, CD300 или LPA5.
15. Слитый белок по любому из пп. 1-14, где внеклеточный компонент дополнительно содержит дополнительную внеклеточную часть, где дополнительная внеклеточная часть необязательно происходит из внеклеточной части молекулы, которая отличается от молекулы-источника связывающего домена или не содержит связывающий домен, или характеризуется идентичностью с ней.
16. Слитый белок по любому из пп. 1-15, где внеклеточный компонент дополнительно содержит внеклеточную часть из гидрофобного компонента или внеклеточную часть, которая содержит гидрофобный компонент или его часть.
17. Слитый белок по п. 15 или 16, где дополнительная внеклеточная часть содержит домен мультимеризации и/или спейсер.
18. Слитый белок по любому из пп. 1-17, где внеклеточный компонент содержит внеклеточную часть CD200R, или где связывающий домен содержит CD200-связывающую часть CD200R или его связывающего варианта.
19. Слитый белок по любому из пп. 1-17, где внеклеточный компонент содержит внеклеточную часть SIRPα, или где связывающий домен содержит CD47-связывающую часть SIRPα или его связывающего варианта.
20. Слитый белок по любому из пп. 1-19, где внеклеточный компонент или дополнительная внеклеточная часть содержат домен мультимеризации.
21. Слитый белок по п. 20, где домен мультимеризации содержит остаток цистеина.
22. Слитый белок по п. 20, где домен мультимеризации содержит внеклеточный компонент, модифицированный так, чтобы он содержал остаток цистеина на расстоянии от приблизительно 2 до приблизительно 15 аминокислот от гидрофобного компонента.
23. Слитый белок по любому из пп. 1-22, где гидрофобный компонент содержит трансмембранный домен CD2, CD3ε, CD3δ, CD3ζ, CD25, CD27, CD28, CD40, CD79A, CD79B, CD80, CD86, CD95 (Fas), CD134 (OX40), CD137 (4-1BB), CD150 (SLAMF1), CD152 (CTLA4), CD200R, CD223 (LAG3), CD270 (HVEM), CD272 (BTLA), CD273 (PD-L2), CD274 (PD-L1), CD278 (ICOS), CD279 (PD-1), CD300, CD357 (GITR), A2aR, DAP10, FcRα, FcRβ, FcRγ, Fyn, GAL9, KIR, Lck, LAT, LRP, NKG2D, NOTCH1, NOTCH2, NOTCH3, NOTCH4, PTCH2, ROR2, Ryk, Slp76, SIRPα, pTα, TCRα, TCRβ, TIM3, TRIM, LPA5 или Zap70.
24. Слитый белок по любому из пп. 1-23, где гидрофобный компонент содержит трансмембранный домен CD28.
25. Слитый белок по любому из пп. 1-23, где гидрофобный компонент содержит трансмембранный домен 4-1BB.
26. Слитый белок по любому из пп. 1-25, где внутриклеточный сигнальный домен предусматривает внутриклеточный сигнальный домен костимулирующей молекулы.
27. Слитый белок по п. 26, где костимулирующая молекула предусматривает CD28, CD137 (4-1BB) или ICOS.
28. Слитый белок по любому из пп. 1-27, где внутриклеточный сигнальный домен предусматривает внутриклеточный сигнальный домен CD3ε, CD3δ, CD3ζ, CD25, CD27, CD28, CD40, CD47, CD79A, CD79B, CD134 (OX40), CD137 (4-1BB), CD150 (SLAMF1), CD278 (ICOS), CD357 (GITR), CARD11, DAP10, DAP12, FcRα, FcRβ, FcRγ, Fyn, Lck, LAT, LRP, NKG2D, NOTCH1, NOTCH2, NOTCH3, NOTCH4, ROR2, Ryk, Slp76, pTα, TCRα, TCRβ, TRIM, Zap70, PTCH2 или любую их комбинацию.
29. Слитый белок по любому из пп. 1-28, где внутриклеточный сигнальный домен содержит костимулирующий домен CD137 (4-1BB), CD27, CD28, ICOS, OX40 (CD134) или любую их комбинацию.
30. Слитый белок по любому из пп. 1-29, где внутриклеточный сигнальный домен содержит костимулирующий домен CD137 (4-1BB) или CD28, или любую их комбинацию.
31. Слитый белок по любому из пп. 1-30, где внутриклеточный сигнальный домен содержит костимулирующий домен CD28.
32. Слитый белок по любому из пп. 1-31, где внутриклеточный сигнальный домен содержит костимулирующий домен CD137 (4-1BB).
33. Слитый белок по любому из пп. 1-32, где мишень представляет собой иммуносупрессорный лиганд.
34. Слитый белок по любому из пп. 1-32, где мишень выбрана из CD47, CD58, CD95L (FasL), CD200, CD270 (HVEM), CD274 (PD-L1) и GAL9.
35. Слитый белок по любому из пп. 1-34, где (a) внеклеточный компонент содержит внеклеточную часть CD200R, (b) гидрофобный компонент содержит трансмембранный домен CD28, и (c) внутриклеточный компонент содержит внутриклеточный сигнальный домен CD28 или 41BB.
36. Слитый белок по п. 35, где внеклеточная часть CD200R содержит целый внеклеточный домен CD200R.
37. Слитый белок по п. 35, где внеклеточная часть CD200R содержит по меньшей мере 200 аминокислот с N-конца CD200R.
38. Слитый белок по п. 35, где внеклеточная часть CD200R содержит от по меньшей мере приблизительно 225 аминокислот до по меньшей мере приблизительно 235 аминокислот с N-конца CD200R.
39. Слитый белок по п. 35, где внеклеточная часть CD200R содержит по меньшей мере приблизительно 234 аминокислоты с N-конца CD200R.
40. Слитый белок по любому из пп. 35-39, где CD200R представляет собой CD200R человека.
41. Слитый белок по любому из пп. 35-40, где внутриклеточный компонент содержит второй внутриклеточный сигнальный домен.
42. Слитый белок по п. 41, где второй внутриклеточный сигнальный домен предусматривает внутриклеточный сигнальный домен CD137 (4-1BB).
43. Слитый белок по любому из пп. 35-42, где внеклеточный компонент содержит внеклеточную часть CD28, примыкающую к трансмембранному домену CD28.
44. Слитый белок по п. 43, где внеклеточная часть CD28 содержит остаток цистеина.
45. Слитый белок по любому из пп. 1-44, где внутриклеточный сигнальный компонент не содержит сигнальный домен CD3ζ, и/или не содержит сигнальный домен, способный передавать первичный сигнал Т-клетке, и/или не содержит сигнальный домен из молекулы, в естественных условиях способной передавать первичный сигнал Т-клетке.
46. Слитый белок по п. 1, где (a) внеклеточный компонент содержит аминокислотную последовательность, кодируемую молекулой нуклеиновой кислоты, изложенной под SEQ ID NO:2, (b) гидрофобный компонент содержит аминокислотную последовательность, кодируемую молекулой нуклеиновой кислоты, изложенной под SEQ ID NO:3, и (c) внутриклеточный компонент содержит аминокислотную последовательность, кодируемую молекулой нуклеиновой кислоты, изложенной под SEQ ID NO:5.
47. Слитый белок по п. 1, где (a) внеклеточный компонент содержит аминокислотную последовательность, кодируемую молекулой нуклеиновой кислоты, изложенной под SEQ ID NO:2, (b) гидрофобный компонент содержит аминокислотную последовательность, кодируемую молекулой нуклеиновой кислоты, изложенной под SEQ ID NO:4, и (c) внутриклеточный компонент содержит аминокислотную последовательность, кодируемую молекулой нуклеиновой кислоты, изложенной под SEQ ID NO:5.
48. Слитый белок по п. 1, где (a) внеклеточный компонент содержит аминокислотную последовательность, кодируемую молекулой нуклеиновой кислоты, изложенной под SEQ ID NO:8, (b) гидрофобный компонент содержит аминокислотную последовательность, кодируемую молекулой нуклеиновой кислоты, изложенной под SEQ ID NO:4, и (c) внутриклеточный компонент содержит аминокислотную последовательность, кодируемую молекулой нуклеиновой кислоты, изложенной под SEQ ID NO:5.
49. Слитый белок по п. 41, где внеклеточный компонент дополнительно содержит домен мультимеризации, имеющий аминокислотную последовательность, кодируемую молекулой нуклеиновой кислоты, изложенной под SEQ ID NO:9.
50. Слитый белок по п. 1, где (a) внеклеточный компонент содержит аминокислотную последовательность, кодируемую молекулой нуклеиновой кислоты, изложенной под SEQ ID NO:11, (b) гидрофобный компонент содержит аминокислотную последовательность, кодируемую молекулой нуклеиновой кислоты, изложенной под SEQ ID NO:4, и (c) внутриклеточный компонент содержит аминокислотную последовательность, кодируемую молекулой нуклеиновой кислоты, изложенной под SEQ ID NO:5.
51. Слитый белок по п. 50, где внеклеточный компонент дополнительно содержит аминокислотную последовательность, кодируемую молекулой нуклеиновой кислоты, изложенной под SEQ ID NO:9.
52. Слитый белок по п. 51, где внутриклеточный компонент дополнительно содержит второй внутриклеточный сигнальный домен, имеющий аминокислотную последовательность, кодируемую молекулой нуклеиновой кислоты, изложенной под SEQ ID NO:13.
53. Слитый белок по п. 1, где (a) внеклеточный компонент содержит внеклеточную часть CD200R, (b) гидрофобный компонент содержит трансмембранный домен CD28, и (c) внутриклеточный компонент содержит внутриклеточный сигнальный домен CD137 (4-1BB).
54. Слитый белок по п. 53, где внеклеточная часть CD200R содержит целый внеклеточный домен CD200R.
55. Слитый белок по п. 53, где внеклеточная часть CD200R содержит по меньшей мере 200 аминокислот с N-конца CD200R.
56. Слитый белок по п. 53, где внеклеточная часть CD200R содержит от по меньшей мере приблизительно 225 аминокислот до по меньшей мере приблизительно 235 аминокислот с N-конца CD200R.
57. Слитый белок по любому из пп. 53-56, где внеклеточный компонент содержит внеклеточную часть CD28, примыкающую к трансмембранному домену CD28.
58. Слитый белок по п. 57, где внеклеточная часть CD28 содержит остаток цистеина.
59. Слитый белок по п. 1, где (a) внеклеточный компонент содержит внеклеточную часть CD200R, (b) гидрофобный компонент содержит трансмембранный домен CD137 (4-1BB), и (c) внутриклеточный компонент содержит внутриклеточный сигнальный домен CD137 (4-1BB).
60. Слитый белок по п. 59, где внеклеточная часть CD200R содержит целый внеклеточный домен CD200R.
61. Слитый белок по п. 59, где внеклеточная часть CD200R содержит по меньшей мере часть внеклеточного домена из по меньшей мере 230 аминокислот с N-конца CD200R.
62. Слитый белок по любому из пп. 59-61, где внеклеточный компонент содержит внеклеточную часть CD137 (4-1BB), примыкающую к трансмембранному домену CD137 (4-1BB).
63. Слитый белок по п. 62, где внеклеточная часть CD137 (4-1BB) содержит остаток цистеина.
64. Слитый белок по п. 1, где (a) внеклеточный компонент содержит связывающий домен с аминокислотной последовательностью, кодируемой молекулой нуклеиновой кислоты, изложенной под SEQ ID NO:8, и домен мультимеризации с аминокислотной последовательностью, кодируемой молекулой нуклеиновой кислоты, изложенной под SEQ ID NO:9, (b) гидрофобный компонент содержит аминокислотную последовательность, кодируемую молекулой нуклеиновой кислоты, изложенной под SEQ ID NO:4, и (c) внутриклеточный компонент содержит аминокислотную последовательность, кодируемую молекулой нуклеиновой кислоты, изложенной под SEQ ID NO:13.
65. Слитый белок по п. 64, где внутриклеточный компонент дополнительно содержит второй внутриклеточный сигнальный домен, имеющий аминокислотную последовательность, кодируемую молекулой нуклеиновой кислоты, изложенной под SEQ ID NO:5.
66. Слитый белок по п. 1, где (a) внеклеточный компонент содержит связывающий домен с аминокислотной последовательностью, кодируемой молекулой нуклеиновой кислоты, изложенной под SEQ ID NO:11, и домен мультимеризации с аминокислотной последовательностью, кодируемой молекулой нуклеиновой кислоты, изложенной под SEQ ID NO:9, (b) гидрофобный компонент содержит аминокислотную последовательность, кодируемую молекулой нуклеиновой кислоты, изложенной под SEQ ID NO:4, и (c) внутриклеточный компонент содержит аминокислотную последовательность, кодируемую молекулой нуклеиновой кислоты, изложенной под SEQ ID NO:13.
67. Слитый белок по п. 1, где (a) внеклеточный компонент содержит внеклеточную часть SIRPα, (b) гидрофобный компонент содержит трансмембранный домен CD28, и (c) внутриклеточный компонент содержит внутриклеточный сигнальный домен CD28.
68. Слитый белок по п. 67, где внеклеточная часть SIRPα содержит целый внеклеточный домен SIRPα.
69. Слитый белок по п. 67, где внеклеточная часть SIRPα содержит по меньшей мере 361 аминокислоту с N-конца SIRPα.
70. Слитый белок по любому из пп. 67-69, где внутриклеточный компонент содержит второй внутриклеточный сигнальный домен.
71. Слитый белок по п. 70, где второй внутриклеточный сигнальный домен предусматривает внутриклеточный сигнальный домен CD137 (4-1BB).
72. Слитый белок по любому из пп. 67-71, где внеклеточный компонент содержит внеклеточную часть CD28, примыкающую к трансмембранному домену CD28.
73. Слитый белок по п. 72, где внеклеточная часть CD28 содержит остаток цистеина.
74. Слитый белок по п. 1, где (a) внеклеточный компонент содержит аминокислотную последовательность, кодируемую молекулой нуклеиновой кислоты, изложенной под SEQ ID NO:17, (b) гидрофобный компонент содержит аминокислотную последовательность, кодируемую молекулой нуклеиновой кислоты, изложенной под SEQ ID NO:18, и (c) внутриклеточный компонент содержит аминокислотную последовательность, кодируемую молекулой нуклеиновой кислоты, изложенной под SEQ ID NO:5.
75. Слитый белок по п. 1, где (a) внеклеточный компонент содержит аминокислотную последовательность, кодируемую молекулой нуклеиновой кислоты, изложенной под SEQ ID NO:17, (b) гидрофобный компонент содержит аминокислотную последовательность, кодируемую молекулой нуклеиновой кислоты, изложенной под SEQ ID NO:4, и (c) внутриклеточный компонент содержит аминокислотную последовательность, кодируемую молекулой нуклеиновой кислоты, изложенной под SEQ ID NO:5.
76. Слитый белок по п. 1, где (a) внеклеточный компонент содержит связывающий домен с аминокислотной последовательностью, кодируемой молекулой нуклеиновой кислоты, изложенной под SEQ ID NO:21, и домен мультимеризации с аминокислотной последовательностью, кодируемой молекулой нуклеиновой кислоты, изложенной под SEQ ID NO:9, (b) гидрофобный компонент содержит аминокислотную последовательность, кодируемую молекулой нуклеиновой кислоты, изложенной под SEQ ID NO:4, и (c) внутриклеточный компонент содержит аминокислотную последовательность, кодируемую молекулой нуклеиновой кислоты, изложенной под SEQ ID NO:5.
77. Слитый белок по п. 1, где (a) внеклеточный компонент содержит связывающий домен с аминокислотной последовательностью, кодируемой молекулой нуклеиновой кислоты, изложенной под SEQ ID NO:21, и домен мультимеризации с аминокислотной последовательностью, кодируемой молекулой нуклеиновой кислоты, изложенной под SEQ ID NO:9, (b) гидрофобный компонент содержит аминокислотную последовательность, кодируемую молекулой нуклеиновой кислоты, изложенной под SEQ ID NO:4, и (c) внутриклеточный компонент содержит аминокислотную последовательность, кодируемую молекулой нуклеиновой кислоты, изложенной под SEQ ID NO:13.
78. Слитый белок по п. 70, где внутриклеточный компонент дополнительно содержит аминокислотную последовательность, кодируемую молекулой нуклеиновой кислоты, изложенной под SEQ ID NO:5.
79. Слитый белок по п. 1, где (a) внеклеточный компонент содержит внеклеточную часть CD279 (PD-1), (b) гидрофобный компонент содержит трансмембранный домен CD28, и (c) внутриклеточный компонент содержит внутриклеточный сигнальный домен CD28.
80. Слитый белок по п. 79, где внеклеточная часть CD279 (PD-1) содержит целый внеклеточный домен CD279 (PD-1).
81. Слитый белок по п. 79, где внеклеточная часть CD279 (PD-1) содержит часть внеклеточного домена из по меньшей мере 100 аминокислот с N-конца CD279 (PD-1).
82. Слитый белок по п. 79, где внеклеточная часть CD279 (PD-1) содержит часть внеклеточного домена из по меньшей мере 149 аминокислот с N-конца CD279 (PD-1).
83. Слитый белок по любому из пп. 79-82, где внеклеточный компонент содержит внеклеточную часть CD28, примыкающую к трансмембранному домену CD28.
84. Слитый белок по п. 83, где внеклеточная часть CD28 содержит остаток цистеина.
85. Слитый белок по п. 1, где (a) внеклеточный компонент содержит аминокислотную последовательность, кодируемую молекулой нуклеиновой кислоты, изложенной под SEQ ID NO:89, и домен мультимеризации с аминокислотной последовательностью, кодируемой молекулой нуклеиновой кислоты, изложенной под SEQ ID NO:9, (b) гидрофобный компонент содержит аминокислотную последовательность, кодируемую молекулой нуклеиновой кислоты, изложенной под SEQ ID NO:4, и (c) внутриклеточный компонент содержит аминокислотную последовательность, кодируемую молекулой нуклеиновой кислоты, изложенной под SEQ ID NO:5.
86. Слитый белок по п. 1, где (a) внеклеточный компонент содержит аминокислотную последовательность, кодируемую молекулой нуклеиновой кислоты, изложенной под SEQ ID NO:91, и домен мультимеризации с аминокислотной последовательностью, кодируемой молекулой нуклеиновой кислоты, изложенной под SEQ ID NO:9, (b) гидрофобный компонент содержит аминокислотную последовательность, кодируемую молекулой нуклеиновой кислоты, изложенной под SEQ ID NO:4, и (c) внутриклеточный компонент содержит аминокислотную последовательность, кодируемую молекулой нуклеиновой кислоты, изложенной под SEQ ID NO:5.
87. Слитый белок по п. 1, где (a) внеклеточный компонент содержит аминокислотную последовательность, кодируемую молекулой нуклеиновой кислоты, изложенной под SEQ ID NO:95, и домен мультимеризации с аминокислотной последовательностью, кодируемой молекулой нуклеиновой кислоты, изложенной под SEQ ID NO:9, (b) гидрофобный компонент содержит аминокислотную последовательность, кодируемую молекулой нуклеиновой кислоты, изложенной под SEQ ID NO:4, и (c) внутриклеточный компонент содержит аминокислотную последовательность, кодируемую молекулой нуклеиновой кислоты, изложенной под SEQ ID NO:5.
88. Слитый белок по п. 1, где (a) внеклеточный компонент содержит внеклеточную часть CD95 (Fas), (b) гидрофобный компонент содержит трансмембранный домен CD28, и (c) внутриклеточный компонент содержит внутриклеточный сигнальный домен CD28.
89. Слитый белок по п. 88, где внеклеточная часть CD95 (Fas) содержит целый внеклеточный домен CD95 (Fas).
90. Слитый белок по п. 88, где внеклеточная часть CD95 (Fas) содержит по меньшей мере часть внеклеточного домена из по меньшей мере 175 аминокислот с N-конца CD95 (Fas).
91. Слитый белок по п. 88, где внеклеточная часть CD95 (Fas) содержит по меньшей мере часть внеклеточного домена из по меньшей мере 173 аминокислот с N-конца CD95 (Fas).
92. Слитый белок по п. 88, где внеклеточная часть CD95 (Fas) содержит по меньшей мере часть внеклеточного домена из по меньшей мере 166 аминокислот с N-конца CD95 (Fas).
93. Слитый белок по п. 88, где внеклеточная часть CD95 (Fas) содержит по меньшей мере часть внеклеточного домена из по меньшей мере 161 аминокислот с N-конца CD95 (Fas).
94. Слитый белок по любому из пп. 88-93, где внеклеточный компонент содержит внеклеточную часть CD28, примыкающую к трансмембранному домену CD28.
95. Слитый белок по п. 94, где внеклеточная часть CD28 содержит остаток цистеина.
96. Слитый белок по п. 1, где (a) внеклеточный компонент содержит аминокислотную последовательность, кодируемую молекулой нуклеиновой кислоты, изложенной под SEQ ID NO:71, и домен мультимеризации с аминокислотной последовательностью, кодируемой молекулой нуклеиновой кислоты, изложенной под SEQ ID NO:9, (b) гидрофобный компонент содержит аминокислотную последовательность, кодируемую молекулой нуклеиновой кислоты, изложенной под SEQ ID NO:4, и (c) внутриклеточный компонент содержит аминокислотную последовательность, кодируемую молекулой нуклеиновой кислоты, изложенной под SEQ ID NO:5.
97. Слитый белок по п. 1, где (a) внеклеточный компонент содержит аминокислотную последовательность, кодируемую молекулой нуклеиновой кислоты, изложенной под SEQ ID NO:73, и домен мультимеризации с аминокислотной последовательностью, кодируемой молекулой нуклеиновой кислоты, изложенной под SEQ ID NO:9, (b) гидрофобный компонент содержит аминокислотную последовательность, кодируемую молекулой нуклеиновой кислоты, изложенной под SEQ ID NO:4, и (c) внутриклеточный компонент содержит аминокислотную последовательность, кодируемую молекулой нуклеиновой кислоты, изложенной под SEQ ID NO:5.
98. Слитый белок по п. 1, где (a) внеклеточный компонент содержит аминокислотную последовательность, кодируемую молекулой нуклеиновой кислоты, изложенной под SEQ ID NO:75, и домен мультимеризации с аминокислотной последовательностью, кодируемой молекулой нуклеиновой кислоты, изложенной под SEQ ID NO:9, (b) гидрофобный компонент содержит аминокислотную последовательность, кодируемую молекулой нуклеиновой кислоты, изложенной под SEQ ID NO:4, и (c) внутриклеточный компонент содержит аминокислотную последовательность, кодируемую молекулой нуклеиновой кислоты, изложенной под SEQ ID NO:5.
99. Слитый белок по п. 1, где (a) внеклеточный компонент содержит внеклеточную часть CD2, (b) гидрофобный компонент содержит трансмембранный домен CD28, и (c) внутриклеточный компонент содержит внутриклеточный сигнальный домен CD28.
100. Слитый белок по п. 99, где внеклеточная часть CD2 содержит целый внеклеточный домен CD2.
101. Слитый белок по п. 99, где внеклеточная часть CD2 содержит по меньшей мере часть внеклеточного домена из по меньшей мере 175 аминокислот с N-конца CD2.
102. Слитый белок по любому из пп. 99-101, где внеклеточный компонент содержит внеклеточную часть CD28, примыкающую к трансмембранному домену CD28.
103. Слитый белок по п. 102, где внеклеточная часть CD28 содержит остаток цистеина.
104. Слитый белок по п. 1, где (a) внеклеточный компонент содержит аминокислотную последовательность, кодируемую молекулой нуклеиновой кислоты, изложенной под SEQ ID NO:61, и домен мультимеризации с аминокислотной последовательностью, кодируемой молекулой нуклеиновой кислоты, изложенной под SEQ ID NO:9, (b) гидрофобный компонент содержит аминокислотную последовательность, кодируемую молекулой нуклеиновой кислоты, изложенной под SEQ ID NO:4, и (c) внутриклеточный компонент содержит аминокислотную последовательность, кодируемую молекулой нуклеиновой кислоты, изложенной под SEQ ID NO:5.
105. Слитый белок по п. 1, где (a) внеклеточный компонент содержит внеклеточную часть TIM3, (b) гидрофобный компонент содержит трансмембранный домен CD28, и (c) внутриклеточный компонент содержит внутриклеточный сигнальный домен CD28.
106. Слитый белок по п. 105, где внеклеточная часть TIM3 содержит целый внеклеточный домен TIM3.
107. Слитый белок по п. 105, где внеклеточная часть TIM3 содержит по меньшей мере часть внеклеточного домена из по меньшей мере 180 аминокислот с N-конца TIM3.
108. Слитый белок по любому из пп. 105-107, где внеклеточный компонент содержит внеклеточную часть CD28, примыкающую к трансмембранному домену CD28.
109. Слитый белок по п. 108, где внеклеточная часть CD28 содержит остаток цистеина.
110. Слитый белок по п. 1, где (a) внеклеточный компонент содержит внеклеточную часть LAG3, (b) гидрофобный компонент содержит трансмембранный домен CD28, и (c) внутриклеточный компонент содержит внутриклеточный сигнальный домен CD28.
111. Слитый белок по п. 110, где внеклеточная часть LAG3 содержит целый внеклеточный домен LAG3.
112. Слитый белок по п. 110, где внеклеточная часть LAG3 содержит по меньшей мере часть внеклеточного домена из по меньшей мере 410 аминокислот с N-конца LAG3.
113. Слитый белок по любому из пп. 110-112, где внеклеточный компонент содержит внеклеточную часть LAG3, примыкающую к трансмембранному домену CD28.
114. Слитый белок по п. 113, где внеклеточная часть CD28 содержит остаток цистеина.
115. Слитый белок по п. 5, где (a) внеклеточный компонент содержит связывающий домен с аминокислотной последовательностью, изложенной под SEQ ID NO:31, и домен мультимеризации с аминокислотной последовательностью, изложенной под SEQ ID NO:32, (b) гидрофобный компонент содержит аминокислотную последовательность, изложенную под SEQ ID NO:27, и (c) внутриклеточный компонент содержит аминокислотную последовательность, изложенную под SEQ ID NO:36.
116. Слитый белок по п. 115, где внутриклеточный компонент дополнительно содержит второй внутриклеточный сигнальный домен, имеющий аминокислотную последовательность, изложенную под SEQ ID NO:28.
117. Слитый белок по п. 5, где (a) внеклеточный компонент содержит связывающий домен с аминокислотной последовательностью, изложенной под SEQ ID NO:34, и домен мультимеризации с аминокислотной последовательностью, изложенной под SEQ ID NO:32, (b) гидрофобный компонент содержит аминокислотную последовательность, изложенную под SEQ ID NO:27, и (c) внутриклеточный компонент содержит аминокислотную последовательность, изложенную под SEQ ID NO:36.
118. Слитый белок по п. 5, где (a) внеклеточный компонент содержит аминокислотную последовательность, изложенную под SEQ ID NO:40, (b) гидрофобный компонент содержит аминокислотную последовательность, изложенную под SEQ ID NO:41, и (c) внутриклеточный компонент содержит аминокислотную последовательность, изложенную под SEQ ID NO:28.
119. Слитый белок по п. 5, где (a) внеклеточный компонент содержит аминокислотную последовательность, изложенную под SEQ ID NO:40, (b) гидрофобный компонент содержит аминокислотную последовательность, изложенную под SEQ ID NO:27, и (c) внутриклеточный компонент содержит аминокислотную последовательность, изложенную под SEQ ID NO:28.
120. Слитый белок по п. 5, где (a) внеклеточный компонент содержит связывающий домен с аминокислотной последовательностью, изложенной под SEQ ID NO:44, и домен мультимеризации с аминокислотной последовательностью, изложенной под SEQ ID NO:32, (b) гидрофобный компонент содержит аминокислотную последовательность, изложенную под SEQ ID NO:27, и (c) внутриклеточный компонент содержит аминокислотную последовательность, изложенную под SEQ ID NO:28.
121. Слитый белок по п. 5, где (a) внеклеточный компонент содержит связывающий домен с аминокислотной последовательностью, изложенной под SEQ ID NO:44, и домен мультимеризации с аминокислотной последовательностью, изложенной под SEQ ID NO:32, (b) гидрофобный компонент содержит аминокислотную последовательность, изложенную под SEQ ID NO:27, и (c) внутриклеточный компонент содержит аминокислотную последовательность, изложенную под SEQ ID NO:36.
122. Слитый белок по п. 121, где внутриклеточный компонент дополнительно содержит аминокислотную последовательность, изложенную под SEQ ID NO:28.
123. Слитый белок по п. 5, где (a) внеклеточный компонент содержит аминокислотную последовательность, изложенную под SEQ ID NO:90, и домен мультимеризации с аминокислотной последовательностью, изложенной под SEQ ID NO:32, (b) гидрофобный компонент содержит аминокислотную последовательность, изложенную под SEQ ID NO:27, и (c) внутриклеточный компонент содержит аминокислотную последовательность, изложенную под SEQ ID NO:28.
124. Слитый белок по п. 5, где (a) внеклеточный компонент содержит аминокислотную последовательность, кодируемую молекулой нуклеиновой кислоты, изложенной под SEQ ID NO:92, и домен мультимеризации с аминокислотной последовательностью, изложенной под SEQ ID NO:32, (b) гидрофобный компонент содержит аминокислотную последовательность, изложенную под SEQ ID NO:27, и (c) внутриклеточный компонент содержит аминокислотную последовательность, изложенную под SEQ ID NO:28.
125. Слитый белок по п. 5, где (a) внеклеточный компонент содержит аминокислотную последовательность, кодируемую молекулой нуклеиновой кислоты, изложенной под SEQ ID NO:96, и домен мультимеризации с аминокислотной последовательностью, изложенной под SEQ ID NO:32, (b) гидрофобный компонент содержит аминокислотную последовательность, изложенную под SEQ ID NO:27, и (c) внутриклеточный компонент содержит аминокислотную последовательность, изложенную под SEQ ID NO:28.
126. Слитый белок по п. 5, где (a) внеклеточный компонент содержит аминокислотную последовательность, изложенную под SEQ ID NO:72, и домен мультимеризации с аминокислотной последовательностью, изложенной под SEQ ID NO:32, (b) гидрофобный компонент содержит аминокислотную последовательность, изложенную под SEQ ID NO:27, и (c) внутриклеточный компонент содержит аминокислотную последовательность, изложенную под SEQ ID NO:28.
127. Слитый белок по п. 5, где (a) внеклеточный компонент содержит аминокислотную последовательность, изложенную под SEQ ID NO:74, и домен мультимеризации с аминокислотной последовательностью, изложенной под SEQ ID NO:32, (b) гидрофобный компонент содержит аминокислотную последовательность, изложенную под SEQ ID NO:27, и (c) внутриклеточный компонент содержит аминокислотную последовательность, изложенную под SEQ ID NO:28.
128. Слитый белок по п. 5, где (a) внеклеточный компонент содержит аминокислотную последовательность, изложенную под SEQ ID NO:76, и домен мультимеризации с аминокислотной последовательностью, изложенной под SEQ ID NO:32, (b) гидрофобный компонент содержит аминокислотную последовательность, изложенную под SEQ ID NO:27, и (c) внутриклеточный компонент содержит аминокислотную последовательность, изложенную под SEQ ID NO:28.
129. Слитый белок по п. 5, где (a) внеклеточный компонент содержит аминокислотную последовательность, изложенную под SEQ ID NO:62, и домен мультимеризации с аминокислотной последовательностью, изложенной под SEQ ID NO:32, (b) гидрофобный компонент содержит аминокислотную последовательность, изложенную под SEQ ID NO:27, и (c) внутриклеточный компонент содержит аминокислотную последовательность, изложенную под SEQ ID NO:28.
130. Молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая слитый белок по любому из пп. 1-129.
131. Вектор, содержащий молекулу нуклеиновой кислоты по п. 130.
132. Вектор по п. 131, где вектор является вирусным вектором.
133. Вектор по п. 132, где вирусный вектор является лентивирусным или ретровирусным вектором.
134. Вектор по п. 133, где вирусный вектор является лентивирусным вектором.
135. Вектор по любому из пп. 131-134, дополнительно кодирующий антигенспецифический TCR.
136. Вектор по п. 135, где TCR является экзогенным для клетки-хозяина.
137. Вектор по п. 135 или п. 136, где TCR является специфичным к рестриктированному по HLA класса I антигену.
138. Вектор по любому из пп. 135-137, где антиген представляет собой рак-специфический антиген.
139. Вектор по п. 138, где рак-специфический антиген предусматривает WT-1, мезотелин или циклин-A1.
140. Вектор по любому из пп. 131-139, дополнительно кодирующий лиганд.
141. Вектор по п. 140, где лиганд представляет собой CD200, CD47, PD-L1 или CD58.
142. Вектор по любому из пп. 131-141, дополнительно кодирующий siRNA для снижения экспрессии эндогенного рецептора.
143. Вектор по п. 142, где эндогенный рецептор предусматривает CD200R, SIRPα, CD279 (PD-1), CD95 (Fas) или CD2, или представляет собой TCR или его часть.
144. Клетка-хозяин, содержащая слитый белок по любому из пп. 1-129.
145. Клетка-хозяин, содержащая по меньшей мере два различных слитых белка по любому из пп. 1-129.
146. Клетка-хозяин по п. 145, содержащая слитый белок по п. 79 и слитый белок по п. 105.
147. Клетка-хозяин, содержащая молекулу нуклеиновой кислоты по п. 130.
148. Клетка-хозяин, содержащая вектор по любому из пп. 131-143.
149. Клетка-хозяин по любому из пп. 144-148, где клетка-хозяин представляет собой клетку иммунной системы.
150. Клетка-хозяин по п. 149, где клетка иммунной системы представляет собой Т-клетку.
151. Клетка-хозяин по п. 150, где T-клетка представляет собой CD4+ T-клетку.
152. Клетка-хозяин по п. 150, где T-клетка представляет собой CD8+ T-клетку.
153. Клетка-хозяин по любому из пп. 144-152, дополнительно содержащая антигенный рецептор, который необязательно представляет собой антигенспецифический TCR.
154. Клетка-хозяин по п. 153, где антигенспецифический TCR является экзогенным для клетки или хозяина.
155. Клетка-хозяин по п. 153 или п. 154, где TCR связывается с комплексом антиген::HLA с высокой аффинностью.
156. Клетка-хозяин по п. 155, где высокоаффинное связывание характеризуется значением Ka, составляющим 107 M-1 или больше.
157. Клетка-хозяин по любому из пп. 153-156, где TCR является специфичным к рестриктированному по HLA класса I антигену.
158. Клетка-хозяин по любому из пп. 153-156, где антиген представляет собой рак-специфический антиген.
159. Клетка-хозяин по п. 158, где рак-специфический антиген предусматривает WT-1, мезотелин или циклин-A1.
160. Клетка-хозяин по любому из пп. 153-156, где антиген представляет собой вирусный антиген.
161. Клетка-хозяин по п. 153, где антигенный рецептор является химерным антигенным рецептором.
162. Клетка-хозяин по п. 161, где химерный антигенный рецептор содержит внеклеточный антиген-связывающий домен и внутриклеточный сигнальный домен, способный передавать первичный сигнал Т-клетке, и необязательно костимулирующий домен.
163. Клетка-хозяин по любому из пп. 144-162, дополнительно кодирующая лиганд.
164. Клетка-хозяин по п. 163, где лиганд представляет собой CD200, CD47, PD-L1 или CD58.
165. Клетка-хозяин по любому из пп. 144-164, дополнительно кодирующая siRNA для снижения экспрессии эндогенного рецептора.
166. Клетка-хозяин по п. 165, где эндогенный рецептор предусматривает CD200R, SIRPα, CD279 (PD-1), CD95 (Fas) или CD2.
167. Способ лечения заболевания у субъекта, включающий введение субъекту слитого белка по любому из пп. 1-129.
168. Способ лечения заболевания у субъекта, включающий введение субъекту вектора по любому из пп. 131-143.
169. Способ лечения заболевания у субъекта, включающий введение субъекту клетки-хозяина по любому из пп. 144-166.
170. Способ по любому из пп. 167-169, где заболевание выбрано из группы, состоящей из вирусной инфекции, бактериальной инфекции, рака и аутоиммунного заболевания.
171. Способ по любому из пп. 167-170, где субъект является человеком.
172. Слитый белок по любому из пп. 1-129 для применения при лечении рака.
