Получение вирусоподобных частиц вируса гриппа в растениях - RU2015146097A
Код документа: RU2015146097A
Формула
1. Нуклеиновая кислота, содержащая регуляторную область, активную в растении, и энхансер экспрессии, активный в растении, причем регуляторная область и энхансер экспрессии функционально связаны с нуклеотидной последовательностью, кодирующей модифицированный гемагглютинин гриппа (НА), содержащий модифицированную протеолитическую петлю.
2. Нуклеиновая кислота по п. 1, в которой энхансер экспрессии выбран из группы, состоящей из CPMVX, CPMVX+, CPMV-HT+CPMV HT+[WT115] и CPMV НТ+[511].
3. Нуклеиновая кислота по п. 1, в которой энхансер экспрессии не является CPMV НТ.
4. Нуклеиновая кислота по п. 1, причем нуклеиновая кислота не содержит длинную межгенную область вируса желтой карликовости бобов (BeYDV LIR) и короткую межгенную область BeYDV (BeYDV SIR).
5. Нуклеиновая кислота по п. 1, в которой модифицированная протеолитическая петля содержит один или несколько сайтов расщепления протеазой, проявляющих пониженное или устраненное расщепление протеазой по сравнению с расщеплением одного или нескольких сайтов расщепления нативного НА.
6. Нуклеиновая кислота по п. 5, где протеаза является Клара-подобной, фуриноподобной или представляет собой трипсин.
7. Нуклеиновая кислота по п. 1, в которой модифицированная протеолитическая петля содержит линкерную последовательность.
8. Нуклеиновая кислота по п. 7, в которой линкерная последовательность характеризуется аминокислотной последовательностью GG, TETQ или TETR.
9. Нуклеиновая кислота по п. 1, причем НА, кодируемый нуклеотидной последовательностью, выбран из группы, состоящей из НА из типов гриппа В, С, А и подтипов H1, Н2, Н3, Н4, Н5, Н6, Н7, Н8, Н9, Н10, H11, Н12, Н13, Н14, Н15 и Н16.
10. Нуклеиновая кислота по п. 1, причем нуклеотидная последовательность, кодирующая белок гемагглютинин (НА) гриппа характеризуется по меньшей мере 70% идентичностью последовательности по отношению к последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 17, 18, 20, 21, 41, 58, 77, 81, 85, 92, 96, 98, 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 114, 134, 143, 147, 154, 161, 168, 194 и 199.
11. Нуклеиновая кислота по п. 1, причем НА представляет собой НА0.
12. Нуклеиновая кислота по п. 1, причем модифицированный НА содержит нативный или ненативный сигнальный пептид.
13. Нуклеиновая кислота по п. 1, причем нуклеотидная последовательность, кодирующая модифицированный НА, содержит химерную нуклеотидную последовательность, кодирующую последовательно модифицированный эктодомен НА, содержащий модифицированную протеолитическую петлю, трансмембранный домен гриппа и цитоплазматический хвост, причем модифицированный эктодомен НА происходит из первого штамма гриппа, а трансмембранный домен и цитоплазматический хвост происходят из второго штамма гриппа.
14. Способ получения вирусоподобной частицы (ВПЧ) вируса гриппа в растении, предусматривающий следующее:
a) введение нуклеиновой кислоты по п. 1 в растение или часть растения;
b) инкубация растения или части растения при условиях, которые обеспечивают экспрессию нуклеиновых кислот с получением при этом ВПЧ.
15. Способ по п. 14, при котором на стадии а) вторую нуклеиновую кислоту вводят в растение или часть растения, причем вторая нуклеиновая кислота содержит вторую регуляторную область, активную в растении и функционально связанную с нуклеотидной последовательностью, кодирующей белок протонного канала.
16. Способ по п. 15, при котором белок протонного канала выбирают из М2 или ВМ2 гриппа.
17. Способ получения вирусоподобных частиц (ВПЧ) вируса гриппа в растении, предусматривающий следующее:
a) предоставление растения или части растения, содержащих нуклеиновую кислоту по п. 1, и
b) инкубация растения или части растения при условиях, которые обеспечивают экспрессию нуклеиновой кислоты с получением при этом ВПЧ.
18. Способ по п. 14, дополнительно предусматривающий стадию
c) сбора растения, и
d) очищения ВПЧ, причем размер ВПЧ находится в диапазоне 80-300 нм.
19. ВПЧ, полученная с помощью способа по п. 14.
20. ВПЧ по п. 19, дополнительно содержащая один или несколько липидов растительного происхождения.
21. ВПЧ по п. 20, в которой модифицированный белок НА содержит специфические для растения N-гликаны или модифицированные N-гликаны.
22. Способ получения модифицированного белка НА, содержащего модифицированную протеолитическую петлю, содержащую один или несколько сайтов расщепления протеазой, проявляющих пониженное или устраненное расщепление в растении, предусматривающий следующее:
a) введение нуклеиновой кислоты по п. 1 в растение;
b) инкубация растения или части растения при условиях, которые обеспечивают экспрессию белка НА с получением при этом модифицированного белка НА,
c) сбор растения и очищение модифицированного белка НА.
23. Белок НА, полученный с помощью способа по п. 22, причем белок характеризуется активностью гемагглютинина (НА).
24. НА, кодируемый нуклеиновой кислотой по п. 1.
25. Способ по п. 14, при котором на стадии введения (стадии а) нуклеиновую кислоту вводят в растение транзиторным образом или нуклеиновую кислоту вводят растение так, чтобы она являлась стабильной.
26. Растение, содержащее нуклеиновую кислоту по п. 1.
27. Композиция, содержащая эффективную дозу ВПЧ по п. 19 для индукции иммунного ответа и фармацевтически приемлемый носитель.
28. Вакцина, содержащая эффективную дозу ВПЧ по п. 19 для индукции иммунного ответа.
29. Способ индукции иммунитета к инфицированию вирусом гриппа у субъекта, предусматривающий введение ВПЧ по п. 19.
30. Способ по п. 29, при котором ВПЧ вводят субъекту перорально, интрадермально, интраназально, внутримышечно, интраперитонеально, внутривенно или подкожно.
31. Способ повышения качества продукта белка НА, экспрессированного в растении, предусматривающий следующее:
a) введение нуклеиновой кислоты по п. 1 в растение;
b) инкубация растения или части растения при условиях, которые обеспечивают экспрессию белка НА с получением при этом модифицированного белка НА,
c) сбор растения и очищение модифицированного белка НА, причем модифицированный белок НА характеризуется повышенным качеством продукта по сравнению с нативным НА.
32. Способ по п. 31, при котором качество включает в себя повышенный выход продукта, стабильность продукта, однородность продукта или их комбинацию.
