Способ конструирования рекомбинантной плазмидной днк, кодирующей бычий гормон роста - SU1471949A3
Код документа: SU1471949A3
Описание
31
Полиаденилировэнную РНК траскри- бируют в одноцепочечную с ДНК с использованием обратной транскриптазы. РНК удаляют путем щелочного гидролиза . Одноцепочечную с ДНК экстрагируют фенолом, подвергают хроматографи- ческому разделению при пропускании над G-50 Sephadex и осаждают этанолом . Одноцепочечную ДНК используют как основу для синтеза второй цепи кДНК с применением обратной транскриптазы . Одноцепочечную гепариновую петлю у З -концевой части первой молекулярной цепи кДНК удаляют путем обработки нуклеазой 5д. Двух- цепочечную с ДНК очищают экстракци- ей фенолом, подвергают хроматографи- ческому разделению при пропускании над G5.0 Sephadex и осаждают в этано- ле. Двухцепочечнук кДНК снабжают концевым звеном,dCMP с использованием dCTP и концевой трасферазы.
Плазмиду pBR 322 расщепляют эндо- нуклеазой Pst I и снабжают концевым звеном dGMP с тем исключением, что вместо dCTP используют dGTP. 50 нг расщепленной Pst I плазмиды pBR.322 с dG-концевой частью и 20 нг двуцепо чечной кДНК с dG-концевой частью от- жигшот в 50 мкл реакционной смеси.
Трансформацию Е. coli X, 1776 плаз - мидой осуществляют как описано ниже, Штамм Е. coli X 1776 становится проницаемым дпя ДНК.в результате вьздерж- ки в термостате в 75 мкМ СаС, 5 MKMMgCl, 10 мкМ Трис, рН 7,5 в течение 20 мин при 4 с, Плазмиду и бактерии выдерживают в течение 60 мин при и затем в течение 2 мин при . Преобразованные колонии отбирают по стойкости к тетрациклину. Присутствие размноженной ДНК определяют путем гибридизации колоний кДНК зондом, меченным 32Р и кодируюпа1М гормон роста быков. Плазмиду ДНК выделяют из отобранных колоний, расщепляют Pst I, подвергают электрофорезу на 1%-ной агарозе, обрабатьгоают этидийбромидом, фотографируют и, наконец , переносят на нитроцеллюлозные фильтры. Наличие последовательностей гормона роста определяют путем гибридизации с полной цепью кДИК гормона крысы, меченной nick-трансляцией. Получакп один клон, которьш гибриди- зировался с nick-транслированной DMA и обозначенной как рВР 348. Введенная
Q 5 0
5 о
5
0
5
0
5
последовательность включала 8831 пар оснований.
Пример 2. Плазмиду рВР 348 расщепляют Pst 1, фосфат у 5 -концевых звеньев фрагментов ДНК удаляют путем обработки щелочной фосфатазой и заменяют меченным Р фосфатом с использованием полинуклеотидной киназы. Затем плазмиду рВР 348 расщепляют Pst I, Pvu II или Sau ЗА, меченными , и полинуклеотидной киназой, а после этого расщепляют другими ферментами с образованием фрагментов ДНК, меченых в одиночной концевой части. Эти фрагменты получают путем элюирования из поли- акриламидного геля и устанавливают последовательность.
Аминокислотные положения нумеруют, начиная с аминокислоты с аминовым концом гормона роста быков в направлении к карбоксильному концу и в направлении к первому AU.G кодону, который , как предполагается, является точкой начала трансляции. Данная последовательность кодирует синтез . гормона роста, включающий поелетрансляционную обработку. Трансляция гормона роста mRNA приводит к предшественнику гормона роста, включающему сигнальный пептид.
Пример ,3. (А) Осуществляют процедуру таким же образом, как описано в примере 1, используя плазмиду pBR 315 вместо плазмиды pBR 322.. Все условия, включая отбор рекомбинант- ных клонов, описаны ранее.
Введенную последовательность уда ляют и анализируют аналогично примеру 2, в результате чего получают ДНК, содержащую примерно 831.п.о.
(В) Осуществляют процедуру таким же образом, как описано в примере 1, с использованием плазмиды pBR 316 вместо плазмиды pBR 322-. Все условия идентичны описанным в примере 1-.
Пример 4. В данном примере сДНА, кодирующую предЩественник гормона роста быков, получают по примеру 1 .
(А) Линкеры Hind III,,имеющие последовательность 5 -CCAAGCTTGG-3 , соединяют с кДНК, полученной по примеру 1, за счет связьшания обрезанных концов с использованием Т4 DNA лигазы. После связьшания продукт об- рабатьшают посредством Hind III или Hsu I. Плазмиду pBR 322 расщепляют
Hind III или Hsu I и подвергают обработке щелочной фосфатазой. После оса)ения из этанола обработанную фосфатазой расщепленную pBR 322 соединяют с кДНК, содержащей линкер Hind III. Е. coli X 1776 трансформируют рекомбинантной плазмидой и отбирают по чувствительности к тетрациклину . Получают колонию, включающую введенную последовательность, которая гибридизируется с nick-транслированной ДНК. Введенную последовательность удаляют путем расщепления с Hind III или Hsu I и анализируют, как описано в примере 2. Введенная молекула содержала примерно 830 пар оснований , (в) Осуществляют процедуру аналогично примеру 4, в котором использовалось несколько векторов вместо pBR 322, однако вместо плазмиды pBR 322 используют плазмиды pSC lOlj рМВ9, pBR 315 и pBR 316. Все условия, включая отбор рекомбинантных клонов, аналогичны описанным. Для всех плазмид получают идентичные результаты, т.е. в каждом случае получают рекомбинан- тную плазмйду, содержащую кДНК, кодирующую гормон роста быка.
(С) Осуществляют процедуру таким же образом, как описано в примере 4 (А), но используют несколько других сайтов рестрикции и эндонуклеаз рестрикции . В данном примере используют линкеры Sal I и Ват Н I вместо линкеров Hind III. Последовательности линкеров представляют собой 5 -GGTCCACC-3 и З -CCGGATCCGG-з . При использовании линкеров Sal I кДНК и pBR 322 расщепляют эндонукле- азой Sal I, а при использовании линкеров Ват Н I эндонуклеаза ограничения представляет собой Ват HI. Все условия, включая отбор рекомбина- нтных клонов, описаны в примере 4 (А-).
(D)Осуществляют процедуру аналогично примеру 4 (С), в котором вместо плазмиды pBR 322 используют плазмиды pSC 101, рМВ9, pBR 313, pBR 315 и pBR 316; Все условия такие же, как в примере 4 (С) и получают идентичные результаты.
(E)Осуществляют процедуру аналогично примеру 4 (А) с использованием линкера Есо RI, имеющего последовательность 5 -CCGAATT6G-3 , вместо линкера -Hind III и с использованием эндонуклеа ы Есо RI вместо Hind III
(Hsu I). Транформирование колонии не отбирают по чувствительности к тетрациклину .
(F)Осуществляют процедуру аналогично примеру 4 (Е), но с использованием плазмид pSC 101, рМВ 9, pBR 313 и pBR 315 вместо pBR 322. Используют те же условия, что описаны в
10 примере 4 (Е), и для каждой плазмиды получают идентичные результаты.
(G)Осуществляют процедуру аналогично примеру 4 (А) с использованием линкера Pst I, имеющего последова15 тельность 5 -GCTGCAGC-3 , и с использованием Pst I эндонуклеазы вместо сайта Hind III и вместо Hind III (Hsu I) соответственно. Используют идентичные условия с той разницей,
Q что отбор рекомбинантных клонов осуществляют , как описано в примере 1 Получают рекомбинантньй клон.
(Н) Осуществляют процедуру аналогично примеру 4 (G), но используют
5 плазмиды pBR 315 и вместо плазмцды pBR 322. Используют те же условия, что описаны в примере 4 (G), и получают идентичные результаты. Q) Осуществляют процедуры таким
0 же образом, как описано в примерах 1 3 (А), 3 (В) и 4 (А) - (И), с использованием Е. coli RRJ или Е. coli НВ 101 вместо Е. cali X 1776. Все условия и результаты идентичны описанным.
j ПримерЗ. В данном примере получают cDNA, кодирующую i предщественник гормона роста быков , как описано в призере 1. Линкеры Есо RI соединяют с кДНК и рас-
Q щепляют посредством Есо RJ.
(А) В качестве вектора используют Charon 16А. Когезионно свя,занные концевые части обрабатьтают путем - жки в течение 60 мин при 42°С в 0,1 М
g Трис-НС1, рН 8,0 и 10 мМ MgCljj. Данньй вектор расщепляют в сайте ;ЕСО RI эндонуклеазой Есо RJ и затем подвергают обработке щелочной фосфа- тазой. Шсле осаждения из этанола в обработанный фосфатазой вектор ЬЕсо RI сайт вводят кДНК при молярном соотношении 2 моль вектора на I моль.
0
+
Эту смесь сшивают лигазой фага Т Полученной смесью трансформируют суспензию клеток Е. coli X 1776, приготовленную для преобразования, как описано в примере 1. Рекомбинантные фаги извлекают и наносят на .Lac бактерии в чашках, содержащих 5-хлор-4-бром-3-индолип- ()-В-глактозид (Х6) , для продуцирования бесцветных негативных колоний отбирают рекомбинант- ные фаги (80 мкг/мл), содержащие
сДНК в Е. coRJ сайте вектора 16А. Отобранный рекомбинант изолирую и обрабатьшают избытком эндонуклеа- зы Есо RJ и продукт обработки анализируют , как описано в примере 2. Из- влекают ДНК с длинной цепью, включающей примерно 830 пар оснований. Полученные фаги упаковьшают in vitro.
(Б) ДНК фагов Charon ЗА или 4А используют в качестве векто-ра вместо ДНК Charon 16А. Все условия были идентичны тем, что описаны для ДНК Charon 16А. Выбор рекомбинантных фагов осуществляют путем нанесения фагов на Lac бактерии в чашках, со- держащих Хб, и изолирования бесцветных негативных колоний с последующими либо гибридизацией с соответствующей пробой, или обработкой эндо- нуклеазой. Эту введенную последова- тельность удаляют, как описано ранее в результате чего п олучают ДНК с длинной цепью примерно 830 пар осно- ваний.
(C)ДНК фaгa gt WE8 ЛВ используют в качестве вектора вместо Charon 16А Все условия идентичны описанным для Charon 16А. Отбор рекомбинантных фагов осуществляют по способу гибридизации .
Введенный фрагмент удаляют, как описано ранее, в результате чего получалась ДНК, включающая примерно 830 пар оснований (длина цепи).
(D)Осуществляют процедуру таким же образом, как описано в примерах
5(А) - (С), в которых использовались Е. coli RPJ, Е. coli ИВ 101, Е. coli DP 50 или Е. coli DPS иф F, вместо Е. coli, X 1776, Все условия тедентич- ны и получают идентичные результаты.
Пример 6. Для осуществления данного примера получают сДНК, кодирующую предшественник гармона роста, как описано в примере 1 . Вво- дят линкеры Hind III и кДНК обраба- тьшают посредством Hind III или Hsu I, как описано в примере 4(А).
Ппазмиду рС 194, изолированную из S. aureus, используют в качестве вектора, рС 194 расщепляют в зоне Hind Hi посредством Hind III или Hsu I и затем подвергают обработке щелочной фосфатазой.
Полученную кДНК соединяют с расщепленной рС-194, Осуществляют трансформацию В, subtil is RuB, Клеточную суспензию наносят непосредственно на L чашки, содержащие 3 мкг хлор- амфеникола. Отобранньй рекомбинант изолируют и обрабатывают посредством Hind III и продукт расщепления анализируют, как описано в примере 2 Извлекают ДНК длиной цепи примерно 830 пар оснований.
Пример 7, (А) Плазмиду pBR 348 обрабатывают эндонуклеазой Нае II с образованием фрагмента, включающего 1600 п.о. Однако зона Нае II находится в пределах введенной кДНК, кодирукнцей предшественник гормона роста, а вторая зона - в пределах фрагмента плазмиды pBR322. В результате расщепления получают
,...3 - З -GCGGAA5
Бычий GH (гормон роста) начинается либо с 4-1 ala, либо с -+2 phe остататочного звена в концевом по-: ложении NHj,. Удаление ко дона ala . осуществляют путем вьщержки в термостате ДНК вместе с dATP и фрагментом Кленова DNA полимеразы I. В результате этой реакции получают.
5 ТТС .,.,3
З - AAG5 .
ДНК экстрагируют фенолом и осаждают . Избыток dATP и .дигерированные основания удаляют путем хроматографии на G50 Sephadex. Оставшееся 5 звено удаляют нуклеазой S.. В результате такого расщепления получают
5- ТТС ,.,,3
з - AAG- ....5
(В) Осуществляют процедуру таким же образом, как описано в примере 7(А), в котором дезоксинуклеотидную последовательность, кодирующую предшественника гормона роста быка, удаляют путем обработки рекомбинантных ДНК, полученньис в примерах 3, 4, 5 И 6 эндонуклеазой Нае II.
Используемые векторы и эндонуклеа зы показаны в таблице.
После обработки ферментом рестрикции изолируют последовательность предшественника гормона роста быка посредством гельэлектрофореза и за914
тем ее подвергают обработке, как описано в Примере 7(А), при этом получают идентичные результаты.
(С) Осуществляют процедуры таким же образом как описано в примерах 7(А) и 7(В), с использованием полимеразы или З - 5 экзонуклеазы вместо фрагмента Кпенова ДНК полимеразы I.
Все другие условия идентичны и в каждом случае получают идентичные последовательности фрагмента гормона роста быков.
П р и м е р 8. {А) фрагмент гормона роста быков ,
5 - С ТТС....3
з - GCCGAAG з
получают путем обработки Нае II,- как описано в примере 7(А) или 7(В). Затупление осуществляют следующим об- . ДНК, вьщерживают в термостате- с dATP, dCTP, dCTP, dTTP и фрагменто Кпенова ДНК полимеразы I. В результате этой реакции получают 5 - GG
З - GCGGAAG ...,
ДНК экстрагируют фенолом и осаждают. Данную последовательность затем выдерживают в термостате с фрагментом Кленова ДНК полимеразы I в присутствии dCTP. Эту последовательность за тем обрабатьюают S| нуклеазой, в результате чего получают последовательность
5 - GCC ТТСз
3 - CGG AAG5
(в) Осуществляют процедуру таким же образом, как описано в примере 8(А), с использованием Т4 ДНК полимеразы или 3 - 5, т.е. в присутствии dCTP.
Пример 9. Дезоксинуклеотид- ную последовательность, кодирующую гормон роста быков, вводят в векторы переноса, как описано для предшественника гормона роста быков.
(А) Осуществляют процедуры таким же образом, как описано в примерах , 3(А), 3(В), 4(А) - (J), 5(А) - ,() и 6, о использованием ДНК, приготовленной аналогично примерам 7(А), 7(В) или 7(С). Все другие условия идентичны. ДНК расщепляют соответствующими эндонуклеазами, как показано в таблице, и анализируют, как описано в примере 2. В каждом случае по9 О
лучают ДНК с последовательностью, начинающуюся с Phe в положении 2.
(В) Осуществляют процедуры таким же образом, как описано в примерах I, 3(А), 3(В), 4 (А) - (СГ), 5СА) - (D) и 6, с использованием ДНК, приготовленной согласно примеру 8(А) или 8(В). Все другие условия идентичны.
ДНК расщепляют соответствующей эндо-. нуклеазой (как показано в таблице) и анализируют, как описано в примере 2. В каждом случае получают ДНК., имеющую последовательность, начинающуюся с Ala кодона.
Пример 10. (А) Экспрессию предшественника гормона роста быка как белка слияния демонстрируют с помощью радиоиммунного анализа и
миникпеточного эксперимента. В эксперименте с радиоиммунным анализом Е. coli X 1776, содержащие pBR 348, или Е. coli, содержащие pBR 322, как контроль, выращивают в питательном
бульоне и извлекают посредством центрифугирования . Клетки повторно суспендируют и лизирутот, и в гормон роста вводят радиомеченый гормон роста овец и антитело овец (или быков).
Иммунный комплекс осаждают и измеряют радиоактивность. Эксперимент показал , что белок слияния сохраняет некоторую 1муноактивность гормона роста быков. Дпя более подробной иллюстрации продуцирования белка слияния осуществляют мкниклеточньй эксперимент . Данньй эксперимент показывает , что pBR 348 образует белок слияния , состоящий из 183 аминокислот
| Лактамазы, 217 аминокислот предгор- мона роста быка и несколько связывающих аминокислот, кодированных обычно, нетранслированной 5 зоной. Общий молекулярный вес, составляющий примерно 45000, соответствует предсказанному молекулярному весу гибридного белка.
(В) Дпя прямой экспрессии предшественника гормона роста быка введен ™ сначала отделяют от pBR 348 путем частичного расщепления эндону- клеазной Pst I и очищают посредством препаративного гель-электрофореза. 15 мкг образца очищенной введенной
Н затем модиАицируют путем суспен- зирования ДНК в воде, в которую ввоят раствор солей так, чтобы конечая композиция содержала: 70 мМ Трис, Н 8,8; 70 мМ MgCl2 ; Ю Ь дитио1
треитола и 13,75 молекулярных звеньев полимеразы ДНК в общем объеме 250 мкл Реакционную смесь вьщерживают в термостате при 37 С в течение нескольких минут, затем вводят dATP до концентрации 50 M}J. После, дополнительной выдержки в термостате в течение 30 мин фермент инактивируют путем термообра ботки при 65°С в течение 5 мин. Этот процесс повторяют еще два раза, один раз с использованием dCTP и dATP, а затем снова с использованием dTTP. Обработанную DNA извлека1от путем осаждения этанолом. Обрабатывают S, нук- леазой. Данный процесс обеспечивает получение молекулы ДНК, заканчивающейся в начальном кодоне в положении за номером 26. Такие молекулы транс- лирзгются при вводе в вектор экспрессии , имеющий зону ввода, соответствующую примерно 3-11 нуклеотидам от последовательности рибрсомного связы- ,вания.
Вектор прямой экспрессии конструируют путем модификации плазмиды ptrp ЕЗО, путем удаления 23-29 нуклеоти- дов с использованием полимерат зы и S нуклеазы, как описано ранее.
Модифицированную кДНК и модифицированный вектор экспрессии снабжают линкером, имеющим последовательнйсть 5 -CCGGATCCGG-3 у одной цепи, и гомологичную ей, последовательность у другой цепи посредством связьюания с использованием лигазы. Эти линкеры обеспечивают наличие Ват Е+ сайтов. Бактерии-хозяева Е. coli НВ 101, RR5 или X 1776 трансформируют посредством рекомбинантных ДНК, несущих фрагмент , кодирующий предшественник гормона роста, и трансформаты отбирают по стойкости к ампициллину. Единственный трансформант, обозначенный как ptr рЕЗО/bGH отбирают для дополнительного анализа.
Бактериальные клетки, трансформированные плазмщ ой ptr рЕЗО/bGH, выращивают в стандартной.минимальной среде (М9), содержащей LeU PrO, витамин В1 и ампициллин, при 37°С. На ранней логарифмической фазе trp опе- рон индуцируют путем ввода й-индолил- акриловой кислоты (30 мкг/мл среды). Контрольные культуры оставались не- индуцированньми. По прошествии 3 ч роста 1,5 мл клеток .подвергают радиоактивному мечению путем ввода 20 1К S-L-Met и выдерживают в тер моста47
ев л. ой ин а т н . а- и - ы-
rp т ,i .
ь ы 5 г а - л- . ота1949J2
те в течение 10 мин. Клетки извлекают путем центрифугирования, промывают и снова суспенди руют в 250 мкл буферного раствора, содержащего 10% гликоля, 5% р -меркаптоэтанола и 2,3% SDS в 0,0525 М Трис, рН 6,8. Суспензию кипятят в течение 5 мин, затем вводят в 10%-ный гель SDS полиакрилами10 да и фракционируют посредством электрофореза . Полосы, соответствующие белковым зонам, визуально наблюдают посредством ауторадиографии. Результаты показали наличие новой белковой
15 полосы, составляющей примерно 2АООО дальтон, которая отсутствует в неиндуцированных или непреобразованных культурах.
Предшественник гормона роста бы20 ков очищают обычными способами,
включающими, например, гель-фильтрацию , ионообменную хроматографию, адсорбционную хроматографию и методы, основанные на различии растворимос25 тей. Предшественник гормона роста Превращают в гормон роста.
(С) Линкеры с последовательностью S -CCGGATCCGGATG-3 у одной цепи и гомологичной ей последовательностью
30 У другой.цепи соединяют фрагментом ДНК, кодирующим гормон роста.быка, полученным аналогично примерам 7(А) - (С) и 8(А) - (В). Эту модифицированную DNA затем вводят в вектор ptr
-g рЕ 30, как описано в примере 10(В). Бактерию-хозяина трансформируют и культивируют, и получаемый в результате гормон роста быков очищают, как описано в примере 10(В).
40 Формула изобретения
1. Способ конструирования реком- бинантной плазмидной ДНК, кодирующей бычий гормон роста, заключающийся в
45 том, что вьщеляют полиаденилирован- ную мРНК из гипофиза быка, очищают поли А мРНК адсорбционной хроматографией с применением олиго-ё-ц еллюло- зы, обрабатывают обратной транскрипgQ тазой и получают однкДНК, удваивают полученную однкДНК .с помощью обратной транскриптазы, полученную двунитевую кДНК последовательно обрабатьюают эн- донуклазой Нае II, фрагментом Кленоgg ва, ДНК полимеразой, а затем нуклеа- зой S( и получают кДНК, кодирукнцую бычий гормон роста с 26 по 191 аминокислоту со следующей нуклеотидной последовательностью;
S-ATGATGCCTCCAGGCCCCCGGACCTCCCTGCTCCT GCTTTCGCCCTGCTCTGCCTGCCGTGGAGTCAGGTG GTGGGCGCGTTCCC AGGCATGTGGTTGTCCGGGGTG TTTGCGAACGCTGTGCTCCGGGGTCAGCACCTGCAC
CAGCTGGGTGCTGAGACCTTGAAAGAGTTTGAG CGTAGCTACATCGGGGAGGGAGAGAGATACTGC ;ATCCAGAACACCGAGGTTGCCTTCTGCTTCT€C IGAAACCATGCCGGCGGCCACGGGCAAGAATGAG
GGCCAGCAGAAATGAGACTTGGAGCTGCTTCGC
ATCTCACTGCTCCTGATCCAGTCGTGGCTTGGG
GCCCTGCAGTTTCTCAGGAGAGTCTTCACC
AACAGCTTGGTGTTTGGGAGGTCGGAGCGТ
GTCTATGAGAAGCTGAAGGACCTGGAGGAA
GGCATGTTGGCCGTGATGGGGGAGCTGGAA
GATGG CAGC GGGCGGGG TGGG CAGATGCTC
AAGCAGACCTATGAGAAATTTGACACAAAC
ATGCGCAGTGACGAGGCGGTGCTCAAG
AACTACGGTqTGGTGTGGTGCTTCCGG
AAGGACCTGGATAAGACGGAGACGTAC
CTGAGGGTGATGAAGTGGCGCGGGTTC
GGGGAGGGCAGGTGTGGCTTGTAG-З ,
5
°
5
0
следующей обработкой эндонуклеазой S, и получением кДНК, кодирукядей гормон роста быка со следующей нуклео- тидной последовательностью
5 -GGGTTGGGAGCGATGTGGTTGTGCGGCCTGTTT GGGAAGGGTGTGCTGGGGGCTCAGCACCTGCAG GAGGTGGGTGCTGACAGGTTGAAAGAGTTl GAG CGTACGTAGATGCCGGAGGGACAGAGATAGTCC ATGGAGAAGAGCCAGGTTGCCTTGTGCTTGTGC.. GAAAGCATCCCGGCCGCCACGGGCAAGAATGAG GCCCAGGAGAAATCAGACTTGGAGCTGCTTGGG ATGTCACTGCTGCTGATCGAGTCGTGGCTTGGGCCCGTG CAGTTTCTCAGCAGAGTCTTGACCAACAGGTTG GTGTT GGAGCTGGGACCGTGTCTATGAGAAG ,GTGAAGGACCTGGAGGAAGGGATCTTGGCCCTG ATGCGGGAGGTGGAAGATGGGACCCCCCGCGTC GGGGAGATCGTCAAGCAGACGTATGAGAAATTT GAGACAAACATGCGCAGTGACGAGGGCGTG CTCAAGAACTACGGTCTGCTGTCCTGGTTCCGGAAG GAGGTGGATAAGAGGGAGACGTAGGTGAGGGTGATG AAGTGGGGGCGGTTGGGGGAGGGGAGGTGTGGCTTGTAG
Реферат
Изобретение относится к области генной инженерии и касается способа получения рекомбинантной плазмидной ДНК, кодирующей бычий гормон роста. Рекомбинантная плазмидная ДНК, кодирующая гормон роста быка, получена путем выделения мРНК из гипофизарных желез быков с последующим получением кДНК и клонированием полученной кДНК в PBR 322. 1 з.п.ф-лы, 1 табл.
Формула
