Композиции и способы регуляции клеточной активности nk - RU2006102960A

Реферат

1. Антитело, которое связывается, по крайней мере, с двумя различными продуктами гена ингибиторного KIR рецептора, где названное антитело способно нейтрализовать опосредованное KIR ингибирование клеточной цитотоксичности NK клеток, экспрессирующих, по крайней мере, один из названных двух различных ингибиторных KIR рецепторов человека.

2. Антитело по п.1, где названное антитело не является NKVSF1.

3. Антитело по п.1, где названное антитело связывается с KIR2DL1 и KIR2DL2/3.

4. Антитело по п.3, где названное антитело ингибирует связывание молекулы HLA-C аллеля, имеющей остаток лизина в положении 80, с человеческим KIR2DL1 рецептором, и связывание молекулы HLA-C аллеля, имеющей остаток аргинина в положении 80, с человеческими KIR2DL2/3 рецепторами.

5. Антитело по п.4, где названное антитело связывается в основном с тем же эпитопом, что и моноклональное антитело DF200.

6. Антитело по п.5, где названное антитело является моноклональным антителом или фрагментом моноклонального антитела.

7. Антитело по п.6, где названное антитело является моноклональным антителом DF200 или его фрагментом.

8. Антитело по п.1, где названное антитело является фрагментом антитела, выбранным из Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab')₂, Fv, диа-антителом, одноцепочечным фрагментом антитела или мультиспецифичным антителом, включающим ряд различных фрагментов антитела.

9. Антитело по п.6, где названное антитело является гуманизированным антителом или химерным антителом.

10. Гибридома, включающая (а) В-клетку из хозяина млекопитающего, не являющегося человеком, который был иммунизирован антигеном, включающим эпитоп, представленный на ингибиторном KIR полипептиде, слитую с (б) иммортализованной клеткой, где названная гибридома производит моноклональное антитело, которое связывается, по крайней мере, с двумя различными продуктами гена ингибиторного KIR рецептора и способно нейтрализовать опосредованное KIR ингибирование клеточной цитотоксичности NK в популяции NK клеток, экспрессирующих названные, по крайней мере, два различных продукта гена ингибиторного KIR рецептора.

11. Гибридома по п.10, где названная гибридома не производит моноклональное антитело NKVSF1.

12. Гибридома по п.10, где названное антитело связывается с KIR2DL1 HKIR2DL2/3.

13. Гибридома по п.12, где названная гибридома производит антитело, которое ингибирует связывание молекулы HLA-c аллеля, имеющей остаток лизина в положении 80, с рецептором KIR2DL1 человека, и связывание молекулы HLA-C аллеля, имеющей остаток аргинина в положении 80, с рецептором KIR2DL2/3 человека.

14. Гибридома по п.12, где названная гибридома производит антитело, которое связывается главным образом с тем же эпитопом, что и моноклональное антитело DF200, производимое гибридомой DF200.

15. Гибридома по п.14, где названная гибридома является гибридомой DF200.

16. Способ производства антитела, которое связывается, по крайней мере, с двумя различными продуктами гена ингибиторного KIR рецептора, где названное антитело способно нейтрализовать опосредованное KIR ингибирование клеточной цитотоксичности NK в популяции NK клеток, экспрессирующих названные, по крайней мере, два различных продукта гена ингибиторного KIR рецептора, названный метод включает стадии:

(а) иммунизация млекопитающего (не-человека) иммуногеном, включающим ингибиторный KIR полипептид;

(б) приготовление антител из названного иммунизированного животного, где названные антитела связываются с названным KIR полипептидом,

(в) селекция антител (б), которые перекрестно реагируют, по крайней мере, с двумя различными продуктами гена ингибиторного KIR рецептора, и

(г) селекция антител (в), которые способны нейтрализовать опосредованное KIR ингибирование клеточной цитотоксичности NK в популяции NK клеток, экспрессирующих названные, по крайней мере, два различные продукта гена ингибиторного KIR рецептора, где порядок стадий (в) и (г) необязательно обращен.

17. Способ по п.16, где названное антитело, выбранное на стадии 1(в) или (г) не является антителом NKVSF1.

18. Способ по п.16, где антитело, приготовленное на стадии (б), является моноклональным антителом.

19. Способ по п.16, где ингибиторный KIR полипептид, использованный для иммунизации, является KIR2DL 1 полипептидом, и антитела, выбранные на стадии (в), перекрестно реагируют, по крайней мере, с KIR2DL и KIR2DL2/3.

20. Способ по п.19, где названное антитело, выбранное на стадии (в) ингибирует связывание молекулы HLA-c аллеля, имеющей остаток лизина в положении 80, с человеческим KIR2DL1 рецептором, и связывание молекулы HLA-C аллеля, имеющей остаток аргинина в положении 80, с человеческим KIR2DL2/3 рецепторами.

21. Способ по п.16, где антитела, выбранные на стадии (г), вызывают, по крайней мере, 50% усиление цитотоксичности NK.

22. Способ по п.16, где названное антитело или фрагмены антитела связываются главным образом с тем же эпитопом, что и моноклональное антитело DF200.

23. Способ по п.18, включающий дополнительную стадию приготовления фрагментов выбранных моноклональных антител.

24. Способ производства антитела, которое связывается, по крайней мере, с двумя различными продуктами гена ингибиторного KIR рецептора, где названное антитело способно нейтрализовать опосредованное KIR ингибирование клеточной цитотоксичности NK в популяции NK клеток, экспрессирующих, по крайней мере, два названных различных продукта гена ингибиторного KIR-рецептора, названный метод включает стадии:

(а) селекция из библиотеки или набора моноклонального антитела или фрагмента антитела, которое перекрестно реагирует, по крайней мере, с двумя различными продуктами гена ингибиторного KIR2DL рецептора человека, и

(б) селекцию антитела (а), которое способно нейтрализовать опосредованное KIR ингибирование клеточной цитотоксичности NK в популяции NK клеток, экспрессирующих названные, по крайней мере, два различных продукта гена ингибиторного KIR2DL рецептора человека.

25. Способ по п.24, где названное антитело выбрано на стадии (б) не является NKVSF1.

26. Способ по п.24, где названное антитело, выбранное на стадии (б), ингибирует связывание молекулы HLA-c аллеля, имеющей остаток лизина в положении 80, с человеческим KIR2DL1 рецептором, и связывание молекулы HLA-C аллеля, имеющей остаток аргинина в положении 80, с человеческими KIR2DL2/3 рецепторами.

27. Способ по п.24, где антитело, выбранное на стадии (б), вызывает, по крайней мере, 50% усиление цитотоксичности NK.

28. Способ по п.24, где названное антитело связывается главным образом с тем же эпитопом, что и моноклональное антитело DF200.

29. Способ по п.24, включающий дополнительную стадию приготовления фрагментов выбранных моноклональных антител.

30. Способ производства антитела, которое связывается, по крайней мере, с двумя различными продуктами гена ингибиторного KIR рецептора человека, где названное антитело способно нейтрализовать опосредованное KIR ингибирование клеточной цитотоксичности NK в популяции NK клеток, экспрессирующих названные, по крайней мере, два различных продукта гена ингибиторного KIR рецептора человека, названный способ включает стадии:

(а) культивирование гибридомы по любому одному из пп.10-15 в условиях, которые вызывают экспрессию названного моноклонального антитела, и

(б) выделение названного моноклонального антитела из названной гибридомы.

31. Способ по п.30, включающий дополнительную стадию приготовления фрагментов названного моноклонального антитела.

32. Способ производства антитела, которое связывается, по крайней мере, с двумя различными продуктами гена ингибиторного KIR рецептора человека, где названное антитело способно нейтрализовать опосредованное KIR ингибирование клеточной цитотоксичности NK в популяции NK клеток, экспрессирующих названные, по крайней мере, два различных продукта гена ингибиторного KIR рецептора человека, названный способ включает стадии:

(а) выделение из гибридомы любого одного из пп.10-15 ДНК, кодирующей названное моноклональное антитело;

(б) необязательно модификация названной ДНК так, что она кодирует модифицированное или преобразованное антитело, выбранное из гуманизированного антитела, химерного антитела, одноцепочечного антитела или иммунореактивного фрагмента антитела;

(в) встраивание названной ДНК или модифицированной ДНК в экспрессионный вектор, где названное антитело или фрагмент антитела способно быть экспрессированным, когда названный экспрессионный вектор представлен в хозяине, растущем в подходящих условиях;

(г) трансфекция клетки хозяина названным экспрессионным вектором, где названная клетка хозяина не производит иначе иммуноглобулиновый белок;

(д) культивирование названной трансфицированной клетки хозяина в условиях, которые вызывают экспрессию названного антитела или фрагмента антитела; и

(е) выделение антитела или фрагмента антитела, производимого названной трансфицированной клеткой хозяина.

33. Фармацевтическая композиция, включающая антитело, которое связывается, по крайней мере, с двумя различными продуктами гена ингибиторного KIR рецептора человека, где названное антитело способно нейтрализовать опосредованное KIR ингибирование клеточной цитотоксичности NK в популяции NK клеток, экспрессирующих, по крайней мере, один из двух названных различных ингибиторных KIR рецепторов, названное антитело, будучи представленным в количестве, эффективном для обнаруживаемого усиления клеточной цитотоксичности NK у пациента или в биологическом образце, включающем NK клетки; и фармакологически приемлемый носитель или эксципиент.

34. Композиция по п.33, дополнительно включающая терапевтический агент, выбранный из иммуномодуляторного агента, гормонального агента, химиотерапевтического агнета, анти-ангиогенного агента, апоптотического агента, второго антитела, которое связывается с и ингибирует ингибиторный KIR рецептор, анти-инфекционного агента и направляющего агента или вспомогательного соединения.

35. Композиция по п.34, где названный иммуномодуляторный агент выбран из IL-1альфа, IL-1бета, IL-2, IL-3, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-11, IL-12, IL-13, IL-15, IL-21, TGF-бета, GM-CSF, M-CSF, G-CSF, TNF-альфа, TNF-бета, LAF, TCGF, BCGF, TRF, BAF, BDG, MP, LIF, OSM, TMF, PDGF, IFN-альфа, IFN-бета или IFN-гамма.

36. Композиция по п.34, где названный химиотерапевтический агент выбран из алкилирующих агентов, антиметаболитов, цитотоксических антибиотиков, адриамицина, дактиномицина, митомицина, карминомицина, дауномицина, доксорубицина, тамоксифена, таксола, таксотера, винкристина, винбластина, винорелбина, этопозида (VP-16), 5-фторурацила (5FU), цитозин арабинозида, циклофосфамида, тиотепа, метотрексата, камптотецина, актиномицина D, митомицина С, цисплатина (CDDP), аминоптерина, комбретастатина(ов), других винка алкалоидов и их производных или пролекарств.

37. Композиция по п.34, где названный гормональный агент выбран из леупрорелина, гозерелина, трипторелина, бузерелина, тамоксифена, торемифена, флутамида, нилутамида, ципротерон бикалутамид анастрозола, экземестана, летрозола, фадрозола, медрокси, хлормадинона, мегестрола, других агонистов LHRH, других анти-эстрогенов, других анти-андрогенов, других ингибиторов ароматазы и других прогестагенов.

38. Композиция по п.34, где названный дополнительный агент выбран из фенотиазинов, замещенных бензамидов, антигистаминов, бутирофенонов, кортикостероидов, бензодиазепинов, каннабиноидов, золендроновой (zolendronic) кислоты, памидроновой (pamidronic) кислоты, эритропоэтина, G-CSF, филгастима, ленограстима, дарбепоэтина, других анти-эметиков, других антагонистов серотонина, других бифосфонатесоров, других гематопоэтических ростовых факторов.

39. Композиция по п.34, где названные анти-апоптотические агенты представляют собой антисмысловую нуклеотидную последовательность PHKi, siPHK, или малую молекулу химического соединения, которое ингибируют экспрессию гена, выбранного из bcr-abl, bcl-2, Bck-x1, Mcl-1, Bak, A1 или А20.

40. Композиция по п.34, где названный анти-ангиогенный агент выбран из нейтрализующих антител, антисмысловой РНК, siPHK, PHKi, РНК аптамеров или рибозимов, направленных против гена, кодирующего VEGF, гена, кодирующего VEGF рецептор, VEGF или VEGF рецептор; или варианты VEGF, обладающие антагонистическими свойствами против VEGF.

41. Композиция по п.34, где названное второе антитело, которое связывается с и ингибирует ингибиторный KIR рецептор, является антителом или его производным, или фрагментом, которое связывается с эпитопом ингибиторного KIR рецептора, отличающимся от эпитопа, связанного названным антителом, которое связывается с общей детерминантой, представленной, по крайней мере, на двух различных продуктах гена ингибиторного KIR рецептора человека.

42. Способ усиления клеточной активности NK у пациентов, нуждающихся в этом, включающий стадию введения названному пациенту композиции по п.33.

43. Способ по п.42, где названный пациент страдает от рака, другого пролиферативного расстройства, инфекционного заболевания или иммунного расстройства.

44. Способ по п.43, где названный пациент страдает от скваматозной клеточной карциномы, лейкемии, острой лимфоцитной лейкемии, острой лимфобластной лейкемии, лимфомы В-клеток, лимфомы Т-клеток лимфомы Ходжкина, не-Ходжкиновской лимфомы, опушенной клеточной лимфомы, лимфомы Буркетса, острой или хронической миелогенной лейкемии, промиелоцитной лейкемии, фибросаркомы, рабдомиосаркомы; меланомы, семиномы, тератокарцитомы, нейробластомы, глиомы, астроцитомы, шванном; фибросаркомы, рабдомиосаркомы, остеосаркомы, меланомы, ксеродерма пигментозум, кератоакантомы, семиномы, тироидного фолликулярного рака, тератокарциномы, других карцином мочевого пузыря, молочной железы, кишечника, почки, печени, легкого, яичника, простаты, поджелудочной железы, желудка, шейки матки, щитовидной железы или кожи, других гематопоэтических опухолей лимфоидных клонов, других гематопоэтических опухолей миелоидного происхождения, других опухолей мезенхимальной природы, других опухолей центральной или периферической нервной системы или других опухолей мезенхимальной природы.

45. Способ по п.44, где названный пациент страдает от гематопоэтической опухоли лимфоидного происхождения.

46. Способ по п.45, где названная опухоль выбрана из Т-пролимфоцитной лейкемии (T-PLL), включая мелкоклеточный и мозговой клеточный тип; большую гранулярную лимфоцитную лейкемию (LGL) Т-клеточного типа, синдром Цезаря (SS); острую Т-клеточную лейкемийную лимфому (ATLL), a/d T-NHL гепатоселезеночную лимфому; периферическую пост-тимусную Т-клеточную лимфому плеоморфического или иммунобластического подтипа; ангио-иммунобластическую Т-клеточную лимфому; ангиоцентрическую (назальную) Т-клеточную лимфому; анапластическую (Ki 1+) крупноклеточную лимфому; интестинальную Т-клеточную лимфому; Т-лимфобластическую лейкемию; или лимфому/лейкемию (T-LbLy/TALL).

47. Способ по п.42, где названный пациент страдает от пролиферативного расстройства, выбранного из гиперплазии, фиброза, ангиогенеза, псориаза, атеросклероза, стеноза или рестеноза после ангиопластики и других заболеваний, характеризующихся пролиферацией в гладких мышцах кровеносных сосудов.

48. Способ по п.42, где названный пациент страдает от инфекционного заболевания, вызванного вирусом, выбранным из вируса гепатита типа А, вируса гепатита типа В, вируса гепатита типа С, гриппа, ветряной оспы, аденовируса, симплексного вируса герпеса типа I (HSV-1), симплексного вируса герпеса типа 2 (HSV-2), вируса чумы рогатого скота, риновируса, эховируса, ротавируса, респираторного синтициального вируса, вируса папилломы, цитомегаловируса, эхиновируса, арбовируса, хунтавируса, вируса кокксаки, вируса свинки, вируса кори, вируса краснухи, вируса полимиелита или вируса иммунодефицита человека типа 1 или типа 2 (HIV-1, HIV-2).

49. Способ по п.42, где названный пациент страдает от инфекционного заболевания, вызванного бактерией, простейшим или паразитом, выбранным из Staphylococcus, S.pyogenes, Enterococcus, Bacillus anthracis, Lactobacillus, Listeria, Corynebecterium diphteria, G. vaginalis; Nocardia; Streptomyces; Thermoactinomyces vulgaris; Treponema; Camplyobacter; Raeruginosa; Legionella; N.meningitides; F. Meningosepticum; F. Adoratum, Brucella; B. pectussis; B. bronchiseptica; E.coli; Klebsiella; Enterobacter; S. Marcescens; S.liquefaciens; Edwardsiella; P. Mirabilis; P. Vulgaris; Streptobacillus; R. Fickettsfi; C. psittaci; C. trachornatis; M. tuberculosis, M. intracellulare, M. folluitum; M. laprae, M. avium; M. bovis; M. africanurn; M. kansasii; M. intracellulare; M. lepraernurium; Nocardia; других Streptococcus, других Bacillus, других Gardnerella, других Pseudomonas, других Neisseria, других Flavobacteria, других Bordetella, других Escherichia, других Serratia, других Proteus, других Rickettsiaceae, других Chlamydia, других Micobacterium, лейшманий, кокцидий, трипаносом, хламидий или рикеттсий.

50. Способ по п.42, включающий дополнительную стадию введения названному пациенту подходящего дополнительного терапевтического агента, выбранного из иммуномодуляторного агента, гормонального агента, химиотерапевтического агента, анти-ангиогенного агента, апоптотического агента, второго антитела, которое связывается с и ингибирует ингибиторный KIR рецепторо, анти-инфекционный агент, направляющий агент или вспомогающее соединение, где названный дополнительный терапевтический агент вводится названному пациенту как единичная форма дозировки с названным антителом, или как отдельная форма дозировки.

51. Антитело по п.1, где названное антитело конъюгировано или ковалентно связано с токсином, детектируемой структурой или твердой подложкой.

52. Способ выявления присутствия NK клеток, несущих на их клеточной поверхности ингибиторный KIR, в биологическом образце или живом организме, названный способ включает стадии:

а) контактирование названного биологического образца или живого организма с антителом п.51, где названное антитело конъюгировано или ковалентно связано с детектируемой структурой, и

б) детектирование присутствия названного антитела в названном биологическом образце или живом организме.

53. Способ очистки из образца NK клеток, несущих ингибиторный KIR на их клеточной поверхности, включающий стадии

а) контактирование названного образца с антителом п.51 в условиях, которые позволяют названным NK клеткам, несущим ингибиторный KIR на их клеточной поверхности, связываться с названным антителом, где названное антитело конъюгировано или ковалентно связано с твердой подложкой, и

б) элюирование названных связанных NK клеток из названного антитела, конъюгированного или ковалентно с твердой подложкой.

54. Композиция, включающая антитело, которое связывается с общей детерминантой, представленной, по крайней мере, на двухразличных продуктах ингибиторного KIR рецептора человека, где названное антитело способно нейтрализовать опосредованное KIR ингибирование клеточной цитотоксичности NK в NK клетках, экспрессирующих, по крайней мере, один из названных двух различных ингибиторных KIR рецепторов человека, где названное антитело включено в липосому.

55. Композиция по п.54, где дополнительная субстанция, выбранная из молекулы нуклеиновой кислоты для доставки генов для генной терапии; молекулы нуклеиновой кислоты для доставки антисмысловой РНК, PHKi или siPHK для подавления гена в NK клетке; или токсина или лекарства для направленного уничтожения NK клеток, дополнительно включена в названную липосому.