Модифицированные рекомбинантные вакцинирующие вирусы и другие микроорганизмы и их применение - RU2006100679A

Реферат

1. Рекомбинантный вирус коровьей оспы, содержащий модифицированный ген тимидин-киназы (ТК) и/или модифицированный ген НА и модифицированный ген F3 или нарушенный локус F3.

2. Рекомбинантный вирус коровьей оспы по п.1, отличающийся тем, что (а) ген F3 и (b) ген ТК и/или ген НА инактивированы.

3. Рекомбинантный вирус коровьей оспы по п.1 или 2, отличающийся тем, что, по крайней мере, ген F3 инактивирован вставкой в него гетерологичной нуклеиновой кислоты.

4. Рекомбинантный вирус коровьей оспы по п.2, отличающийся тем, что ген F3 и ген ТК инактивированы вставкой гетерологичной нуклеиновой кислоты.

5. Рекомбинантный вирус коровьей оспы по любому из пп.1, 2 и 4, отличающийся тем, что вирус коровьей оспы относится к штамму Lister.

6. Рекомбинантный вирус по п.5, отличающийся тем, что штамм представляет собой штамм LIVP.

7. Рекомбинантный вирус коровьей оспы по любому из пп.1, 2 и 4, отличающийся тем, что модификация гена F3 осуществлена по сайту NotI гена F3 или в соответствующем локусе.

8. Рекомбинантный вирус коровьей оспы по п.7, отличающийся тем, что модификация осуществлена по положению 35 гена F3 или по положению 1475 внутри фрагмента HindIII F ДНК вируса коровьей оспы штамма LIVP.

9. Рекомбинантный вирус коровьей оспы по любому из пп.1, 2 и 4, отличающийся тем, что ген ТК, НА и/или F3 содержит вставку гетерологичной нуклеиновой кислоты, которая кодирует белок.

10. Рекомбинантный вирус коровьей оспы по п.9, отличающийся тем, что гетерологичная нуклеиновая кислота включает регуляторную последовательность, оперативно связанную с нуклеиновой кислотой, кодирующей белок.

11. Рекомбинантный вирус коровьей оспы по п.10, отличающийся тем, что регуляторная последовательность содержит ранний/поздний промотор р7.5 вируса коровьей оспы.

12. Рекомбинантный вирус коровьей оспы по п.10, отличающийся тем, что регуляторная последовательность содержит ранний/поздний промотор pE/L вируса коровьей оспы.

13. Рекомбинантный вирус коровьей оспы по п.9, отличающийся тем, что гетерологичная нуклеиновая кислота кодирует определяемый белок или белок, способный индуцировать определяемый сигнал.

14. Клетка-хозяин, содержащая рекомбинантный вирус коровьей оспы по любому из пп.1, 2 и 4.

15. Опухолевая клетка, содержащая рекомбинантный вирус коровьей оспы по любому из пп.1, 2 и 4.

16. Фармацевтическая композиция, содержащая рекомбинантный вирус коровьей оспы по любому из пп.1, 2 и 4 в фармацевтически приемлемом носителе.

17. Фармацевтическая композиция по п.16, отличающаяся тем, что она составлена для систематического применения.

18. Фармацевтическая композиция по п.16, отличающаяся тем, что она составлена для внутривенного введения или составлена в носителе.

19. Комбинация, в которую входит композиция, содержащая фармацевтическую композицию по п.16, и противораковый агент.

20. Комбинация по п.19, отличающаяся тем, что противораковый агент представляет собой химиотерапевтическое соединение.

21. Комбинация по п.20, отличающаяся тем, что противораковый агент выбран из числа алкилирующих агентов, антиметаболитов, платиновых координационных комплексов, антрацендионов, замещенных производных мочевины, производных метилгидразина, адренокортикальных супрессантов и противораковых полисахаридов.

22. Комбинация по п.19, отличающаяся тем, что противораковый агент выбран из числа следующих: ганцикловир, 5-фторурацил, 6-метилпурин-дезоксирибозид, цефалоспорин-доксорубицин, 4-[(2-хлорэтил)(2-мезилоксиэтил)амино]бензоил-L-глутаминовая кислота, ацетоминофен, индол-3-уксусная кислота, СВ1954, 7-этил-10-[4-(1-пиперидино)-1-пиперидино]карбонилоксикампототецин, бис-(2-хлорэтил)амино-4-гидроксифениламинометанон 28, 1-хлорметил-5-гидрокси-1,2-дигидро-3Н-бенз[е]индол, эпирубицин-глюкуронид, 5'-дезокси-5-фторуридин, цитозин-арабинозид и линамарин.

23. Комбинация по п.20, отличающаяся тем, что соединение и вирус содержатся отдельно в двух композициях.

24. Комбинация по п.20, отличающаяся тем, что соединение и вирус содержатся в одной композиции.

25. Способ уничтожения иммунопривилегированных клеток у животного, в котором вводят животному фармацевтическую композицию по п.16, при этом вирус накапливается в иммунопривилегированных клетках, опосредуя, таким образом, аутоиммунизацию, что приводит к уничтожению клеток или уменьшению их количества.

26. Способ по п.25, отличающийся тем, что иммунопривилегированные клетки содержат опухолевые клетки.

27. Применение фармацевтической композиции по п.16 для уничтожения иммунопривилегированных клеток или тканей.

28. Рекомбинантный поксвирус, содержащий модифицированный ген ТК и НА и модифицированный ген F3 или локус, который соответствует гену F3 у вируса коровьей оспы.

29. Применение рекомбинантного вируса по любому из пп.1, 2, 4 и 28 для составления фармацевтической композиции для генной терапии или вакцинной терапии.

30. Применение по п.29, отличающееся тем, что генная терапия представляет собой генную терапию рака.

31. Применение рекомбинантного вируса по любому из пп.1, 2, 4 и 28 для составления лекарства для уничтожения иммунопривилегированных клеток или тканей у животного, при этом вирус накапливается в иммунопривилегированных клетках, вирус не накапливается до токсических уровней в органах и тканях, которые не содержат иммунопривилегированные клетки или ткани.

32. Применение комбинации по п.19 для лечения рака.

33. Применение комбинации по п.19 для составления лекарства для лечения рака.

34. Способ получения полипептида или РНК или соединения-продукта, в котором животному с опухолью вводят микроорганизм, содержащий нуклеиновую кислоту, кодирующую полипептид или РНК или метаболический путь для выработки соединения-продукта, при этом микроорганизм накапливается в иммунопривилегированных клетках, и микроорганизм не накапливается до токсических уровней в органах и тканях, которые не содержат иммунопривилегированные клетки или ткани, из животного извлекают опухолевую ткань и из опухоли выделяют полипептид или РНК или соединение.

35. Способ по п.34, отличающийся тем, что микроорганизм представляет собой эукариотическую клетку, прокариотическую клетку или вирус.

36. Способ по п.34 или 35, отличающийся тем, что микроорганизм представляет собой цитоплазматический вирус или ослабленную бактерию.

37. Способ по п.36, отличающийся тем, что бактерия выбрана из числа ослабленных штаммов vibrio, E.coli, listeria, salmonella и streptococcus.

38. Способ по любому из п.34 или 35, отличающийся тем, что животное не является человеком.

39. Способ одновременного получения полипептида, молекулы РНК или клеточного соединения и антитела, которое специфично реагирует с полипептидом, молекулой РНК или соединением, в котором а) животному с опухолью вводят микроорганизм, при этом микроорганизм экспрессирует или вырабатывает соединение, полипептид или молекулу РНК, и b) из сыворотки животного выделяют антитело.

40. Способ по п.39, отличающийся тем, что дополнительно после стадии а) содержит стадии, на которых из животного извлекают опухолевую ткань и из опухолевой ткани выделяют полипептид, молекулу РНК или клеточное соединение.

41. Способ по п.39 или 40, отличающийся тем, что животное не является человеком.

42. Способ по п.39 или 40, отличающийся тем, что микроорганизм является бактерией, клеткой млекопитающего или вирусом.

43. Способ по п.39 или 40, отличающийся тем, что микроорганизм накапливается в иммунопривилегированных клетках, и микроорганизм не накапливается до токсических уровней в органах и тканях, которые не содержат иммунопривилегированные клетки или ткани.

44. Способ по п.39 или 40, отличающийся тем, что микроорганизм представляет собой вирус, выбранный из числа следующих: поксвирусы, вирусы герпеса, аденовирусы и вирус Синдбис.

45. Способ по п.39 или 40, отличающийся тем, что микроорганизм представляет собой цитоплазматический вирус или эукариотическую клетку.

46. Способ по п.45, отличающийся тем, что клетка является иммунной клеткой.

47. Способ по п.45, отличающийся тем, что клетка является стволовой клеткой.

48. Способ по любому из пп.34, 35, 39 и 40, отличающийся тем, что микроорганизм содержит молекулу ДНК, которая кодирует конструкцию с репортерным геном.

49. Способ по п.48, отличающийся тем, что конструкция с репортерным геном кодирует определяемый белок или белок, который индуцирует или дает определяемый сигнал.

50. Способ по п.49, отличающийся тем, что белок является люциферазой или флуоресцентным белком.

51. Способ по п.48, отличающийся тем, что конструкция с репортерным геном кодирует систему, генерирующую биолюминесценцию, и, в качестве опции, кодирует флуоресцентный белок.

52. Способ по любому из пп.34, 35, 39 и 40, отличающийся тем, что микроорганизм представляет собой клетку млекопитающего.

53. Способ по любому из пп.34, 35, 39 и 40, отличающийся тем, что микроорганизм является бактерией.

54. Способ по любому из пп.34, 35, 39 и 40, отличающийся тем, что микроорганизм является вирусом.

55. Способ по п.54, отличающийся тем, что вирус представляет собой вирус коровьей оспы.

56. Способ по п.55, отличающийся тем, что вирус коровьей оспы является вирусом коровьей оспы штамма LIVP.

57. Способ по п.53, отличающийся тем, что бактерия представляет собой ослабленную бактерию Vibrio cholerae.

58. Способ по любому из пп.34, 35, 39 и 40, отличающийся тем, что опухоль является солидной опухолью.

59. Способ уничтожения иммунопривилегированных клеток или тканей у животного, в котором вводят, по крайней мере, два микроорганизма, при этом микроорганизмы вводят одновременно, последовательно или поочередно, при этом микроорганизмы накапливаются в иммунопривилегированных клетках, в результате чего животное подвергается аутоиммунизации против иммунопривилегированных клеток или тканей.

60. Способ по п.59, отличающийся тем, что иммунопривилегированные клетки или ткани включают опухолевые клетки.

61. Применение, по крайней мере, двух микроорганизмов для составления лекарства для уничтожения иммунопривилегированных клеток или тканей, при этом микроорганизмы накапливаются в иммунопривилегированных клетках, в результате чего животное подвергается аутоиммунизации против иммунопривилегированных клеток или тканей, и, по крайней мере, один из микроорганизмов является рекомбинантным вирусом по любому из пп.1, 2, 4 и 28.

62. Применение по п.61, отличающееся тем, что иммунопривилегированные клетки или ткани включают опухолевые клетки.

63. Комбинация, содержащая, по крайней мере, два микроорганизма, составленная для введения животному для уничтожения иммунопривилегированных клеток или тканей, причем один из микроорганизмов представляет собой рекомбинантный вирус по любому из пп.1, 2, 4 и 28.

64. Комбинация по п.63, отличающаяся тем, что иммунопривилегированные клетки или ткани содержат опухолевые клетки.

65. Комбинация по п.63, отличающаяся тем, что микроорганизмы содержатся в отдельных композициях.

66. Набор, содержащий комбинацию по п.63, в котором каждый микроорганизм, содержащийся в композиции, составлен и упакован для введения в виде одной дозы.

67. Способ получения антител к продуктам, кодируемым гетерологичной нуклеиновой кислотой, в иммунопривилегированных клетках или тканях, в котором животному, содержащему иммунопривилегированные клетки или ткани, вводят микроорганизм, содержащий нуклеиновую кислоту, кодирующую выбранный белок или РНК, и из крови или сыворотки животного выделяют антитела к белку или РНК.

68. Способ по п.67, отличающийся тем, что животное не является человеком.

69. Способ по п.67, отличающийся тем, что животное является человеком.

70. Способ по любому из пп.67-69, отличающийся тем, что иммунопривилегированные клетки или ткани содержат опухолевые клетки.

71. Способ по любому из пп.67-69, отличающийся тем, что продукты, вырабатываемые в иммунопривилегированных клетках, содержат опухолевые антигены.

72. Способ по любому из пп.67-69, отличающийся тем, что микроорганизм представляет собой эукариотическую клетку, бактерию или вирус.

73. Способ по любому из пп.67-69, отличающийся тем, что микроорганизм представляет собой клетку млекопитающего.

74. Способ по любому из пп.67-69, отличающийся тем, что микроорганизм представляет собой ослабленный цитоплазмический вирус.

75. Способ по любому из пп.67-69, отличающийся тем, что микроорганизм представляет собой ослабленный поксвирус.

76. Способ по любому из пп.67-69, отличающийся тем, что микроорганизм представляет собой вирус коровьей оспы.

77. Способ по п.76, отличающийся тем, что вирус представляет собой вирус штамма Lister.

78. Способ по п.77, отличающийся тем, что вирус представляет собой вирус штамма LIVP.

79. Способ по п.74, отличающийся тем, что вирус содержит вставку в гене F3 или локус, соответствующий локусу F3 штамма LIVP (SEQ ID No. 34).

80. Способ ингибирования роста иммунопривилегированных клеток или тканей в организме субъекта, в котором вводят субъекту модифицированный микроорганизм, который кодирует определяемый генный продукт, причем модифицированный микроорганизм накапливается в иммунопривилегированных тканях или клетках, и вводят субъекту терапевтическое вещество, которое понижает патогенность микроорганизма, осуществляют мониторинг присутствия определяемого генного продукта в организме субъекта до тех пор, пока определяемый генный продукт не станет присутствовать в основном только в иммунопривилегированных тканях или клетках субъекта, и прекращают или временно приостанавливают введение терапевтического соединения, в результате чего увеличивается патогенность микроорганизма, и рост иммунопривилегированных клеток или тканей ингибируется.

81. Способ по п.80, отличающийся тем, что рост иммунопривилегированных клеток или тканей ингибируется за счет индукции или увеличения иммунного ответа на иммунопривилегированные клетки.

82. Способ по п.80, отличающийся тем, что терапевтическое соединение понижает экспрессию одного или более генов, кодируемых микроорганизмом, что вызывает клеточный лизис или апоптоз.

83. Терапевтический способ уничтожения иммунопривилегированных клеток или тканей у животного, в котором животному вводят вирус коровьей оспы по любому из пп.1, 2 и 4, при этом вирус коровьей оспы накапливается в иммунопривилегированных клетках, не накапливается в незатронутых органах и тканях, имеет пониженную токсичность для животного, и приводит к проницаемости клеточной мембраны иммунопривилегированных клеток, в результате чего организм животного вырабатывает аутоантитела к клеткам или продуктам клеток.

84. Способ по п.83, отличающийся тем, что незатронутые органы включают в себя яичники или яички.

85. Способ по п.83, отличающийся тем, что иммунопривилегированные клетки или ткани содержат опухолевые клетки.

86. Способ по п.83, отличающийся тем, что вирус коровьей оспы является вирусом штамма LIVP.

87. Способ по п.83, отличающийся тем, что вирус коровьей оспы содержит или экспрессирует терапевтический продукт.

88. Способ по п.87, отличающийся тем, что вирус коровьей оспы содержит нуклеиновую кислоту, кодирующую терапевтический продукт.

89. Способ по п.83, отличающийся тем, что аутоантитела содержат антитела к опухоли.

90. Применение комбинации по п.19 для лечения рака.

91. Применение комбинации по п.19 для составления лекарства для лечения рака.

92. Вакцина, содержащая рекомбинантный вирус коровьей оспы по любому из пп.1, 2 и 4.

93. Применение вакцины по п.92 для вакцинации против оспы.