Masp-2, комплемент-связывающий фермент и его применение - RU2003104524A

Реферат

1. Использование в значительной степени чистого полипептида, содержащего аминокислотные последовательности, полученные из протеазы серина-2, ассоциированной с маннан-связывающим лектином (MASP-2) (последовательность №2), или его функционального гомолога для получения фармацевтической композиции, при этом упомянутый функциональный гомолог является полипептидом, содержащим последовательность, которая не менее чем на 60% гомологична упомянутой ранее последовательности №2 и/или

i) способным ассоциироваться с маннан-связывающим лектином, и/или

ii) обладающим активностью протеазы серина, и/или

iii) обладающим активностью MASP-2 в ин-витро анализе для функции пути активации комплемента маннан-связывающим лектином.

2. Использование по п.1, отличающееся тем, что полипептид содержит последовательность, которая идентифицируется как последовательность №3.

3. Использование по п.1, отличающееся тем, что полипептид способен ассоциироваться с маннан-связывающим лектином.

4. Использование по п.1 или 2, отличающееся тем, что данный полипептид конъюгирует с меткой или токсином.

5. Использование по одному из предыдущих пунктов, отличающееся тем, что полипептид или его функциональный эквивалент содержит последовательность, которая идентифицируется как последовательность №1.

6. Использование по одному из предыдущих пунктов, отличающееся тем, что молекулярная масса полипептида составляет 20 кДа.

7. Использование по одному из пп.1-3, отличающееся тем, что полипептид содержит аминокислоты 30-444 последовательности №2.

8. Использование по одному из предыдущих пунктов, отличающееся тем, что молекулярная масса полипептида составляет 52 кДа.

9. Использование по одному из пп.1-3, отличающееся тем, что полипептид содержит аминокислоты 138-296 последовательности №2.

10. Использование по одному из предыдущих пунктов, отличающееся тем, что полипептид обладает активностью протеазы серина.

11. Использование по одному из предыдущих пунктов, отличающееся тем, что полипептид обладает активностью MASP-2 в ин-витро анализе для функции пути активации комплемента маннан-связывающим лектином.

12. Использование по п.10 или 11, отличающееся тем, что полипептид содержит аминокислоты 15-671 последовательности №3.

13. Использование по п.10 или 11, отличающееся тем, что полипептид содержит аминокислоты 15-296 последовательности №2.

14. Использование по п.10 или 11, отличающееся тем, что полипептид содержит аминокислоты 30-296 последовательности №2.

15. Использование по любому из пп.1-3, отличающееся тем, что полипептид способен конкурентно подавлять активность MASP-2.

16. Использование по п.15, отличающееся тем, что полипептид содержит фрагмент полипептида последовательности №2, при этом упомянутый полипептид является конкурентным ингибитором образования комплекса (маннан-связывающий лектин)/MASP-2.

17. Использование по п.15 или 16, отличающееся тем, что полипептид или его функциональный эквивалент содержит последовательность, которая идентифицируется как последовательность №3, отличающееся тем, что один аминокислотный остаток или большее число аминокислотных остатков на позиции 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18 или 19 замещены другим аминокислотным остатком.

18. Использование по п.17, отличающееся тем, что замещены хотя бы два аминокислотных остатка.

19. Использование по п.17, отличающееся тем, что arg на позиции 14 последовательности №3 замещена другой аминокислотой.

20. Использование по п.17, отличающееся тем, что arg на позиции 14 последовательности №3 замещена другой аминокислотой, выбранной из группы аминокислот, включающей малые незаряженные аминокислоты.

21. Использование по п.17, отличающееся тем, что arg на позиции 14 последовательности №3 замещена другой аминокислотой, выбранной из группы аминокислот, включающей gly и ala.

22. Использование по одному из предыдущих пунктов, отличающееся тем, что фармацевтическая композиция применяется для лечения инфекций.

23. Использование по п.22, отличающееся тем, что данные инфекции вызываются видом микроорганизмов.

24. Использование по п.23, отличающееся тем, что видом микроорганизмов является грибок.

25. Использование по п.23, отличающееся тем, что видом микроорганизмов являются дрожжи.

26. Использование по п.23, отличающееся тем, что видом микроорганизмов являются бактерии.

27. Использование по п.26, отличающееся тем, что данный вид бактерий резистентен хотя бы к одному антибиотику.

28. Использование по п.26, отличающееся тем, что данный вид бактерий обладает мультирезистентностью.

29. Использование по п.26, отличающееся тем, что данный вид бактерий является патогенным.

30. Использование по п.22, отличающееся тем, что данная инфекция является вирусной инфекцией.

31. Использование по п.30, отличающееся тем, что данный вирус является ретровирусом.

32. Использование по п.31, отличающееся тем, что данный ретровирус является Вирусом Иммунодефицита Человека.

33. Использование по п.1, отличающееся тем, что в состав фармацевтической композиции также входит хотя бы одна подъединица маннан-связывающего лектина, или хотя бы один олигомер маннан-связывающего лектина, содержащий хотя бы одну подъединицу маннан-связывающего лектина.

34. Использование по п.1, отличающееся тем, что в состав фармацевтической композиции также входит хотя бы одна подъединица маннан-связывающего лектина, или хотя бы один олигомер маннан-связывающего лектина, содержащий хотя бы одну подъединицу маннан-связывающего лектина для изготовления медикамента с целью получения набора составляющих частей.

35. Использование по п.33 или 34, отличающееся тем, что упомянутый олигомер выбирается из группы олигомеров, в состав которой входят тетрамеры, пентамеры и/или гексамеры маннан-связывающего лектина.

36. Использование по любому из п.33-35, отличающееся тем, что фармацевтическая композиция применяется для лечения инфекций с содержанием маннан-связывающего лектина в сыворотке индивидуума ниже 500 нг/мл.

37. Использование по любому из п.33-35, отличающееся тем, что фармацевтическая композиция применяется для лечения инфекций с содержанием маннан-связывающего лектина в сыворотке индивидуума ниже 100 нг/мл.

38. Использование по любому из п.33 по 35, отличающееся тем, что фармацевтическая композиция применяется для лечения инфекций с содержанием маннан-связывающего лектина в сыворотке индивидуума ниже 50 нг/мл.

39. Полипептид или его функциональный гомолог с аминокислотной последовательностью, которая идентифицируется как последовательность №1, отличающийся тем, что упомянутый гомолог содержит аминокислотную последовательность, которая не менее чем на 60% гомологична последовательности №1.

40. Полипептид или его функциональный гомолог с аминокислотной последовательностью из остатков 30-444 последовательности №2, отличающийся тем, что упомянутый гомолог содержит аминокислотную последовательность, которая не менее, чем на 60% гомологична последовательности №2.

41. Полипептид по п.40, отличающийся тем, что данный полипептид содержит аминокислотную последовательность из остатков 30-296 последовательности №2 или ее фрагмент или варианты.

42. Полипептид по п.40, отличающийся тем, что данный полипептид содержит аминокислотную последовательность из остатков 138-296 последовательности №2 или ее фрагмент или варианты.

43. Полипептид или его функциональный гомолог с аминокислотной последовательностью из остатков 15-671 последовательности №3, отличающийся тем, что упомянутый гомолог содержит аминокислотную последовательность, которая не менее, чем на 60% гомологична последовательности №3.

44. Полипептид или его функциональный гомолог с аминокислотной последовательностью из остатков 16-296 последовательности №2, отличающийся тем, что упомянутый гомолог содержит аминокислотную последовательность, которая не менее, чем на 60% гомологична последовательности №2.

45. Полипептид, который является конкурентным ингибитором образования комплекса (маннан-связывающий лектин)/MASP-2, при этом упомянутый полипептид содержит аминокислотную последовательность, которая не менее, чем на 60% гомологична последовательности, которая идентифицируется как последовательность №3.

46. Полипептид или его функциональный гомолог по п.45, который содержит последовательность, которая идентифицируется как последовательность №3, отличающийся тем, что один аминокислотный остаток или большее число аминокислотных остатков на позиции 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18 или 19 замещены другим аминокислотным остатком.

47. Полипептид по пункту 45, отличающийся тем, что замещены хотя бы два аминокислотных остатка.

48. Полипептид по п.45, отличающийся тем, что arg на позиции 14 последовательности №3 замещена другой аминокислотой.

49. Полипептид по п.45, отличающийся тем, что arg на позиции 14 последовательности №3 замещена другой аминокислотой, выбранной из группы аминокислот, включающей малые незаряженные аминокислоты.

50. Полипептид по п.45, отличающийся тем, что arg на позиции 14 последовательности №3 замещена другой аминокислотой, выбранной из группы аминокислот, в состав которой входят gly и ala.

51. Полипептид по одному из пп.39-50, при этом упомянутый полипептид обладает активностью MASP-2 в ин-витро анализе для функции пути активации комплемента маннан-связывающим лектином.

52. Полипептид по одному из пп.39-50, при этом упомянутый полипептид может конкурентно подавлять активность протеазы серина MASP-2.

53. Полипептид по одному из пп.39-52, отличающийся тем, что он конъюгирует с меткой или токсином.

54. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты, содержащая нуклеотидную последовательность, которая кодирует полипептид с последовательностью, которая не менее, чем на 85% идентична полипептидной последовательности по одному из пп.39-50.

55. Вектор нуклеиновой кислоты, содержащий молекулу нуклеиновой кислоты по п.54.

56. Вектор по п.55, отличающийся тем, что он является вектором экспрессии.

57. Вектор по п.55, отличающийся тем, что он также содержит элемент регуляции.

58. Использование соединения, способного конкурентно специфически подавлять активность MASP-2, с целью приготовления медикамента.

59. Использование по п.58, отличающееся тем, что это соединение является фрагментом пептида фактора комплемента С2 или С4.

60. Использование по п.58, отличающееся тем, что это соединение является полипептидом по любому из пунктов 39-50.

61. Использование по п.58, отличающееся тем, что это соединение является фрагментом маннан-связывающего лектина, который может ассоциироваться с MASP-2.

62. Использование по п.58, отличающееся тем, что это соединение является антителом, полученным при введении полипептида MASP-2 животному, производящему антитело.

63. Использование по п.58, отличающееся тем, что это соединение является антителом, которое выборочно образует связи с MASP-2.

64. Использование по п.63, отличающееся тем, что этим антителом является моноклональное антитело.

65. Использование по любому из пп.62-64, отличающееся тем, что это антитело связано с соединением, содержащим обнаруживаемый маркер.

66. Фармацевтическая композиция, содержащая в значительной степени чистый полипептид, содержащий аминокислотную последовательность, полученную из протеазы серина-2, ассоциированной с маннан-связывающим лектином (MASP-2) (последовательность №2), или ее функциональный гомолог, при этом упомянутый гомолог содержит аминокислотную последовательность, которая не менее, чем на 60% гомологична последовательности №2.

67. Фармацевтическая композиция по пп.66, отличающаяся тем, что данный полипептид содержит последовательность, которая идентифицируется как последовательность №3.

68. Фармацевтическая композиция по п.66, отличающаяся тем, что данный полипептид может ассоциироваться с маннан-связывающим лектином.

69. Фармацевтическая композиция по п.66, отличающаяся тем, что данный полипептид конъюгирует с меткой или токсином.

70. Фармацевтическая композиция по п.66, содержащая полипептид по любому из пунктов 39-52.

71. Способ анализа комплекса (маннан-связывающий лектин)/MASP на активность MASP, включающий получение образца для анализа, и в значительной степени уменьшающий любой артифакт, получаемый в результате активности пути классического комплемента с помощью анализа при наличии достаточно большой ионной силы с целью эффективного уменьшения активации классического пути комплемента, но не такой большой, чтобы в значительной степени умешать активность MASP комплекса (маннан-связывающий лектин)/MASP.

72. Способ определения активности MASP-2, при этом упомянутый способ включает анализ активности MASP-2, состоящий из следующих этапов:

- нанесение образца, содержащего комплексы (маннан-связывающий лектин)/ MASP-2 на твердую фазу с получением связанных комплексов;

- нанесение хотя бы одного фактора комплемента на эти комплексы;

- обнаружение количества расщепленных факторов комплемента;

- коррелирование количества расщепленных факторов комплемента с количеством MASP-2; и

- определение активности MASP-2.

73. Способ по п.72, отличающийся тем, что твердой фазой является покрытие из маннана.

74. Способ по одному из пп.71-73, отличающийся тем, что хотя бы один фактор комплемента является фактором комплемента, расщепляемым комплексом (маннан-связывающий лектин)/MASP-2.

75. Способ по п.74, отличающийся тем, что хотя бы один фактор комплемента выбирается из группы факторов, в состав которой входит С3, С4 и С5, но желательно С4.

76. Способ по одному из предыдущих пунктов, отличающийся тем, что расщепляемый фактор комплемента обнаруживается с помощью антител, направляемых на фактор комплемента.

77. Способ по одному из предыдущих пунктов, отличающийся тем, что подавляется активация классического пути комплемента.

78. Способ по п.77, отличающийся тем, что активация подавляется проведением анализа при большой ионной силе.

79. Способ по п.78, отличающийся тем, что концентрация соли составляет больше 0,2 М, находится в пределах от 0,3 до 10 М, от 0,5 до 5 М, от 0,7 до 2 М, от 0,9 до 2 М, около 1,0 М.

80. Способ по п.79, отличающийся тем, что эта соль выбирается из группы солей, в состав которой входит: NaCl, KCl, MgCl₂, CaCl₂, Nal, KCl, Mgl₂, Cal₂ или NaBr, KBr, MgBr₂, CaBr₂, Na₂S₂O₃, (NH₄)₂ SO₄ и NH₄НСО₃.

81. Способ по одному из предыдущих пунктов для проведения количественного анализа MASP-2 или активности MASP-2 в биологических образцах.