Слитые серпиновые полипептиды и способы их применения - RU2017145308A
Код документа: RU2017145308A
Формула
1. Выделенный слитый белок для ингибирования сериновых протеаз, имеющий по меньшей мере один человеческий полипептид альфа-1-антитрипсина (AAT), имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 32 и SEQ ID NO: 33, где полипептид ААТ функционально связан с Fc-полипептидом иммуноглобулина, имеющим аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 50% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 6.
2. Выделенный слитый белок по п.1, где полипептид AAT и Fc-полипептид иммуноглобулина функционально связаны друг с другом посредством шарнирной области, линкерной области или шарнирной области и линкерной области.
3. Выделенный слитый белок для ингибирования сериновых протеаз, имеющий по меньшей мере один человеческий полипептид альфа-1-антитрипсина (AAT), имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 32 и SEQ ID NO: 33, где полипептид ААТ функционально связан с Fc-полипептидом иммуноглобулина, имеющим аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 50% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 6, где пептидная последовательность содержит аминокислотную последовательность EPKSCDKTHTCPPCP, ERKCCVECPPCP, EPKSCDKTHTCPPCP или GGGSGGGS.
4. Выделенный слитый белок по п. 1, где полипептид ААТ содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1, функционально связанную с Fc-полипептидом иммуноглобулина, содержащим аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6.
5. Выделенный слитый белок по п. 1, где полипептид ААТ содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2, функционально связанную с Fc-полипептидом иммуноглобулина, содержащим аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6.
6. Выделенный слитый белок по п. 1, где полипептид ААТ содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 32, функционально связанную с Fc-полипептидом иммуноглобулина, содержащим аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6.
7. Выделенный слитый белок по п. 1, где полипептид ААТ содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 33, функционально связанную с Fc-полипептидом иммуноглобулина, содержащим аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6.
8. Выделенный слитый белок для ингибирования сериновых протеаз, имеющий по меньшей мере один человеческий полипептид альфа-1-антитрипсина (AAT), имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 32 и SEQ ID NO: 33, где полипептид ААТ функционально связан с Fc-полипептидом иммуноглобулина, имеющим аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 50% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 6, где указанный слитый белок дополнительно включает полипептид, содержащий домен WAP, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO:9-13.
9. Выделенный слитый белок для ингибирования сериновых протеаз, имеющий по меньшей мере один человеческий полипептид альфа-1-антитрипсина (AAT), имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 32 и SEQ ID NO: 33, где полипептид ААТ функционально связан с Fc-полипептидом иммуноглобулина, имеющим аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 50% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 6, где указанный слитый белок дополнительно включает полипептид SLPI, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:9 или аминокислотную последовательность SEQ ID NO:10.
10. Выделенный слитый белок по п.1, где указанный Fc-полипептид иммуноглобулина был модифицирован для усиления связывания с FcRn.
11. Выделенный слитый белок по п.1, где указанный Fc-полипептид иммуноглобулина содержит по меньшей мере одну из нижеследующих мутаций: Met252Tyr, Ser254Thr, Thr256Glu, Met428Leu или Asn434Ser.
12. Выделенный слитый белок по п. 1, где указанный Fc-полипептид иммуноглобулина содержит по меньшей мере одну мутацию в положении, выбранном из группы, состоящей из Met252, Ser254, Thr256, Met428 или Asn434.
13. Применение слитого белка по любому из пп. 1-12 в производстве лекарственного средства для лечения или ослабления симптомов заболевания или расстройства, ассоциированного с избыточной экспрессией или активностью сериновой протеазы у индивидуума, нуждающегося в этом.
14. Применение слитого белка по любому из пп. 1-12 в производстве лекарственного средства для лечения или ослабления воспаления или симптомов воспалительного заболевания или расстройства, а также снижения риска инфицирования у индивидуума, нуждающегося в этом.
15. Применение слитого белка по любому из пп. 1-12 в производстве лекарственного средства для снижения риска инфицирования у индивидуума, нуждающегося в этом.
16. Применение по любому из пп.13-15, где указанным индивидуумом является человек.
17. Применение по п.13, где указанное заболевание или расстройство выбрано из эмфиземы, хронической обструктивной болезни легких (ХОБЛ), острого респираторного дистресс-синдрома (ОРДС), аллергической астмы, кистозного фиброза, рака легких, ишемического реперфузионного повреждения, ишемического/реперфузионного повреждения после трансплантации сердца; инфаркта миокарда, ревматоидного артрита, септического артрита, псориатического артрита, анкилозирующего спондилита, болезни Крона, псориаза, диабета типа I и/или типа II, пневмонии, сепсиса, реакции «трансплантат против хозяина» (GVHD), заболевания, связанного с заживлением ран, системной красной волчанки и рассеянного склероза.
18. Применение по п.15, где указанная инфекция выбрана из бактериальных инфекций, грибковых инфекций или вирусных инфекций.
19. Способ очистки слитого белка, включающий стадии:
культивирования клетки, содержащей конструкцию нуклеиновой кислоты, которая кодирует слитый белок, в условиях, обеспечивающих экспрессию слитого белка,
где слитый белок содержит по меньшей мере один серпиновый полипептид человека, функционально связанный со вторым полипептидом, где указанный полипептид содержит по меньшей мере одно из следующего:
Fc-полипептид иммуноглобулина или аминокислотную последовательность, которая получена из Fc-полипептида иммуноглобулина;
направленный на цитокин полипептид или последовательность, полученную из направленного на цитокин полипептида;
полипептид, содержащий домен WAP, или последовательность, полученную из полипептида, содержащего домен WAP; или
альбуминовый полипептид или аминокислотную последовательность, полученную из полипептида сывороточного альбумина;
приведение в контакт супернатанта из культивированных клеток с аффинной смолой в условиях, которые обеспечивают связывание между аффинной смолой и слитым белком, где аффинная смола содержит белок A или антитело, которое связывается с альфа-1-антитрипсином (AAT) или фрагмент указанного антитела; и
элюирование слитого белка с аффинной смолы с использованием буфера в условиях, которые обеспечивают отсоединение слитого белка от аффинной смолы, где буфер имеет почти нейтральный pH,
где очищенный слитый белок ингибирует активность эластазы нейтрофилов (NE).
20. Способ по п. 19, где серпиновый полипептид человека содержит полипептид альфа-1-антитрипсина (AAT) или полипептид, полученный из полипептида AAT.
21. Способ по п. 19, где клетка содержит клетку яичника китайского хомячка (CHO), клетку почек человеческого эмбриона (HEK) 293, клетку COS, клетку PER.C6®, клетку NS0, клетку SP2/0 или клетку YB2/0.
22. Способ по п. 21, где клетка содержит клетку яичника китайского хомячка (CHO) или клетку почек человеческого эмбриона (HEK) 293.
23. Способ по п. 19, где конструкция нуклеиновой кислоты содержит секреторную сигнальную последовательность.
24. Способ по п. 19, где очищенный слитый белок ингибирует активность эластазы нейтрофилов (NE) в той же или большей степени по сравнению с альфа-1-антитрипсином(sdAAT), полученным из сыворотки крови человека.
25. Способ по п. 20, где полипептид альфа-1-антитрипсина (AAT) или полипептид, полученный из полипептида AAT, содержат аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 34 или SEQ ID NO: 35.
26. Способ по п. 20, где полипептид альфа-1 антитрипсина (AAT) или полипептид, полученный из полипептида AAT, содержат петлю реакционного сайта AAT, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1, или мутированную петлю реакционного сайта AAT, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 32 или 33.
27. Способ по п.1, где Fc-полипептид иммуноглобулина содержит человеческий Fc-полипептид.
28. Способ по п.27, где Fc-полипептид человека содержит полипептид IgM человека или Fc-полипептид IgG человека.
29. Способ по п.28, где Fc-полипептид IgG человека содержит полипептид IgG1 человека, Fc-полипептид IgG2 человека, Fc-полипептид IgG3 человека или Fc-полипептид IgG4 человека.
30. Способ по п.19, где Fc-полипептид иммуноглобулина включает аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 3, 4, 5, 6 и 7.
31. Способ по п.19, где серпиновый полипептид человека и Fc-полипептид иммуноглобулина функционально связаны друг с другом посредством шарнирной области, линкерной области или шарнирной области и линкерной области.
32. Способ по п.20, где полипептид альфа-1-антитрипсина (AAT) и Fc-полипептид иммуноглобулина функционально связаны друг с другом посредством шарнирной области, линкерной области или шарнирной области и линкерной области.
33. Способ по п. 19, где слитый белок содержит аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 21 и SEQ ID NO: 36.
34. Способ по п. 20, где слитый белок содержит по меньшей мере два полипептида альфа-1-антитрипсина (AAT) и Fc-полипептида иммуноглобулина.
35. Способ по п. 34, где слитый белок содержит два полипептида альфа-1-антитрипсина (AAT), и где каждый из двух полипептидов AAT функционально связан с Fc-полипептидом иммуноглобулина посредством шарнирной области, линкерной области или шарнирной области и линкерной области, в результате чего указанный слитый белок имеет следующую структуру от N-конца к С-концу: полипептид ААТ - Fc-полипептид иммуноглобулина - полипептид ААТ.
36. Способ по п. 19, где Fc-полипептид иммуноглобулина содержит по меньшей мере одну из следующих мутаций: Met252Tyr, Ser254Thr, Thr256Glu, Met428Leu или Asn434Ser.
37. Способ по п. 31, где указанные шарнирная область, линкерная область или шарнирная область и линкерная область содержат пептидную последовательность.
