Способ ингибирования внутриклеточного активированного ras с помощью интакного антитела иммуноглобулинового типа, обладающего способностью к проникновению в цитозоль, и его применение - RU2017103679A
Код документа: RU2017103679A
Формула
1. Способ ингибирования внутриклеточного активированного RAS с применением интактного антитела иммуноглобулинового типа, обладающего способностью к проникновению в цитозоль, которое специфически связывается с активированным RAS в цитозоле.
2. Способ по п. 1, где антитело является химерным, человеческим или гуманизированным антителом.
3. Способ по п. 1, где антитело выбрано из группы, состоящей из IgG, IgM, IgA, IgD и IgE.
4. Способ по п. 1, где RAS является мутантным типом.
5. Способ по п. 1, где антитело включает вариабельную область тяжелой цепи (VH), специфически связывающуюся с активированным RAS в цитозоле.
6. Способ по п. 5, где вариабельная область тяжелой цепи (VH) включает:
- CDR1, включающую аминокислотную последовательность, который имеет по меньшей мере 90% гомологии с аминокислотной последовательностью, выбранной из группы, состоящей из: SEQ ID №№ 8, 11, 14, 17, 20, 23 и 26;
- CDR2, включающую аминокислотную последовательность, который имеет по меньшей мере 90% гомологии с аминокислотной последовательностью, выбранной из группы, состоящей из: SEQ ID №№ 9, 12, 15, 18, 21, 24 и 27; и
- CDR3, включающую аминокислотную последовательность, который имеет по меньшей мере 90% гомологии с аминокислотной последовательностью, выбранной из группы, состоящей из: SEQ ID №№ 10, 13, 16, 19, 22, 25 и 28.
7. Способ по п. 5, где вариабельная область тяжелой цепи (VH) включает аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID №№ 1-7.
8. Способ по п. 1, где антитело активно проникает в живые клетки.
9. Способ по п. 1, где антитело содержит вариабельную область легкой цепи (VL), обладающую способностью к проникновению в цитозоль.
10. Способ по п. 9, где способность к проникновению в цитозоль является способностью к проникновению в клетки посредством эндоцитоза, с последующей локализацией в цитозоле посредством эндосомального высвобождения.
11. Способ по п. 9, где вариабельная область легкой цепи включает:
- CDR1, включающую аминокислотную последовательность, который имеет по меньшей мере 90% гомологии с аминокислотной последовательностью, выбранной из группы, состоящей из: SEQ ID №№ 32, 35 и 38; и
- CDR3, включающую аминокислотную последовательность, который имеет по меньшей мере 90% гомологии с аминокислотной последовательностью, выбранной из группы, состоящей из: SEQ ID №№ 34, 27 и 40.
12. Способ по п. 9, где вариабельная область легкой цепи является областью, в которой 2-я и 4-я аминокислоты, нумерованные начиная от N-конца вариабельной области легкой цепи, замещены на лейцин (L) и метионин (M), соответственно (где положения аминокислот нумеруются в соответствии с системой нумерации Кабат).
13. Способ по п. 9, где вариабельная область легкой цепи является областью, в которой 9-я, 10-я, 13-я, 15-я, 17-я, 19-я, 21-я, 22-я, 42-я, 45-я, 58-я, 60-я, 79-я и 85-я аминокислоты, пронумерованные начиная от N-конца вариабельной области легкой цепи, замещены на серин (S), серин (S), аланин (A), валин (V), аспарагиновую кислоту (D), валин (V), изолейцин (I), треонин (T), лизин (K), лизин (K), валин (V), серин (S), глутамин (Q) и треонин (Т), соответственно (где положения аминокислот нумеруются в соответствии с системой нумерации Кабат).
14. Способ по п. 9, где вариабельная область легкой цепи является областью, в которой 89-я и 91-я аминокислоты, пронумерованные начиная от N-конца вариабельной области легкой цепи, замещены на глутамин (Q) и тирозин (Y), соответственно (где положения аминокислот нумеруются в соответствии с системой нумерации Кабат).
15. Способ по п. 9, где вариабельная область легкой цепи включает аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID №№ 29, 30 и 31.
16. Способ по п. 1, где связывание антитела с активированным RAS в цитозоле ингибирует связывание активированного RAS с B-Raf, C-Raf или PI3K в цитозоле.
17. Вариабельная область тяжелой цепи (VH), которая индуцирует проникновение интактного антитела иммуноглобулинового типа в цитозоль и связывание с активированным RAS в цитозоле.
18. Вариабельная область тяжелой цепи (VH) по п. 17, причем указанная вариабельная область тяжелой цепи (VH) включает:
- CDR1, включающую аминокислотную последовательность, который имеет по меньшей мере 90% гомологии с аминокислотной последовательностью, выбранной из группы, состоящей из: SEQ ID №№ 8, 11, 14, 17, 20, 23 и 26;
- CDR2, включающую аминокислотную последовательность, который имеет по меньшей мере 90% гомологии с аминокислотной последовательностью, выбранной из группы, состоящей из: SEQ ID №№ 9, 12, 15, 18, 21, 24 и 27; и
- CDR3, включающую аминокислотную последовательность, который имеет по меньшей мере 90% гомологии с аминокислотной последовательностью, выбранной из группы, состоящей из: SEQ ID №№ 10, 13, 16, 19, 22, 25 и 28.
19. Вариабельная область тяжелой цепи (VH) по п. 17, отличающаяся тем, что включает аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID №№ 1-7.
20. Антитело, включающее вариабельную область тяжелой цепи по любому из пп. 17-19.
21. Антитело по п. 20, отличающееся тем, что активно проникает в живые клетки и специфически связывается с активированным RAS в цитозоле.
22. Антитело по п. 20, отличающееся тем, что является химерным, человеческим или гуманизированным антителом.
23. Антитело по п. 20, отличающееся тем, что выбрано из группы, состоящей из IgG, IgM, IgA, IgD и IgE.
24. Антитело по п.20, отличающееся тем, что включает вариабельную область легкой цепи (VL), обладающую способностью к проникновению в цитозоль.
25. Антитело по п. 20, где способность к проникновению в цитозоль является способностью к проникновению в клетки посредством эндоцитоза, с последующей локализацией в цитозоле посредством эндосомального высвобождения.
26. Антитело по п. 24, где вариабельная область легкой цепи включает:
- CDR1, включающую аминокислотную последовательность, который имеет по меньшей мере 90% гомологии с аминокислотной последовательностью, выбранной из группы, состоящей из: SEQ ID №№ 32, 35 и 38; и
- CDR3, включающую аминокислотную последовательность, который имеет по меньшей мере 90% гомологии с аминокислотной последовательностью, выбранной из группы, состоящей из: SEQ ID №№ 34, 27 и 40.
27. Антитело по п. 24, где вариабельная область легкой цепи может быть областью, в которой 2-я и 4-я аминокислоты, пронумерованные начиная от N-конца вариабельной области легкой цепи, замещены на лейцин (L) и метионин (M), соответственно (где положения аминокислот нумеруются в соответствии с системой нумерации Кабат).
28. Антитело по п. 24, где вариабельная область легкой цепи является областью, в которой 9-я, 10-я, 13-я, 15-я, 17-я, 19-я, 21-я, 22-я, 42-я, 45-я, 58-я, 60-я, 79-я и 85-я аминокислоты, пронумерованные начиная от N-конца вариабельной области легкой цепи, замещены на серин (S), серин (S), аланин (A), валин (V), аспарагиновую кислоту (D), валин (V), изолейцин (I), треонин (T), лизин (K), лизин (K), валин (V), серин (S), глутамин (Q) и треонин (Т), соответственно (где положения аминокислот нумеруются в соответствии с системой нумерации Кабат).
29. Антитело по п. 24, где вариабельная область легкой цепи является областью, в которой 89-я и 91-я аминокислоты, пронумерованные начиная от N-конца вариабельной области легкой цепи, замещены на глутамин (Q) и тирозин (Y), соответственно (где положения аминокислот нумеруются в соответствии с системой нумерации Кабат).
30. Антитело по п. 24, где вариабельная область легкой цепи включает аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID №№ 29, 30 и 31.
31. Способ ингибирования роста раковых или опухолевых клеток, отличающийся тем, что включает этап воздействия на клетки индивидуума антитела, специфически связывающегося с активированным RAS в цитозоле.
32. Способ лечения рака или опухоли, причем указанный способ включает стадию применения у индивидуума фармацевтически эффективного количества антитела, которое специфически связывается с активированным RAS в цитозоле.
33. Способ скрининга вариабельной области тяжелой цепи, которая специфически связывается с RAS в цитозоле, включающий стадии:
(1) экспрессии библиотеки вариабельной области тяжелой цепи, которая может связываться с ГТФ-связанным RAS;
(2) связывания библиотеки с ГТФ-связанным RAS; и
(3) измерения аффинности библиотеки к ГТФ-связанному RAS.
34. Способ по п. 33, где библиотека вариабельной области тяжелой цепи на стадии (1) индуцирует мутацию в следующих аминокислотных остатках:
- 31-м - 33-м аминокислотных остатках в CDR1 области в вариабельной области тяжелой цепи;
- 50-м и 52-м - 56-м аминокислотных остатках в CDR2 области в вариабельной области тяжелой цепи; и
- 95-м - 100-м аминокислотных остатках в CDR3 области в вариабельной области тяжелой цепи.
35. Биологически активная молекула, слитая с антителом по любому из пп. 20-30, и выбранная из группы, состоящей из пептидов, белков, низкомолекулярных лекарств, наночастиц и липосом.
36. Биологически активная молекула по п. 35, где пептидом является RGD4C, включающий аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID № 41, или RGD10, включающий аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID № 42.
37. Фармацевтическая композиция для профилактики или лечения рака, включающая в качестве активных ингредиентов антитело по любому из пп. 20-30, или биологически активную молекулу, слитую с антителом и выбранную из группы, состоящей из пептидов, белков, низкомолекулярных лекарств, наночастиц и липосом.
38. Композиция для диагностики рака, включающая антитело по любому из пп. 20-30, или биологически активную молекулу, слитую с антителом и выбранную из группы, состоящей из пептидов, белков, низкомолекулярных лекарств, наночастиц и липосом.
39. Полинуклеотид, кодирующий вариабельную область легкой цепи по любому из пп. 17-19 или антитело по любому из пп. 20-30.
