Антигенсвязывающие полипептидные конструкции, содержащие легкие цепи каппа и лямбда, и их применения - RU2018116846A
Код документа: RU2018116846A
Формула
1. Антигенсвязывающая полипептидная конструкция, содержащая первый гетеродимер и второй гетеродимер,
первый гетеродимер (H1L1), содержащий полипептидную последовательность тяжелой цепи (H1) первого иммуноглобулина и полипептидную последовательность легкой цепи (L1) иммуноглобулина лямбда, которые образуют первую область Fab, которая специфически связывается с первым антигеном; и второй гетеродимер (H2L2), содержащий полипептидную последовательность тяжелой цепи (H2) второго иммуноглобулина и полипептидную последовательность легкой цепи (L2) иммуноглобулина каппа, которые образуют вторую область Fab, которая специфически связывается со вторым антигеном,
при этом
H1 отличается от H2, а H1 и H2 каждая содержат вариабельный домен тяжелой цепи (домен VH) и константный домен 1 тяжелой цепи (домен CH1);
L1 содержит вариабельный домен легкой цепи лямбда (VL-лямбда) и константный домен легкой цепи лямбда (CL-лямбда), а L2 содержит вариабельный домен легкой цепи каппа (VL-каппа) и константный домен легкой цепи каппа (CL-каппа); и
одна или более из H1, H2, L1 и L2 содержит аминокислотные модификации по сравнению с соответствующими полипептидными последовательностями H1, H2, L1 и L2 дикого типа, которые способствуют преимущественному спариванию H1 с L1 по сравнению с L2, и/или способствуют преимущественному спариванию H2 с L2 по сравнению с L1, причем аминокислотные модификации не удаляют остаток цистеина, который встречается в природе.
2. Конструкция по п. 1, отличающаяся тем, что указанные аминокислотные модификации способствуют преимущественному спариванию H1 с L1 по сравнению с L2 и/или способствуют преимущественному спариванию H2 с L2 по сравнению с L1, в случае если H1, H2, L1 и L2 коэкспрессируются в клетке или клетке млекопитающего, или в случае если H1, H2, L1 и L2 коэкспрессируются в системе бесклеточной экспрессии, или в случае если H1 и L1 продуцируются в клетке, а H2 и L2 продуцируются в другой клетке, и продукты двух клеток смешиваются по окислительно-восстановительному способу производства, или в случае если H1 и L1 продуцируются в системе бесклеточной экспрессии, а H2 и L2 продуцируются в другой системе бесклеточной экспрессии, и продукты двух систем бесклеточной экспрессии смешиваются.
3. Антигенсвязывающая полипептидная конструкция по п. 1 или 2, отличающаяся тем, что каждый гетеродимер содержит один Fab.
4. Антигенсвязывающая полипептидная конструкция по любому из пп. 1-3, отличающаяся тем, что
a. H2 содержит аминокислотную замену в положении 143; L2 содержит аминокислотную замену в положении 124; и
i. H1 содержит аминокислотную замену в положении 186 или 179, а L1 содержит аминокислотную замену в положении 180;
ii. H1 содержит аминокислотную замену в положении 186; а L1 содержит аминокислотные замены в положении 133;
iii. H1 содержит аминокислотную замену в положении 143; а L1 содержит аминокислотные замены в положении 133; или
iv. H1 содержит аминокислотную замену в положении 188; а L1 содержит аминокислотные замены в положении 178;
b. H1 содержит аминокислотную замену в положении 143; L1 содержит аминокислотную замену в положении 131; а также
i. H2 содержит аминокислотную замену в положениях 186 или 124_186, а L2 содержит аминокислотную замену в положениях 133 или 133_160, или 124_133, или 176_180; или
ii. H2 содержит аминокислотную замену в положении 188; а L2 содержит аминокислотные замены в положении 131;
iii. H2 содержит аминокислотную замену в положении 143; а L2 содержит аминокислотные замены в положениях 124_133 или 124_133_180;
c. H1 содержит аминокислотную замену в положении 143; L1 содержит аминокислотную замену в положении 131; а также
i. H2 содержит аминокислотную замену в положениях 124_186 или 124_179 или 188, а L2 содержит аминокислотную замену в положениях 176_178 или 176_180, или 131; или
ii. H2 содержит аминокислотную замену в положениях 143_188, или 143, или 124_143; а L2 содержит аминокислотные замены в положениях 124_176_178 или 124_178, или 124_180, или 124_176_180, или 124, или 124_176;
d. H1 содержит аминокислотную замену в положении 179, 186, 143 и/или 188; L1 содержит аминокислотную замену в положении 180, 133 и/или 176_178; H2 содержит аминокислотную замену в положении 143, а L2 содержит аминокислотную замену в положении 131 и/или 124;
e. H1 содержит аминокислотную замену в положении 39 или не содержит аминокислотных замен, которые способствуют преимущественному спариванию; L1 содержит аминокислотную замену в положении 38 или не содержит аминокислотных замен, которые способствуют преимущественному спариванию; Н2 содержит аминокислотную замену в положении 39, и L2 содержит аминокислотную замену в положении 38;
f. H1 содержит аминокислотную замену в положении 143; L1 содержит аминокислотную замену в положении 131; а также
i. H2 содержит аминокислотную замену в положениях 188 или 124_186, а L2 содержит аминокислотную замену в положениях 176_178 или 176_180, или 131; или
ii. H2 содержит аминокислотную замену в положении 143 или 186; а L2 содержит аминокислотные замены в положениях 124_133 или 124_133_180;
g. H1 содержит аминокислотную замену в положении 188; L1 содержит аминокислотную замену в положениях 176_178 или 178; и
i. H2 содержит аминокислотную замену в положениях 177_188, а L2 содержит аминокислотную замену в положениях 176_178; или
ii. H2 содержит аминокислотную замену в положении 186 или 124 или 124_179; а L2 содержит аминокислотные замены в положениях 176 или 131_176;
h. H1 содержит аминокислотную замену в положении 186; L1 содержит аминокислотную замену в положении 133; а также
i. H2 содержит аминокислотную замену в положении 188, а L2 содержит аминокислотную замену в положении 131; или
ii. H2 содержит аминокислотную замену в положениях 177_188; а L2 содержит аминокислотные замены в положениях 176_178; или
H1 содержит аминокислотную замену в положениях 124_190; L1 содержит аминокислотную замену в положении 135; Н2 содержит аминокислотную замену в положениях 124 или 188, и L2 содержит аминокислотную замену в положениях 176 или 176_178;
i. H1 содержит аминокислотную замену в положениях 177_188; L1 содержит аминокислотную замену в положении 176_178; и
i. Н2 содержит аминокислотную замену в положении 188, а L2 содержит аминокислотную замену в положениях 176_178 или 131;
ii. H2 содержит аминокислотную замену в положении 186; а L2 содержит аминокислотные замены в положениях 133 или 124_160_180;
iii. Н2 содержит аминокислотную замену в положении 124 или 124_179, или 124_186; а L2 содержит аминокислотные замены в положениях 176 или 176_178, или 176_180; или
iv. H2 содержит аминокислотную замену в положении 143; а L2 содержит аминокислотные замены в положениях 133 или 124_133;
j. H1 содержит аминокислотную замену в положении 188; L1 содержит аминокислотную замену в положении 178; Н2 содержит аминокислотную замену в положении 124 или 188, и L2 содержит аминокислотную замену в положениях 176_178 или 176_180, или 176;
k. или H1 содержит аминокислотную замену в положениях 145_188; L1 содержит аминокислотную замену в положении 178; и Н2 содержит аминокислотную замену в положении 124 и/или 188, и L2 содержит аминокислотную замену в одном или более положениях 124, 133 и 178;
l. H1 содержит аминокислотную замену в положении 174, 179 или 186; L1 содержит аминокислотную замену в положении 176 или 180; Н2 содержит аминокислотную замену в положении 143 или 190, и L2 содержит аминокислотную замену в положении 131, 135 или 124; или
m. H1 содержит аминокислотную замену в положении 174; L1 содержит аминокислотную замену в положении 176; Н2 содержит аминокислотную замену в положении 190; и L2 не содержит аминокислотных замен, которые способствуют преимущественному спариванию или содержит аминокислотную замену в положении 135;
n. H1 содержит аминокислотную замену в положениях 143_190; L1 содержит аминокислотную замену в положении 133; Н2 содержит аминокислотную замену в положении 124, и L2 содержит аминокислотную замену в положениях 131_135;
o. H1 содержит аминокислотную замену в положении 143 и/или 186; L1 содержит аминокислотную замену в положении 133; Н2 содержит аминокислотную замену в положении 124, и L2 содержит аминокислотную замену в положении 131;
p. H1 содержит аминокислотную замену в положениях 143_179; L1 содержит аминокислотную замену в положениях 124_178; Н2 содержит аминокислотную замену в положении 186, и L2 содержит аминокислотную замену в положениях 178_180 или 160_180;
q. H1 содержит аминокислотную замену в положении 143; L1 содержит аминокислотную замену в положении 124; Н2 содержит аминокислотную замену в положении 179 или 186, и L2 содержит аминокислотную замену в положении 124_160_180;
r. H1 содержит аминокислотную замену в положении 186; L1 содержит аминокислотную замену в положениях 180 или 178_180; Н2 содержит аминокислотную замену в положении 143 и/или 179, и L2 содержит аминокислотную замену в положениях 124_178 или 131;
s. H1 содержит аминокислотную замену в положении 179; L1 содержит аминокислотную замену в положении 180; Н2 содержит аминокислотную замену в положении 143, и L2 содержит аминокислотную замену в положении 124;
t. H1 содержит аминокислотную замену в положении 143 или 186; L1 содержит аминокислотную замену в положении 180 или не содержит аминокислотных замен, которые способствуют преимущественному спариванию; Н2 содержит аминокислотную замену в положениях 143_145, и L2 содержит аминокислотную замену в положении 124;
u. H1 не содержит аминокислотных замен, которые способствуют преимущественному спариванию; L1 содержит аминокислотную замену в положении 135; Н2 содержит аминокислотную замену в положении 139, и L2 содержит аминокислотную замену в положении 116;
v. H1 не содержит аминокислотных замен, которые способствуют преимущественному спариванию или содержит аминокислотную замену в положении 45; L1 не содержит аминокислотных замен, которые способствуют преимущественному спариванию; Н2 содержит аминокислотную замену в положении 45, и L2 содержит аминокислотную замену в положении 44;
w. H1 содержит аминокислотную замену в положении 139; L1 содержит аминокислотную замену в положении 116; Н2 не содержит аминокислотных замен, которые способствуют преимущественному спариванию, и L2 содержит аминокислотную замену в положении 135; или
x. H1 содержит аминокислотную замену в положении 124; L1 содержит аминокислотную замену в положении 176; Н2 содержит аминокислотную замену в положении 124, и L2 содержит аминокислотную замену в положении 176.
5. Антигенсвязывающая полипептидная конструкция по любому из пп. 1-4, отличающаяся тем, что аффинность первой области Fab к первому антигену находится в пределах около 100-кратной аффинности области Fab, образованной соответствующими полипептидными последовательностями дикого типа H1 и L1 к первому антигену, и/или аффинность второй области Fab ко второму антигену находится в пределах около 100-кратной аффинности области Fab, образованной соответствующими полипептидными последовательностями дикого типа H2 и L2 ко второму антигену.
6. Антигенсвязывающая полипептидная конструкция по любому из пп. 1-5, отличающаяся тем, что температура плавления (Tm) первой области Fab находится в пределах около 20°C Tm области Fab, образованной соответствующими полипептидными последовательностями H1 и L1 дикого типадля первого антигена, и/или температура плавления (Tm) второй области Fab находится в пределах около 20°C Tm области Fab, образованной соответствующими полипептидными последовательностями H2 и L2 дикого типадля второго антигена.
7. Антигенсвязывающая полипептидная конструкция по любому из пп. 1-6, отличающаяся тем, что
a. H1 и L1 представляют собой полипептидные последовательности дикого типа, а Н2 и L2 каждая содержат, по меньшей мере, одну аминокислотную модификацию;
b. одна или более из H1, L1, и H2 содержат, по меньшей мере, одну аминокислотную модификацию, а L2 представляет собой полипептидную последовательность дикого типа;
c. одна или более из H1, L1, и L2 содержат, по меньшей мере, одну аминокислотную модификацию, а H2 представляет собой полипептидную последовательность дикого типа;
d. одна или более из H1, H2, и L2 содержат, по меньшей мере, одну аминокислотную модификацию, а L1 представляет собой полипептидную последовательность дикого типа;
e. одна или более из L1, H2, и L2 содержат, по меньшей мере, одну аминокислотную модификацию, а H1 представляет собой полипептидную последовательность дикого типа; или
f. H1, L1, H2 и L2 каждая содержат, по меньшей мере, одну аминокислотную модификацию.
8. Антигенсвязывающая полипептидная конструкция по любому из пп. 1-7, отличающаяся тем, что аминокислотные модификации находятся в:
a. по меньшей мере, двух из домена CH1 H1, домена CH1 H2, домена CL-лямбда L1 и домена CL-каппа L2;
b. по меньшей мере, двух из доменов CH1 и VH H1 и H2, домена CL-лямбда и домена VL-лямбда L1, а также домена CL-каппа и домена VL-каппа L2, или
c. по меньшей мере, двух из домена VH H1, домена VH H2, домена VL-лямбда L1 и домена VL-каппа L2.
9. Конструкция по любому из пп. 1-8, отличающаяся тем, что H1, L1, H2 и/или L2 каждая содержат, по меньшей мере, 1 аминокислотную модификацию в области Fab.
10. Конструкция по любому из пп. 1-9, отличающаяся тем, что, по меньшей мере, одна из H1, H2, L1 и L2 содержит, по меньшей мере, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 аминокислотных модификаций, по меньшей мере, одного константного домена и/или, по меньшей мере, одного вариабельного домена.
11. Конструкция по любому из пп. 1-10, отличающаяся тем, что аминокислотные модификации способствуют преимущественному спариванию H1 с L1 по сравнению с L2 с образованием H1L1, или H2 с L2 по сравнению с L1 с образованием H2L2, так что относительное спаривание, по меньшей мере, одного из H1L1 или H2L2 является, по меньшей мере, на 10% большим по сравнению с диким типом, а относительное спаривание другого находится в пределах около 10% от дикого типа или, по меньшей мере, на около 10% больше по сравнению с диким типом.
12. Конструкция по любому из пп. 1-11, отличающаяся тем, что термическая стабильность первой области Fab находится в пределах около 0, 1, 2 или 3°C Tm области Fab, образованной соответствующими полипептидными последовательностями H1 и L1 дикого типа, и/или термическая стабильность второй области Fab находится в пределах около 0, 1, 2 или 3°C Tm области Fab, образованной соответствующими полипептидными последовательностями H2 и L2 дикого типа.
13. Конструкция по любому из пп. 1-3, отличающаяся тем, что аминокислотные модификации выбраны из группы, состоящей из уникальных идентификаторов наборов конструкций мАт, представленных в одной или более таблицах с 10-A1 по 10-A12.
14. Конструкция по любому из пп. 1-3, отличающаяся тем, что аминокислотные модификации выбраны из группы, состоящей из уникальных идентификаторов наборов конструкций мАт, представленных в любой из таблиц с 10-B1 по 10-B10.
15. Конструкция по любому из пп. 1-14, отличающаяся тем, что эта конструкция дополнительно содержит димерный Fc, имеющий два полипептида Fc, каждый из которых содержит последовательность домена CH3 и связан с или без помощи линкеров с одной из первой области Fab и второй области Fab.
16. Конструкция по п. 15, отличающаяся тем, что Fc представляет собой Fc человека, Fc IgG1 человека, Fc IgA человека, Fc IgG человека, Fc IgD человека, Fc IgE человека, Fc IgM человека, Fc IgG2 человека, Fc IgG3 человека или Fc IgG4 человека.
17. Конструкция по п. 15 или 16, отличающаяся тем, что Fc содержит одну или более модификаций по сравнению с диким типом, в, по меньшей мере, одной из последовательностей домена CH3, которые способствуют образованию гетеродимерного Fc.
18. Конструкция по любому из пп. 15-17, отличающаяся тем, что Fc содержит
i) гетеродимерный Fc IgG1, имеющий модификации L351Y_F405A_Y407V в первом полипептиде Fc и модификации T366L_K392M_T394W во втором полипептиде Fc;
ii) гетеродимерный Fc IgG1, имеющий модификации L351Y_F405A_Y407V в первом полипептиде Fc и модификации T366L_K392L_T394W во втором полипептиде Fc;
iii) гетеродимерный Fc IgG1, имеющий модификации T350V_L351Y_F405A_Y407V в первом полипептиде Fc и модификации T350V_T366L_K392L_T394W во втором полипептиде Fc;
iv) гетеродимерный Fc IgG1, имеющий модификации T350V_L351Y_F405A_Y407V в первом полипептиде Fc и модификации T350V_T366L_K392M_T394W во втором полипептиде Fc; или
v) гетеродимерный Fc IgG1, имеющий модификации T350V_L351Y_S400E_F405A_Y407V в первом полипептиде Fc и модификации T350V_T366L_N390R_K392M_T394W во втором полипептиде Fc.
19. Конструкция по любому из пп. 15-18, отличающаяся тем, что Fc дополнительно содержит, по меньшей мере, одну последовательность домена CH2.
20. Конструкция по п. 19, отличающаяся тем, что, в случае если H1, L1, H2 и L2 коэкспрессируются,
a) изменение в количестве полного правильного спаривания, измеренное суммой спаривания H1L1 и H2L2, составляет более, чем около 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40% или 45% по сравнению со спариванием соответствующих полипептидных цепей H1, L1, H2 и L2 без аминокислотных замен в области Fab, которые способствуют преимущественному спариванию;
b) изменение количества полного правильного спаривания, измеренное количеством биспецифического антитела, полученного в процентах от видов, отличных от полученных полуантител, составляет более, чем около 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70% или 80% по сравнению со спариванием соответствующих полипептидных цепей H1, L1, H2 и L2 без аминокислотных замен в области Fab, которые способствуют преимущественному спариванию, или
c) изменение количества полного правильного спаривания, измеренное количеством биспецифического антитела, полученного в процентах от всех полученных видов, составляет более, чем около 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70% или 80% по сравнению со спариванием соответствующих полипептидных цепей H1, L1, H2 и L2 без аминокислотных замен в области Fab, которые способствуют преимущественному спариванию.
21. Конструкция по п. 20, отличающаяся тем, что Fc содержит одну или более модификаций для способствования селективному связыванию рецепторов Fc-гамма, для уменьшения или устранения связывания с рецепторами Fc-гамма или для способствования связыванию с FcRn.
22. Конструкция по любому из пп. 15-21, отличающаяся тем, что линкеры представляют собой один или более полипептидных линкеров.
23. Конструкция по п. 22, отличающаяся тем, что линкеры содержат одну или более шарнирных областей антитела.
24. Конструкция по п. 23, отличающаяся тем, что линкеры содержат одну или более шарнирных областей IgG1.
25. Конструкция по п. 23 или 24, отличающаяся тем, что один или более полипептидных линкеров содержат одну или более модификаций по сравнению с полипептидным линкером дикого типа.
26. Конструкция по любому из пп. 1-25, отличающаяся тем, что аминокислотные модификации представляют собой аминокислотные замены.
27. Конструкция по любому из пп. 1-26, отличающаяся тем, что последовательности каждой из H1, H2, L1 и L2 получают из человеческих последовательностей или гуманизированных последовательностей.
28. Конструкция по любому из пп. 1-27, конъюгированная с терапевтическим агентом или лекарственным средством.
29. Полинуклеотид или набор полинуклеотидов, который кодирует конструкцию по любому из пп. 1-27.
30. Вектор или набор векторов, содержащих один или более полинуклеотидов или наборов полинуклеотидов по п. 29.
31. Вектор или набор векторов по п. 30, отличающийся тем, что этот вектор или, по меньшей мере, один вектор из этого набора векторов является мультицистронным.
32. Выделенная клетка, содержащая полинуклеотид или набор полинуклеотидов по п. 29, или вектор или набор векторов по пп. 30 или 31.
33. Выделенная клетка по п. 32, отличающаяся тем, что клетка представляет собой дрожжевую клетку, бактериальную клетку, клетку насекомого или клетку млекопитающего.
34. Выделенная клетка по п. 33, отличающаяся тем, что клетка стабильно трансфицируется или транзиентно трансфицируется вектором или набором векторов по пп. 30 или 31.
35. Фармацевтическая композиция, содержащая антигенсвязывающую полипептидную конструкцию по любому из пп. 1-28 и фармацевтически приемлемый носитель.
36. Фармацевтическая композиция по п. 35, дополнительно содержащая одно или более веществ, выбранных из группы, состоящей из буфера, антиоксиданта, молекулы с низкой молекулярной массой, лекарственного средства, белка, аминокислоты, углевода, липида, хелатирующего агента, стабилизатора и наполнителя.
37. Способ приготовления конструкции по любому из пп. 1-27, включающий этапы:
(d) получение клетки-хозяина, содержащей полинуклеотид или набор полинуклеотидов, кодирующих антигенсвязывающую полипептидную конструкцию;
(e) культивирование клетки-хозяина в культуре клеток-хозяев в условиях, которые позволяют экспрессировать антигенсвязывающую полипептидную конструкцию, и
(f) сбор антигенсвязывающей полипептидной конструкции из культуры клеток-хозяев.
38. Способ по п. 37, отличающийся тем, что клетка-хозяин транзиентно трансфицируется или стабильно трансфицируется полинуклеотидом или набором полинуклеотидов.
39. Машиночитаемый носитель данных, хранящий
набор данных, содержащий данные, представляющие комплементарные аминокислотные модификации в первом гетеродимере, содержащем полипептидную последовательность тяжелой цепи (H1) первого иммуноглобулина и полипептидную последовательность легкой цепи лямбда (L1) первого иммуноглобулина; и втором гетеродимере, содержащем полипептидную последовательность тяжелой цепи (Н2) второго иммуноглобулина и полипептидную последовательность легкой цепи каппа (L2) второго иммуноглобулина, причем H1 и H2 каждая содержат, по меньшей мере, вариабельный домен тяжелой цепи (домен VH) и константный домен тяжелой цепи (домен CH1) и отличаются друг от друга; причем L1 и L2 каждая содержат, по меньшей мере, вариабельный домен легкой цепи (домен VL) и константный домен легкой цепи (домен CL), причем комплементарные аминокислотные модификации способствуют преимущественному спариванию H1 с L1 по сравнению с L2, и H2 с L2 по сравнению с L1, и причем набор данных содержит данные, представляющие эти модификации, перечисленные в одной или более таблицах с 10-A1 по 10-A12 или таблицах с 10-B1 по 10-B10 или подмножество этих модификаций.
40. Способ получения биспецифической антигенсвязывающей полипептидной конструкции, которая содержит:
a. первый гетеродимер, содержащий полипептидную последовательность тяжелой цепи (H1) первого иммуноглобулина и полипептидную последовательность легкой цепи лямбда (L1) первого иммуноглобулина; и
b. второй гетеродимер, содержащий полипептидную последовательность тяжелой цепи (H2) второго иммуноглобулина и полипептидную последовательность легкой цепи каппа (L2) второго иммуноглобулина,
причем H1 и H2 каждая содержат, по меньшей мере, вариабельный домен тяжелой цепи (домен VH) и константный домен тяжелой цепи (домен CH1) и отличаются друг от друга; причем L1 и L2 каждая содержат вариабельный домен легкой цепи (домен VL) и константный домен легкой цепи (домен CL), и причем дна или более из H1, L1, H2 и L2 содержат аминокислотные модификации, которые способствуют преимущественному спариванию H1 с L1 по сравнению с L2 и H2 с L2 по сравнению с L1,
способ, включающий
a. введение одной или более комплементарных аминокислотных модификаций из набора данных по п. 37 в H1, L1, H2 и/или L2; и
b. коэкспрессию H1, L1, H2 и L2 в клетке-хозяине для получения продукта экспрессии, содержащего биспецифическую антигенсвязывающую полипептидную конструкцию.
41. Способ по п. 40, дополнительно включающий определение количества биспецифической антигенсвязывающей полипептидной конструкции в продукте экспрессии относительно других полипептидных продуктов для отбора предпочтительного подмножества комплементарных аминокислотных модификаций, которые обеспечивают повышенное количество указанной биспецифической антигенсвязывающей полипептидной конструкции по сравнению с количеством биспецифической антигенсвязывающей полипептидной конструкции в продукте экспрессии, полученном в результате коэкспрессии H1, L1, H2 и L2 дикого типа.
42. Способ по п. 40 или 41, отличающийся тем, что конструкция содержит Fc, содержащий, по меньшей мере, две последовательности доменов CH3, и при этом Fc спарен с помощью или без помощи одного или более линкеров с первым гетеродимером и вторым гетеродимером.
43. Способ по п. 42, отличающийся тем, что Fc представляет собой гетеродимерный Fc, содержащий одну или более аминокислотных модификаций, которые способствуют образованию гетеродимерного Fc относительно гомодимерного Fc.
44. Способ по любому из пп. 40-43, отличающийся тем, что, в случае если H1, L1, H2 и L2 коэкспрессируются,
a) изменение в количестве полного правильного спаривания, измеренное суммой полученных % H1L1 и % H2L2, составляет более, чем около 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40% или 45% по сравнению со спариванием соответствующих полипептидных цепей H1, L1, H2 и L2 без аминокислотных замен в области Fab, которые способствуют преимущественному спариванию;
b) изменение в количестве полного правильного спаривания, измеренное количеством биспецифического антитела, полученного в процентах от видов, отличных от полученных полуантител, составляет более, чем около 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70% или 80% по сравнению со спариванием соответствующих полипептидных цепей H1, L1, H2 и L2 без аминокислотных замен в области Fab, которые способствуют преимущественному спариванию, или
изменение в количестве полного правильного спаривания, измеренное количеством биспецифического антитела, полученного в процентах от всех полученных видов, составляет более, чем около 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70% или 80% по сравнению со спариванием соответствующих полипептидных цепей H1, L1, H2 и L2 без аминокислотных замен в области Fab, которые способствуют преимущественному спариванию.
