Система доставки белков - RU2007125135A

Реферат

1. Вирусоподобные частицы (VLP), имеющие оболочку из липидного бислоя, происходящую из плазматической мембраны, включающие:

а) структурный белок вируса, или его фрагмент, или производное, способное образовывать покрытые оболочкой VLP;

б) физиогенный белок и

в) рекомбинантный белок-мишень.

2. VLP по п.1, где оболочка из липидного бислоя, происходящая из плазматической мембраны, включает, по меньшей мере 4, более предпочтительно, по меньшей мере, шесть, наиболее предпочтительно, по меньшей мере, 8 различных типов липидов.

3. VLP по п.1, где оболочка из липидного бислоя, происходящая из плазматической мембраны, включает фосфатидилсерин.

4. VLP по п.1, где оболочка из липидного бислоя, происходящая из плазматической мембраны, включает, по меньшей мере 4, более предпочтительно, по меньшей мере, шесть, наиболее предпочтительно, по меньшей мере, 8 различных типов белков.

5. VLP по п.1, где структурный белок вируса является структурным белком из вируса вирусных семейств, выбранных из группы, включающей Retroviridae, Coronaviridae, Herpesviridae, Hepadidviridae и Orthomyxoviridae.

6. VLP по п.5, где структурный белок вируса является структурным белком из HIV-1.

7. VLP по п.6, где структурный белок вируса является Pr55Gag из HIV-1.

8. VLP по п.1, где VLP включает, по меньшей мере, 2000 копий структурного белка вируса, более предпочтительно, по меньшей мере, 3000 копий и наиболее предпочтительно, по меньшей мере, 4000 копий.

9. VLP по п.1, где физиогенный белок выбран из группы, состоящей из гемагглютинина, физиогенного белка респираторного синцитиального вируса, Е белков вируса клещевого энцефалита и вируса лихорадки денге, Е1 белка вируса леса Семлики, G белков вируса бешенства и вируса везикулярного стоматита и gp64 бакуловируса или их функционально эквивалентных фрагментов или производных.

10. VLP по п.9, где физиогенный белок является G белком вируса везикулярного стоматита.

11. VLP по п.1, где физиогенный белок является гетерологичным структурному белку вируса.

12. VLP по п.1, где рекомбинантный белок-мишень является мембранным белком.

13. VLP по п.12, где мембранный белок является белком с единственным трансмембранным доменом.

14. VLP по п.1, где рекомбинантный белок-мишень выбран из группы, состоящей из CFTR, SCF-R и Нох4.

15. Способ доставки рекомбинантного белка-мишени в клетку-реципиент, включающий:

а) обеспечение VLP по любому из пп.1-14 и

б) выдерживание клетки-реципиента с указанным VLP.

16. Способ белковой терапии, включающий:

а) обеспечение VLP по любому из предшествующих пунктов и

б) выдерживание клетки с указанным VLP в количестве, эффективном для обеспечения терапевтического эффекта, ассоциированного с рекомбинантным белком-мишенью.

17. Способ по п.16, где белковая терапия предназначена для лечения муковисцидоза.

18. Фармацевтическая композиция, включающая VLP по любому из пп.1-14 вместе с, по меньшей мере, одним фармацевтически приемлемым носителем, дилюентом или эксципиентом.

19. VLP по любому из пп.1-14, для применения в терапии.

20. Применение VLP по п.14 в производстве медикамента для лечения муковисцидоза.

21. Способ производства VLP по любому из пп.1-14, включающий совместную экспрессию структурного белка вируса, или его фрагмента, или производного, способного образовывать VLP с оболочкой, совместно с физиогенным белком, совместно с рекомбинантным белком-мишенью в клетках, культивируемых in vitro, и выделение VLP из культуральной среды

22. Клетки-хозяева in vitro, включающие:

а) нуклеиновую кислоту, кодирующую структурный белок вируса, или его фрагмент, или производное, способный образовывать VLP с оболочкой;

б) нуклеиновую кислоту, кодирующую физиогенный белок; и

в) нуклеиновую кислоту, кодирующую рекомбинантный белок-мишень.

23. Вектор нуклеиновой кислоты, включающий:

а) последовательность, кодирующую структурный белок вируса, или его фрагмент, или производное, способный образовывать VLP с оболочкой;

б) последовательность, кодирующую физиогенный белок; и

в) участок клонирования, в который может быть встроена последовательность, кодирующая белок-мишень.

24. Вектор по п.23, дополнительно включающий, по меньшей мере, одно из следующего списка: точку начала репликации, маркер селекции, сайт старта транскрипции, энхансер транскрипции, индуктор транскрипции, регуляторный элемент транскрипции, 3'-нетранслируемую регуляторную последовательность, 5'-нетранслируемую регуляторную последовательность и последовательности, позволяющие обнаружить и/или очистить продукт белок-мишень.

25. Набор реактивов, включающий вектор по п.22 или 23.

26. Набор реактивов, включающий:

а) стабильную линию клеток-хозяев, включающую нуклеиновую кислоту, кодирующую структурный белок вируса, или его фрагмент, или производное, способный образовывать VLP с оболочкой, и нуклеиновую кислоту, кодирующую физиогенный белок; и

б) вектор, подходящий для трансфекции указанной линии клеток-хозяев последовательностью, кодирующей белок-мишень.

27. VLP, имеющие оболочку из липидного бислоя, происходящую из плазматической мембраны, указанные VLP дополнительно включают, по меньшей мере, один структурный белок вируса, или его фрагмент, или производное, способный образовывать VLP с оболочкой, и рекомбинантный мембраносвязанный белок-мишень, где белок-мишень находится в оболочке VLP.