Способ двойной конъюгации для получения конъюгатов антитело-лекарственное средство - RU2019142720A

1. Способ получения конъюгата антитело-лекарственное средство, включающий стадии:

a. избирательного восстановления сконструированного антитела с цистеиновыми заменами, включающего реакцию антитела, содержащего один или более сконструированных остатков цистеина в положениях, выбранных из 40, 41 и 89 тяжелой цепи в соответствии с системой нумерации Kabat, 152, 153, 155 и 171 тяжелой цепи в соответствии с системой нумерации Eu, 40 и 41 легкой цепи в соответствии с системой нумерации Kabat, и 165 и 168 легкой цепи в соответствии с системой нумерации Eu, с соединением в соответствии с формулой (I), (II), (III), (IV), (V), (VI) или (VII)

или его солью;

b. дополнительного восстановления избирательно восстановленного антитела со стадии a. с использованием средства, восстанавливающего межцепьевые дисульфидные связи; и

c. конъюгации терапевтических групп с дополнительно восстановленным антителом со стадии b. посредством расщепляемого или нерасщепляемого линкеров.

2. Способ по п.1, где соединение в соответствии с формулой (I), (II), (III), (IV), (V), (VI) или (VII) присутствует в количестве по меньшей мере один молярный эквивалент на молярное количество сконструированного цистеина.

3. Способ по п.1 или 2, где сконструированное антитело с цистеиновыми заменами подвергают реакции с соединением в соответствии с формулой (I), (II) или (III), или его солью.

4. Способ по п.1 или 2, где антитело содержит один или более сконструированных остатков цистеина в положениях, выбранных из 40, 41, 152 и 153 тяжелой цепи и 40, 41 и 165 легкой цепи.

5. Способ по п.4, где антитело содержит один или более сконструированных остатков цистеина в положениях, выбранных из 41 тяжелой цепи и 40 и 41 легкой цепи.

6. Способ по п.1 или 2, где средство, восстанавливающее межцепьевые дисульфидные связи, представляет собой трис(3-сульфофенил)фосфин, трис(2-карбоксиэтил)фосфин или дитиотреитол.

7. Способ по п.1 или 2, где средство, восстанавливающее межцепьевые дисульфидные связи, присутствует в количестве более, чем 0,1 молярного эквивалента на молярный эквивалент антитела.

8. Способ по п.1 или 2, где антитело представляет собой моноспецифическое или биспецифическое антитело, или фрагмент антитела, содержащие по меньшей мере одну вариабельную область тяжелой цепи и легкой цепи, связывающиеся с мишенью, выбранной из группы, состоящей из аннексина A1, B7H4, CA6, CA9, CA15-3, CA19-9, CA27-29, CA125, CA242, CCR2, CCR5, CD2, CD19, CD20, CD22, CD30, CD33, CD37, CD38, CD40, CD44, CD47, CD56, CD70, CD74, CD79, CD115, CD123, CD138, CD203c, CD303, CD333, CEA, CEACAM, CLCA-1, CLL-1, c-MET, Cripto, DLL3, EGFL, EGFR, EPCAM, EPh (например, EphA2 или EPhB3), рецептора эндотелина B (ETBR), FAP, FcRL5 (CD307), FGFR (например, FGFR3), FOLR1, GCC, GPNMB, HER2, HMW-MAA, интегрина α (например, αvβ3 и αvβ5), IGF1R, TM4SF1 (или антигена L6), подобного антигену Льюиса A углевода, антигена Льюиса X, антигена Льюиса Y, LIV1, мезотелина, MUC1, MUC16, NaPi2b, нектина-4, PD-1, PD-L1, PSMA, PTK7, SLC44A4, STEAP-1, антигена 5T4 (или TPBG, гликопротеина трофобластов), TF (тканевого фактора), TF-Ag, Tag72, TNFR, TROP2, VEGFR и VLA.

9. Конъюгат антитело-лекарственное средство, который можно получать способом по любому из пп. 1-8.

10. Конъюгат антитело-лекарственное средство, где антитело содержит один или более сконструированных остатков цистеина в положениях, выбранных из 40, 41, и 89 тяжелой цепи в соответствии с системой нумерации Kabat, 152, 153, 155 и 171 тяжелой цепи в соответствии с системой нумерации Eu, 40 и 41 легкой цепи в соответствии с системой нумерации Kabat, и 165 и 168 легкой цепи в соответствии с системой нумерации Eu; где терапевтические группы конъюгированы посредством расщепляемого или нерасщепляемого линкера с одним или более сконструированными остатками цистеина, так же как с одним или более восстановленными остатками цистеина из межцепьевой связи антитела; и где конъюгат антитело-лекарственное средство имеет среднее DAR по меньшей мере 2,0.

11. Конъюгат антитело-лекарственное средство по п.10, где антитело содержит один или более сконструированных остатков цистеина в положениях, выбранных из 41 тяжелой цепи и 40 и 41 легкой цепи.

12. Конъюгат антитело-лекарственное средство по п.10 или 11, имеющий среднее DAR по меньшей мере 2,2.

13. Конъюгат антитело-лекарственное средство по п.10 или 11, имеющий среднее DAR от 2,0 до 6,0.

14. Конъюгат антитело-лекарственное средство по п.10 или 11 для применения в качестве лекарственного средства.

15. Фармацевтическая композиция, содержащая конъюгат антитело-лекарственное средство по любому из пп. 9-13 и один или более фармацевтически приемлемых эксципиентов.

16. Фармацевтическая композиция по п.15 для применения в качестве лекарственного средства.