Химерный цитокиновый рецептор - RU2018109350A
Код документа: RU2018109350A
Формула
1. Химерный цитокиновый рецептор (CCR), содержащий:
экзодомен, который связывается с лигандом, выбранным из фактора, секретируемого опухолью, хемокина и антигена клеточной поверхности; а также
эндодомен цитокинового рецептора.
2. Химерный цитокиновый рецептор по п. 1, который включает два полипептида:
(i) первый полипептид, который включает:
(a) первый антигенсвязывающий домен, который связывает первый эпитоп лиганда
(b) первую цепь эндодомена цитокинового рецептора; а также
(ii) второй полипептид, который включает:
(а) второй антигенсвязывающий домен, который связывает второй эпитоп лиганда
(b) вторую цепь эндодомена цитокинового рецептора.
3. Химерный цитокиновый рецептор по п. 2, в котором каждый из первого и второго антигенсвязывающих доменов является одноцепочечными вариабельными фрагментами (scFvs).
4. Химерный цитокиновый рецептор по п. 2, где каждый из первого и второго антигенсвязывающих доменов является однодоменными связующими (dAbs).
5. Химерный цитокиновый рецептор по п. 1, который включает два полипептида:
(i) первый полипептид, который включает:
(a) вариабельный домен тяжелой цепи (VH)
(b) первую цепь эндодомена цитокинового рецептора; а также
(ii) второй полипептид, который включает:
(a) вариабельный домен легкой цепи (VL)
(b) вторую цепь эндодомена цитокинового рецептора.
6. Химерный цитокиновый рецептор по п. 5, в котором первая и вторая цепи для эндодоменов цитокинового рецептора различны и выбраны из эндодомена α-, β-, γ-цепей цитокинового рецептора I типа.
7. Химерный цитокиновый рецептор по п. 5, где первая и вторая цепи для эндодоменов цитокинового рецептора являются одинаковыми и выбранными из эндодомена α-, β-, γ-цепей цитокинового рецептора I типа.
8. Химерный цитокиновый рецептор по любому из предыдущих пунктов, в котором эндодомен цитокинового рецептора включает:
(i) эндодомен β-цепи рецептора IL-2
(ii) эндодомен α-цепи рецептора IL-7; или
(iii) эндодомен α-цепи рецептора IL-15; и/или
(iv) общий эндодомен γ-цепи рецептора.
9. Химерный цитокиновый рецептор по любому из предыдущих пунктов, в котором лиганд представляет собой секретируемый опухолью фактор, выбранный из: простатоспецифического антигена (PSA), карциноэмбрионального антигена (СЕА), фактора роста эндотелия сосудов (VEGF) и СА125.
10. Химерный цитокиновый рецептор по любому из пп. 1-7, где лиганд представляет собой хемокин, выбранный из: CXCL12, CCL2, CCL4, CCL5 и CCL22.
11. Клетка, которая содержит химерный цитокиновый рецептор по любому из предыдущих пунктов.
12. Клетка по п. 11, которая содержит первый химерный цитокиновый рецептор и второй химерный цитокиновый рецептор, которые связывают различные эпитопы на одном лиганде.
13. Клетка по п. 12, где первый первый химерный цитокиновый рецептор включает эндодомен α- или β-цепи цитокинового рецептора I типа, и второй химерный цитокиновый рецептор включает эндодомен γ-цепи цитокинового рецептора I типа, так что, когда первый химерный цитокиновый рецептор и второй химерный цитокиновый рецептор связывают лиганд, происходит комбинированная сигнализация через α-/β-цепь и γ-цепь.
14. Клетка по любому из пп. 11-13, которая также включает химерный антигенный рецептор.
15. Клетка по п. 14, где химерный антигенный рецептор связывает ассоциированный с опухолью антиген клеточной поверхности.
16. Клетка по п. 15, где химерный антигенный рецептор связывает антиген клеточной поверхности, ассоциированный с раком предстательной железы.
17. Клетка по п. 16, в которой антиген клеточной поверхности представляет собой антиген стволовых клеток предстательной железы (PSCA) или простатоспецифический мембранный антиген (PSMA).
18. Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая химерный цитокиновый рецептор (CCR) по любому из пп. 1-10.
19. Конструкция нуклеиновой кислоты, которая содержит первую последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую первый CCR, и вторую последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую второй CCR, конструкцию нуклеиновой кислоты, имеющую структуру:
AgB1-спейсер1-TM1-эндо1-коэкспр-AbB2-спейсер2-ТМ2-эндо2,
в которой
AgB1 представляет собой последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую антигенсвязывающий домен первого CCR;
спейсер 1 представляет собой последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую спейсер первого CCR;
TM1 представляет собой последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую трансмембранный домен первого CCR;
эндо 1 представляет собой последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую эндодомен первого CCR;
коэкспр представляет собой последовательность нуклеиновой кислоты, обеспечивающую коэкспрессию обоих CCRs;
AgB2 представляет собой последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую антигенсвязывающий домен второго CCR;
спейсер 2 представляет собой последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую спейсер второго CCR;
TM2 представляет собой последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую трансмембранный домен второго CCR;
эндо 2 представляет собой последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую эндодомен второго CCR.
20. Конструкция нуклеиновой кислоты по п. 19, которая также кодирует химерный антигенный рецептор (CAR), конструкцию нуклеиновой кислоты, имеющую структуру:
(i) CCRAgB1-CCRспейсер1-CCRTM1-CCRэндо1-коэкспр1-CCRAgB2-CCRспейсер2-CCRTM2-CCRэндо2-коэкспр2-CARAgB-CARспейсер-CARTM-CARэндо;
(ii) CCRAgB1-CCRспейсер1-CCRTM1-CCRэндо1-коэкспр1-CARAgB-CARспейсер-CARTM-CARэндо-коэкспр2-CCRAgB2-CCRспейсер2-CCRTM2-CCRэндо2; или
(iii) CARAgB-CARспейсер-CARTM-CARэндо-коэкспр1-CCRAgB1-CCRспейсер1-CCRTM1-CCRэндо1-коэкспр2-CCRAgB2-CCRспейсер2-CCRTM2-CCRэндо2;
в которой
CCRAgB1 представляет собой последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую антигенсвязывающий домен первого CCR;
CCRспейсер1 представляет собой последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую спейсер первого CCR;
CCRTM1 представляет собой последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую трансмембранный домен первого CCR;
CCRэндо1 представляет собой последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую эндодомен первого CCR;
CCRAgB2 представляет собой последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую антигенсвязывающий домен второго CCR;
CCRспейсер2 представляет собой последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую спейсер второго CCR;
CCRTM2 представляет собой последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую трансмембранный домен второго CCR;
CCRэндо2 представляет собой последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую эндодомен второго CCR;
Коэкспр1 и коэкспр2 представляют собой последовательности нуклеиновой кислоты, обеспечивающие коэкспрессию двух фланкирующих последовательностей;
CARAgB представляет собой последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую антигенсвязывающий домен CAR;
CARспейсер представляет собой последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую спейсер CAR;
CARTM представляет собой последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую трансмембранный домен CAR; а также
CARэндо представляет собой последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую эндодомен CAR.
21. Конструкция нуклеиновой кислоты по п. 19 или 20, где коэкспр кодирует последовательность, содержащую саморасщепляющийся пептид.
22. Конструкция нуклеиновой кислоты по пп. 19-21, где альтернативные кодоны используются в областях последовательности, кодирующих одни и те же или подобные аминокислотные последовательности, чтобы избежать гомологической рекомбинации.
23. Вектор, включающий конструкцию нуклеиновой кислоты по любому из пп. 19-22.
24. Ретровирусный вектор или лентивирусный вектор, или транспозон по п. 23.
25. Набор, который включает:
i) вектор, содержащий последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую первый CCR, как определено в любом из пп. 1-10; а также
ii) вектор, содержащий последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую второй CCR, как определено в любом из пп. 1-10.
26. Набор по п. 25, который также включает вектор, содержащий последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую химерный антигенный рецептор.
27. Набор, который включает:
i) вектор, содержащий последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую CCR, как определено в любом из пп. 1-10; а также
ii) вектор, содержащий последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую химерный антигенный рецептор.
28. Способ получения клетки по любому из пп. 11-17, который включает стадию введения: последовательности нуклеиновой кислоты по п. 18; конструкции нуклеиновой кислоты по любому из пп. 19-22; вектора по п. 23 или 24; или набора векторов по любому из пп. 22-27, в клетку.
29. Способ по п. 28, где клетка из образца, полученного от субъекта.
30. Фармацевтическая композиция, содержащая множество клеток по любому из пп. 11-17.
31. Способ лечения и/или профилактики заболевания, который включает стадию введения фармацевтической композиции по п. 30 субъекту.
32. Способ по п. 31, который включает в себя следующие этапы:
(i) выделение клеточного образца от субъекта;
(ii) трансдукция или трансфекция клеток с помощью последовательности нуклеиновой кислоты по п. 18; конструкции нуклеиновой кислоты по любому из пп. 19-22; вектора по п. 23 или 24; или набора векторов по любому из пп. 22-27; а также
(iii) введение клеток из (ii) субъекту.
33. Способ по п. 32, где образец представляет собой образец, содержащий Т-клетки.
34. Способ по п. 32 или 33, где заболевание представляет собой рак.
35. Фармацевтическая композиция по п. 30 для применения при лечении и/или профилактике заболевания.
36. Применение клетки по любому из пп. 11-17 при изготовлении лекарственного средства для лечения и/или профилактики заболевания.
Комментарии