Способ продуцирования белка - RU2015128651A
Код документа: RU2015128651A
Формула
1. Способ продуцирования рекомбинантного белка, включающий
(а) сбор бульона микробных клеток, который экспрессирует рекомбинантный белок; и
(б) добавление количества флокулянта, необходимого для достижения распределения частиц по размерам, при котором примерно 5 об.% или менее частиц имеют размер в интервале 5 мкм или менее.
2. Способ по п. 1, дополнительно включающий стадию
(в) осветления сбора, подвергнутого флокулированию.
3. Способ по п. 2, дополнительно включающий стадию
(г) очистки рекомбинантного белка из осветленного сбора, подвергнутого флокулированию.
4. Способ осветления микробного сбора, включающий
(а) сбор бульона микробных клеток;
(б) добавление количества флокулянта, необходимого для достижения распределения частиц по размерам, при котором примерно 5 об.% или менее частиц имеют размер в интервале 5 мкм или менее; и
(в) осветление сбора, подвергнутого флокулированию.
5. Способ по п. 4, при котором бульон микробных клеток экспрессирует рекомбинантный белок.
6. Способ по п. 2 или 4, при котором стадия (в) включает (1) отстаивание; и/или (2) центрифугирование; и/или (3) фильтрование.
7. Способ по п. 1 или 5, при котором экспрессируемый рекомбинантный белок содержит сигнальную последовательность.
8. Способ по п. 7, при котором сигнальная последовательность представляет собой сигнальную последовательность, направляющую в периплазму.
9. Способ по п. 1 или 4, в котором флокулянт добавляют в количестве, составляющем 0,01-5% от объема сбора.
10. Способ по п. 1 или 4, в котором флокулянт добавляют в количестве, составляющем 0,01-2% от объема сбора.
11. Способ по п. 1 или 4, в котором флокулянт представляет собой полиэтиленимин (PEI) или поли(диаллилдиметиламмония хлорид) (PDADMAC).
12. Способ по п. 1 или 4, в котором флокулянт представляет собой CaCl2.
13. Способ по п. 1 или 4, в котором бульон микробных клеток представляет собой бульон клеток Escherichia coli.
14. Способ по п. 1 или 5, в котором рекомбинантный белок представляет собой антигенсвязывающий белок.
15. Способ по п. 14, в котором антигенсвязывающий белок содержит (а) слияние пептид-dAb; (б) dAb-конъюгат; (в) слияние dAb-dAb или (г) голое dAb.
16. Способ по п. 14, в котором антигенсвязывающий белок содержит (а) эксендин 4-AlbudAb™ (SEQ ID NO: 1); (б) AlbudAb™ с C-концевым цистеином (SEQ ID NO: 3); (в) AlbudAb™-VH dAb против TNFR1 (рецептор 1 фактора некроза опухоли) (SEQ ID NO: 5); или (г) VH dAb против TNFR1 (SEQ ID NO: 7 или 9).
17. Модифицированный сбор клеток Escherichia coli, где
(г) клетки экспрессируют рекомбинантный белок, направленный в периплазму;
(д) сбор содержит 0,01-2 об.% PEI; и
(е) распределение частиц сбора по размерам является таким, что примерно 5 об.% или менее частиц имеют размер в интервале 5 мкм или менее.
18. Модифицированный сбор по п. 17, где рекомбинантный белок содержит антигенсвязывающий белок.
19. Модифицированный сбор по п. 18, где антигенсвязывающий белок содержит: (а) слияние пептид-dAb; (б) dAb-конъюгат; (в) слияние dAb-dAb или (г) голое dAb.
20. Модифицированный сбор по п. 18, где антигенсвязывающий белок содержит (а) эксендин 4-AlbudAb™; (б) AlbudAb™ с C-концевым цистеином; (в) AlbudAb™-VH dAb против TNFR1 или (г) VH dAb против TNFR1.
