Строение экспрессионного вектора, новые способы получения клеток-продуцентов и их применение для рекомбинантного получения полипептидов - RU2017127208A
Код документа: RU2017127208A
Формула
1. Экспрессионный вектор, содержащий
экспрессионную кассету лёгкой цепи антитела
экспрессионную кассету тяжёлой цепи антитела и
экспрессионную кассету маркера селекции,
где экспрессионные кассеты расположены однонаправлено и
где экспрессионные кассеты расположены по направлению от 5'- к 3'-концу последовательности в следующем порядке: экспрессионная кассета тяжёлой цепи антитела, экспрессионная кассета лёгкой цепи антитела и экспрессионная кассета маркера селекции.
2. Экспрессионный вектор по п. 1, в котором экспрессионная кассета лёгкой цепи антитела и/или экспрессионная кассета тяжёлой цепи антитела, и/или экспрессионная кассета маркера селекции независимо друг от друга содержат промотор, выбранный из промотора фактора элонгации 1α человека, промотора CMV человека и промотора SV40.
3. Экспрессионный вектор по п. 1 или 2, в котором одна, две или все три экспрессионные кассеты содержат промотор фактора элонгации 1α человека.
4. Экспрессионный вектор по пп. 1-3, в котором экспрессионная кассета лёгкой цепи антитела и/или экспрессионная кассета тяжёлой цепи антитела, и/или экспрессионная кассета маркера селекции независимо друг от друга содержат промотор фактора элонгации 1α человека.
5. Экспрессионный вектор по пп. 1-4, в котором экспрессионные кассеты не содержат терминаторную последовательность.
6. Экспрессионный вектор по п. 5, в котором терминаторной последовательностью является транскрипционная терминаторная последовательность гена гастрина человека (hGT).
7. Экспрессионный вектор по п. 1 или 2, в котором одна, две или все три экспрессионные кассеты содержат промотор CMV человека.
8. Экспрессионный вектор по п. 1, 2 или 7, в котором экспрессионная кассета лёгкой цепи антитела и/или экспрессионная кассета тяжёлой цепи антитела, и/или экспрессионная кассета маркера селекции независимо друг от друга содержат промотор CMV человека.
9. Экспрессионный вектор по пп. 1-4 и 7-8, в котором одна, две или все три экспрессионные кассеты содержат поли(A)-сигнальную последовательность бычьего гормона роста.
10. Экспрессионный вектор по пп. 1-4 и 7-9, в котором экспрессионная кассета лёгкой цепи антитела и/или экспрессионная кассета тяжёлой цепи антитела, и/или экспрессионная кассета маркера селекции независимо друг от друга содержат поли(A)-сигнальную последовательность бычьего гормона роста.
11. Экспрессионный вектор по пп. 1-4 и 7-10, в котором экспрессионная кассета лёгкой цепи антитела и/или экспрессионная кассета тяжёлой цепи антитела, и/или экспрессионная кассета маркера селекции независимо друг от друга содержат поли(A)-сигнальную последовательность, выбранную из поли(A)-сигнальной последовательности бычьего гормона роста и поли(A)-сигнальной последовательности SV40.
12. Экспрессионный вектор по пп. 1 и 7-11, в котором одна, две или все три экспрессионные кассеты содержат терминаторную последовательность гастрина человека после поли(A)-сигнальной последовательности.
13. Экспрессионный вектор по пп. 1 и 7-12, в котором экспрессионная кассета лёгкой цепи антитела и/или экспрессионная кассета тяжёлой цепи антитела, и/или экспрессионная кассета маркера селекции независимо друг от друга содержат терминаторную последовательность гастрина человека после поли(A)-сигнальной последовательности.
14. Экспрессионный вектор по пп. 1 и 7-13, в котором экспрессионная кассета лёгкой цепи антитела и/или экспрессионная кассета тяжёлой цепи антитела, и/или экспрессионная кассета маркера селекции независимо друг от друга содержат в направлении от 5' к 3' поли(A)-сигнальную последовательность бычьего гормона роста и терминаторную последовательность гастрина человека.
15. Экспрессионный вектор по пп. 1-14, в котором промотор одной, двух или всех трех экспрессионных кассет содержит интрон А.
16. Экспрессионный вектор по пп. 1-8 и 12-13, в котором одна, две или все три экспрессионные кассеты содержат поли(A)-сигнальную последовательность SV40.
17. Экспрессионный вектор по п. 16, в котором одна, две или все три экспрессионные кассеты содержат промотор SV40.
18. Экспрессионный вектор по пп. 1-17, в котором нуклеиновая кислота, кодирующая лёгкую цепь антитела, и/или нуклеиновая кислота, кодирующая тяжёлую цепь антитела, содержит, по меньшей мере, один интрон.
19. Экспрессионный вектор по пп. 1-18, в котором нуклеиновая кислота, кодирующая лёгкую цепь антитела, и/или нуклеиновая кислота, кодирующая тяжёлую цепь антитела, является кДНК.
20. Применение экспрессионного вектора по пп. 1-19 для рекомбинантного получения антитела.
21. Применение экспрессионного вектора по пп. 1-19 для получения стабильной клеточной линии.
22. Применение экспрессионного вектора по пп. 1-19 для получения линии клеток-продуцентов.
23. Применение экспрессионного вектора по пп. 1-19, включающего по меньшей мере одну экспрессионную кассету, содержащую промотор фактора элонгации 1α человека, для получения стабильной клеточной линии.
24. Применение экспрессионного вектора по пп. 1-19, включающего по меньшей мере одну экспрессионную кассету, содержащую промотор фактора элонгации 1α человека, для получения линии клеток-продуцентов.
25. Применение экспрессионного вектора по пп. 1-19, включающего по меньшей мере одну экспрессионную кассету, содержащую промотор фактора элонгации 1α человека, для рекомбинантного получения антитела.
26. Применение экспрессионного вектора по пп. 1-19, включающего по меньшей мере одну экспрессионную кассету, содержащую промотор CMV человека, для получения линии клеток-продуцентов.
27. Применение экспрессионного вектора по пп. 1-19, включающего по меньшей мере одну экспрессионную кассету, содержащую промотор CMV человека, для получения стабильной клеточной линии.
28. Применение экспрессионного вектора по пп. 1-19, включающего по меньшей мере одну экспрессионную кассету, содержащую промотор CMV человека, для получения антитела.
29. Способ трансфекции эукариотической клетки экспрессионным вектором, где экспрессионный вектор линеаризован перед трансфекцией путём разрезания в точке начала репликации прокариот.
30. Способ по п.29, в котором точка начала репликации прокариот находится между экспрессионной кассетой лёгкой цепи антитела и экспрессионной кассетой тяжёлой цепи антитела.
31. Способ по пп. 29-30, в котором экспрессионный вектор представляет собой экспрессионный вектор по пп. 1-19.
32. Способ селекции эукариотических клеток, содержащих нуклеиновую кислоту, кодирующую антитело, в котором агент для селекции в первый раз добавляют в культуральную среду примерно через 24 часа после трансфекции.
33. Способ по п. 32, в котором нуклеиновая кислота, кодирующая антитело, содержится в экспрессионном векторе по пп. 1-19.
34. Применение способа по пп. 32-33 для получения эукариотической клетки для рекомбинантного получения антитела.
35. Применение клетки, селектированной с помощью способа по пп. 32-33, для рекомбинантного получения антитела.
36. Способ получения антитела, включающий следующие этапы:
культивирование эукариотической клетки, которая была трансфецирована экспрессионным вектором по пп. 1-19, и
выделение антитела из клетки или из культуральной среды.
37. Способ получения антитела, включающий следующий этап:
культивирование эукариотической клетки, полученной путём трансфекции экспрессионным вектором, кодирующим антитело, который был линеаризован перед трансфекцией путём разрезания в точке начала репликации прокариот, и
выделение антитела из клетки или из культуральной среды.
38. Способ получения антитела, включающий следующий этап:
культивирование эукариотической клетки, которая была трансфецирована экспрессионным вектором, кодирующим антитело, и которая была селектирована с помощью добавления в культуральную среду агента для селекции примерно через 24 часа после трансфекции, и
выделение антитела из клетки или из культуральной среды.
39. Способ трансфекции эукариотической клетки экспрессионным вектором, кодирующим антитело, где экспрессионный вектор содержит прокариотические и эукариотические последовательности нуклеиновых кислот, в котором прокариотические последовательности нуклеиновых кислот удаляют из экспрессионного вектора перед трансфекцией эукариотической клетки экспрессионным вектором.
40. Способ по пп. 37-39, в котором экспрессионный вектор, кодирующий антитело, представляет собой экспрессионный вектор по пп. 1-19.
41. Применение линеаризованного экспрессионного вектора, кодирующего антитело, не содержащего прокариотические последовательности нуклеиновых кислот, для трансфекции эукариотической клетки.
42. Применение экспрессионного вектора, кодирующего антитело, содержащего только эукариотические последовательности нуклеиновых кислот, для получения эукариотической клетки для рекомбинантного получения антитела.
43. Применение по пп. 35, 41, 42, в котором экспрессионный вектор, кодирующий антитело, представляет собой экспрессионный вектор по пп. 1-19.
44. Экспрессионный вектор по пп. 1-19, где экспрессионный вектор кодирует биспецифическое антитело.
45. Экспрессионный вектор по п. 44, в котором биспецифическое антитело имеет первую специфичность связывания или сайт связывания, который специфично связывается с первым антигеном или с первым эпитопом на антигене, и биспецифическое антитело имеет вторую специфичность связывания или сайт связывания, который специфично связывается со вторым антигеном или со вторым эпитопом на антигене.
46. Экспрессионный вектор по пп. 1-19 и 44-45, где экспрессионный вектор содержит
первую экспрессионную кассету, содержащую по направлению от 5'- к 3'-концу промотор, нуклеиновую кислоту, кодирующую первую лёгкую цепь антитела, поли(A)-сигнальную последовательность, и, необязательно, терминаторную последовательность,
вторую экспрессионную кассету, содержащую по направлению от 5'- к 3'-концу промотор, нуклеиновую кислоту, кодирующую вторую лёгкую цепь антитела, поли(A)-сигнальную последовательность, и, необязательно, терминаторную последовательность,
третью экспрессионную кассету, содержащую по направлению от 5'- к 3'-концу промотор, нуклеиновую кислоту, кодирующую первую тяжёлую цепь антитела, поли(A)-сигнальную последовательность, и, необязательно, терминаторную последовательность,
четвёртую экспрессионную кассету, содержащую по направлению от 5'- к 3'-концу промотор, нуклеиновую кислоту, кодирующую вторую тяжёлую цепь антитела, поли(A)-сигнальную последовательность, и, необязательно, терминаторную последовательность,
или
первую экспрессионную кассету, содержащую по направлению от 5'- к 3'-концу промотор, нуклеиновую кислоту, кодирующую лёгкую цепь антитела, поли(A)-сигнальную последовательность, и, необязательно, терминаторную последовательность,
вторую экспрессионную кассету, содержащую по направлению от 5'- к 3'-концу промотор, нуклеиновую кислоту, кодирующую первую тяжёлую цепь антитела, поли(A)-сигнальную последовательность, и, необязательно, терминаторную последовательность,
третью экспрессионную кассету, содержащую по направлению от 5'- к 3'-концу промотор, нуклеиновую кислоту, кодирующую вторую тяжёлую цепь антитела, поли(A)-сигнальную последовательность, и, необязательно, терминаторную последовательность,
где лёгкая цепь антитела является общей для обеих тяжёлых цепей антитела.
47. Экспрессионный вектор по пп. 1-19 и 44-46, где экспрессионный вектор содержит
экспрессионную кассету лёгкой цепи антитела,
экспрессионную кассету первой тяжёлой цепи антитела,
экспрессионную кассету второй тяжёлой цепи антитела, и
экспрессионную кассету маркера селекции,
где, по меньшей мере, одна из экспрессионной кассеты тяжёлой цепи антитела и экспрессионной кассеты лёгкой цепи антитела и экспрессионная кассета маркера селекции расположены однонаправленно, и
где однонапраленные экспрессионные кассеты расположены по направлению от 5'- к 3'-концу последовательности в следующем порядке: экспрессионная кассета тяжёлой цепи антитела, экспрессионная кассета лёгкой цепи антитела и экспрессионная кассета маркера селекции.
48. Экспрессионный вектор по пп. 1-19 и 44-46, где экспрессионный вектор содержит
экспрессионную кассету первой лёгкой цепи антитела,
экспрессионную кассету второй лёгкой цепи антитела,
экспрессионную кассету первой тяжёлой цепи антитела,
экспрессионную кассету второй тяжёлой цепи антитела, и
экспрессионную кассету маркера селекции,
где одна из экспрессионных кассет тяжёлой цепи антитела, одна из экспрессионных кассет лёгкой цепи антитела и экспрессионная кассета маркера селекции расположены однонаправленно, и
где однонапраленные экспрессионные кассеты расположены по направлению от 5'- к 3'-концу последовательности в следующем порядке: экспрессионная кассета тяжёлой цепи антитела, экспрессионная кассета лёгкой цепи антитела и экспрессионная кассета маркера селекции.
49. Экспрессионный вектор по пп. 44-48, в котором одна из экспрессионных кассет тяжёлой цепи антитела кодирует тяжёлую цепь антитела, содержащую мутацию типа «впадина».
50. Экспрессионный вектор по пп. 44-49, в котором одна из экспрессионных кассет тяжёлой цепи антитела кодирует тяжёлую цепь антитела, содержащую мутацию типа «выступ».
51. Экспрессионный вектор по пп. 44-50, в котором одна из экспрессионных кассет лёгкой цепи антитела кодирует вариант лёгкой цепи антитела, содержащий вариабельный домен лёгкой цепи антитела и домен CH1 тяжёлой цепи антитела в качестве константного домена, и/или одна из экспрессионных кассет лёгкой цепи антитела кодирует лёгкую цепь антитела, содержащую вариабельный домен лёгкой цепи антитела и домен CL лёгкой цепи антитела в качестве константного домена.
52. Экспрессионный вектор по пп. 44-51, в котором одна из экспрессионных кассет тяжёлой цепи антитела кодирует вариант тяжёлой цепи антитела, содержащий в качестве первого константного домена константный домен лёгкой цепи (CL), и/или одна из экспрессионных кассет тяжёлой цепи антитела кодирует тяжёлую цепь антитела, содержащую в качестве первого константного домена константный домен CH1 тяжёлой цепи.
