Комбинации элементов экспрессионного вектора, новые способы получения клеток-продуцентов и их применение для рекомбинантного получения полипептидов - RU2014129727A

Реферат

1. Способ селекции рекомбинантных клеток млекопитающих, включающий следующие этапы:a) трансфекция клеток млекопитающего экспрессионным вектором, содержащим- первую экспрессионную кассету, содержащую в направлении 5′-3′ промотор hCMV, нуклеиновую кислоту, кодирующую легкую цепь антитела, bGH поли(А)-сигнальную последовательность и последовательность терминатора hGT,- вторую экспрессионную кассету, содержащую в направлении 5′-3′ промотор hCMV, нуклеиновую кислоту, кодирующую тяжелую цепь антитела, bGH поли(А)-сигнальную последовательность и последовательность терминатора hGT, итаким образом, получение множества рекомбинантных клеток млекопитающего,b) селекция из множества рекомбинантных клеток млекопитающего (единичных) рекомбинантных клеток млекопитающего.2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что нуклеиновая кислота, кодирующая легкую цепь антитела и/или нуклеиновая кислота, кодирующая тяжелую цепь антитела, содержит по меньшей мере один интрон.3. Способ по любому из пп. 1 или 2, отличающийся тем, что нуклеиновая кислота, кодирующая легкую цепь антитела и/или нуклеиновая кислота, кодирующая тяжелую цепь антитела, представляет собой кДНК.4. Способ по п. 1, отличающийся тем, что первая экспрессионная кассета и вторая экспрессионная кассета расположены в одном направлении для селекции стабильно трансфецированных клеток.5. Способ по п. 1, отличающийся тем, что первая экспрессионная кассета и вторая экспрессионная кассета расположены в разных направлениях для селекции кратковременно трансфецированных клеток.6. Способ по п. 1, отличающийся тем, что экспрессионная плазмида дополнительно содержит селекционный маркер.7. Способ по п. 6, отличающийся тем, что экспрессионн