Химерные и гуманизированные антитела против интегрина α5в1 которые модулируют ангиогенез - RU2005120019A

Реферат

1. Способ очистки pH-чувствительных антител против интегрина α5в1, охватывающий

(a) адсорбцию антител на аффинный в отношении антитела матрикс, связанный с субстратом; и

(b) элюцию антитела со связанного с субстратом, аффинного в отношении антитела матрикса с использованием раствора элюции, имеющего рН, составляющий примерно от 3,0 до 5,5.

2. Способ по п.1, далее охватывающий стадию

(c) восстановления очищенного антитела.

3. Способ по п.1, в котором раствор элюции имеет значение pH, составляющее примерно от 3,3 до 5,5.

4. Способ по п.1, в котором раствор элюции имеет значение pH, составляющее примерно от 3,5 до 5,5.

5. Способ по п.1, в котором раствор элюции имеет значение pH, составляющее примерно от 3,5 до 4,2.

6. Способ по п.1, в котором раствор элюции имеет значение pH, составляющее примерно от 4,2 до 5,5.

7. Способ по п.1, в котором антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи, характеризующуюся последовательностью, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 2-6, 16 и 20, и вариабельную область легкой цепи, независимо выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 8-12, 18 и 22.

8. Способ по п.1, в котором аффинный в отношении антитела матрикс выбран из группы, состоящей из полипептидов, полисахаридов, жирных кислот, липидов, аптамеров нуклеиновой кислоты, гликопротеинов, липопротеинов, гликолипидов, мультибелковых комплексов, биологической мембраны, вирусов, белка А, белка G, лектинов и Fc-рецепторов.

9. Способ по п.2, далее охватывающий стадию нейтрализации элюата, содержащего элюированное антитело, основным раствором, так что pH нейтрализованного раствора составляет примерно от 6,0 до 8,0.

10. Способ оценки физиологических эффектов, модулируемых химерным или гуманизированным антителом против интегрина α5в1, причем данный способ охватывает

(a) получение образца жизнеспособной ткани, способной к регенерации сосудов;

(b) создание очагов повреждения жизнеспособной ткани, достаточных для образования хороидальной неоваскуляризации;

(c) нанесение на жизнеспособную ткань одной или нескольких доз химерного или гуманизированного антитела против интегрина α5в1; и

(d) мониторинг подвергнутой дозированию жизнеспособной ткани на предмет реваскуляризации.

11. Способ по п.10, в котором жизнеспособная ткань по стадии (a) представляет собой ткань глаза.

12. Способ по п.11, в котором ткань глаза представляет собой часть глаза живого примата.

13. Способ по п.12, в котором стадия нанесения (c) охватывает инъекцию гуманизированного антитела против интегрина α5в1 в стекловидное тело глаза.

14. Способ по п.11, в котором жизнеспособная ткань представляет собой желтое пятно глаза.

15. Способ по п.10, в котором стадия создания охватывает контакт жизнеспособной ткани с лазерным излучением.

16. Способ по п.15, в котором лазерное излучение по мощности составляет примерно от 300 до 700 МВт, и время воздействия не превышает 0,1 с.

17. Способ по п.10, в котором очаги повреждения по стадии (b) составляли примерно от 50 до 100 мкм в диаметре.

18. Способ по п.10, где стадия мониторинга охватывает периодическое фотографирование очагов повреждения, получавших дозу на стадии (c).

19. Способ по п.18, в котором стадия мониторинга далее охватывает непрямую офтальмоскопическую оценку задней камеры глаза и биомикроскопическую оценку переднего сегмента глаза.

20. Способ по п.10, в котором стадия мониторинга охватывает внутривенное введение флуоресцеиновой метки и оценку жизнеспособной ткани флуоресцеиновой ангиографией.

21. Способ по п.10, в котором химерное или гуманизированное антитело против интегрина α5в1 по стадии (c) представляет собой антитело или Fab-фрагмент.

22. Способ по п.10, в котором гуманизированное антитело против интегрина α5в1 по стадии (c) содержит вариабельную область тяжелой цепи, характеризующуюся последовательностью, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 2-6, 16 и 20, и вариабельную область легкой цепи, независимо выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 8-12, 18 и 22.

23. Нуклеиновая кислота, кодирующая полипептид химерного или гуманизированного антитела против интегрина α5в1, причем данный полипептид включает в себя аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 2-6, 8-12, 16, 18, 20, 22, 25, 26, 28, 31 и 32.

24. Нуклеиновая кислота по п.23, где полипептид представляет собой одноцепочечное антитело или Fab.

25. Нуклеиновая кислота по п.24, где полипептид включает в себя SEQ ID NO: 26 и 28.

26. Нуклеиновая кислота по п.23, где полипептид включает в себя SEQ ID NO: 25 и 26.

27. Нуклеиновая кислота по п.23, где полипептид включает в себя SEQ ID NO: 31 и 32.

28. Полипептид, включающий в себя одну или несколько аминокислотных последовательностей, выбранных из группы, состоящей из SEQ ID NO: 2-6, 8-12, 16, 18, 20, 22, 25, 26, 28, 31 и 32.

29. Полипептид по п.28, включающий в себя аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 25 и 26.

30. Полипептид по п.28, включающий в себя аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 26 и 28.

31. Полипептид по п.28, включающий в себя аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 31 и 32.

32. Вектор, включающий в себя одну или несколько нуклеиновых кислот, выбранных из группы, состоящей из SEQ ID NO: 15, 17, 19, 21, 23, 24, 27, 29 и 30.

33. Вектор по п.32, в котором нуклеиновые кислоты содержат SEQ ID NO: 19 и 21.

34. Клетка, трансформированная экспрессирующим вектором, включающим в себя одну или несколько нуклеиновых кислот, выбранных из группы, состоящей из SEQ ID NO: 15, 17, 19, 21, 23, 24, 27, 29 и 30.

35. Клетка по п.34, где вектор включает в себя нуклеиновые кислоты SEQ ID NO: 19 и 21.

36. Химерное антитело против интегрина α5в1, содержащее

(a) первую полипептидную последовательность из первого источника, включающую в себя одну или несколько аминокислотных последовательностей, выбранных из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1, 7, 16, 18, 20, 22, 25, 26, 28, 31 и 32; и

(b) второй полипептид из второго источника, включающий в себя последовательность константной области антитела из второго источника;

в котором первая и вторая полипептидные последовательности образуют белковый комплекс, который характеризуется иммунореактивностью в отношении интегрина α5в1.

37. Химерное антитело по п.36, в котором первая полипептидная последовательность включает в себя SEQ ID NO: 25 и 26.

38. Химерное антитело по п.36, в котором первая полипептидная последовательность включает в себя SEQ ID NO: 26 и 28.

39. Химерное антитело по п.36, в котором первая полипептидная последовательность включает в себя SEQ ID NO: 31 и 32.

40. Фармацевтическая композиция, содержащая химерное или гуманизированное антитело против интегрина α5в1, где антитело содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1, 7, 16, 18, 20, 22, 25, 26, 28, 31 и 32.

41. Фармацевтическая композиция по п.40, в которой антитело содержит аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 25 и 26.

42. Фармацевтическая композиция по п.40, в которой антитело содержит аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 26 и 28.

43. Фармацевтическая композиция по п.40, в которой антитело содержит аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 31 и 32.

44. Способ подавления васкуляризации в поврежденной ткани, охватывающий нанесение на поврежденную ткань одной или нескольких доз химерного или гуманизированного антитела против интегрина α5в1.

45. Способ по п.44, где химерное или гуманизированное антитело против интегрина α5в1 содержит аминокислоты, выбранные из группы, состоящей из SEQ ID NO: 20, 22, 25, 26, 28, 31 и 32.

46. Способ введения терапевтического антитела, охватывающий

(a) получение фармацевтического средства, включающего в себя терапевтическое антитело, содержащее вариабельную область тяжелой цепи, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 2-6, 16, 20, и вариабельную область легкой цепи, независимо выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 8-12, 18, 22; и

(b) нанесение терапевтического антитела на поврежденную ткань, где поврежденная ткань отвечает на повреждение путем увеличения потока крови за счет неоваскуляризации, и терапевтическое антитело ингибирует указанную неоваскуляризацию.

47. Способ по п.46, в котором фармацевтическое средство представляет собой средство для инъекций.

48. Способ по п.46, в котором стадия нанесения охватывает системную инъекцию фармацевтического средства.

49. Способ по п.46, где поврежденная ткань находится в одном или обоих глазах.

50. Способ по п.46, где поврежденная ткань находится в обоих глазах субъекта, и стадия нанесения охватывает инъекцию фармацевтического средства в один глаз, посредством чего фармацевтическое средство контактирует с обоими глазами, таким образом, ингибируя неоваскуляризацию в поврежденной ткани.