Композиции химерного поксвируса и их применение - RU2757002C2

Чертежи

Показать все 94 чертежа(ей)

Описание

Ссылки на родственные заявки

[0001] В настоящей заявке испрашивается приоритет по временной заявке США №62/372408, поданной 9 августа 2016 года, и временной заявке США №62/519010, поданной 13 июня 2017 года, которые полностью включены в настоящее описание в качестве ссылки для любых целей.

Ссылка на «список последовательностей», таблицу или приложение к списку компьютерных программ, представленных в файле ascii.

[0002] Список последовательностей, записанный в файле 48440-606001WO_ST25, создан 8 августа 2017 года, 696 239 байт, формат компьютера IBM-PC, операционная система MS-Windows, включен настоящим посредством ссылки.

Уровень техники

[0003] Рак является второй ведущей причиной смерти в США. В последние годы был достигнут значительный прогресс в иммунотерапии рака, включая ингибиторы иммунных контрольных точек, Т-клетки с химерными антигенными рецепторами и онколитические вирусы. Онколитические вирусы представляют собой встречающиеся в природе или генетически модифицированные вирусы, которые инфицируют, размножаются и, в конечном итоге, убивают раковые клетки, оставляя здоровые клетки неповрежденными. Однако клинические преимущества онколитических вирусов в качестве самостоятельных видов лечения остаются ограниченными. В данной области техники необходимы новые композиции, использующие преимущества полезных свойств онколитических вирусов, при этом максимально повышающие безопасность и клинические результаты. В данном документе, среди прочего, раскрыты решения этих и других проблем в данной области техники.

Сущность изобретения

[0004] В одном аспекте изобретение относится к химерному поксвирусу, содержащему последовательность нуклеиновой кислоты, имеющую идентичность последовательности, составляющую по меньшей мере 70% с SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 2, при этом последовательность нуклеиновой кислоты включает фрагменты нуклеиновой кислоты по меньшей мере из двух штаммов поксвируса, выбранных из группы, включающей штамм Brighton вируса коровьей оспы, штамм Herman поксвируса енотов, штамм Utrecht поксвируса кроликов, штамм WR вируса осповакцины, штамм IHD вируса осповакцины, штамм Elstree вируса осповакцины, штамм CL вируса осповакцины, штамм Lederle-Chorioallantoic вируса осповакцины, штамм AS вируса осповакцины, штамм NZ2 орф-вируса и штамм TJS псевдопоксвируса коров.

[0005] В одном аспекте изобретение относится к выделенной нуклеиновой кислоте, кодирующей химерный поксвирус, который описан в настоящем описании.

[0006] В одном аспекте изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей терапевтически эффективное количество химерного поксвируса, который описан в настоящем описании.

[0007] В другом аспекте изобретение относится к способу лечения рака у пациента, включающему введение пациенту терапевтически эффективного количества химерного поксвируса, который описан в настоящем описании, с осуществлением, тем самым, лечения рака у пациента. В вариантах осуществления рак представляет собой рак молочной железы, рак толстой кишки, рак почек, лейкоз, рак легкого, меланому, рак яичников, рак предстательной железы, рак поджелудочной железы, рак мозга, рак печени, рак желудка или саркому.

[0008] В другом аспекте изобретение относится к способу получения химерного поксвируса, включающему: инфицирование клетки по меньшей мере двумя штаммами поксвируса, выбранными из группы, включающей штамм Brighton вируса коровьей оспы, штамм Herman поксвируса енотов, штамм Utrecht поксвируса кроликов, штамм WR вируса осповакцины, штамм IHD вируса осповакцины, штамм Elstree вируса осповакцины, штамм CL вируса осповакцины, штамм Lederle-Chorioallantoic вируса осповакцины, штамм AS вируса осповакцины, штамм NZ2 орф-вируса и штамм TJS псевдопоксвируса коров; и обеспечение возможности репликации по меньшей мере двух штаммов поксвируса, с получением тем самым химерного поксвируса.

[0009] В одном аспекте изобретение относится к способу ингибирования клеточной пролиферации клетки, включающему приведение в контакт клетки с химерным поксвирусом, как описано в настоящем описании.

[0010] В одном аспекте изобретение относится к химерному поксвирусу, содержащему последовательность нуклеиновой кислоты, имеющую идентичность последовательности, составляющую по меньшей мере 70% с SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 2, при этом последовательность нуклеиновой кислоты содержит: (i) фрагменты нуклеиновой кислоты по меньшей мере из двух штаммов поксвируса, выбранных из группы, состоящей из штамма Brighton вируса коровьей оспы, штамма Herman поксвируса енотов, штамма Utrecht поксвируса кроликов, штамма WR вируса осповакцины, штамма IHD вируса осповакцины, штамма Elstree вируса осповакцины, штамма CL вируса осповакцины, штамма Lederle-Chorioallantoic вируса осповакцины, штамма AS вируса осповакцины, штамма NZ2 орф-вируса и штамма TJS псевдопоксвируса коров; (ii) одну или более противораковых последовательностей нуклеиновой кислоты; или (iii) последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую определяемый фрагмент.

[0011] В другом аспекте изобретение относится к химерному поксвирусу, содержащему последовательность нуклеиновой кислоты, имеющую идентичность последовательности, составляющую по меньшей мере 70% с SEQ ID NO: 1, при этом последовательность нуклеиновой кислоты содержит: (i) фрагменты нуклеиновой кислоты из штамма Brighton вируса коровьей оспы, штамма Herman поксвируса енотов, штамма Utrecht поксвируса кроликов, штамма WR вируса осповакцины, штамма IHD вируса осповакцины, штамма Elstree вируса осповакцины, штамма CL вируса осповакцины, штамма Lederle-Chorioallantoic вируса осповакцины и штамма AS вируса осповакцины; (ii) одну или более противораковых последовательностей нуклеиновой кислоты; или (iii) последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую определяемый фрагмент.

[0012] В другом аспекте изобретение относится к химерному поксвирусу, содержащему последовательность нуклеиновой кислоты, имеющую идентичность последовательности, составляющую по меньшей мере 70% с SEQ ID NO: 2, при этом последовательность нуклеиновой кислоты содержит: (i) фрагменты нуклеиновой кислоты из штамма NZ2 орф-вируса и штамма TJS псевдопоксвируса коров; (ii) одну или более противораковых последовательностей нуклеиновой кислоты; или (iii) последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую определяемый фрагмент.

[0013] В другом аспекте изобретение относится к химерному поксвирусу, содержащему последовательность нуклеиновой кислоты, имеющую идентичность последовательности, составляющую по меньшей мере 70% с SEQ ID NO: 3, при этом последовательность нуклеиновой кислоты содержит: (i) фрагменты нуклеиновой кислоты из штамма Brighton вируса коровьей оспы, штамма Herman поксвируса енотов, штамма Utrecht поксвируса кроликов, штамма WR вируса осповакцины, штамма IHD вируса осповакцины, штамма Elstree вируса осповакцины, штамма CL вируса осповакцины, штамма Lederle-Chorioallantoic вируса осповакцины и штамма AS вируса осповакцины; (ii) одну или более противораковых последовательностей нуклеиновой кислоты; или (iii) последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую определяемый фрагмент.

[0014] В одном аспекте изобретение относится к химерному поксвирусу, содержащему последовательность нуклеиновой кислоты, имеющую идентичность последовательности, составляющую по меньшей мере 70% с SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 2, при этом последовательность нуклеиновой кислоты содержит: (i) фрагменты нуклеиновой кислоты по меньшей мере из двух штаммов поксвируса, выбранных из группы, состоящей из штамма Brighton вируса коровьей оспы, штамма Herman поксвируса енотов, штамма Utrecht поксвируса кроликов, штамма WR вируса осповакцины, штамма IHD вируса осповакцины, штамма Elstree вируса осповакцины, штамма CL вируса осповакцины, штамма Lederle-Chorioallantoic вируса осповакцины, штамма AS вируса осповакцины, штамма NZ2 орф-вируса и штамма TJS псевдопоксвируса коров; (ii) одну или более противораковых последовательностей нуклеиновой кислоты; (iii) одну или более связывающих последовательностей нуклеиновой кислоты; или (iv) последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую определяемый фрагмент.

[0015] В другом аспекте изобретение относится к химерному поксвирусу, содержащему последовательность нуклеиновой кислоты, имеющую идентичность последовательности, составляющую по меньшей мере 70% с SEQ ID NO: 1, при этом последовательность нуклеиновой кислоты содержит: (i) фрагменты нуклеиновой кислоты из штамма Brighton вируса коровьей оспы, штамма Herman поксвируса енотов, штамма Utrecht поксвируса кроликов, штамма WR вируса осповакцины, штамма IHD вируса осповакцины, штамма Elstree вируса осповакцины, штамма CL вируса осповакцины, штамма Lederle-Chorioallantoic вируса осповакцины и штамма AS вируса осповакцины; (ii) одну или более противораковых последовательностей нуклеиновой кислоты; (iii) одну или более связывающих последовательностей нуклеиновой кислоты; или (iv) последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую определяемый фрагмент.

[0016] В другом аспекте изобретение относится к химерному поксвирусу, содержащему последовательность нуклеиновой кислоты, имеющую идентичность последовательности, составляющую по меньшей мере 70% с SEQ ID NO: 2, при этом последовательность нуклеиновой кислоты содержит: (i) фрагменты нуклеиновой кислоты из штамма NZ2 орф-вируса и штамма TJS псевдопоксвируса коров; (ii) одну или более противораковых последовательностей нуклеиновой кислоты; (iii) одну или более связывающих последовательностей нуклеиновой кислоты; или (iv) последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую определяемый фрагмент.

[0017] В другом аспекте изобретение относится к химерному поксвирусу, содержащему последовательность нуклеиновой кислоты, имеющую идентичность последовательности, составляющую по меньшей мере 70% с SEQ ID NO: 3, при этом последовательность нуклеиновой кислоты содержит: (i) фрагменты нуклеиновой кислоты из штамма Brighton вируса коровьей оспы, штамма Herman поксвируса енотов, штамма Utrecht поксвируса кроликов, штамма WR вируса осповакцины, штамма IHD вируса осповакцины, штамма Elstree вируса осповакцины, штамма CL вируса осповакцины, штамма Lederle-Chorioallantoic вируса осповакцины и штамма AS вируса осповакцины; (ii) одну или более противораковых последовательностей нуклеиновой кислоты; (iii) одну или более связывающих последовательностей нуклеиновой кислоты; или (iv) последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую определяемый фрагмент.

Краткое описание чертежей

[0018] ФИГ. 1. Изоляты новых химерных ортопоксвирусов #33 (SEQ ID NO: 1) и #17 (SEQ ID NO: 3) демонстрируют превосходную способность уничтожать раковые клетки по сравнению с родительскими индивидуальными штаммами вируса дикого типа и контрольными вирусами GLV-1h68 и OncoVEX GFP.

[0019] ФИГ. 2. Изолят нового химерного парапоксвируса #189 (SEQ ID NO: 2) демонстрирует превосходную способность уничтожать раковые клетки по сравнению с родительскими индивидуальными штаммами вируса дикого типа и контрольными вирусами GLV-1h68 и OncoVEX GFP.

[0020] ФИГ. 3. Изоляты новых химерных ортопоксвирусов #17 (SEQ ID NO: 3) и #33 (SEQ ID NO: 1) демонстрируют мощную способность уничтожать раковые клетки в клеточных линиях рака поджелудочной железы по сравнению с их родительскими штаммами вируса и контрольными вирусами GLV-1h68 и OncoVEX GFP.

[0021] ФИГ. 4. Изолят нового химерного парапоксвируса #189 (SEQ ID NO: 2) демонстрирует мощную способность уничтожать раковые клетки в клеточных линиях рака поджелудочной железы по сравнению с их родительскими штаммами вируса и контрольными вирусами GLV-1h68 и OncoVEX GFP.

[0022] ФИГ. 5A-5C. Изоляты новых химерных вирусов #33 (SEQ ID NO: 1) и #189 (SEQ ID NO: 2) демонстрируют превосходную способность уничтожать клетки в клеточных линиях рака желудка. Раковые клетки инфицировали каждым вирусом при MOI 0,01, 0,1 и 1,0, Жизнеспособность клеток через 96 часов после инфицирования наносили на график в зависимости от MOI в клеточных линиях рака желудка MKN-45 (Фиг. 5A), OCUM-2M (Фиг. 5B) и KATO-3 (Фиг. 5C).

[0023] ФИГ. 6A-6D. Цитотоксический эффект HOV-189 (SEQ ID NO: 2) in vitro зависит как от времени, так и от дозы в клеточных линиях трижды негативного рака молочной железы. (Фиг. 6A) Hs578T. LD₅₀, MOI 0,396 (SD 0,113), (Фиг. 6B) BT549. LD₅₀, MOI 1,636 (SD 0,539), (Фиг. 6C) MDA-MB-468. LD₅₀, MOI 0,185 (SD 0,071), (Фиг. 6D) MDA-MB-231. LD₅₀, MOI 1,712 (SD 1,263). LD₅₀(через 96 ч), средняя летальная доза; MOI, множественность заражения; SD, стандартное отклонение.

[0024] ФИГ. 7. Репликация HOV-189 (SEQ ID NO: 2) в клеточных линиях трижды негативного рака молочной железы. Эффективная репликация вируса происходила in vitro в клеточных линиях BT549, Hs578T и MDA-MB-231 при низкой множественности заражения (MOI 0,01). Репликация HOV-189 в MDA-MB-468 была низкой при MOI 0,01. При MOI 10 репликация HOV-189 в MDA-MB-468 оставалась почти на два порядка ниже, чем трех других клеточных линий.

[0025] ФИГ. 8. Интратуморальная инъекция HOV-189 (SEQ ID NO: 2) в ксенотрансплантаты MDA-MB-468 эффективно уменьшает относительный размер опухоли в дозах, составляющих всего 10³ БОЕ на опухоль, по сравнению с контролем. Опухоли инъецировали PBS (контроль), 10³ БОЕ на опухоль, 10⁴ БОЕ на опухоль или 10⁵ БОЕ на опухоль при исходном объеме опухоли, составляющем приблизительно 100-150 мм³. Размер опухоли измеряли приблизительно каждые 3 дня, и эффект обработки был устойчивым через 6 недель после инъекции.

[0026] ФИГ. 9. Не наблюдали значительного снижения относительной массы тела у голых мышей, обработанных интратуморальной инъекцией HOV-189 (SEQ ID NO: 2), по сравнению с инъецированными PBS контролями. Массу тела измеряли приблизительно каждые 3 дня.

[0027] ФИГ. 10A-10C. HOV-189 (SEQ ID NO: 2) инфицирует опухоли MDA-MB-468 in vivo. Иммунофлуоресцентное обнаружение поликлонального антитела против орф-вируса демонстрирует вирусную инфекцию опухолевой ткани ксенотрансплантата MDA-MB-468, собранной через 1 неделю после интратуморальной инъекции HOV-189. (Фиг. 10A) Контрольная опухоль, 10X, (Фиг. 10B) Опухоль из группы обработки 10⁵ БОЕ, 10X, (Фиг. 10C) Опухоль из группы обработки 10⁵ БОЕ, 60X. (ORF и контрастный краситель DAPI).

[0028] ФИГ. 11. Интратуморальная инъекция HOV-189 (SEQ ID NO: 2) оказывает туморостатическое действие на отдаленную неинъецированную опухоль. Вторые опухоли молочной железы, полученные в ксенотрансплантатах MDA-MB-468, обрабатывали одной интратуморальной инъекцией HOV-189 при 10⁵ БОЕ, тогда как четвертые опухоли молочной железы не инъецировали. Контрольные опухоли инъецировали PBS. Размер опухоли измеряли приблизительно каждые 3 дня.

[0029] ФИГ. 12A-12L. Анализ цитотоксичности проводили на клеточных линиях рака PANC-1, MiaPaCa-2, BxPC-3, SU.86.86, Capan-1 и AsPC-1 посредством культивирования 3×10³ раковых клеток на лунку в 100 мкл RPMI, 5% FBS, 1% раствора антибиотика-антимикотика в течение 24 часов. 20 мкл вируса, как указано, затем добавляли при множественности заражения (MOI) 1, 0,1 и 0,01. Ежедневный анализ жизнеспособности клеток проводили, добавляя 20 мкл CellTiter 96 Aqueous One Solution Cell Proliferation Assay во все лунки и считывая колориметрические показатели после 1 часа инкубации. Результаты эксперимента стандартизировали только для среды и контроля с MOI 0. Этот эксперимент повторяли в трех повторах. Представлены графики, показывающие процент выживания клеток с течением времени для PANC-1 (Фиг. 12A), MiaPaCa-2 (Фиг. 12C), BxPC-3 (Фиг. 12E), SU.86.86 (Фиг. 12G), Capan-1 (Фиг. 12I) и AsPC-1 (Фиг. 12K), обработанных #33 при MOI 1, 0,1 или 0,01. Также представлены столбиковые диаграммы, сравнивающие процент выживаемости клеток через 120 часов для раковых клеток PANC-1 (Фиг. 12B), MiaPaCa-2 (Фиг. 12D), BxPC-3 (Фиг. 12F), SU.86.86 (Фиг. 12H), Capan-1 (Фиг. 12J) и AsPC-1 (Фиг. 12L), обработанных вирусом, как указано. Статистический анализ проводили, сравнивая #33 с другими экспериментальными группами, как указано, используя однофакторный дисперсионный анализ в каждый момент времени. Для SU.86.86 (Фиг. 12H) статистический анализ проводили, используя непарный t-тест для каждой MOI.

[0030] ФИГ. 13A-13L. Кривую репликации вируса строили на клеточных линиях рака PANC-1, MiaPaCa-2, BxPC-3, SU.86.86, Capan-1, и AsPC-1 посредством культивирования клеток при 5×10⁵клеток на лунку в 2 мл RPMI, 10% FBS, 1% раствора антибиотика-антимикотика в течение 24 часов в трех повторах. Затем среды аспирировали, и добавляли #33, OncoVEX GFP, GLV-1h68 или #189 при множественности заражения (MOI) 0,01 в 500 мкл RPMI, 2,5% FBS, 1% раствора антибиотика-антимикотика в течение 1 часа, встряхивая каждые 20 минут. Через один час среды аспирировали, и добавляли 1,5 мл RPMI, 2,5% FBS, 1% раствора антибиотика-антимикотика. Через 24, 48 и 72 часа собирали клетки и супернатант, и после трех циклов заморозки и оттаивания выполняли серийные разведения в двух повторах. Этот эксперимент повторяли в двух повторах. Представленные графики демонстрируют БОЕ/миллион клеток с течением времени для раковых клеток PANC-1 (Фиг. 13A), MiaPaCa-2 (Фиг. 13C), BxPC-3 (Фиг. 13E), SU.86.86 (Фиг. 13G), Capan-1 (Фиг. 13I) и AsPC-1 (Фиг. 13K), обработанных вирусом, как указано. Также представлены столбиковые диаграммы, сравнивающие БОЕ/миллион клеток в каждый момент времени для каждого вируса в раковых клетках, обработанных PANC-1 (Фиг. 13B), MiaPaCa-2 (Фиг. 13D), BxPC-3 (Фиг. 13F), SU.86.86 (Фиг. 13H), Capan-1 (Фиг. 13J) и AsPC-1 (Фиг. 13L). Статистический анализ проводили, сравнивая #33 с другими экспериментальными группами, используя однофакторный дисперсионный анализ в каждый момент времени.

[0031] ФИГ. 14A-14C. Восемнадцати самкам бестимусных голых мышей Nude-Foxn1^nu(Envigo, Indianapolis, IN) имплантировали 2×10⁶ двусторонних боковых опухолей MiaPaCa-2. Как только размеры опухоли достигали 400 мм³, в левостороннюю опухоль инъецировали 50 мкл PBS (3 мыши), #33 (5 мышей), #33-(SE)hNIS или #33-(SE)hNIS-E9LmiR100t (5 мышей) при приблизительно 1×10⁵ БОЕ/доза. Чистое процентное изменение массы (Фиг. 14A) и процентное изменение (Фиг. 14B) инъецированных опухолей и процентное изменение неинъецированных опухолей (FID. 14C) регистрировали два раза в неделю в течение 43 дней.

[0032] ФИГ. 15A-15C. Двадцати шести самкам бестимусных голых мышей Nude-Foxn1^nu(Envigo, Indianapolis, IN) имплантировали 1,25×10⁶ двусторонних боковых опухолей PANC-1. Как только размеры опухоли достигали приблизительно 250 мм³, в левостороннюю опухоль инъецировали 50 мкл PBS (4 мыши), #33 (6 мышей), #33-(SE)hNIS (6 мышей), #33-(SE)hNIS-E9LmiR100t (5 мышей) или #33-(H5)Fluc2 при приблизительно 1×10³ БОЕ/доза. Чистое процентное изменение массы (Фиг. 15A) и процентное изменение (Фиг. 15B) инъецированных опухолей и процентное изменение неинъецированных опухолей (Фиг. 15C) регистрировали два раза в неделю в течение 43 дней.

[0033] ФИГ. 16. Два раза в неделю одной контрольной PBS-мыши и 3 инъецированным #33-(H5)Fluc2 мышам интраперитонеально инъецировали 4,28 мг люциферина в 150 мкл PBS. Через 7 минут получали люциферазную визуализацию при стандартной выдержке. Относительную единицу регистрировали в каждый момент времени и анализировали относительно контрольных мышей PBS в качестве исходного уровня.

[0034] ФИГ. 17A-17D. Анализ цитотоксичности проводили на клеточных линиях рака HT-29 и HCT-116 посредством культивирования клеток при 3×10³ на лунку в 100 мкл среды МакКоя 5А, 5% FBS, 1% раствора антибиотика-антимикотика в течение 24 часов. 20 мкл вируса, либо #33, #33-(SE)hNIS, #33-(H5)Emerald, OncoVEX^GFP, GLV-1h68, либо #189, затем добавляли при множественности заражения (MOI) 1, 0,1 и 0,01. Ежедневный анализ жизнеспособности клеток проводили, добавляя 20 мкл CellTiter 96 Aqueous One Solution Cell Proliferation Assay во все лунки и считывая колориметрические показатели после 1 часа инкубации. Результаты эксперимента стандартизировали только для среды и контроля с MOI 0. Этот эксперимент повторяли в трех повторах. Представлены графики, показывающие процент выживания клеток с течением времени для HT-29 (Фиг. 17A) и HCT-116 (Фиг. 17C), обработанные #33 при MOI 1, 0,1 или 0,01. Также представлены столбиковые диаграммы, сравнивающие процент выживаемости клеток через 120 часов для раковых клеток HT-29 (Фиг. 17B) и HCT-116 (Фиг. 17D), обработанных вирусом, как указано. Статистический анализ проводили, сравнивая #33 с другими экспериментальными группами, используя однофакторный дисперсионный анализ в каждый момент времени.

[0035] ФИГ. 18A-18F. Анализ цитотоксичности проводили на клеточных линиях рака SW620, SW480 и COLO 320DM посредством культивирования клеток при 3×10³ на лунку в 100 мкл RPMI, 5% FBS, 1% раствора антибиотика-антимикотика в течение 24 часов. 20 мкл вируса, либо #33, #33-(SE)hNIS, #33-(H5)Emerald, OncoVEX^GFP, GLV-1h68, либо #189 затем добавляли при множественности заражения (MOI) 1, 0,1 и 0,01. Ежедневный анализ жизнеспособности клеток проводили, добавляя 20 мкл CellTiter 96 Aqueous One Solution Cell Proliferation Assay во все лунки и считывая колориметрические показатели после 1 часа инкубации. Результаты эксперимента стандартизировали только для среды и контроля с MOI 0. Этот эксперимент повторяли в трех повторах. Представлены графики, показывающие процент выживания клеток с течением времени для SW620 (Фиг. 18A), SW480 (Фиг. 18C) и COLO 320DM (Фиг. 18E), обработанных #33 при MOI 1, 0,1 или 0,01. Также представлены столбиковые диаграммы, сравнивающие процент выживаемости клеток через 120 часов для раковых клеток SW620 (Фиг. 18B), SW480 (Фиг. 18D) и COLO 320DM (Фиг. 18F), обработанных вирусом, как указано. Статистический анализ проводили, сравнивая #33 с другими экспериментальными группами, используя однофакторный дисперсионный анализ в каждый момент времени. «NS» над сравниваемым столбиком означает «несущественно».

[0036] ФИГ. 19A-19B. Анализ цитотоксичности проводили на клеточной линии рака LoVo посредством культивирования клеток при 3×10³ на лунку в 100 мкл среды F-12K, 5% FBS, 1% раствора антибиотика-антимикотика в течение 24 часов. 20 мкл вируса, либо #33, #33-(SE)hNIS, #33-(H5)Emerald, OncoVEX^GFP, GLV-1h68, либо #189 затем добавляли при множественности заражения (MOI) 1, 0,1 и 0,01. Ежедневный анализ жизнеспособности клеток проводили, добавляя 20 мкл CellTiter 96 Aqueous One Solution Cell Proliferation Assay во все лунки и считывая колориметрические показатели после 1 часа инкубации. Результаты эксперимента стандартизировали только для среды и контроля с MOI 0. Этот эксперимент повторяли в трех повторах. На ФИГ. 19A показан процент выживаемости клеток с течением времени для раковых клеток LoVo, обработанных #33 при MOI 1, 0,1 или 0,01. На ФИГ. 19B показана столбиковая диаграмма, сравнивающая процент выживаемости клеток через 120 часов для раковых клеток LoVo, обработанных вирусом, как указано. Статистический анализ проводили, сравнивая #33 с другими экспериментальными группами, используя однофакторный дисперсионный анализ в каждый момент времени. «NS» над сравниваемым столбиком означает «несущественно».

[0037] ФИГ. 20A-20D. Кривую репликации вируса строили на клеточных линиях рака HT-29 и HCT-116 посредством культивирования клеток при 5×10⁵ клеток на лунку в 2 мл среды МакКоя 5А, 10% FBS, 1% раствора антибиотика-антимикотика в течение 24 часов в трех повторах. Затем среды аспирировали, и добавляли #33, #33-(SE)hNIS, #33-(H5)Emerald, OncoVEX^GFP, GLV-1h68 или #189 при множественности заражения (MOI) 0,01 в 500 мкл среды МакКоя 5А, 2,5% FBS, 1% раствора антибиотика-антимикотика в течение 1 часа, встряхивая каждые 20 минут. Через один час среды аспирировали, и добавляли 1,5 мл среды МакКоя 5А, 2,5% FBS, 1% раствора антибиотика-антимикотика. Через 24, 48 и 72 часа собирали клетки и супернатант, и после трех циклов заморозки и оттаивания выполняли серийные разведения в двух повторах. Этот эксперимент повторяли в двух повторах. Представленные графики демонстрируют БОЕ/миллион клеток с течением времени для HT-29 (Фиг. 20A) и HCT-116 (Фиг. 20C). Также представлены столбиковые диаграммы, сравнивающие БОЕ/миллион клеток в каждый момент времени для каждого вируса в раковых клетках, обработанных HT-29 (Фиг. 20B) и HCT-116 (Фиг. 20D). Статистический анализ проводили, сравнивая #33 с другими экспериментальными группами, используя однофакторный дисперсионный анализ в каждый момент времени.

[0038] ФИГ. 21A-21D. Кривую репликации вируса строили на клеточных линиях рака SW620 и SW480 посредством культивирования клеток при 5×10⁵ клеток на лунку в 2 мл RPMI, 10% FBS, 1% раствора антибиотика-антимикотика в течение 24 часов в трех повторах. Затем среды аспирировали, и добавляли #33, #33-(SE)hNIS, #33-(H5)Emerald, OncoVEX^GFP, GLV-1h68, или #189 при множественности заражения (MOI) 0,01 в 500 мкл RPMI 2,5% FBS, 1% раствора антибиотика-антимикотика в течение 1 часа, встряхивая каждые 20 минут. Через один час среды аспирировали, и добавляли 1,5 мл RPMI, 2,5% FBS, 1% раствора антибиотика-антимикотика. Через 24, 48 и 72 часа собирали клетки и супернатант, и после трех циклов заморозки и оттаивания выполняли серийные разведения в двух повторах. Этот эксперимент повторяли в двух повторах. Представленные графики демонстрируют БОЕ/миллион клеток с течением времени для SW620 (Фиг. 21A) и SW480 (Фиг. 21C). Также представлены столбиковые диаграммы, сравнивающие БОЕ/миллион клеток в каждый момент времени для каждого вируса в раковых клетках, обработанных SW620 (Фиг. 21B) и SW480 (Фиг. 21D). Статистический анализ проводили, сравнивая #33 с другими экспериментальными группами, используя однофакторный дисперсионный анализ в каждый момент времени.

[0039] ФИГ. 22. Иммуногистохимический анализ раковых клеток HCT-116, инфицированных вирусом #33 или #33-(SE)hNIS. Изображения получены через 24 ч после инъекции с MOI 0,01.

[0040] ФИГ. 23. Иммуногистохимический анализ HT-29 раковых клеток, инфицированных вирусом #33 или #33-(SE)hNIS. Изображения получены через 24 ч после инъекции с MOI 0,01.

[0041] ФИГ. 24. Четырнадцати самкам бестимусных голых мышей Nude-Foxn1^nu(Envigo, Indianapolis, IN) имплантировали 5×10⁶ клеток HT-29 на двусторонние боковые опухоли. Как только размеры опухоли достигали приблизительно 200 мм³, в обе опухоли инъецировали 50 мкл PBS (4 мыши), #33 (5 мышей) или #33-(H5)Fluc2 (5 мышей) при приблизительно 1×10⁵ БОЕ/доза. Чистое процентное изменение массы и процентное изменение опухолей регистрировали два раза в неделю в течение 42 дней. На ФИГ. 24 показан процент изменения опухоли HT-29 с течением времени. Значимое различие в процентном изменении объема опухоли отметили при сравнении контроля PBS как с #33 (3 мыши), так и #33-(H5)Fluc2 (p=0,02 и p=0,03, соответственно).

[0042] ФИГ. 25. Два раза в неделю одной контрольной PBS-мыши и 3 инъецированным #33-(H5)Fluc2 мышам инъецировали 4,28 мг люциферина в 150 мкл PBS интраперитонеально. Через 7 минут люциферазную визуализацию получали при стандартной выдержке. Относительную единицу регистрировали в каждый момент времени и анализировали относительно контрольных мышей PBS в качестве исходного уровня.

[0043] ФИГ. 26. Девятнадцати самкам бестимусных голых мышей Nude-Foxn1^nu(Envigo, Indianapolis, IN) имплантировали 5×10⁶ двусторонних боковых опухолей HCT-116. Как только размеры опухоли достигали приблизительно 200 мм³, в обе опухоли инъецировали 50 мкл PBS (2 мыши), #33 (3 мыши), #33-(SE)hNIS или #33-(H5)Fluc2 при приблизительно 1×10⁵ БОЕ/доза. Чистое процентное изменение массы и процентное изменение опухолей регистрировали два раза в неделю в течение 42 дней. На ФИГ. 25 показан процент изменения опухоли HCT-116 с течением времени. Значимое различие в процентном изменении объема опухоли отметили при сравнении контроля PBS с #33 (3 мыши), #33-(SE)hNIS и #33-(H5)Fluc2 (p=0,0002, p=0,0001 и p=0,0002, соответственно).

[0044] ФИГ. 27. Два раза в неделю одной контрольной PBS-мыши и 3 инъецированным #33-(H5)Fluc2 мышам интраперитонеально инъецировали 4,28 мг люциферина в 150 мкл PBS. Через 7 минут люциферазную визуализацию получали при стандартной выдержке. Относительную единицу регистрировали в каждый момент времени и анализировали относительно контрольных мышей PBS в качестве исходного уровня.

[0045] ФИГ. 28A-28C. Опосредованная онколитическим вирусом цитотоксичность в клетках рака легких и фибробластах легких через 72 ч после инъекции. 5000 клеток A549, H2199 или HF1 фибробластов культивировали в каждой лунке 96-луночного планшета. На следующий день клетки инфицировали различными вирусами (#33, #33-(H5)Emerald, #189, GLV-1h68, OncoVEX^GFP) с указанной множественностью заражения (MOI; 0, 0,001, 0,01, 0,1, 1 MOI) или псевдоинфицировали. Жизнеспособность клеток определяли, используя CellTiter96AQ_ueous One Solution (Promega; Cat#G3581) через 72 часа после инъекции. Выживаемость инфицированных клеток A549 (Фиг. 28A), клеток H2199 (Фиг. 28B) или фибробластов HF1 (Фиг. 28C) вычисляли по отношению к выживаемости псевдоинфицированных клеток.

[0046] ФИГ. 29. GFP-изображения по дням для ксенотранстплантантной модели А549 после однократной инъекции 1000 БОЕ вируса (#33-(H5)Emerald, GLV-1h68 или OncoVEX^GFP интратуморально), как указано, в правую опухоль.

[0047] ФИГ. 30. Масса мышей по дням для ксенотранстплантантной модели А549. Через 3 недели после инъекции опухолевых клеток А549 мышей рассортировали по различным группам обработки (n=4 или 5), чтобы получить одинаковый средний объем опухоли в каждой группе (~200 мм³), и в правостороннюю опухоль каждой мыши интратуморально инъецировали 10³ БОЕ указанных вирусов (#33, #33-(H5)Emerald, GLV-1h68, OncoVEX^GFP, T-VEC^TM, #189, контроль PBS) или интраперитонеально (i.p.) инъецировали #33-(H5)Emerald. Мышей взвешивали два раза в неделю, и показано процентное изменение их массы. Каждая линия представляет массу отдельной мыши.

[0048] ФИГ. 31A-31B. Регрессия опухоли для ксенотранстплантантной модели А549. Через 3 недели после инъекции опухолевых клеток А549 мышей рассортировали по различным группам обработки (n=4 или 5), чтобы получить одинаковый средний объем опухоли в каждой группе (~200 мм³), и в правостороннюю опухоль каждой мыши интратуморально инъецировали 10³ БОЕ указанных вирусов (#33, #33-(H5)Emerald, GLV-1h68, OncoVEX^GFP, T-VEC^TM, #189, контроль PBS), или интраперитонеально (i.p.) инъецировали #33-(H5)Emerald. Объем инъецированной (Фиг. 31A) и неинъецированной (Фиг. 31B) опухоли измеряли два раза в неделю, используя цифровые штангенциркули. Каждая линия представляет объем опухоли отдельной мыши.

[0049] ФИГ. 32. Объем инфицированных вирусом опухолей в ксенотранстплантантной модели А549. Через 3 недели после инъекции опухолевых клеток А549 мышей рассортировали по различным группам обработки (n=4 или 5), чтобы получить одинаковый средний объем опухоли в каждой группе (~200 мм³), и в правостороннюю опухоль каждой мыши интратуморально инъецировали 10³ БОЕ указанных вирусов (#33, #33-(H5)Emerald, GLV-1h68, OncoVEX^GFP, T-VEC^TM, #189, контроль PBS), или интраперитонеально (i.p.) инъецировали #33-(H5)Emerald. Объем опухолей измеряли два раза в неделю, используя цифровые штангенциркули. Каждая линия представляет средний объем инъецированных опухолей в отдельных группах обработки со стандартным отклонением. Статистический анализ: однофакторный дисперсионный анализ на 24 день (*=p<0,05).

[0050] ФИГ. 33. Объем неинъецированных опухолей в ксенотранстплантантной модели А549. Через 3 недели после инъекции опухолевых клеток А549 мышей рассортировали по различным группам обработки (n=4 или 5), чтобы получить одинаковый средний объем опухоли в каждой группе (~200 мм³), и в правостороннюю опухоль каждой мыши интратуморально инъецировали 10³ БОЕ указанных вирусов (#33, #33-(H5)Emerald, GLV-1h68, OncoVEX^GFP, T-VEC^TM, #189, контроль PBS), или интраперитонеально (i.p.) инъецировали #33-(H5)Emerald. Объем опухолей для неинъецированной опухоли измеряли два раза в неделю, используя цифровые штангенциркули. Каждая линия представляет средний объем инъецированных опухолей в отдельных группах обработки со стандартным отклонением. Статистический анализ: однофакторный дисперсионный анализ на 24 день (*=p<0,05).

[0051] ФИГ. 34A-34B. Кратность изменения объема опухоли. Через 3 недели после инъекции опухолевых клеток А549 мышей рассортировали по различным группам обработки (n=4 или 5), чтобы получить одинаковый средний объем опухоли в каждой группе (~200 мм³), и в правостороннюю опухоль каждой мыши интратуморально инъецировали 10³ БОЕ указанных вирусов (#33, #33-(H5)Emerald, GLV-1h68, OncoVEX^GFP, T-VEC^TM, #189, контроль PBS), или интраперитонеально (i.p.) инъецировали #33-(H5)Emerald. Объем опухолей измеряли два раза в неделю, используя цифровые штангенциркули. Кратность изменения объема опухоли для инъецированных (Фиг. 34A) и неинъецированных (Фиг. 34B) опухолей вычисляли путем нормализации объемов опухоли в различные моменты времени объемами опухоли в момент инъекции вируса (т.е. 0 день). На ФИГ. 34A-34B каждая линия представляет средний объем опухоли в отдельных группах обработки со стандартным отклонением. Статистический анализ: однофакторный дисперсионный анализ на 24 день (*=p<0,05).

[0052] ФИГ. 35A-35B. Биораспределение вирусов в инъецированных и неинъецированных опухолях (модель А549). Через 3 недели после инъекции опухолевых клеток А549 мышей рассортировали по различным группам обработки (n=3), чтобы получить одинаковый средний объем опухоли в каждой группе (~200 мм³), и только в правостороннюю опухоль правой сторон у каждой мыши интратуморально инъецировали 103 БОЕ указанных вирусов (#33, #33-(H5)Emerald, GLV-1h68, OncoVEX^GFP). Через шесть дней после инъекции вируса производили сбор опухолей и нормальных органов. Собранные ткани взвешивали, измельчали на мелкие кусочки и гомогенизировали в 1 мл PBS, используя гомогенизатор Bullet Blender Gold. Гомогенаты подвергали 3 циклам замораживания-оттаивания с последующей обработкой ультразвуком в течение 1 минуты. Гомогенаты центрифугировали при 1000 об/мин в течение 3 минут, а супернатанты собирали. Супернатанты серийно разводили и определяли титр вируса, используя стандартный анализ бляшкообразования. На ФИГ. 35A показаны БОЕ/г опухоли для каждого вируса в инъецированной опухоли. На ФИГ. 35B показаны БОЕ/г опухоли для каждого вируса в неинъецированной опухоли.

[0053] ФИГ. 36. Титр вирусов в яичниках мышей (модель А549). Через 3 недели после инъекции опухолевых клеток А549 мышей рассортировали по различным группам обработки (n=3), чтобы получить одинаковый средний объем опухоли в каждой группе (~200 мм³), и только в правостороннюю опухоль правой сторон у каждой мыши интратуморально инъецировали 103 БОЕ указанных вирусов (#33, #33-(H5)Emerald, GLV-1h68, OncoVEX^GFP, T-VEC™). Через шесть дней после инъекции вируса производили сбор опухолей и нормальных органов. Собранные ткани взвешивали, измельчали на мелкие кусочки и гомогенизировали в 1 мл PBS, используя гомогенизатор Bullet Blender Gold. Гомогенаты подвергали 3 циклам замораживания-оттаивания с последующей обработкой ультразвуком в течение 1 минуты. Гомогенаты центрифугировали при 1000 об/мин в течение 3 минут, а супернатанты собирали. Супернатанты серийно разводили и определяли титр вируса, используя стандартный анализ бляшкообразования. На ФИГ. 36 показаны БОЕ/г ткани (яичников) для каждого вируса. Не обнаружено (ND).

[0054] ФИГ. 37. Титр вирусов в крови через 20 дней после инъекции вируса. Через 3 недели после инъекции опухолевых клеток А549 мышей рассортировали по различным группам обработки (n=3), чтобы получить одинаковый средний объем опухоли в каждой группе (~200 мм³), и только в правостороннюю опухоль правой сторон у каждой мыши интратуморально инъецировали 10³ БОЕ указанных вирусов (#33, #33-(H5)Emerald, GLV-1h68, OncoVEX^GFP, T-VEC™). Кровь брали у мышей (n=3) путем пункции лицевой вены. После 3 циклов замораживания и оттаивания кровь серийно разводили, и определяли титр вируса, используя стандартный анализ бляшкообразования. На ФИГ. 37 показаны БОЕ/мл крови для каждого инъецированного вируса. Не обнаружено (ND).

[0055] ФИГ. 38. Химерный вирус #33 более эффективен, чем родительские вирусы, в уничтожении клеток рака легких (A549). Анализ цитотоксичности: 5000 клеток культивировали в каждой лунке 96-луночного планшета. На следующий день клетки инфицировали химерным вирусом #33 или родительскими вирусами с указанной множественностью заражения (MOI), или псевдоинфицировали. Жизнеспособность клеток определяли, используя CellTiter96AQ_ueous One Solution (Promega; Cat#G3581), через 72 часа после инъекции. Выживаемость инфицированных клеток вычисляли относительно выживаемости псевдоинфицированных клеток.

[0056] ФИГ. 39. Изменение массы тела после обработки. A549, клетки рака легких человека, культивировали, трипсинизировали, промывали PBS и ресуспендировали в PBS и матригеле 1:1 для получения 5×10⁶ клеток на 100 мкл. 100 мкл суспензии клеток подкожно инъецировали с каждой стороны верхнего бока бестимусной голой мыши для получения 2 опухолей на мышь. Через 3 недели после инъекции опухолевых клеток мышей рассортировали по различным группам обработки (n=4 или 5), чтобы получить одинаковый средний объем опухоли в каждой группе (~200 мм³). После сортировки 10³ БОЕ указанных вирусов интратуморально инъецировали только в правостороннюю опухоль каждой мыши. Мышей взвешивали два раза в неделю, и процентное изменение их массы наносили на график. Каждая линия представляет массу отдельной мыши.

[0057] ФИГ. 40. Регрессия опухоли. A549, клетки рака легких человека, культивировали, трипсинизировали, промывали PBS и ресуспендировали в PBS и матригеле 1:1 для получения 5×10⁶ клеток на 100 мкл. 100 мкл суспензии клеток подкожно инъецировали с каждой стороны верхнего бока бестимусной голой мыши для получения 2 опухолей на мышь. Через 3 недели после инъекции опухолевых клеток мышей рассортировали по различным группам обработки (n=4 или 5), чтобы получить одинаковый средний объем опухоли в каждой группе (~200 мм³). После сортировки 10³ БОЕ указанных вирусов интратуморально инъецировали только в правостороннюю опухоль каждой мыши. Объем опухолей (и инъецированных, и неинъецированных) измеряли два раза в неделю, используя цифровой штангенциркуль (объем={(длина)²× ширина/2}. Каждая линия представляет объем опухоли отдельной мыши.

[0058] ФИГ. 41. Титр вирусов в инъецированных и неинъецированных опухолях через 7 дней после инъекции. A549, клетки рака легких человека, культивировали, трипсинизировали, промывали PBS и ресуспендировали в PBS и матригеле 1:1 для получения 5×10⁶ клеток на 100 мкл. 100 мкл суспензии клеток подкожно инъецировали с каждой стороны верхнего бока бестимусной голой мыши для получения 2 опухолей на мышь. Через 3 недели после инъекции опухолевых клеток мышей рассортировали по различным группам обработки (n=3), чтобы получить одинаковый средний объем опухоли в каждой группе (~200 мм³). После сортировки 10³ БОЕ указанных вирусов интратуморально инъецировали только в правостороннюю опухоль каждой мыши. Через шесть дней после инъекции вируса производили сбор опухолей и нормальных органов. Собранные ткани взвешивали, измельчали на мелкие кусочки и гомогенизировали в 1 мл PBS, используя гомогенизатор Bullet Blender Gold. Гомогенаты подвергали 3 циклам замораживания-оттаивания с последующей обработкой ультразвуком в течение 1 минуты. Гомогенаты центрифугировали при 1000 об/мин в течение 3 минут, а супернатанты собирали. Супернатанты серийно разводили, и определяли титр вируса, используя стандартный анализ бляшкообразования.

[0059] ФИГ. 42. Биораспределение вирусов. A549, клетки рака легких человека, культивировали, трипсинизировали, промывали PBS и ресуспендировали в PBS и матригеле 1:1 для получения 5×10⁶ клеток на 100 мкл. 100 мкл суспензии клеток подкожно инъецировали с каждой стороны верхнего бока бестимусной голой мыши для получения 2 опухолей на мышь. Через 3 недели после инъекции опухолевых клеток мышей рассортировали по различным группам обработки (n=3), чтобы получить одинаковый средний объем опухоли в каждой группе (~200 мм³). После сортировки 10³ БОЕ указанных вирусов интратуморально инъецировали только в правостороннюю опухоль каждой мыши. Через шесть дней после инъекции вируса производили сбор опухолей и нормальных органов. Собранные ткани взвешивали, измельчали на мелкие кусочки и гомогенизировали в 1 мл PBS, используя гомогенизатор Bullet Blender Gold. Гомогенаты подвергали 3 циклам замораживания-оттаивания с последующей обработкой ультразвуком в течение 1 минуты. Гомогенаты центрифугировали при 1000 об/мин в течение 3 минут, а супернатанты собирали. Супернатанты серийно разводили и определяли титр вируса, используя стандартный анализ бляшкообразования.

[0060] ФИГ. 43. Титр вирусов в крови инъецированных мышей. Кровь брали из лицевой вены мышей с опухолью А549 в различные моменты времени после интратуморальной инъекции 1000 БОЕ указанных вирусов. Вирус в образцах крови титровали, используя стандартную методику анализа бляшкообразования. В моче до 10 дня после инъекции вирусов не обнаружили.

[0061] ФИГ. 44. Выживаемость мышей после инъекции вирусов. A549, клетки рака легких человека, культивировали, трипсинизировали, промывали PBS и ресуспендировали в PBS и матригеле 1:1 для получения 5×10⁶ клеток на 100 мкл. 100 мкл суспензии клеток подкожно инъецировали с каждой стороны верхнего бока бестимусной голой мыши для получения 2 опухолей на мышь. Через 3 недели после инъекции опухолевых клеток мышей рассортировали по различным группам обработки (n=3), чтобы получить одинаковый средний объем опухоли в каждой группе (~200 мм³). После сортировки 10³ БОЕ указанных вирусов интратуморально инъецировали только в правостороннюю опухоль каждой мыши. Объем опухоли измеряли два раза в неделю, используя цифровые штангенциркули, и мышей подвергали эвтаназии, когда одна из двусторонних опухолей превышала опухолевую нагрузку (3000 мм³), или когда мыши слабели (потеря >20% массы тела) вследствие обработки вирусом.

[0062] ФИГ. 45A-45C. Сравнение цитотоксического потенциала химерного #33 и родительских поксвирусов в A549. ФИГ. 45A. MOI вирусов, необходимую для уничтожения 50% клеток A549 (LD50), рассчитывали для всех вирусов и сравнивали. ФИГ. 45B. Клетки инфицировали #33 или родительскими вирусами с MOI 0,03 БОЕ, и кратное увеличение титра вирусов относительно исходного вируса определяли через 24 часа после инъекции и сравнивали среди вирусов. ФИГ. 45C. Клетки A549 инфицировали вирусами, как на ФИГ. 45B, и супернатант из инфицированных лунок собирали через 12 и 18 ч после инъекции. Титр вирусов в супернатанте определяли посредством анализа бляшкообразования и сравнивали среди вирусов.

[0063] ФИГ. 46A-46B. Клетки A549 инфицировали #33 или #33-(H5)Emerald, который имеет ген J2R (TK), замещенный на (зеленую) кассету экспрессии Emerald, при различных MOI. ФИГ. 46A. 5000 клеток культивировали в каждой лунке 96-луночного планшета. На следующий день в клетки инфицировали химерный вирус #33 или #33-(H5)Emerald, который имеет ген J2R (TK), замещенный на (зеленую) кассету экспрессии Emerald, при различных MOI. Жизнеспособность клеток определяли, используя CellTiter96AQ_ueous One Solution (Promega; Cat#G3581), через 72 часа после инъекции. Выживаемость инфицированных клеток вычисляли относительно выживаемости псевдоинфицированных клеток. ФИГ. 46B. Клетки A549 инфицировали #33 или #33-(H5) при MOI 0,03 БОЕ, и в указанные моменты времени определяли кратное увеличение титра вирусов относительно исходного вируса.

[0064] ФИГ. 47A-47B. ФИГ. 47A. Изображение: A549, клетки рака легких человека, культивировали, трипсинизировали, промывали PBS и ресуспендировали в PBS и матригеле 1:1 для получения 5×10⁶ клеток на 100 мкл. 100 мкл суспензии клеток подкожно инъецировали с каждой стороны верхнего бока бестимусной голой мыши для получения 2 опухолей на мышь. Через 3 недели после инъекции опухолевых клеток мышей рассортировали по различным группам обработки (n=5), чтобы получить одинаковый средний объем опухоли в каждой группе (~200 мм³). После сортировки 10³ бляшкообразующих единиц (БОЕ) #33-(H5)Emerald или PBS интратуморально инъецировали только в правостороннюю опухоль каждой мыши. У мышей визуализировали зеленую флуоресценцию (возбуждение: 465 & эмиссия: 530 нм) два раза в неделю, используя оборудование для создания изображений у мелких животных (система визуализации LagoX), и изображения обрабатывали, используя программное обеспечение для обработки изображений AMIview. ФИГ. 47B. Среднюю интенсивность флуоресценции (MFI) Emerald вычисляли для каждой опухоли в различные моменты времени, используя программное обеспечение для обработки изображений AMIview. Сравнивали среднюю MFI (n=5 мышей/группа) для инъецированных и неинъецированных опухолей.

[0065] ФИГ. 48A-48D. ФИГ. 48A. A549, клетки рака легких человека, культивировали, трипсинизировали, промывали PBS и ресуспендировали в PBS и матригеле 1:1 для получения 5×10⁶ клеток на 100 мкл. 100 мкл суспензии клеток подкожно инъецировали с каждой стороны верхнего бока бестимусной голой мыши для получения 2 опухолей на мышь. Через 3 недели после инъекции опухолевых клеток мышей рассортировали по различным группам обработки (n=7), чтобы получить одинаковый средний объем опухоли в каждой группе (~200 мм³). После сортировки 10³ бляшкообразующих единиц (БОЕ) #33-(H5)Emerald PBS интратуморально инъецировали только в правостороннюю опухоль каждой мыши. Мышей взвешивали два раза в неделю, и процентное изменение их массы наносили на график. Каждая линия представляет массу отдельной мыши. ФИГ. 48B. Объем опухолей измеряли два раза в неделю, используя цифровые штангенциркули (объем={(длина)²× ширина/2}. Каждая линия представляет средний объем инъецированных опухолей в отдельной группе обработки с SD. Статистика: непарный Т-критерий; ****=p<0,0001. **33-GFP относится к животным, обработанным #33-(H5)Emerald. ФИГ. 48C. Объем опухоли для отдельных мышей в каждой группе обработки наносили на график. ФИГ. 48D. Мышей подвергали эвтаназии, когда одна из двусторонних опухолей превышала опухолевую нагрузку (3000 мм³), и кривую выживаемости для группы, обработанной вирусом, сравнивали кривой выживаемости группы, обработанной PBS. Статистика: логранговый критерий (Кокса-Мантеля); ****=p<0,0001.

[0066] ФИГ. 49A-49C. ФИГ. 49A. A549, клетки рака легких человека, культивировали, трипсинизировали, промывали PBS и ресуспендировали в PBS и матригеле 1:1 для получения 5×10⁶ клеток на 100 мкл. 100 мкл суспензии клеток подкожно инъецировали с каждой стороны верхнего бока бестимусной голой мыши для получения 2 опухолей на мышь. Через 3 недели после инъекции опухолевых клеток мышей рассортировали по различным группам обработки (n=4 или 5), чтобы получить одинаковый средний объем опухоли в каждой группе (~200 мм³). После сортировки 10³ БОЕ указанных вирусов интратуморально инъецировали только в правостороннюю опухоль каждой мыши. На 7 и 56 день после инъекции вирусов 3 мышей из группы, обработанной вирусом, подвергали эвтаназии и производили сбор их органов, а также опухолей. Титры вирусов в извлеченных органах определяли посредством анализа бляшкообразования и сравнивали среди опухолей и органов. Статистика: Однофакторный дисперсионный анализ; ***=p<0,0001. ND = не определяется. ФИГ. 49B. Срезы опухолей (через 7 дней после инъекции вирусов) окрашивали на вирус осповакцины. Темное окрашивание представляет инфицированные вирусом области срезов опухолей. Каждый срез принадлежит отдельной мыши. ФИГ. 49D. Срезы опухолей, полученные на 7 день после инъекции вирусов, окрашивали на апоптозные клетки, используя In Situ Cell death detection Fluorescein (Roche). Для «положительного контроля» срезы опухолей обрабатывали рекомбинантной ДНКазой I (300 ед/мл) в течение 10 минут при комнатной температуре. Серый сигнал представляет апоптозные клетки.

[0067] ФИГ. 50. цитотоксичность in vitro в клетках OVCAR8 (через 72 ч после инъекции). 5000 клеток OVCAR8 (рака яичников человека) культивировали в каждой лунке 96-луночного планшета. На следующий день в клетки инфицировали химерный вирус #33 или #33 с делецией TK (#33/TK-), или вирусы #33 с целевыми последовательностями miR100 и Let-7c вставляли в основные вирусные гены E9L или D4R. Инфицирование проводили при указанных множественностях заражениях (MOI). Жизнеспособность клеток определяли, используя CellTiter96AQ_ueous One Solution (Promega; Cat#G3581), через 72 часа после инъекции. Выживаемость инфицированных клеток вычисляли относительно выживаемости псевдоинфицированных клеток.

[0068] ФИГ. 51. Кинетика роста вирусов в клетках OVCAR8. OVCAR8 клетки инфицировали указанными вирусами при MOI 0,03 БОЕ в 6-луночных планшетах. Клеточные лизаты из инфицированных лунок собирали через 24, 48 и 72 ч после инъекции. Титры вирусов в клеточных лизатах определяли посредством анализа бляшкообразования, и кратное повышение титра вирусов относительно исходного вируса наносили на график.

[0069] ФИГ. 52. Процентное изменение массы мышей. OVCAR8, клетки рака яичников человека культивировали, трипсинизировали, промывали PBS и ресуспендировали в PBS и матригеле 1:1 для получения 5×10⁶ клеток на 100 мкл. 100 мкл суспензии клеток подкожно инъецировали с каждой стороны верхнего бока бестимусной голой мыши для получения 2 опухолей на мышь. Через 3 недели после инъекции опухолевых клеток мышей рассортировали по различным группам обработки (n=8 для PBS и n=5 для всех других групп), чтобы получить одинаковый средний объем опухоли в каждой группе (~200 мм³). После сортировки 10⁵ БОЕ указанных вирусов или PBS интратуморально инъецировали только в правостороннюю опухоль каждой мыши. Мышей взвешивали два раза в неделю, и процентное изменение их массы наносили на график. Каждая линия представляет массу отдельной мыши.

[0070] ФИГ. 53. Объем опухоли. OVCAR8, клетки рака яичников человека, культивировали, трипсинизировали, промывали PBS и ресуспендировали в PBS и матригеле 1:1 для получения 5×10⁶клеток на 100 мкл. 100 мкл суспензии клеток подкожно инъецировали с каждой стороны верхнего бока бестимусной голой мыши для получения 2 опухолей на мышь. Через 3 недели после инъекции опухолевых клеток мышей рассортировали по различным группам обработки (n=8 для PBS и n=5 для всех других групп), чтобы получить одинаковый средний объем опухоли в каждой группе (~200 мм³). После сортировки 10⁵ БОЕ указанных вирусов или PBS интратуморально инъецировали только в правостороннюю опухоль каждой мыши. Объем опухолей измеряли два раза в неделю, используя цифровые штангенциркули (объем={(длина)²× ширина/2}. Объем инъецированных вирусом и неинъецированных опухолей для каждой мыши в каждой группе обработки наносили на график.

[0071] ФИГ. 54A-54B. Средний объем опухоли для инъецированных и неинъецированных опухолей. OVCAR8, клетки рака яичников человека, культивировали, трипсинизировали, промывали PBS и ресуспендировали в PBS и матригеле 1:1 для получения 5×10⁶ клеток на 100 мкл. 100 мкл суспензии клеток подкожно инъецировали с каждой стороны верхнего бока бестимусной голой мыши для получения 2 опухолей на мышь. Через 3 недели после инъекции опухолевых клеток мышей рассортировали по различным группам обработки (n=8 для PBS и n=5 для всех других групп), чтобы получить одинаковый средний объем опухоли в каждой группе (~200 мм³). После сортировки 10⁵ БОЕ указанных вирусов или PBS интратуморально инъецировали только в правостороннюю опухоль каждой мыши. Объем опухолей измеряли два раза в неделю, используя цифровой штангенциркуль (объем={(длина)²× ширина/2}. Средний объем опухоли с SD для каждой группы обработки наносили на график. На ФИГ. 54A и 54B показан средний объем опухоли для инъецированных и неинъецированных опухолей, соответственно.

[0072] ФИГ. 55. Титры вирусов в органах через 7 дней после инъекции. OVCAR8, клетки рака яичников человека, культивировали, трипсинизировали, промывали PBS и ресуспендировали в PBS и матригеле 1:1 для получения 5×10⁶клеток на 100 мкл. 100 мкл суспензии клеток подкожно инъецировали с каждой стороны верхнего бока бестимусной голой мыши для получения 2 опухолей на мышь. Через 3 недели после инъекции опухолевых клеток мышей рассортировали по различным группам обработки (n=3), чтобы получить одинаковый средний объем опухоли в каждой группе (~200 мм³). После сортировки 10⁵ БОЕ указанных вирусов интратуморально инъецировали только в правостороннюю опухоль каждой мыши. На 7 день после инъекции вирусов мыши подвергали эвтаназии, и производили сбор их органов, а также опухолей. Титры вирусов в извлеченных органах определяли посредством анализа бляшкообразования и сравнивали среди опухолей и органов. Примечание: в нормальных органах (легких, печени, яичниках, почках, селезенке и мозге) и неинъецированных опухолях вирус не обнаружен.

[0073] ФИГ. 56. miR100 в опухолях OVCAR8 и органах мышей. Бестимусных голых мышей-носителей ксенотрансплантатов OVCAR8 (n=3) подвергали эвтаназии, и производили сбор их органов, а также опухолей. Собранные ткани гомогенизировали, и выделяли суммарную РНК, используя miRNeasy mini kit (Qiagen). ПЦР в реальном времени проводили для определения уровней miR-100 в лизатах.

[0074] ФИГ. 57. Let-7c в опухолях OVCAR8 и органах мышей. Бестимусных голых мышей-носителей ксенотрансплантатов OVCAR8 (n=3) подвергали эвтаназии, и производили сбор их органов, а также опухолей. Собранные ткани гомогенизировали, и выделяли суммарную РНК, используя miRNeasy mini kit (Qiagen). ПЦР в реальном времени проводили для определения уровней Let-7c в лизатах.

Подробное описание изобретения

[0075] В настоящем описании описаны композиции химерного поксвируса, которые сочетают в себе благоприятные свойства от различных видов вирусов для создания новых гибридных химерных поксвирусов, которые превосходят отдельные вирусы дикого типа. Заявители получили химерные поксвирусы из различных родов. Изоляты химерных ортопоксвирусов и парапоксвирусов демонстрируют превосходную способность уничтожения в панелях клеточных линий рака NCI-60 по сравнению с их отдельными родительскими вирусами дикого типа. Кроме того, пользуясь преимуществом в виде того факта, что представители разных родов семейства poxviridae являются антигенно различимыми, эффективный химерный ортопоксвирус и эффективный химерный парапоксвирус, полученные в этом исследовании, потенциально можно объединить в одну и ту же схему лечения для достижения максимальной терапевтической эффективности.

I. Определения

[0076] Хотя в настоящем описании показаны и описаны различные варианты осуществления и аспекты настоящего изобретения, специалистам в данной области техники будет очевидно, что такие варианты осуществления и аспекты представлены только в качестве примера. Специалистам в данной области техники будут встречаться многочисленные вариации, изменения и замены без отступления от изобретения. Следует понимать, что различные альтернативы вариантам осуществления настоящего изобретения, описанным в настоящем описании, можно использовать при практическом осуществлении настоящего изобретения.

[0077] Заголовки разделов, используемые в указанном документе, предназначены только для организационных целей и не должны рассматриваться как ограничивающие предмет описания. Все документы или части документов, цитируемых в заявке, включая, без ограничения, патенты, патентные заявки, статьи, книги, руководства и научные труды, тем самым напрямую включены в качестве ссылки в полном объеме для любых целей.

[0078] Если не указано иное, технические и научные термины, используемые в настоящем описании, имеют такое же значение, которое обычно понятно специалистам в данной области техники. См., например, Singleton et al., DICTIONARY OF MICROBIOLOGY AND MOLECULAR BIOLOGY 2^nd ed., J. Wiley & Sons (New York, NY 1994); Sambrook et al., MOLECULAR CLONING, A LABORATORY MANUAL, Cold Springs Harbor Press (Cold Springs Harbor, NY 1989). Любые способы, устройства и материалы, подобные или эквивалентные описанным в настоящем описании, можно использовать при практическом осуществлении этого изобретения. Следующие определения приведены для облегчения понимания определенных терминов, часто используемых в настоящем описании, и не предназначены для ограничения объема настоящего раскрытия.

[0079] Термины «выделять» или «выделенный» применительно к нуклеиновой кислоте, вирусу или белку означают, что нуклеиновая кислота, вирус или белок по существу не содержат других клеточных компонентов, с которыми он связан в естественном состоянии. Он может быть, например, в гомогенном состоянии и может быть либо в сухом, либо в водном растворе. Чистоту и гомогенность обычно определяют, используя методы аналитической химии, такие как электрофорез в полиакриламидном геле или жидкостная хроматография высокого разрешения. Белок, который является преобладающим видом, присутствующим в препарате, по существу очищен.

[0080] «Нуклеиновая кислота», или «олигонуклеотид», или «полинуклеотид», или грамматические эквиваленты, используемые в настоящем описании, означают по меньшей мере два нуклеотида, ковалентно связанных вместе. Термин «нуклеиновая кислота» относится к дезоксирибонуклеотидам или рибонуклеотидам и их полимерам в одно- или двухцепочечной форме или к их комплементам. Термин «полинуклеотид» относится к линейной последовательности нуклеотидов. Термин «нуклеотид» обычно относится к одной единице полинуклеотида, то есть мономеру. Нуклеотиды могут представлять собой рибонуклеотиды, дезоксирибонуклеотиды или их модифицированные варианты. Примеры рассматриваемых в настоящем описании, полинуклеотидов включают одноцепочечную и двухцепочечную ДНК, одноцепочечную и двухцепочечную РНК (включая миРНК) и гибридные молекулы, содержащие смеси одноцепочечной и двухцепочечной ДНК и РНК. Термины также охватывают нуклеиновые кислоты, содержащие известные аналоги нуклеотидов или модифицированные остатки или связи основной цепи, которые являются синтетическими, природного происхождения и неприродного происхождения, которые имеют свойства связывания, сходные с эталонной нуклеиновой кислотой, и которые метаболизируются аналогично эталонным нуклеотидам. Примеры таких аналогов включают, без ограничения, фосфоротиоаты, фосфорамидаты, метилфосфонаты, хиралметилфосфонаты и 2-O-метил рибонуклеотиды.

[0081] Нуклеиновые кислоты могут включать неспецифические последовательности. В рамках изобретения термин «неспецифическая последовательность» относится к последовательности нуклеиновой кислоты, которая содержит ряд остатков, которые не предназначены для того, чтобы быть комплементарными или только частично комплементарными любой другой последовательности нуклеиновой кислоты. В качестве примера, неспецифическая последовательность нуклеиновой кислоты представляет собой последовательность остатков нуклеиновой кислоты, которая не функционирует в качестве ингибирующей нуклеиновой кислоты при контакте с клеткой или организмом. «Ингибирующая нуклеиновая кислота» представляет собой нуклеиновую кислоту (например, ДНК, РНК, полимер нуклеотидных аналогов), которая способна связываться с нуклеиновой кислотой-мишенью (например, мРНК, переносимой в белок) и уменьшать транскрипцию нуклеиновой кислоты-мишени (например, мРНК из ДНК) или уменьшать трансляцию нуклеиновой кислоты-мишени (например, мРНК) или изменять сплайсинг транскрипта (например, одноцепочечного морфолино олиго).

[0082] «Меченая нуклеиновая кислота или олигонуклеотид» представляет собой нуклеиновую кислоту или олигонуклеотид, которая связана, либо ковалентно, посредством линкера или химической связи, либо нековалентно, посредством ионных, ван-дер-ваальсовых, электростатических или водородных связей с меткой, так что присутствие нуклеиновой кислоты можно обнаружить, обнаружив присутствие обнаруживаемой метки, связанной с нуклеиновой кислотой. В качестве альтернативы, способ, использующий взаимодействия с высокой аффинностью, может достигать тех же результатов, когда один из пары партнеров по связыванию связывается с другим, например, биотин, стрептавидин. В вариантах осуществления основная цепь фосфотиоатной нуклеиновой кислоты или фосфотиоатного полимера содержит детектируемую метку, как описано в настоящем документе и общеизвестно в данной области.

[0083] Слова «комплементарный» или «комплементарность» относятся к способности нуклеиновой кислоты в полинуклеотиде образовывать пару оснований с другой нуклеиновой кислотой во втором полинуклеотиде. Например, последовательность A-G-T является комплементарной к последовательности T-C-A. Комплементарность может быть частичной, при которой только некоторые из нуклеиновых кислот совпадают в соответствии со спариванием оснований, или полной, когда все нуклеиновые кислоты совпадают в соответствии со спариванием оснований.

[0084] Нуклеиновая кислота является «функционально связанной», когда она находится в функциональном отношении с другой последовательностью нуклеиновой кислоты. Например, ДНК для предпоследовательности или секреторного лидера функционально связана с ДНК для полипептида, если она экспрессируется в виде белка-предшественника, который участвует в секреции полипептида; промотор или энхансер функционально связан с кодирующей последовательностью, если он влияет на транскрипцию последовательности; или сайт связывания рибосомы функционально связан с кодирующей последовательностью, если он расположен так, чтобы облегчить трансляцию. Обычно «функционально связанный» означает, что последовательности ДНК, которые связаны, находятся рядом друг с другом и, в случае секреторного лидера, являются смежными и находятся в фазе считывания. Однако энхансеры не должны быть смежными. Связывание осуществляется путем лигирования на подходящих сайтах рестрикции. Если такие сайты не существуют, синтетические олигонуклеотидные адаптеры или линкеры используют в соответствии с общепринятой практикой.

[0085] Термин «ген» означает сегмент ДНК, участвующий в продуцировании белка; он включает области, предшествующие и следующие за областью кодирования (лидер и трейлер), а также промежуточные последовательности (интроны) между отдельными кодирующими сегментами (экзоны). Лидер, трейлер, а также интроны включают регуляторные элементы, которые необходимы во время транскрипции и трансляции гена. Кроме того, «белковый генный продукт» представляет собой белок, экспрессируемый конкретным геном.

[0086] Слово «экспрессия» или «экспрессируемый» в рамках изобретения по отношению к гену, означает продукт транскрипции и/или трансляции этого гена. Уровень экспрессии молекулы ДНК в клетке можно определить на основе либо количества соответствующей мРНК, которая присутствует в клетке, либо количества белка, кодируемого этой ДНК, продуцируемого клеткой. Уровень экспрессии некодирующих молекул нуклеиновой кислоты (например, миРНК) можно определить посредством стандартных методов ПЦР или нозерн-блоттинга, хорошо известных в данной области. См. Sambrook et al., 1989 Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 18.1-18.88.

[0087] Термин «миРНК», «малая интерферирующая РНК», «малая РНК» или «РНКi» в рамках изобретения относится к нуклеиновой кислоте, которая образует двухцепочечную РНК, причем эта двухцепочечная РНК обладает способностью уменьшать или ингибировать экспрессию гена или целевого гена при экспрессии в той же клетке, что и ген или целевой ген. Комплементарные части нуклеиновой кислоты, которые гибридизуют с образованием двухцепочечной молекулы, обычно имеют значительную или полную идентичность. В одном варианте осуществления миРНК или РНКi относится к нуклеиновой кислоте, которая имеет значительную или полную идентичность с целевым геном и образует двухцепочечную миРНК. В вариантах осуществления миРНК ингибирует экспрессию генов, взаимодействуя с комплементарной клеточной мРНК, тем самым препятствуя экспрессии комплементарной мРНК. Как правило, длина нуклеиновой кислоты составляет по меньшей мере приблизительно 15-50 нуклеотидов (например, каждая комплементарная последовательность двухцепочечной миРНК имеет длину 15-50 нуклеотидов, а длина двухцепочечной миРНК составляет приблизительно 15-50 пар оснований). В других вариантах осуществления длина составляет 20-30 нуклеотидных оснований, предпочтительно приблизительно 20-25 или приблизительно 24-29 нуклеотидов в длину, например, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 или 30 нуклеотидов в длину. Неограничивающие примеры миРНК включают в себя рибозимы, РНК-ловушки, короткие шпилечные РНК (shРНК), микроРНК (миРНК) и малые ядрышковые РНК (snoРНК).

[0088] Термин «рекомбинантный» при использовании со ссылкой, например, на клетку или нуклеиновую кислоту, белок или вектор, указывает, что клетка, нуклеиновая кислота, белок или вектор модифицированы посредством введения гетерологичной нуклеиновой кислоты или белка или изменения нативной нуклеиновой кислоты или белка, или что клетка получена из клетки, модифицированной таким образом. Таким образом, например, рекомбинантные клетки экспрессируют гены, которые не обнаружены в нативной (нерекомбинантной) форме клетки, или экспрессируют нативные гены, которые иначе аномально экспрессируются, недостаточно экспрессируются или не экспрессируются вообще. Трансгенные клетки и растения представляют собой клетки и растения, которые экспрессируют гетерологичный ген или кодирующую последовательность, обычно в результате рекомбинантных методов.

[0089] Термин «гетерологичный» при использовании со ссылкой на части нуклеиновой кислоты указывает, что нуклеиновая кислота содержит две или более подпоследовательности, которые не обнаруживаются в одинаковом отношении друг к другу в природе. Например, нуклеиновую кислоту обычно получают рекомбинантно, имея две или более последовательностей из неродственных генов, расположенных для получения новой функциональной нуклеиновой кислоты, например, промотора из одного источника и кодирующей области из другого источника. Аналогично, гетерологичный белок указывает на то, что белок содержит две или более подпоследовательности, которые не обнаруживают в одинаковых отношениях друг с другом в природе (например, слитый белок).

[0090] Термин «экзогенный» относится к молекуле или веществу (например, соединению, нуклеиновой кислоте или белку), которые образуются за пределами данной клетки или организма. Например, «экзогенный промотор», как упоминается в настоящем описании, представляет собой промотор, который не образуется в клетке или организме, которым он экспрессируется. И наоборот, термин «эндогенный» или «эндогенный промотор» относится к молекуле или веществу, которое является нативным или образуется в данной клетке или организме.

[0091] Термин «выделенный» применительно к нуклеиновой кислоте или белку означает, что нуклеиновая кислота или белок по существу не содержат других клеточных компонентов, с которыми они связаны в естественном состоянии. Они могут находиться, например, в гомогенном состоянии и могут быть либо сухими, либо в водном растворе. Чистоту и однородность обычно определяют с использованием методик аналитической химии, таких как электрофорез в полиакриламидном геле или жидкостная хроматография высокого разрешения. Белок, который является преобладающим видом, присутствующим в препарате, по существу очищен.

[0092] Термины «полипептид», «пептид» и «белок» используют в настоящем описании взаимозаменяемо для обозначения полимера из аминокислотных остатков, при этом в вариантах осуществления полимер может быть конъюгирован с фрагментом, который не состоит из аминокислот. Эти термины применяют к аминокислотным полимерам, в которых один или несколько аминокислотных остатков представляют собой искусственный химический миметик соответствующей встречающейся в природе аминокислоты, а также к встречающимся в природе аминокислотным полимерам и не встречающимся в природе аминокислотным полимерам. «Слитый белок» относится к химерному белку, кодирующему две или более отдельных последовательностей белка, которые рекомбинантно экспрессируются в виде одного фрагмента.

[0093] Термины «пептидил» и «пептидильный фрагмент» означают одновалентный пептид.

[0094] Термин «аминокислота» относится к аминокислотам природного происхождения и синтетическим аминокислотам, а также к аминокислотным аналогам и миметикам аминокислот, которые функционируют аналогично аминокислотам природного происхождения. Аминокислоты природного происхождения представляют собой аминокислоты, кодируемые генетическим кодом, а также те аминокислоты, которые модифицируются позднее, например, гидроксипролин, γ-карбоксиглутамат и O-фосфосерин. Аминокислотные аналоги относятся к соединениям, которые имеют ту же основную химическую структуру, что и аминокислота природного происхождения, то есть α-углерод, который связывается с водородом, карбоксильной группой, аминогруппой и R-группой, например, гомосерином, норлейцином, метионинсульфоксидом, метионин метилсульфонием. Такие аналоги имеют модифицированные R-группы (например, норлейцин) или модифицированные пептидные каркасы, но сохраняют ту же основную химическую структуру, что и аминокислота природного происхождения. Миметики аминокислот относятся к химическим соединениям, имеющим структуру, которая отличается от общей химической структуры аминокислоты, но которая действует аналогично аминокислоте природного происхождения. Термины «аминокислота неприродного происхождения» и «ненатуральная аминокислота» относятся к аминокислотным аналогам, синтетическим аминокислотам и миметикам аминокислот, которые не встречаются в природе.

[0095] В настоящем описании, аминокислоты могут называться либо их общеизвестными трехбуквенными символами, либо однобуквенными символами, рекомендованными Комиссией по биохимической номенклатуре IUPAC-IUB. Нуклеотиды так же могут называться их общепринятыми однобуквенными кодами.

[0096] «Консервативно модифицированные варианты» применяют как к последовательностям аминокислот, так и нуклеиновых кислот. Что касается специфических последовательностей нуклеиновой кислоты, то «консервативно модифицированные варианты» относятся к тем нуклеиновым кислотам, которые кодируют идентичные или по существу идентичные аминокислотные последовательности. Вследствие вырожденности генетического кода любой заданный белок кодируется значительным количеством функционально идентичных нуклеиновых кислот. Например, все кодоны GCA, GCC, GCG и GCU кодируют аминокислоту аланин. Таким образом, в каждом положении, в котором кодоном предусмотрен аланин, кодон можно заменить на любой из соответствующих кодонов без изменения кодируемого полипептида.

[0097] Такие варианты нуклеиновых кислот являются «молчащими вариантами», которые представляют собой один вид консервативно модифицированных вариантов. Каждая последовательность нуклеиновой кислоты в настоящем описании, которая кодирует полипептид, также включает любой возможный молчащий вариант нуклеиновой кислоты. Специалисты в данной области техники признают, что каждый кодон в нуклеиновой кислоте (за исключением AUG, который, как правило, является единственным кодоном для метионина, и TGG, который, как правило, является единственным кодоном для триптофана) можно модифицировать так, чтобы произвести функционально идентичную молекулу. Соответственно, в каждой описанной последовательности подразумевают каждый молчащий вариант нуклеиновой кислоты, которая кодирует полипептид.

[0098] Что касается аминокислотных последовательностей, то специалистам в этой области техники понятно, что отдельные замены, делеции или вставки в последовательность нуклеиновой кислоты, пептидов, полипептидов или белков, которые изменяют, добавляют или удаляют отдельную аминокислоту или небольшой процент аминокислот в кодируемой последовательности, представляют собой «консервативно модифицированный вариант», в котором изменение приводит к замене аминокислоты на химически похожую аминокислоту. Таблицы консервативных замен, обеспечивающих функционально схожие аминокислоты, хорошо известны в этой области техники. Такие консервативно модифицированные варианты представляют собой дополнения и не исключают полиморфные варианты, межвидовые гомологи и аллели согласно настоящему изобретению.

[0099] Каждая из приведенных ниже восьми групп содержит аминокислоты, которые являются консервативными заменами друг друга: 1) Аланин (A), Глицин (G); 2) Аспарагиновая кислота (D), Глутаминовая кислота (E); 3) Аспарагин (N), Глутамин (Q); 4) Аргинин (R), Лизин (K); 5) Изолейцин (I), Лейцин (L), Метионин (M), Валин (V); 6) Фенилаланин (F), Тирозин (Y), Триптофан (W); 7) Серин (S), Треонин (T) и 8) Цистеин (C), Метионин (M) (см., например, Creighton, Proteins (1984)).

[0100] Термины «идентичный» или процент «идентичности» в контексте двух или более последовательностей нуклеиновой кислоты или полипептидов относится к двум или более последовательностям или подпоследовательностям, которые являются одинаковыми или имеют указанный процент остатков аминокислот или нуклеотидов, которые являются одинаковыми (т.е. приблизительно 60% идентичности, предпочтительно 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или более высокой идентичности по указанной области, при сравнении и выравнивании для максимального соответствия в пределах окна сравнения, или предполагаемой области), что измеряют с использованием алгоритмов сравнения последовательностей BLAST или BLAST 2.0 с параметрами, используемыми по умолчанию, описанными ниже, или посредством выравнивания вручную и визуального контроля (см., например, NCBI web site http://www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/ или т.п.). Такие последовательности затем называют «по существу идентичными». Это определение также относится и его можно применять к последовательностям, комплементарным тестируемой последовательности. Определение также включает последовательности, которые имеют делеции и/или добавления, а также последовательности, которые имеют замены. Как описано ниже, предпочтительные алгоритмы могут учитывать гэпы и тому подобное. Предпочтительно идентичность существует в области, длина которой составляет по меньшей мере приблизительно 25 аминокислот или нуклеотидов, или, более предпочтительно, в области длиной 50-100 аминокислот или нуклеотидов.

[0101] Термины «ген тимидинкиназы», «ген ТК», «ген ТК», «ген J2R» или «J2R» в рамках изобретения относятся к любой из рекомбинантных или встречающихся в природе форм гена или их вариантам или гомологам, которые кодируют полипептид тимидинкиназы, способный поддерживать активность полипептида тимидинкиназы (например, в пределах по меньшей мере 50%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% активности по сравнению с полипептидом тимидинкиназой). В некоторых аспектах варианты или гомологи имеют по меньшей мере 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичность последовательностей нуклеиновой кислоты по всей последовательности или части последовательности (например, 50 100, 150 или 200 непрерывной части нуклеиновой кислоты) по сравнению с геном тимидинкиназы природного происхождения. В вариантах осуществления ген тимидинкиназы содержит последовательность нуклеиновой кислоты SEQ ID NO: 4. В вариантах осуществления ген тимидинкиназы представляет собой последовательность нуклеиновой кислоты SEQ ID NO: 4. В вариантах осуществления ген тимидинкиназы мутирован. В вариантах осуществления ген тимидинкиназы частично удален. В вариантах осуществления ген тимидинкиназы содержит последовательность нуклеиновой кислоты SEQ ID NO: 5. В вариантах осуществления ген тимидинкиназы содержит последовательность нуклеиновой кислоты SEQ ID NO: 5.

[0102] Термин «ген F14.5L», «последовательность F14.5L», «F14.5L» и тому подобное в рамках изобретения относится к любой из рекомбинантных или встречающихся в природе форм гена F14.5L или его вариантам или их гомологам, которые кодируют полипептид F14.5L, способный поддерживать активность полипептида F14.5L (например, в пределах по меньшей мере 50%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% активности по сравнению с полипептидом F14.5L). В некоторых аспектах варианты или гомологи имеют по меньшей мере 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичность последовательности нуклеиновой кислоты по всей последовательности или части последовательности (например, 50 100, 150 или 200 непрерывной части нуклеиновой кислоты) по сравнению с геном F14.5L природного происхождения. В вариантах осуществления ген F14.5L по существу идентичен последовательности нуклеиновой кислоты, соответствующей положению 44428-44279 последовательности нуклеиновой кислоты, идентифицированной номером доступа KX781953, или варианту или гомологу, имеющему существенную с ним идентичность. В вариантах осуществления ген F14.5L содержит последовательность нуклеиновой кислоты SEQ ID NO: 6. В вариантах осуществления ген F14.5L представляет собой последовательность нуклеиновой кислоты SEQ ID NO: 6. В вариантах осуществления ген F14.5L является мутированным. В вариантах осуществления ген F14.5L частично удален. В вариантах осуществления ген F14.5L содержит последовательность нуклеиновой кислоты SEQ ID NO: 7. В вариантах осуществления ген F14.5L содержит последовательность нуклеиновой кислоты SEQ ID NO: 7.

[0103] Термины «ген D4R», «ген урацил-ДНК-гликозилазы» и тому подобное в рамках изобретения относятся к любой из рекомбинантных или встречающихся в природе форм гена урацил-ДНК-гликозилазы или их вариантам или гомологам, которые кодируют полипептид урацил-ДНК-гликозилазу, способный сохранять активность полипептида урацил-ДНК-гликозилазы (например, в пределах по меньшей мере 50%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% активности по сравнению с полипептидом урацил-ДНК-гликозилазой). В некоторых аспектах варианты или гомологи имеют по меньшей мере 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичность последовательностей нуклеиновой кислоты по всей последовательности или части последовательности (например, 50 100, 150 или 200 непрерывной части нуклеиновой кислоты) по сравнению с геном урацил-ДНК-гликозилазы природного происхождения. В вариантах осуществления ген урацил-ДНК-гликозилазы по существу идентичен последовательности нуклеиновой кислоты, соответствующей позиции 102720-103376 последовательности нуклеиновой кислоты, идентифицированной номером доступа DQ439815, или варианту или гомологу, имеющему существенную с ним идентичность. В вариантах осуществления ген урацил-ДНК-гликозилазы содержит последовательность нуклеиновой кислоты SEQ ID NO: 8. В вариантах осуществления ген урацил-ДНК-гликозилазы представляет собой последовательность нуклеиновой кислоты SEQ ID NO: 8.

[0104] Термины «ген E9L», «ген ДНК-полимеразы» и тому подобное в рамках изобретения относятся к любой из рекомбинантных или встречающихся в природе форм гена ДНК-полимеразы или его вариантам или гомологам, которые кодируют полипептид ДНК-полимеразу, способный сохранять активность полипептида ДНК-полимеразы (например, в пределах по меньшей мере 50%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% активности по сравнению с полипептидом ДНК-полимеразой). В некоторых аспектах варианты или гомологи имеют по меньшей мере 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичность последовательностей нуклеиновой кислоты по всей последовательности или части последовательности (например, 50, 100, 150 или 200 непрерывной части нуклеиновой кислоты) по сравнению с геном ДНК-полимеразы природного происхождения. В вариантах осуществления ген ДНК-полимеразы по существу идентичен последовательности нуклеиновой кислоты, соответствующей позиции 56656-53636 последовательности нуклеиновой кислоты, идентифицированной номером доступа AY243312 или варианту или гомологу, имеющему существенную с ним идентичность. В вариантах осуществления ген ДНК-полимеразы содержит последовательность нуклеиновой кислоты SEQ ID NO: 12. В вариантах осуществления ген ДНК-полимеразы представляет собой последовательность нуклеиновой кислоты SEQ ID NO: 12.

[0105] Термины «человеческий ген натрий-йодидного симпортера», «ген hNIS», «ген NIS» и тому подобное в рамках изобретения относятся к любой из рекомбинантных или встречающихся в природе форм человеческого гена натрий-йодидного симпортера или его вариантам или гомологам, которые кодируют человеческий полипептид натрий-йодидного симпортера, способный поддерживать активность полипептида человеческого натрий-йодидного симпортера (например, в пределах по меньшей мере 50%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% активности по сравнению с полипептидом человеческого натрий-йодидного симпортера). В некоторых аспектах варианты или гомологи имеют по меньшей мере 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичность последовательностей нуклеиновой кислоты по всей последовательности или части последовательности (например, 50, 100, 150 или 200 непрерывной части нуклеиновой кислоты) по сравнению с человеческим геном натрий-йодидного симпортера природного происхождения. В вариантах осуществления человеческий ген натрий-йодидного симпортера по существу идентичен последовательности нуклеиновой кислоты, идентифицированной номером доступа NM_000453, или варианту или гомологу, имеющему существенную с ним идентичность. В вариантах осуществления человеческий ген натрий-йодидного симпортера содержит последовательность нуклеиновой кислоты SEQ ID NO: 13. В вариантах осуществления человеческий ген натрий-йодидного симпортера представляет собой последовательность нуклеиновой кислоты SEQ ID NO: 13.

[0106] Термины «ген Emerald» или «последовательность Emerald» в рамках изобретения относится к полученному посредством генной инженерии гену или его вариантам, которые кодируют полипептид Emerald, способный сохранять активность полипептида Emerald (например, в пределах по меньшей мере 50%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% активности по сравнению с полипептидом Emerald). В некоторых аспектах варианты или гомологи имеют по меньшей мере 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичность последовательностей нуклеиновой кислоты по всей последовательности или части последовательности (например, 50, 100, 150 или 200 непрерывной части нуклеиновой кислоты) по сравнению с последовательностью Emerald. В вариантах осуществления Emerald по существу идентичен последовательности нуклеиновой кислоты, соответствующей позиции 3215-3931 последовательности нуклеиновой кислоты, идентифицированной номером доступа KF293661, или варианту или гомологу, имеющему существенную с ним идентичность. В вариантах осуществления ген Emerald содержит последовательность нуклеиновой кислоты SEQ ID NO: 14. В вариантах осуществления ген Emerald представляет собой последовательность нуклеиновой кислоты SEQ ID NO: 14.

[0107] Термины «ген люциферазы светлячков» или «последовательность люциферазы светлячков» в рамках изобретения относятся к любой из рекомбинантных или встречающихся в природе форм гена люциферазы светлячков или его вариантам или гомологам, которые кодируют полипептид люциферазу светлячков, способный сохранять активность полипептида люциферазы светлячков (например, в пределах по меньшей мере 50%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% активности по сравнению с полипептидом люциферазы светлячков). В некоторых аспектах варианты или гомологи имеют по меньшей мере 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичность последовательностей нуклеиновой кислоты по всей последовательности или части последовательности (например, 50, 100, 150 или 200 непрерывной части нуклеиновой кислоты) по сравнению с геном люциферазы светлячков природного происхождения. В вариантах осуществления ген люциферазы светлячков по существу идентичен последовательности нуклеиновой кислоты, соответствующей позиции 3129-4781 последовательности нуклеиновой кислоты, идентифицированной номером доступа KF990214, или варианту или гомологу, имеющему существенную с ним идентичность. В вариантах осуществления ген люциферазы светлячков содержит последовательность нуклеиновой кислоты SEQ ID NO: 15. В вариантах осуществления ген люциферазы светлячков представляет собой последовательность нуклеиновой кислоты SEQ ID NO: 15.

[0108] Термины «ген mCherry» или «последовательность mCherry» в рамках изобретения относятся к любой из рекомбинантных или встречающихся в природе форм гена или его вариантам или гомологам, которые кодируют полипептид mCherry, способный сохранять активность полипептида mCherry (например, в пределах по меньшей мере 50%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% активности по сравнению с полипептидом mCherry). В некоторых аспектах варианты или гомологи имеют по меньшей мере 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичность последовательностей нуклеиновой кислоты по всей последовательности или части последовательности (например, 50, 100, 150 или 200 непрерывной части нуклеиновой кислоты) по сравнению с геном mCherry природного происхождения. В вариантах осуществления ген mCherry по существу идентичен последовательности нуклеиновой кислоты, соответствующей позиции 1073-1783 последовательности нуклеиновой кислоты, идентифицированной номером доступа KX446949, или варианту или гомологу, имеющему существенную с ним идентичность. В вариантах осуществления ген mCherry содержит последовательность нуклеиновой кислоты SEQ ID NO: 16. В вариантах осуществления ген mCherry представляет собой последовательность нуклеиновой кислоты SEQ ID NO: 16.

[0109] Термины «Промотор Н5», «H5» и тому подобное в рамках изобретения относятся к любой из рекомбинантных или встречающихся в природе форм промотора Н5 или его вариантам или гомологам, которые сохраняют активность промотора Н5 (например, в пределах по меньшей мере 50%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% активности по сравнению с промотором Н5). В некоторых аспектах варианты или гомологи имеют по меньшей мере 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичность последовательностей нуклеиновой кислоты по всей последовательности или части последовательности (например, 50, 100, 150 или 200 непрерывной части нуклеиновой кислоты) по сравнению с промотором Н5 природного происхождения. В вариантах осуществления промотор Н5 по существу идентичен последовательности нуклеиновой кислоты, соответствующей позиции 7-76 последовательности нуклеиновой кислоты, идентифицированной номером доступа FJ386852, или варианту или гомологу, имеющему существенную с ним идентичность. В вариантах осуществления промотор Н5 содержит последовательность нуклеиновой кислоты SEQ ID NO: 18. В вариантах осуществления промотор Н5 представляет собой последовательность нуклеиновой кислоты SEQ ID NO: 18.

[0110] Термины «промотор SE», «SE» и тому подобное в рамках изобретения относятся к любой из рекомбинантных или встречающихся в природе форм промотора SE или его вариантам или гомологам, которые сохраняют активность промотора SE (например, в пределах по меньшей мере 50%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% активности по сравнению с промотором SE). В некоторых аспектах варианты или гомологи имеют по меньшей мере 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичность последовательностей нуклеиновой кислоты по всей последовательности или части последовательности (например, 50, 100, 150 или 200 непрерывной части нуклеиновой кислоты) по сравнению с промотором SE природного происхождения. В вариантах осуществления промотор SE содержит последовательность нуклеиновой кислоты SEQ ID NO: 19. В вариантах осуществления промотор SE представляет собой последовательность нуклеиновой кислоты SEQ ID NO: 19.

[0111] Термины «промотор 11K», «11K» и тому подобное в рамках изобретения относятся к любой из рекомбинантных или встречающихся в природе форм промотора 11К или его вариантам или гомологам, которые сохраняют активность промотора 11К (например, в пределах по меньшей мере 50%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% активности по сравнению с промотором 11К). В некоторых аспектах варианты или гомологи имеют по меньшей мере 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичность последовательностей нуклеиновой кислоты по всей последовательности или части последовательности (например, 50, 100, 150 или 200 непрерывной части нуклеиновой кислоты) по сравнению с промотором 11K природного происхождения. В вариантах осуществления промотор 11К по существу идентичен последовательности нуклеиновой кислоты, соответствующей позиции 40734-40771 последовательности нуклеиновой кислоты, идентифицированной номером доступа KF179385, или варианту или гомологу, имеющему существенную с ним идентичность. В вариантах осуществления промотор 11К содержит последовательность нуклеиновой кислоты SEQ ID NO: 20. В вариантах осуществления промотор 11К представляет собой последовательность нуклеиновой кислоты SEQ ID NO: 20.

[0112] Антитела представляют собой большие, сложные молекулы (молекулярная масса ~150000 или приблизительно 1320 аминокислот) со сложной внутренней структурой. Молекула природного антитела содержит две идентичные пары полипептидных цепей, каждая пара имеет одну легкую цепь и одну тяжелую цепь. Каждая легкая цепь и тяжелая цепь, в свою очередь, состоит из двух областей: вариабельной («V») области, участвующей в связывании целевого антигена, и константной («C») области, которая взаимодействует с другими компонентами иммунной системы. Вариабельные области легкой и тяжелой цепи объединяются в трехмерном пространстве, образуя вариабельную область, которая связывает антиген (например, рецептор на поверхности клетки). В каждой вариабельной области легкой или тяжелой цепи есть три коротких сегмента (в среднем 10 аминокислот в длину), называемых областями, определяющими комплементарность («CDR»). Шесть CDR в вариабельном домене антитела (три из легкой цепи и три из тяжелой цепи) складываются вместе в трехмерном пространстве, образуя фактический антителосвязывающий сайт, который прикрепляется к целевому антигену. Положение и длина CDR были точно определены E. Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, U.S. Department of Health and Human Services, 1983, 1987. Часть вариабельной области, не включенная в CDR, называется каркасом («FR»), который формирует окружение для CDR.

[0113] Термин «антитело» используется в соответствии с его общеизвестным значением в данной области. Антитела существуют, например, в виде интактных иммуноглобулинов или в виде ряда хорошо охарактеризованных фрагментов, полученных путем расщепления различными пептидазами. Так, например, пепсин расщепляет антитело ниже дисульфидных связей в шарнирной области с образованием F(ab)'2, димера Fab, который сам по себе является легкой цепью, соединенной с VH-CH1 с помощью дисульфидной связи. F(ab)'2 можно восстановить в мягких условиях, чтобы разорвать дисульфидную связь в шарнирной области, превращая тем самым димер F(ab)'2 в Fab'-мономер. Fab'-мономер представляет собой по существу Fab с частью шарнирной области (см. Fundamental Immunology (Рамкл ed., 3d ed. 1993). Хотя различные фрагменты антител определены в аспекте расщепления интактного антитела, специалисту в данной области будет понятно, что такие фрагменты можно синтезировать de novo либо химически, либо с использованием методики рекомбинантной ДНК. Таким образом, термин антитело в рамках изобретения также включает фрагменты антител, полученные либо посредством модификации целых антител, либо синтезированных de novo с использованием методик рекомбинантной ДНК (например, одноцепочечных Fv) или идентифицированных с использованием библиотек фагового дисплея (см., например, McCafferty et al., Nature 348:552-554 (1990)).

[0114] Иллюстративная структурная единица иммуноглобулина (антитела) содержит тетрамер. Каждый тетрамер состоит из двух идентичных пар полипептидных цепей, каждая пара имеет одну «легкую» (приблизительно 25 кДа) и одну «тяжелую» цепь (приблизительно 50-70 кДа). N-конец каждой цепи определяет вариабельную область, составляющую приблизительно от 100 до 110 или более аминокислот, в первую очередь ответственную за распознавание антигена. Термины вариабельная легкая цепь (VL) и вариабельная тяжелая цепь (VH) относятся к этим легким и тяжелым цепям, соответственно. Fc (т.е. кристаллизуемый фрагмент иммуноглобулина) представляет собой «основание» или «хвост» иммуноглобулина и обычно состоит из двух тяжелых цепей, которые вносят два или три константных домена в зависимости от класса антитела. Связываясь со специфическими белками, Fc-фрагмент обеспечивает, чтобы каждое антитело вырабатывало соответствующий иммунный ответ для данного антигена. Fc-фрагмент также связывается с различными клеточными рецепторами, такими как Fc-рецепторы, и другими иммунными молекулами, такими как белки комплемента.

[0115] Термин «антиген» в рамках изобретения к молекулам, способным связываться с антителосвязывающим доменом, предоставленным в настоящем описании. «Антигенсвязывающий домен» в рамках изобретения представляет собой область антитела, которая связывается с антигеном (эпитопом). Как описано выше, антигенсвязывающий домен обычно состоит из одного константного и одного вариабельного домена каждой из тяжелой и легкой цепей (VL, VH, CL и CH1, соответственно). Паратоп или антигенсвязывающий сайт формируется на N-конце антигенсвязывающего домена. Два вариабельных домена антигенсвязывающего домена обычно связывают эпитоп на антигене.

[0116] Антитела существуют, например, в виде интактных иммуноглобулинов или в виде ряда хорошо охарактеризованных фрагментов, полученных путем расщепления различными пептидазами. Так, например, пепсин расщепляет антитело ниже дисульфидных связей в шарнирной области с образованием F(ab)'2, димера Fab, который сам по себе является легкой цепью, соединенной с VH-CH1 с помощью дисульфидной связи. F(ab)'2 можно восстановить в мягких условиях, чтобы разорвать дисульфидную связь в шарнирной области, превращая тем самым димер F(ab)'2 в Fab'-мономер. Fab'-мономер представляет собой по существу Fab с частью шарнирной области (см. Fundamental Immunology (Paul ed., 3^rd ed. 1993). Хотя различные фрагменты антител определены в аспекте расщепления интактного антитела, специалисту в данной области будет понятно, что такие фрагменты можно синтезировать de novo либо химически, либо с использованием методики рекомбинантной ДНК. Таким образом, термин антитело в рамках изобретения также включает фрагменты антител, полученные либо посредством модификации целых антител, либо синтезированных de novo с использованием методик рекомбинантной ДНК (например, одноцепочечных Fv) или идентифицированных с использованием библиотек фагового дисплея (см., например, McCafferty et al., Nature 348:552-554 (1990)).

[0117] Одноцепочечный вариабельный фрагмент (scFv) обычно представляет собой белок слияния вариабельных областей тяжелых (VH) и легких цепей (VL) иммуноглобулинов, связанных с коротким линкерным пептидом, состоящим из от 10 до приблизительно 25 аминокислот. Линкер обычно может быть богат глицином для гибкости, а также серином или треонином для растворимости. Линкер может соединить N-конец VH с C-концом VL или наоборот.

[0118] Эпитоп антитела представляет собой область его антигена, с которой связывается антитело. Два антитела связываются с одним и тем же или перекрывающимся эпитопом, если каждое конкурентно ингибирует (блокирует) связывание другого с антигеном. То есть 1-, 5-, 10-, 20- или 100-кратный избыток одного антитела ингибирует связывание другого по меньшей мере на 30%, но предпочтительно на 50%, 75%, 90% или даже на 99%, как измерено в анализе конкурентного связывания (см., например, Junghans et al., Cancer Res. 50:1495, 1990). В качестве альтернативы, два антитела имеют один и тот же эпитоп, если по существу все аминокислотные мутации в антигене, которые уменьшают или устраняют связывание одного антитела, уменьшают или устраняют связывание другого. Два антитела имеют перекрывающиеся эпитопы, если некоторые аминокислотные мутации, которые уменьшают или устраняют связывание одного антитела, уменьшают или устраняют связывание другого.

[0119] Для получения подходящих антител согласно настоящему изобретению и для применения в соответствии с настоящим изобретением, например, рекомбинантных, моноклональных или поликлональных антител, можно использовать многие методики, известные в данной области (см., например, Kohler & Milstein, Nature 256:495-497 (1975); Kozbor et al., Immunology Today 4: 72 (1983); Cole et al., pp. 77-96 in Monoclonal Antibodies и Cancer Therapy, Alan R. Liss, Inc. (1985); Coligan, Current Protocols in Immunology (1991); Harlow & Lane, Antibodies, A Laboratory Manual (1988); и Goding, Monoclonal Antibodies: Principles and Practice (2^rd ed. 1986)). Гены, кодирующие тяжелые и легкие цепи интересующего антитела, можно клонировать из клеток, например, гены, кодирующие моноклональное антитело, можно клонировать из гибридомы и использовать для получения рекомбинантного моноклонального антитела. Генные библиотеки, кодирующие тяжелые и легкие цепи моноклональных антител, также можно получить из гибридомных или плазматических клеток. Случайные комбинации продуктов генов тяжелой и легкой цепей генерируют большой пул антител с различной антигенной специфичностью (см., например, Kuby, Immunology (3^rd ed. 1997)). Методики получения одноцепочечных антител или рекомбинантных антител (патент США №4946778, патент США №4816567) можно адаптировать для получения антител к полипептидам данному изобретения. Кроме того, для экспрессии гуманизированных или человеческих антител можно использовать трансгенных мышей или другие организмы, такие как другие млекопитающие (см., например, патенты США №№5545807; 5545806; 5569825; 5625126; 5633425; 5661016, Marks et al., Bio/Technology 10:779-783 (1992); Lonberg et al., Nature 368:856-859 (1994); Morrison, Nature 368:812-13 (1994); Fishwild et al., Nature Biotechnology 14:845-51 (1996); Neuberger, Nature Biotechnology 14:826 (1996); и Lonberg & Huszar, Intern. Rev. Immunol. 13:65-93 (1995)). В качестве альтернативы, технологию фагового дисплея можно использовать для идентификации антител и гетеромерных Fab-фрагментов, которые специфически связываются с выбранными антигенами (см., например, McCafferty et al., Nature 348:552-554 (1990); Marks et al., Biotechnology 10:779-783 (1992)). Антитела также можно получать биспецифичными, т.е. способными распознавать два разных антигена (см., например, WO 93/08829, Traunecker et al., EMBO J. 10:3655-3659 (1991); и Suresh et al., Methods in Enzymology 121:210 (1986)). Антитела также могут быть гетероконъюгатами, например, двумя ковалентно связанными антителами, или иммунотоксинами (см., например, патент США №4676980, WO 91/00360; WO 92/200373; и EP 03089).

[0120] Когда фраза «специфически (или избирательно) связывается с антителом» или «специфически (или избирательно) иммунореактивен с», относится к белку или пептиду, она относится к реакции связывания, которая определяет присутствие белка, часто в гетерогенной популяции белков и др. биопрепаратов. Таким образом, при заданных условиях иммуноанализа указанные антитела связываются с конкретным белком по меньшей мере в два раза больше по сравнению с исходными и, более типично, более чем в 10-100 раз больше по сравнению с исходными. Для специфического связывания с антителом в таких условиях обычно требуется антитело, которое выбирают из-за его специфичности к конкретному белку. Например, поликлональные антитела можно выбрать для получения только подмножества антител, которые специфически иммунореактивны с выбранным антигеном, а не с другими белками. Этот выбор можно достигнуть путем вычитания антител, которые перекрестно реагируют с другими молекулами. Для отбора антител, специфически иммунореактивных с конкретным белком, можно использовать различные форматы иммуноанализа. Например, для отбора антител, специфически иммунореактивных с белком, обычно используют твердофазный иммуноанализ ELISA (см., например, Harlow & Lane, Using Antibodies, A Laboratory Manual (1998) для описания форматов и условий иммуноанализа, которые можно использовать для определения специфической иммунореактивности).

[0121] «Приведение в контакт» используют в соответствии с его основным обычным значением, и оно относится к процессу, позволяющему по меньшей мере двум отдельным видам (например, химическим соединениям, включая биомолекулы или клетки) стать достаточно близкими для реакции, взаимодействия или физического прикосновения. Это следует понимать; однако полученный продукт реакции можно получить непосредственно из реакции между добавленными реагентами или из промежуточного продукта из одного или более из добавленных реагентов, которые можно получить в реакционной смеси.

[0122] Термин «приведение в контакт» может включать предоставление возможности реагирования, взаимодействия или физического соприкосновения двух видов, причем эти два вида могут представлять собой, например, домен антитела, как описано в настоящем описании, и антителосвязывающий домен. В вариантах осуществления приведение в контакт включает, например, предоставление возможности домену антитела, как описано в настоящем описании, взаимодействовать с антителосвязывающим доменом.

[0123] «Пациент» или «нуждающийся в этом пациент» относится к живому организму, страдающему или склонному к заболеванию или состоянию, которое можно лечить путем введения композиции или фармацевтической композиции, представленной в настоящем описании. Неограничивающие примеры включают людей, других млекопитающих, коров, крыс, мышей, собак, обезьян, коз, овец, коров, оленей и других животных, не являющихся млекопитающими. В некоторых вариантах осуществления пациентом является человек.

[0124] Термины «заболевание» или «состояние» относятся к состоянию или состоянию здоровья пациента или пациента, которое можно лечить посредством соединений или способов в рамках изобретения. Заболевание может представлять собой рак. В некоторых дополнительных случаях «рак» относится к человеческим видам рака и карциномам, саркомам, аденокарциномам, лимфомам, лейкозам, включая солидные и лимфоидные виды рака, рак почек, молочной железы, легких, мочевого пузыря, толстой кишки, яичников, предстательной железы, поджелудочной железы, желудка, головного мозга, головы и шеи, кожи, матки, яичка, глиому, пищевода и печени, включая гепатокарциному, лимфому, включая острую B-лимфобластную лимфому, неходжкинские лимфомы (например, Беркитта, мелкоклеточную, и крупноклеточную лимфомы),лимфому Ходжкина, лейкоз (включая AML, ALL и CML) или множественную миелому.

[0125] В рамках изобретения термин «рак» относится ко всем типам рака, новообразований или злокачественных опухолей, обнаруженных у млекопитающих (например, у людей), включая лейкоз, карциномы и саркомы. Иллюстративные виды рака, которые можно лечить соединением или способом в рамках изобретения, включают рак молочной железы, рак толстой кишки, рак почки, лейкоз, рак легкого, меланому, рак яичников, рак предстательной железы, рак поджелудочной железы, рак головного мозга, рак печени, рак желудка или саркому.

[0126] Термин «лейкоз» в широком смысле относится к прогрессирующим, злокачественным заболеваниям кроветворных органов и обычно характеризуется измененной пролиферацией и развитием лейкоцитов и их предшественников в крови и костном мозге. Лейкоз обычно классифицируют клинически на основании (1) длительности и характера заболевания - острый или хронический; 2) типа вовлеченной клетки; миелоидный (миелогенный), лимфоидный (лимфогенный) или моноцитарный; и (3) увеличения или не увеличения количества аномальных клеток в крови - лейкемический или нелейкемический (сублейкемический). Иллюстративные лейкозы, которые можно лечить соединением или способом в рамках изобретения, включают, например, острый нелимфоцитарный лейкоз, хронический лимфоцитарный лейкоз, острый гранулоцитарный лейкоз, хронический гранулоцитарный лейкоз, острый промиелоцитарный лейкоз, Т-клеточный лейкоз взрослых, алейкемический лейкоз, лейкемический лейкоз, базофильный лейкоз, бластный лейкоз, лейкоз крупного рогатого скота, хронический миелоцитарный лейкоз, гематодерматоз, эмбриональный лейкоз, эозинофильный лейкоз, лейкоз Гросса, волосатоклеточный лейкоз, гемобластный лейкоз, гемоцитобластный лейкоз, гистиоцитарный лейкоз, недифференцируемый лейкоз, острый моноцитарный лейкоз, лейкопенический лейкоз, лимфолейкоз, лимфобластный лейкоз, лимфоцитарный лейкоз, лимфогенный лейкоз, лимфоидный лейкоз, лейкоз с клетками лимфосаркомы, мастоцитарный лейкоз, мегакариоцитарный лейкоз, микромиелобластный лейкоз, моноцитарный лейкоз, миелобластный лейкоз, миелоцитарный лейкоз, миелоидный гранулоцитарный лейкоз, миеломоноцитарный лейкоз, лейкоз Негели, плазмоклеточный лейкоз, множественную миелому, плазмоцитарный лейкоз, промиелоцитарный лейкоз, лейкоз с клетками Ридера, лейкоз Шиллинга, недифференцируемый лейкоз, сублейкемический лейкоз или лейкоз из недифференцированных клеток.

[0127] Термин «саркома» в целом относится к опухоли, которая состоит из вещества, подобного эмбриональной соединительной ткани, и обычно состоит из плотно упакованных клеток, заключенных в волокнистое или гомогенное вещество. Саркомы, которые можно лечить соединением или способом в рамках изобретения, включают хондросаркому, фибросаркому, лимфосаркому, меланосаркому, миксосаркому, остеосаркому, саркому Абемети, жировую/адипо саркому, липоаркому, альвеолярную саркому мягких тканей, амелобоастосаркому, ботриоидную саркому, саркому хлорому, хориокарциному, эмбриональную саркому, саркому опухоль Вильмса, саркому эндометрия, стромальную саркому, саркому Юинга, фасциальную саркому, фибробластическую саркому, гигантоклеточную саркому, гранулоцитарную саркому, саркому Ходжкина, идиопатическую множественную геморрагическую пигментную саркому, иммунобластную саркому из В-клеток, лимфому, иммунобластную саркому из T-клеток, саркому Дженсена, саркому Капоши, саркому купферовых клеток, ангиосаркому, лейкосаркому, саркому злокачественную мезотелиому, периостальную саркому, ретикулоцитарную саркому, саркому Рауса, листовидную цистосаркому, синовиальную саркому или телеангиэктатическую саркому.

[0128] Термин «меланома» означает опухоль, возникающую из меланоцитарной системы кожи и других органов. Меланомы, которые можно лечить соединением или способом в рамках изобретения, включают, например, акральную лентигинозную меланому, беспигментную меланому, доброкачественную ювенильную меланому, меланому Клаудмана, меланому S91, меланому Хардинга-Пасси, ювенильную меланому, меланому типа злокачественного лентиго, злокачественную меланому, узловую меланому, подногтевую меланому или поверхностно распространяющуюся меланому.

[0129] Термин «карцинома» относится к злокачественному новообразованию, состоящему из эпителиальных клеток, стремящихся инфильтрировать окружающие ткани и вызывать метастазы. Иллюстративные карциномы, которые можно лечить соединением или способом в рамках изобретения, включают, например, медуллярную карциному щитовидной железы, семейную медуллярную карциному щитовидной железы, ацинарную карциному, ацинозную карциному, аденокистозную карциному, железисто-кистозную карциному, аденоматозную карциному, карциному коры надпочечников, альвеолярную карцинома, альвеолярноклеточную карциному, базальноклеточную карциному, базоцеллюлярную карциному, базалоидную карциному, базальноплоскоклеточную карциному, бронхоальвеолярную карциному, бронхиолярную карциному, бронхогенную карциному, медуллярную карциному, холангиоцеллюлярную карциному, хориокарциному, коллоидную карциному, комедокарциному, карциному тела матки, крибриформную карциному, инфильтрирующую карциному, карциному кожи, цилиндрическую карциному, цилиндроклеточную карциному, карциному протоков, карциному твердого неба, эмбриональную карциному, мозговидную карциному, эпидермоидную карциному, карциному эпителиальных аденоидов, экзофитную карциному, карциному из язвы, фиброзную карциному, желеобразную карциному, коллоидную карциному, гигантоклеточную карциному, гигантоцеллюлярную карциному, гландулярную карциному, гранулезотекаклеточную карциному, базальноклеточную карциному, гематоидную карциному, гепатоцеллюлярную карциному, карциному из клеток Гюртле, карциному с гиалиновой стромой, гипернефроидную карциному, эмбриональную карциному инфантильного типа, карциному in situ, интрадермальную карциному, интраэпитилиальную карциному, карциному Кромпечера, карциному из клеток Кульчицкого, крупноклеточную карциному, лентикулярную карциному, carcinoma lenticulare, липоматозную карциному, лимфоэпителиальную карциному, carcinoma medullare, медуллярную карциному, меланокарциному, карциному мягкого неба, муцинозную карциному, carcinoma muciparum, мукоцеллюлярную карциному, мукоэпидермоидную карциному, carcinoma mucosum, слизистую карциному, миксоматозную карциному, назофарингеальную карциному, овсяноклеточную карциному, оссифицирующую карциному, остеоидную карциному, папиллярную карциному, перипортальную карциному, преинвазивную карциному, шиловидноклеточную карциному, пульповидую карциному, почечноклеточную карциному почек, резервноклеточную карциному, саркомоподобную карциному, карциному Шнейдера, скиррозную карциному, карциному мошонки, перстневидноклеточную карциному, недифференцированную карциному, мелкоклеточную карциному, соланоидную карциному, карциному из сферических клеток, веретеноклеточную карциному, губчатую карциному, squamous carcinoma, плоскоклеточную карциному, string carcinoma, телеангиэктатическую карциному, carcinoma telangiectodes, переходно-клеточную карциному, carcinoma tuberosum, туберозную карциному, веррукозную карциному или виллезную карциному.

[0130] Термин «ассоциированный» или «ассоциированный с» в контексте вещества или активности или функции вещества, ассоциированного с заболеванием (например, раком, астмой, язвенным колитом, синдромом раздраженного кишечника, артритом, увеитом, гангренозной пиодермией или узловатой эритемой) вызван (полностью или частично) либо симптомом заболевания вызван (полностью или частично) посредством вещества или активности или функции вещества.

[0131] В рамках изобретения термины «иммунная контрольная точка», «белок иммунной контрольной точки» или «белок контрольной точки» можно использовать взаимозаменяемо, и они относятся к композициям (молекулам), способным модулировать длительность и амплитуду физиологических иммунных ответов (например, ослаблять и/или устранять длительную активацию иммунных клеток, таким образом регулируя нормальный иммунный гомеостаз). Белки иммунных контрольных точек могут стимулировать (усиливать) иммунный ответ. В вариантах осуществления белок контрольной точки представляет собой клеточный рецептор. Примеры стимулирующих молекул контрольных точек включают, без ограничения, члены суперсемейства рецепторов фактора некроза опухоли (TNF) (например, CD27, CD40, OX40, индуцированный глюкокортикоидами ген семейства TNFR (GITR) и CD137), члены суперсемейства B7-CD28 (например, сам CD28 и индуцируемый Т-клеточный костимулятор (ICOS)). В качестве альтернативы белки иммунных контрольных точек могут ингибировать (уменьшать) иммунный ответ. Примеры ингибирующих молекул контрольных точек включают, без ограничения, рецептор аденозина А2А (A2AR), B7-H3, B7-H4, BTLA, CTLA-4, индоламин 2,3-диоксигеназу (IDO), иммуноглобулиноподобные рецепторы киллеров (KIR), LAG3, PD-1, TIM-3, и иммуноглобулин-V домен супрессор T-клеточной активации (VISTA).

[0132] Подобным образом «ингибитор иммунной контрольной точки» или «ингибитор контрольной точки» в рамках изобретения относится к веществу (например, антителу или его фрагменту, небольшой молекуле), которое способно ингибировать, отрицательно влиять (например, уменьшать) активность или функцию белка контрольной точки (например, уменьшать экспрессию или уменьшать активность белка контрольной точки) относительно активности или функции белка контрольной точки при отсутствии ингибитора. Ингибитор контрольной точки может по меньшей мере в какой-то мере, частично или полностью блокировать стимуляцию, уменьшать, предотвращать или задерживать активацию, или инактивировать, десенсибилизировать, или понижающе регулировать передачу сигнала или ферментативную активность или количество белка контрольной точки. Ингибитор контрольной точки может ингибировать белок контрольной точки, например, связывая, частично или полностью блокируя, уменьшая, предотвращая, задерживая, инактивируя, десенсибилизируя или понижающе регулируя активность белка контрольной точки. В вариантах осуществления ингибитор контрольной точки представляет собой антитело. В вариантах осуществления ингибитор контрольной точки представляет собой фрагмент антитела. В вариантах осуществления ингибитор контрольной точки представляет собой вариант антитела. В вариантах осуществления ингибитор контрольной точки представляет собой scFv. В вариантах осуществления ингибитор контрольной точки представляет собой анти-CTLA-4 антитело. В вариантах осуществления ингибитор контрольной точки представляет собой анти-PD1 антитело. В вариантах осуществления ингибитор контрольной точки представляет собой анти-PD-L1 антитело. В вариантах осуществления ингибитор контрольной точки представляет собой анти-LAG-3 антитело. В вариантах осуществления ингибитор контрольной точки представляет собой анти-IgG1k антитело. В вариантах осуществления ингибитор контрольной точки представляет собой анти-CD25 антитело. В вариантах осуществления ингибитор контрольной точки представляет собой анти-IL2R антитело. В вариантах осуществления ингибитор контрольной точки образует часть онколитического вируса. Неограничивающие примеры ингибиторов контрольных точек включают ипилимумаб, пембролизумаб, ниволумаб, талимоген лагерпарепвек, дурвалумаб, даклизумаб, авелумаб и атезолизумаб.

[0133] Термин «аберрантный» в рамках изобретения относится к отличному от нормального. При использовании для описания ферментативной активности аберрантная относится к активности, большей или меньшей, чем нормальный контроль или среднее значение нормальных контрольных образцов без заболеваний. Аберрантная активность может относиться к величине активности, которая приводит к заболеванию, при этом возврат аберрантной активности к нормальному или не ассоциированному с заболеванием количеству (например, используя способ, как описано в настоящем описании), приводит к уменьшению заболевания или одного или более симптомов заболевания.

[0134] «Контроль» или «стандартный контроль» относится к образцу, измерению или значению, которое служит эталоном, обычно известным эталоном, для сравнения с тестовым образцом, измерением или значением. Например, тестируемый образец можно взять у пациента с подозрением на данное заболевание (например, рак), и сравнить с известным нормальным (не заболевшим) индивидуумом (например, стандартным контрольным пациентом). Стандартный контроль также может представлять собой среднее измерение или значение, полученное у популяции сходных индивидуумов (например, стандартных контрольных пациентов), у которых нет данного заболевания (т.е. стандартной контрольной популяции), например, здоровых индивидуумов с аналогичным анамнезом, того же возраста, массой и т.д. Стандартное контрольное значение также можно получить у одного и того же индивидуума, например, из ранее полученного образца у пациента до начала заболевания. Например, можно разработать контроль для сравнения терапевтической пользы на основе фармакологических данных (например, периода полувыведения) или терапевтических мер (например, сравнение побочных эффектов). Контроль также важен для определения значимости данных. Например, если значения для данного параметра в контролях широко варьируют, отклонения в тестируемых образцах не будут считаться значительными. Специалист поймет, что стандартные контроли можно разработать для оценки любого количества параметров (например, уровней РНК, уровней белка, определенных типов клеток, конкретных текучих сред организма, конкретных тканей, синовиоцитов, синовиальной текучей среды, синовиальной ткани, фибробластоподобных синовиоцитов, макрофагоподобных синовиоцитов и т.д.).

[0135] Специалист в данной области поймет, какие стандартные контроли являются наиболее подходящими в данной ситуации, и сможет анализировать данные на основе сравнения со стандартными контрольными значениями. Стандартные контроли также полезны для определения значимости (например, статистической значимости) данных. Например, если значения для данного параметра широко варьируют в стандартных контролях, отклонения в тестируемых образцах не будут считаться значительными.

[0136] Термин «диагноз» относится к относительной вероятности того, что заболевание (например, рак) присутствует у пациента. Точно так же термин «прогноз» относится к относительной вероятности того, что у пациента в будущем может возникнуть определенный результат в отношении болезненного состояния. Например, в контексте настоящего изобретения прогноз может относиться к вероятности того, что у индивидуума разовьется заболевание (например, рак), или к вероятности степени тяжести заболевания (например, длительности заболевания). Термины не предназначены быть абсолютными, как будет понятно любому специалисту в области медицинской диагностики.

[0137] «Биологический образец» или «образец» относится к материалам, полученным или взятым у пациента или пациента. Биологический образец включает срезы тканей, такие как образцы, полученные при биопсии и вскрытии, и замороженные срезы, взятые для гистологических целей. Такие образцы включают текучие среды организма, такие как кровь и фракции или продукты крови (например, сыворотка, плазма, тромбоциты, эритроциты и тому подобное), мокрота, ткани, культивируемые клетки (например, первичные культуры, экспланты и трансформированные клетки), кал, моча, синовиальная текучая среда, суставная ткань, синовиальная ткань, синовиоциты, фибробластоподобные синовиоциты, макрофагоподобные синовиоциты, иммунные клетки, гемопоэтические клетки, фибробласты, макрофаги, Т-клетки и т.д. Биологический образец обычно получают из эукариотического организма, такого как млекопитающее, такое как примат, например, шимпанзе или человек; корова; собака; кошка; грызун, например, морская свинка, крыса, мышь; кролик; или птица; рептилия; или рыба.

[0138] «Клетка» в рамках изобретения относится к клетке, выполняющей метаболические или другие функции, достаточные для сохранения или репликации своей геномной ДНК. Клетку можно идентифицировать посредством хорошо известных в данной области способов, включая, например, наличие интактной мембраны, окрашивание определенным красителем, способность продуцировать потомство или, в случае гамет, способность объединяться со второй гаметой, чтобы произвести жизнеспособное потомство. Клетки могут включать прокариотические и эукариотические клетки. Прокариотические клетки включают, без ограничения, бактерии. Эукариотические клетки включают, без ограничения, дрожжевые клетки и клетки, полученные из растений и животных, например, клеток млекопитающих, насекомых (например, spodoptera) и человека. Клетки могут быть полезны, когда они естественным образом не прилипают или были обработаны, чтобы не прилипать к поверхностям, например, путем трипсинизации.

[0139] Термин «реплицировать» используется в соответствии с его обычным значением и относится к способности клетки или вируса продуцировать потомство. Специалист в данной области техники сразу поймет, что термин «реплицировать» при использовании в связи с ДНК относится к биологическому процессу получения двух идентичных копий ДНК из одной исходной молекулы ДНК. Таким образом, термин «реплицировать» включает пассирование и реинфицирование клеток потомства. В вариантах осуществления химерный поксвирус в рамках изобретения обладает повышенной онколитической активностью по сравнению с его родительским вирусом. В вариантах осуществления онколитическая активность (способность вызывать гибель клетки у инфицированной клетки) увеличивается более чем в 1,5, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 100, 10000, 10000 раз по сравнению с онколитической активностью родительского вируса (одного из вирусов, использованных для образования химерного вируса в рамках изобретения).

[0140] «Синергическое количество» в рамках изобретения относится к сумме первого количества (например, количества первого химерного поксвируса) и второго количества (например, количества второго химерного поксвируса), которая приводит к синергическому эффекту (т.е. эффекту больше, чем суммарный эффект). Следовательно, термины «синергия», «синергизм», «синергический», «комбинированный синергический объем» и «синергический терапевтический эффект», которые взаимозаменяемо используются в настоящем описании, относятся к измеренному эффекту химерных поксвирусов, вводимых в комбинации, когда измеряемый эффект больше, чем сумма отдельных эффектов каждого из химерных поксвирусов, вводимых отдельно в качестве единственного агента.

[0141] В вариантах осуществления синергическое количество может составлять приблизительно 0,1, 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9, 1,0, 1,1, 1,2, 1,3, 1,4, 1,5, 1,6, 1,7, 1,8, 1,9, 2,0, 2,1, 2,2, 2,3, 2,4, 2,5, 2,6, 2,7, 2,8, 2,9, 3,0, 3,1, 3,2, 3,3, 3,4, 3,5, 3,6, 3,7, 3,8, 3,9, 4,0, 4,1, 4,2, 4,3, 4,4, 4,5, 4,6, 4,7, 4,8, 4,9, 5,0, 5,1, 5,2, 5,3, 5,4, 5,5, 5,6, 5,7, 5,8, 5,9, 6,0, 6,1, 6,2, 6,3, 6,4, 6,5, 6,6, 6,7, 6,8, 6,9, 7,0, 7,1, 7,2, 7,3, 7,4, 7,5, 7,6, 7,7, 7,8, 7,9, 8,0, 8,1, 8,2, 8,3, 8,4, 8,5, 8,6, 8,7, 8,8, 8,9, 9,0, 9,1, 9,2, 9,3, 9,4, 9,5, 9,6, 9,7, 9,8, 9,9, 10,0, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% количества первого химерного поксвируса при отдельном использовании от второго химерного поксвируса. В вариантах осуществления синергическое количество может составлять приблизительно 0,1, 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9, 1,0, 1,1, 1,2, 1,3, 1,4, 1,5, 1,6, 1,7, 1,8, 1,9, 2,0, 2,1, 2,2, 2,3, 2,4, 2,5, 2,6, 2,7, 2,8, 2,9, 3,0, 3,1, 3,2, 3,3, 3,4, 3,5, 3,6, 3,7, 3,8, 3,9, 4,0, 4,1, 4,2, 4,3, 4,4, 4,5, 4,6, 4,7, 4,8, 4,9, 5,0, 5,1, 5,2, 5,3, 5,4, 5,5, 5,6, 5,7, 5,8, 5,9, 6,0, 6,1, 6,2, 6,3, 6,4, 6,5, 6,6, 6,7, 6,8, 6,9, 7,0, 7,1, 7,2, 7,3, 7,4, 7,5, 7,6, 7,7, 7,8, 7,9, 8,0, 8,1, 8,2, 8,3, 8,4, 8,5, 8,6, 8,7, 8,8, 8,9, 9,0, 9,1, 9,2, 9,3, 9,4, 9,5, 9,6, 9,7, 9,8, 9,9, 10,0, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% количества второго химерного поксвируса при использовании отдельно от первого химерного поксвируса.

[0142] Термины «вирус» или «вирусная частица» используются в соответствии с их обычным значением в вирусологии и относятся к вириону, включая вирусный геном (например, ДНК, РНК, одноцепочечный, двухцепочечный), вирусный капсид и ассоциированные белки, и в случае оболочечных вирусов (например, герпесвируса, поксвируса) оболочка включает липиды и необязательно компоненты мембран клетки-хозяина и/или вирусные белки.

[0143] Термин «поксвирус» используют в соответствии с его обычным значением в вирусологии, и он относится к члену семейства Poxviridae, способному инфицировать позвоночных и беспозвоночных, который размножается в цитоплазме их хозяина. В вариантах осуществления вирионы поксвируса имеют размер около 200 нм в диаметре и около 300 нм в длину и обладают геномом в одном линейном двухцепочечном сегменте ДНК, обычно 130-375 т.п.н. Термин поксвирус включает, без ограничений, все роды Poxviridae (например, бетаэнтомопоксвирус, ятапоксвирус, цервидпоксвирус, гаммаэнтомопоксвирус, лепорипоксвирус, вирус оспы свиней, моллюсципоксвирус, вирус оспы крокодилов, альфаэнтомопоксвирус, каприпоксвирус, ортопоксвирус, авипоксвирус и парапоксвирус). В вариантах осуществления поксвирус представляет собой ортопоксвирус (например, вирус оспы, вирус осповакцины, поксвирус коров, вирус оспы обезьян), парапоксвирус (например, орф-вирус, псевдопоксвирус коров, вирус папулезного стоматита крупного рогатого скота), ятапоксвирус (например, поксвирус Тана, вирус опухоли обезьян Яба) или моллюсципоксвирус (например, вирус контагиозного моллюска). В вариантах осуществления поксвирус представляет собой ортопоксвирус (например, штамм Brighton вируса коровьей оспы, штамм Herman поксвируса енотов, штамм Utrecht поксвируса кроликов, штамм WR вируса осповакцины, штамм IHD вируса осповакцины, штамм Elstree вируса осповакцины, штамм CL вируса осповакцины, штамм Lederle-Chorioallantoic вируса осповакцины или штамм AS вируса осповакцины). В вариантах осуществления поксвирус представляет собой парапоксвирус (например, штамм NZ2 орф-вируса или штамм TJS псевдопоксвируса коров).

[0144] Термин «химерный», используемый в контексте химерного поксвируса, используют в соответствии с его обычным значением в вирусологии, и он относится к гибридному микроорганизму (например, химерному поксвирусу), созданному посредством соединения фрагментов нуклеиновых кислот из двух или более различных микроорганизмов (например, два вируса из одного подсемейства, два вируса из разных подсемейств). В вариантах осуществления фрагменты нуклеиновой кислоты по меньшей мере из двух комбинированных штаммов поксвирусов содержат основные гены, необходимые для репликации. В вариантах осуществления фрагменты одного по меньшей мере из двух штаммов вируса поксвируса содержат основные гены, необходимые для репликации. Химерный поксвирус в рамках изобретения, включая его варианты осуществления, может включать один или несколько трансгенов (т.е. последовательности нуклеиновых кислот, не являющихся нативными для вирусного генома). Например, химерный поксвирус в рамках изобретения, включая его варианты осуществления, может включать противораковую последовательность нуклеиновой кислоты, связывающую последовательность нуклеиновой кислоты, последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую определяемый фрагмент, или любую их комбинацию. В вариантах осуществления химерный поксвирус содержит последовательность нуклеиновой кислоты, включая противораковую последовательность нуклеиновой кислоты, связывающую последовательность нуклеиновой кислоты и последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую определяемый фрагмент. В вариантах осуществления химерный поксвирус содержит последовательность нуклеиновой кислоты, включая противораковую последовательность нуклеиновой кислоты и последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую определяемый фрагмент. В вариантах осуществления химерный поксвирус содержит последовательность нуклеиновой кислоты, включая связывающую последовательность нуклеиновой кислоты и последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую определяемый фрагмент. В вариантах осуществления химерный поксвирус содержит последовательность нуклеиновой кислоты, включая противораковую последовательность нуклеиновой кислоты и связывающую последовательность нуклеиновой кислоты.

[0145] Термин «бляшкообразующие единицы» используют в соответствии с его обычным значением в вирусологии, и он относится к количеству бляшек в монослое клеток, которые могут образовываться на объем вирусных частиц. В некоторых вариантах осуществления единицы основаны на количестве бляшек, которые могут образоваться при инфицировании монослоя восприимчивых клеток. Например, в вариантах осуществления 1000 БОЕ/мкл указывает на то, что 1 мкл раствора, содержащего вирусные частицы, содержит достаточное количество вирусных частиц для образования 1000 инфекционных бляшек в монослое клеток. В вариантах осуществления бляшкообразующие единицы сокращенно обозначают «БОЕ».

[0146] Термины «множественность заражения» или «MOI» используют в соответствии с их обычным значением в вирусологии и относятся к отношению инфекционного агента (например, поксвируса) к мишени (например, клетке) в данной площади или объеме. В вариантах осуществления площадь или объем предполагаются гомогенными.

[0147] Термин «штамм Brighton поксвируса коров» используют в соответствии с его общим, обычным значением в вирусологии, и он относится к вирусным штаммам с такими же или похожими названиями и их функциональным фрагментам и гомологам. Термин включает рекомбинантные или встречающиеся в природе формы штамма Brighton поксвируса коров или его варианты, которые сохраняют активность штамма Brighton поксвируса коров (например, в пределах по меньшей мере 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% или 100%). Термин включает рекомбинантные или встречающиеся в природе формы штамма Brighton поксвируса коров или его варианты, геном которых имеет идентичность последовательностей с геномом штамма Brighton поксвируса коров (например, приблизительно 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 99% или 100% идентичности с геномом штамма Brighton поксвируса коров). Штамм Brighton поксвируса коров может относиться к вариантам, имеющим мутированные аминокислотные остатки, которые модулируют (например, повышают или понижают, при сравнении со штаммом Brighton поксвируса коров) активность, экспрессию, нацеливание клеток или инфекционность штамма Brighton поксвируса коров. Штамм Brighton поксвируса коров можно модифицировать, как описано в настоящем описании. В вариантах осуществления штамм Brighton поксвируса коров относится к штамму вируса, идентифицированному ATCC (Американская коллекция типовых культур), ссылочный номер ATCC VR-302™, его вариантам или гомологам. В вариантах осуществления штамм Brighton поксвируса коров относится к штамму вируса, идентифицированному таксономически, ссылочный номер 265872, его вариантам или гомологам.

[0148] Термин «штамм Herman поксвируса енотов» используют в соответствии с его общим, обычным значением в вирусологии, и он относится к вирусным штаммам с такими же или похожими названиями и его функциональным фрагментам и гомологам. Термин включает рекомбинантные или встречающиеся в природе формы штамма Herman поксвируса енотов или его варианты, которые сохраняют активность штамма Herman поксвируса енотов (например, в пределах по меньшей мере 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% или 100%). Термин включает рекомбинантные или встречающиеся в природе формы штамма Herman поксвируса енотов или его варианты, геном которых имеет идентичность последовательностей с геномом штамма Herman поксвируса енотов (например, приблизительно 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 99% или 100% идентичности с геномом штамма Herman поксвируса енотов). Штамм Herman поксвируса енотов может относиться к вариантам, имеющим мутированные аминокислотные остатки, которые модулируют (например, повышают или понижают, при сравнении со штаммом Herman поксвируса енотов) активность, экспрессию, нацеливание клеток или инфекционность штамма Herman поксвируса енотов. Штамм Herman поксвируса енотов можно модифицировать, как описано в настоящем описании. В вариантах осуществления штамм Herman поксвируса енотов относится к штамму вируса, идентифицированному ATCC, ссылочный номер ATCC VR-838™, его вариантам или гомологам. В вариантах осуществления штамм Herman поксвируса енотов относится к штамму вируса, кодируемому последовательностью нуклеиновой кислоты со ссылочным номером NC_027213.

[0149] Термин «штамм Utrecht поксвируса кроликов» используют в соответствии с его общим, обычным значением в вирусологии, и он относится к вирусным штаммам с такими же или похожими названиями и его функциональным фрагментам и гомологам. Термин включает рекомбинантные или встречающиеся в природе формы штамма Utrecht поксвируса кроликов или его варианты, которые сохраняют активность штамма Utrecht поксвируса кроликов (например, в пределах по меньшей мере 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% или 100%). Термин включает рекомбинантные или встречающиеся в природе формы штамма Utrecht поксвируса кроликов или его варианты, геном которых имеет идентичность последовательностей с геномом штамма Utrecht поксвируса кроликов (например, приблизительно 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 99% или 100% идентичности с геномом штамма Utrecht поксвируса кроликов). Штамм Utrecht поксвируса кроликов может относиться к вариантам, имеющим мутированные аминокислотные остатки, которые модулируют (например, повышают или понижают, при сравнении со штаммом Utrecht поксвируса кроликов) активность экспрессию, нацеливание клеток или инфекционность штамма Utrecht поксвируса кроликов. Штамм Utrecht поксвируса кроликов можно модифицировать, как описано в настоящем описании. В вариантах осуществления штамм Utrecht поксвируса кроликов относится к штамму вируса, идентифицированному ATCC, ссылочный номер ATCC VR-1591™, его вариантам или гомологам. В вариантах осуществления штамм Utrecht поксвируса кроликов относится к штамму вируса, идентифицированному таксономически, ссылочный номер 45417, его вариантам или гомологам.

[0150] Термин «штамм WR вируса осповакцины» используют в соответствии с его общим, обычным значением в вирусологии, и он относится к вирусным штаммам с такими же или похожими названиями и его функциональным фрагментам и гомологам. Термин включает рекомбинантные или встречающиеся в природе формы штамма WR вируса осповакцины или его варианты, которые сохраняют активность штамма WR вируса осповакцины (например, в пределах по меньшей мере 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% или 100%). Термин включает рекомбинантные или встречающиеся в природе формы штамма WR вируса осповакцины или его варианты, геном которых имеет идентичность последовательностей с геномом штамма WR вируса осповакцины (например, приблизительно 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 99% или 100% идентичности с геномом штамма WR вируса осповакцины). Штамм WR вируса осповакцины может относиться к вариантам, имеющим мутированные аминокислотные остатки, которые модулируют (например, повышают или понижают, при сравнении со штаммом WR вируса осповакцины) активность, экспрессию, нацеливание клеток или инфекционность штамма WR вируса осповакцины. Штамм WR вируса осповакцины можно модифицировать, как описано в настоящем описании. В вариантах осуществления штамм WR вируса осповакцины относится к штамму вируса, идентифицированному ATCC, ссылочный номер ATCC VR-1354™, его вариантам или гомологам. В вариантах осуществления штамм WR вируса осповакцины относится к штамму вируса, идентифицированному таксономически, ссылочный номер 10254, его вариантам или гомологам.

[0151] Термин «штамм IHD вируса осповакцины» используют в соответствии с его общим, обычным значением в вирусологии, и он относится к вирусным штаммам с такими же или похожими названиями и его функциональным фрагментам и гомологам. Термин включает рекомбинантные или встречающиеся в природе формы штамма IHD вируса осповакцины или его варианты, которые сохраняют активность штамма IHD вируса осповакцины (например, в пределах по меньшей мере 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% или 100%). Термин включает рекомбинантные или встречающиеся в природе формы штамма IHD вируса осповакцины или его варианты, геном которых имеет идентичность последовательностей с геномом штамма IHD вируса осповакцины (например, приблизительно 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 99% или 100% идентичности с геномом штамма IHD вируса осповакцины). Штамм IHD вируса осповакцины может относиться к вариантам, имеющим мутированные аминокислотные остатки, которые модулируют (например, повышают или понижают, при сравнении со штаммом IHD вируса осповакцины) активность, экспрессию, нацеливание клеток или инфекционность штамма IHD вируса осповакцины. Штамм IHD вируса осповакцины можно модифицировать, как описано в настоящем описании. В вариантах осуществления штамм IHD вируса осповакцины относится к штамму вируса, идентифицированному ATCC, ссылочный номер ATCC VR-156™, его вариантам или гомологам. В вариантах осуществления штамм IHD вируса осповакцины относится к штамму вируса, идентифицированному таксономически, ссылочный номер 10251, его вариантам или гомологам.

[0152] Термин «штамм Elstree вируса осповакцины» используют в соответствии с его общим, обычным значением в вирусологии, и он относится к вирусным штаммам с такими же или похожими названиями и его функциональным фрагментам и гомологам. Термин включает рекомбинантные или встречающиеся в природе формы штамма Elstree вируса осповакцины или его варианты, которые сохраняют активность штамма Elstree вируса осповакцины (например, в пределах по меньшей мере 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% или 100%). Термин включает рекомбинантные или встречающиеся в природе формы штамма Elstree вируса осповакцины или его варианты, геном которых имеет идентичность последовательностей с геномом штамма Elstree вируса осповакцины (например, приблизительно 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 99% или 100% идентичности с геномом штамма Elstree вируса осповакцины). Штамм Elstree вируса осповакцины может относиться к вариантам, имеющим мутированные аминокислотные остатки, которые модулируют (например, повышают или понижают, при сравнении со штаммом Elstre вируса осповакцины) активность, экспрессию, нацеливание клеток или инфекционность штамма Elstree вируса осповакцины. Штамм Elstree вируса осповакцины можно модифицировать, как описано в настоящем описании. В вариантах осуществления штамм Elstree вируса осповакцины относится к штамму вируса, идентифицированному ATCC, ссылочный номер ATCC VR-1549™, его вариантам или гомологам.

[0153] Термин «штамм CL вируса осповакцины» используют в соответствии с его общим, обычным значением в вирусологии, и он относится к вирусным штаммам с такими же или похожими названиями и его функциональным фрагментам и гомологам. Термин включает рекомбинантные или встречающиеся в природе формы штамма CL вируса осповакцины или его варианты, которые сохраняют активность штамма CL вируса осповакцины (например, в пределах по меньшей мере 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% или 100%). Термин включает рекомбинантные или встречающиеся в природе формы штамма CL вируса осповакцины или его варианты, геном которых имеет идентичность последовательностей с геномом штамма CL вируса осповакцины (например, приблизительно 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 99% или 100% идентичности с геномом штамма CL вируса осповакцины). Штамм CL вируса осповакцины может относиться к вариантам, имеющим мутированные аминокислотные остатки, которые модулируют (например, повышают или понижают, при сравнении со штаммом CL вируса осповакцины) активность, экспрессию, нацеливание клеток или инфекционность штамма CL вируса осповакцины. Штамм CL вируса осповакцины можно модифицировать, как описано в настоящем описании. В вариантах осуществления штамм CL вируса осповакцины относится к штамму вируса, идентифицированному ATCC, ссылочный номер ATCC VR-1774™, его вариантам или гомологам.

[0154] Термин «штамм Lederle-Chorioallantoic вируса осповакцины» используют в соответствии с его общим, обычным значением в вирусологии, и он относится к вирусным штаммам с такими же или похожими названиями и его функциональным фрагментам и гомологам. Термин включает рекомбинантные или встречающиеся в природе формы штамма Lederle-Chorioallantoic вируса осповакцины или его варианты, которые сохраняют активность штамма Lederle-Chorioallantoic вируса осповакцины (например, в пределах по меньшей мере 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% или 100%). Термин включает рекомбинантные или встречающиеся в природе формы штамма Lederle-Chorioallantoic вируса осповакцины или его варианты, геном которых имеет идентичность последовательностей с геномом штамма Lederle-Chorioallantoic вируса осповакцины (например, приблизительно 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 99% или 100% идентичности с геномом штамма Lederle-Chorioallantoic вируса осповакцины). Штамм Lederle-Chorioallantoic вируса осповакцины может относиться к вариантам, имеющим мутированные аминокислотные остатки, которые модулируют (например, повышают или понижают, при сравнении со штаммом Lederle-Chorioallantoic вируса осповакцины) активность, экспрессию, нацеливание клеток или инфекционность штамма Lederle-Chorioallantoic вируса осповакцины. Штамм Lederle-Chorioallantoic вируса осповакцины можно модифицировать, как описано в настоящем описании. В вариантах осуществления штамм Lederle-Chorioallantoic вируса осповакцины относится к штамму вируса, идентифицированному ATCC, ссылочный номер ATCC VR-118™, его вариантам или гомологам.

[0155] Термин «штамм AS вируса осповакцины» используют в соответствии с его общим, обычным значением в вирусологии, и он относится к вирусным штаммам с такими же или похожими названиями и его функциональным фрагментам и гомологам. Термин включает рекомбинантные или встречающиеся в природе формы штамма AS вируса осповакцины или его варианты, которые сохраняют активность штамма AS вируса осповакцины (например, в пределах по меньшей мере 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% или 100%). Термин включает рекомбинантные или встречающиеся в природе формы штамма AS вируса осповакцины или его варианты, геном которых имеет идентичность последовательностей с геномом штамма AS вируса осповакцины (например, приблизительно 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 99% или 100% идентичности с геномом штамма AS вируса осповакцины). Штамм AS вируса осповакцины может относиться к вариантам, имеющим мутированные аминокислотные остатки, которые модулируют (например, повышают или понижают, при сравнении со штаммом AS вируса осповакцины) активность, экспрессию, нацеливание клеток или инфекционность штамма AS вируса осповакцины. Штамм AS вируса осповакцины можно модифицировать, как описано в настоящем описании. В вариантах осуществления штамм AS вируса осповакцины относится к штамму вируса, идентифицированному ATCC, ссылочный номер ATCC VR-2010™, его вариантам или гомологам.

[0156] Термин «штамм NZ2 орф-вируса» используют в соответствии с его общим, обычным значением в вирусологии, и он относится к вирусным штаммам с такими же или похожими названиями и его функциональным фрагментам и гомологам. Термин включает рекомбинантные или встречающиеся в природе формы штамма NZ2 орф-вируса или его варианты, которые сохраняют активность штамма NZ2 орф-вируса (например, в пределах по меньшей мере 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% или 100%). Термин включает рекомбинантные или встречающиеся в природе формы штамма NZ2 орф-вируса или его варианты, геном которых имеет идентичность последовательностей с геномом штамма NZ2 орф-вируса (например, приблизительно 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 99% или 100% идентичности с геномом штамма NZ2 орф-вируса). Штамм NZ2 орф-вируса может относиться к вариантам, имеющим мутированные аминокислотные остатки, которые модулируют (например, повышают или понижают, при сравнении со штаммом NZ2 орф-вируса) активность, экспрессию, нацеливание клеток или инфекционность штамма NZ2 орф-вируса. Штамм NZ2 орф-вируса можно модифицировать, как описано в настоящем описании. В вариантах осуществления штамм NZ2 орф-вируса относится к штамму вируса, идентифицированному ATCC, ссылочный номер ATCC VR-1548™, его вариантам или гомологам. В вариантах осуществления штамм NZ2 орф-вируса относится к штамму вируса, идентифицированному таксономически, ссылочный номер 10259, его вариантам или гомологам.

[0157] Термин «штамм TJS псевдопоксвируса коров» используют в соответствии с его общим, обычным значением в вирусологии, и он относится к вирусным штаммам с такими же или похожими названиями и его функциональным фрагментам и гомологам. Термин включает рекомбинантные или встречающиеся в природе формы штамма TJS псевдопоксвируса коров или его варианты, которые сохраняют активность штамма TJS псевдопоксвируса коров (например, в пределах по меньшей мере 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% или 100%). Термин включает рекомбинантные или встречающиеся в природе формы штамма TJS псевдопоксвируса коров или его варианты, геном которых имеет идентичность последовательностей с геномом штамма TJS псевдопоксвируса коров (например, приблизительно 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 99% или 100% идентичности с геномом штамма TJS псевдопоксвируса коров). Штамм TJS псевдопоксвируса коров может относиться к вариантам, имеющим мутированные аминокислотные остатки, которые модулируют (например, повышают или понижают, при сравнении со штаммом TJS псевдопоксвируса коров) активность, экспрессию, нацеливание клеток или инфекционность штамма TJS псевдопоксвируса коров. Штамм TJS псевдопоксвируса коров можно модифицировать, как описано в настоящем описании. В вариантах осуществления штамм TJS псевдопоксвируса коров относится к штамму вируса, идентифицированному ATCC, ссылочный номер ATCC VR-634™, его вариантам или гомологам.

[0158] В вариантах осуществления штамм Brighton поксвируса коров представляет собой штамм Brighton поксвируса коров ATCC VR-302™. В вариантах осуществления штамм Herman поксвируса енотов представляет собой штамм Herman поксвируса енотов ATCC VR-838™. В вариантах осуществления штамм Utrecht поксвируса кроликов представляет собой штамм Utrecht поксвируса кроликов ATCC VR-1591™. В вариантах осуществления штамм WR вируса осповакцины представляет собой штамм WR вируса осповакцины ATCC VR-1354™. В вариантах осуществления штамм IH3 вируса осповакцины представляет собой штамм IHD вируса осповакцины ATCC VR-156™. В вариантах осуществления штамм Elstree вируса осповакцины представляет собой штамм Elstree вируса осповакцины ATCC VR-1549™. В вариантах осуществления штамм CL вируса осповакцины представляет собой штамм CL вируса осповакцины ATCC VR-1774™. В вариантах осуществления штамм Lederle-Chorioallantoic вируса осповакцины представляет собой штамм Lederle-Chorioallantoic вируса осповакцины ATCC VR-118™. В вариантах осуществления штамм AS вируса осповакцины представляет собой штамм AS вируса осповакцины ATCC VR-2010™. В вариантах осуществления штамм NZ2 орф-вируса представляет собой штамм NZ2 орф-вируса ATCC VR-1548™. В вариантах осуществления штамм TJS псевдопоксвируса коров представляет собой штамм TJS псевдопоксвируса коров ATCC VR-634™. В вариантах осуществления штамм Brighton поксвируса коров относится к штамму вируса, идентифицированному таксономически, ссылочный номер 265872, его вариантам или гомологам.

[0159] В этом раскрытии «содержит», «содержащий», «заключающий в себе» и «имеющий» и тому подобное могут иметь значение, приписываемое им в Патентном законе США, и могут означать «включает», «включающий» и тому подобное. Термин «по существу состоящий из» или «по существу состоит» также имеет значение, указанное в Патентном законе США, и этот термин является неограничивающим, что допускает наличие большего, чем изложено, если основные или новые характеристики того, что говорится, не изменяются при наличии более того, что изложено, но исключает варианты осуществления предшествующего уровня техники.

II. Вирусные композиции

[0160] В одном аспекте изобретение относится к химерный поксвирус, содержащий последовательность нуклеиновой кислоты, имеющую идентичность последовательности, составляющую по меньшей мере 70% с SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 2, при этом последовательность нуклеиновой кислоты включает фрагменты нуклеиновой кислоты по меньшей мере из двух штаммов поксвируса, выбранных из группы, включающей штамм Brighton вируса коровьей оспы, штамм Herman поксвируса енотов, штамм Utrecht поксвируса кроликов, штамм WR вируса осповакцины, штамм IHD вируса осповакцины, штамм Elstree вируса осповакцины, штамм CL вируса осповакцины, штамм Lederle-Chorioallantoic вируса осповакцины, штамм AS вируса осповакцины, штамм NZ2 орф-вируса и штамм TJS псевдопоксвируса коров.

[0161] Химерные поксвирусы, как описано в настоящем описании, могут включать трансгены. В рамках изобретения «трансген» относится к последовательности нуклеиновой кислоты, которая возникает вне данной клетки, организма или вируса. Следовательно, трансген в рамках изобретения не является нативным или не возникает в поксвирусе. Трансген в рамках настоящего изобретения может кодировать белок или может представлять собой некодирующую последовательность нуклеиновой кислоты. Трансгены в рамках настоящего изобретения могут включать противораковые последовательности нуклеиновых кислот (например, связывающую последовательность нуклеиновой кислоты и последовательности нуклеиновых кислот, которые кодируют полипептиды, полезные для лечения рака) или последовательности нуклеиновых кислот, кодирующие определяемый фрагмент. Таким образом, в вариантах осуществления химерный поксвирус, описанный в настоящем описании, содержит одну или более противораковых последовательностей нуклеиновой кислоты или последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую определяемый фрагмент. В вариантах осуществления химерный поксвирус, описанный в настоящем описании, содержит одну или более противораковых последовательностей нуклеиновой кислоты и последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую определяемый фрагмент.

[0162] В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую по меньшей мере 71% с SEQ ID NO: 1. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую по меньшей мере 72% с SEQ ID NO: 1. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую по меньшей мере 73% с SEQ ID NO: 1. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую по меньшей мере 74% с SEQ ID NO: 1. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую по меньшей мере 75% с SEQ ID NO: 1. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую по меньшей мере 76% с SEQ ID NO: 1. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую по меньшей мере 77% с SEQ ID NO: 1. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую по меньшей мере 78% с SEQ ID NO: 1. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую по меньшей мере 79% с SEQ ID NO: 1. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую по меньшей мере 80% с SEQ ID NO: 1.

[0163] В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую по меньшей мере 81% с SEQ ID NO: 1. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую по меньшей мере 82% с SEQ ID NO: 1. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую по меньшей мере 83% с SEQ ID NO: 1. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую по меньшей мере 84% с SEQ ID NO: 1. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую по меньшей мере 85% с SEQ ID NO: 1. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую по меньшей мере 86% с SEQ ID NO: 1. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую по меньшей мере 87% с SEQ ID NO: 1. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую по меньшей мере 88% с SEQ ID NO: 1. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую по меньшей мере 89% с SEQ ID NO: 1. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую по меньшей мере 90% с SEQ ID NO: 1.

[0164] В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую по меньшей мере 91% с SEQ ID NO: 1. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую по меньшей мере 92% с SEQ ID NO: 1. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую по меньшей мере 93% с SEQ ID NO: 1. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую по меньшей мере 94% с SEQ ID NO: 1. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую по меньшей мере 95% с SEQ ID NO: 1. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую по меньшей мере 96% с SEQ ID NO: 1. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую по меньшей мере 97% с SEQ ID NO: 1. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую по меньшей мере 98% с SEQ ID NO: 1. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую по меньшей мере 99% с SEQ ID NO: 1.

[0165] В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую по меньшей мере 71% с SEQ ID NO: 2. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую по меньшей мере 72% с SEQ ID NO: 2. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую по меньшей мере 73% с SEQ ID NO: 2. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую по меньшей мере 74% с SEQ ID NO: 2. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую по меньшей мере 75% с SEQ ID NO: 2. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую по меньшей мере 76% с SEQ ID NO: 2. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую по меньшей мере 77% с SEQ ID NO: 2. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую по меньшей мере 78% с SEQ ID NO: 2. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую по меньшей мере 79% с SEQ ID NO: 2. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую по меньшей мере 80% с SEQ ID NO: 2.

[0166] В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую по меньшей мере 81% с SEQ ID NO: 2. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую по меньшей мере 82% с SEQ ID NO: 2. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую по меньшей мере 83% с SEQ ID NO: 2. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую по меньшей мере 84% с SEQ ID NO: 2. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую по меньшей мере 85% с SEQ ID NO: 2. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую по меньшей мере 86% с SEQ ID NO: 2. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую по меньшей мере 87% с SEQ ID NO: 2. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую по меньшей мере 88% с SEQ ID NO: 2. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую по меньшей мере 89% с SEQ ID NO: 2. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую по меньшей мере 90% с SEQ ID NO: 2.

[0167] В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую по меньшей мере 91% с SEQ ID NO: 2. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую по меньшей мере 92% с SEQ ID NO: 2. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую по меньшей мере 93% с SEQ ID NO: 2. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую по меньшей мере 94% с SEQ ID NO: 2. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую по меньшей мере 95% с SEQ ID NO: 2. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую по меньшей мере 96% с SEQ ID NO: 2. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую по меньшей мере 97% с SEQ ID NO: 2. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую по меньшей мере 98% с SEQ ID NO: 2. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую по меньшей мере 99% с SEQ ID NO: 2.

[0168] В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую 71% с SEQ ID NO: 1. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую 72% с SEQ ID NO: 1. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую 73% с SEQ ID NO: 1. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую 74% с SEQ ID NO: 1. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую 75% с SEQ ID NO: 1. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую 76% с SEQ ID NO: 1. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую 77% с SEQ ID NO: 1. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую 78% с SEQ ID NO: 1. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую 79% с SEQ ID NO: 1. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую 80% с SEQ ID NO: 1.

[0169] В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую 81% с SEQ ID NO: 1. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую 82% с SEQ ID NO: 1. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую 83% с SEQ ID NO: 1. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую 84% с SEQ ID NO: 1. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую 85% с SEQ ID NO: 1. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую 86% с SEQ ID NO: 1. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую 87% с SEQ ID NO: 1. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую 88% с SEQ ID NO: 1. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую 89% с SEQ ID NO: 1. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую 90% с SEQ ID NO: 1.

[0170] В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую 91% с SEQ ID NO: 1. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую 92% с SEQ ID NO: 1. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую 93% с SEQ ID NO: 1. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую 94% с SEQ ID NO: 1. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую 95% с SEQ ID NO: 1. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую 96% с SEQ ID NO: 1. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую 97% с SEQ ID NO: 1. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую 98% с SEQ ID NO: 1. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую 99% с SEQ ID NO: 1. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты представляет собой последовательность SEQ ID NO: 1.

[0171] В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую 71% с SEQ ID NO: 2. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую 72% с SEQ ID NO: 2. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую 73% с SEQ ID NO: 2. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую 74% с SEQ ID NO: 2. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую 75% с SEQ ID NO: 2. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую 76% с SEQ ID NO: 2. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую 77% с SEQ ID NO: 2. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую 78% с SEQ ID NO: 2. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую 79% с SEQ ID NO: 2. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую 80% с SEQ ID NO: 2.

[0172] В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую 81% с SEQ ID NO: 2. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую 82% с SEQ ID NO: 2. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую 83% с SEQ ID NO: 2. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую 84% с SEQ ID NO: 2. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую 85% с SEQ ID NO: 2. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую 86% с SEQ ID NO: 2. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую 87% с SEQ ID NO: 2. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую 88% с SEQ ID NO: 2. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую 89% с SEQ ID NO: 2. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую 90% с SEQ ID NO: 2.

[0173] В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую 91% с SEQ ID NO: 2. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую 92% с SEQ ID NO: 2. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую 93% с SEQ ID NO: 2. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую 94% с SEQ ID NO: 2. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую 95% с SEQ ID NO: 2. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую 96% с SEQ ID NO: 2. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую 97% с SEQ ID NO: 2. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую 98% с SEQ ID NO: 2. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую 99% с SEQ ID NO: 2. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты представляет собой последовательность SEQ ID NO: 1.

[0174] В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую приблизительно 71% с SEQ ID NO: 1. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую приблизительно 72% с SEQ ID NO: 1. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую приблизительно 73% с SEQ ID NO: 1. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую приблизительно 74% с SEQ ID NO: 1. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую приблизительно 75% с SEQ ID NO: 1. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую приблизительно 76% с SEQ ID NO: 1. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую приблизительно 77% с SEQ ID NO: 1. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую приблизительно 78% с SEQ ID NO: 1. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую приблизительно 79% с SEQ ID NO: 1. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую приблизительно 80% с SEQ ID NO: 1.

[0175] В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую приблизительно 81% с SEQ ID NO: 1. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую приблизительно 82% с SEQ ID NO: 1. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую приблизительно 83% с SEQ ID NO: 1. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую приблизительно 84% с SEQ ID NO: 1. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую приблизительно 85% с SEQ ID NO: 1. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую приблизительно 86% с SEQ ID NO: 1. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую приблизительно 87% с SEQ ID NO: 1. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую приблизительно 88% с SEQ ID NO: 1. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую приблизительно 89% с SEQ ID NO: 1. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую приблизительно 90% с SEQ ID NO: 1.

[0176] В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую приблизительно 91% с SEQ ID NO: 1. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую приблизительно 92% с SEQ ID NO: 1. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую приблизительно 93% с SEQ ID NO: 1. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую приблизительно 94% с SEQ ID NO: 1. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую приблизительно 95% с SEQ ID NO: 1. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую приблизительно 96% с SEQ ID NO: 1. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую приблизительно 97% с SEQ ID NO: 1. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую приблизительно 98% с SEQ ID NO: 1. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую приблизительно 99% с SEQ ID NO: 1.

[0177] В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую приблизительно 71% с SEQ ID NO: 2. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую приблизительно 72% с SEQ ID NO: 2. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую приблизительно 73% с SEQ ID NO: 2. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую приблизительно 74% с SEQ ID NO: 2. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую приблизительно 75% с SEQ ID NO: 2. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую приблизительно 76% с SEQ ID NO: 2. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую приблизительно 77% с SEQ ID NO: 2. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую приблизительно 78% с SEQ ID NO: 2. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую приблизительно 79% с SEQ ID NO: 2. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую приблизительно 80% с SEQ ID NO: 2.

[0178] В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую приблизительно 81% с SEQ ID NO: 2. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую приблизительно 82% с SEQ ID NO: 2. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую приблизительно 83% с SEQ ID NO: 2. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую приблизительно 84% с SEQ ID NO: 2. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую приблизительно 85% с SEQ ID NO: 2. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую приблизительно 86% с SEQ ID NO: 2. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую приблизительно 87% с SEQ ID NO: 2. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую приблизительно 88% с SEQ ID NO: 2. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую приблизительно 89% с SEQ ID NO: 2. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую приблизительно 90% с SEQ ID NO: 2.

[0179] В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую приблизительно 91% с SEQ ID NO: 2. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую приблизительно 92% с SEQ ID NO: 2. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую приблизительно 93% с SEQ ID NO: 2. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую приблизительно 94% с SEQ ID NO: 2. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую приблизительно 95% с SEQ ID NO: 2. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую приблизительно 96% с SEQ ID NO: 2. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую приблизительно 97% с SEQ ID NO: 2. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую приблизительно 98% с SEQ ID NO: 2. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую приблизительно 99% с SEQ ID NO: 2.

[0180] Последовательность нуклеиновой кислоты может иметь идентичность последовательностей, составляющую по меньшей мере 70%, и последовательность нуклеиновой кислоты, имеющая по меньшей мере 70% идентичность последовательностей, может быть непрерывной. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую по меньшей мере 70%, и последовательность нуклеиновой кислоты, имеющую по меньшей мере 70% идентичность последовательностей, не является непрерывной последовательностью. «Последовательность, не являющаяся непрерывной» в рамках изобретения, относится к последовательности, включающей один или более фрагментов последовательностей, не имеющих идентичность последовательностей с SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 2. В вариантах осуществления не являющаяся непрерывной последовательность представляет собой последовательность, включающую первый фрагмент последовательности, имеющий по меньшей мере 70% идентичность последовательностей с SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 2, соединенный со вторым фрагментом последовательности, имеющим по меньшей мере 70% идентичность последовательностей с SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 2, через фрагмент последовательности, не имеющий идентичность последовательностей с SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 2. В вариантах осуществления не являющаяся непрерывной последовательность представляет собой последовательность, включающую множество фрагментов последовательностей, имеющих по меньшей мере 70% идентичность последовательностей с SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 2, соединенных через множество фрагментов последовательностей, не имеющих идентичность последовательностей с SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 2. В вариантах осуществления химерный поксвирус дополнительно содержит нуклеотидную вставку, делецию или мутацию.

[0181] В вариантах осуществления фрагменты нуклеиновой кислоты происходят из штамма Brighton вируса коровьей оспы, штамма Herman поксвируса енотов, штамма Utrecht поксвируса кроликов, штамма WR вируса осповакцины, штамма IHD вируса осповакцины, штамма Elstree вируса осповакцины, штамма CL вируса осповакцины, штамма Lederle-Chorioallantoic вируса осповакцины и штамма AS вируса осповакцины.

[0182] В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты содержит фрагменты нуклеиновой кислоты из штамма Brighton поксвируса коров и штамма Herman поксвируса енотов. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты содержит фрагменты нуклеиновой кислоты из штамма Brighton поксвируса коров и штамма Utrecht поксвируса кроликов. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты содержит фрагменты нуклеиновой кислоты из штамма Brighton поксвируса коров и штамма WR вируса осповакцины. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты содержит фрагменты нуклеиновой кислоты из штамма Brighton поксвируса коров и штамма IHD вируса осповакцины. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты содержит фрагменты нуклеиновой кислоты из штамма Brighton поксвируса коров и штамма Elstree вируса осповакцины. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты содержит фрагменты нуклеиновой кислоты из штамма Brighton поксвируса коров и штамма CL вируса осповакцины. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты содержит фрагменты нуклеиновой кислоты из штамма Brighton поксвируса коров и штамма Lederle-Chorioallantoic вируса осповакцины. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты содержит фрагменты нуклеиновой кислоты из штамма Brighton поксвируса коров и штамма AS вируса осповакцины. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты содержит фрагменты нуклеиновой кислоты из штамма Brighton поксвируса коров и штамма NZ2 орф-вируса. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты содержит фрагменты нуклеиновой кислоты из штамма Brighton поксвируса коров и штамма TJS псевдопоксвируса коров.

[0183] В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты содержит фрагменты нуклеиновой кислоты из штамма Utrecht поксвируса кроликов и штамма WR вируса осповакцины. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты содержит фрагменты нуклеиновой кислоты из штамма Utrecht поксвируса кроликов и штамма IHD вируса осповакцины. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты содержит фрагменты нуклеиновой кислоты из штамма Utrecht поксвируса кроликов и штамма Elstree вируса осповакцины. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты содержит фрагменты нуклеиновой кислоты из штамма Utrecht поксвируса кроликов и штамма CL вируса осповакцины. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты содержит фрагменты нуклеиновой кислоты из штамма Utrecht поксвируса кроликов и штамма Lederle-Chorioallantoic вируса осповакцины. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты содержит фрагменты нуклеиновой кислоты из штамма Utrecht поксвируса кроликов и штамма AS вируса осповакцины. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты содержит фрагменты нуклеиновой кислоты из штамма Utrecht поксвируса кроликов и штамма NZ2 орф-вируса. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты содержит фрагменты нуклеиновой кислоты из штамма Utrecht поксвируса кроликов и штамма TJS псевдопоксвируса коров.

[0184] В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты содержит фрагменты нуклеиновой кислоты из штамма WR вируса осповакцины и штамма IHD вируса осповакцины. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты содержит фрагменты нуклеиновой кислоты из штамма WR вируса осповакцины и штамма Elstree вируса осповакцины. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты содержит фрагменты нуклеиновой кислоты из штамма WR вируса осповакцины и штамма CL вируса осповакцины. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты содержит фрагменты нуклеиновой кислоты из штамма WR вируса осповакцины и штамма Lederle-Chorioallantoic вируса осповакцины. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты содержит фрагменты нуклеиновой кислоты из штамма WR вируса осповакцины и штамма AS вируса осповакцины. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты содержит фрагменты нуклеиновой кислоты из штамма WR вируса осповакцины и штамма NZ2 орф-вируса. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты содержит фрагменты нуклеиновой кислоты из штамма WR вируса осповакцины и штамма TJS псевдопоксвируса коров.

[0185] В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты содержит фрагменты нуклеиновой кислоты из штамма IHD вируса осповакцины и штамма Elstree вируса осповакцины. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты содержит фрагменты нуклеиновой кислоты из штамма IHD вируса осповакцины и штамма CL вируса осповакцины. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты содержит фрагменты нуклеиновой кислоты из штамма IHD вируса осповакцины и штамма Lederle-Chorioallantoic вируса осповакцины. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты содержит фрагменты нуклеиновой кислоты из штамма IHD вируса осповакцины и штамма AS вируса осповакцины. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты содержит фрагменты нуклеиновой кислоты из штамма IHD вируса осповакцины и штамма NZ2 орф-вируса. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты содержит фрагменты нуклеиновой кислоты из штамма IHD вируса осповакцины и штамма TJS псевдопоксвируса коров.

[0186] В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты содержит фрагменты нуклеиновой кислоты из штамма Elstree вируса осповакцины и штамма CL вируса осповакцины. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты содержит фрагменты нуклеиновой кислоты из штамма Elstree вируса осповакцины и штамма Lederle-Chorioallantoic вируса осповакцины. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты содержит фрагменты нуклеиновой кислоты из штамма Elstree вируса осповакцины и штамма AS вируса осповакцины. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты содержит фрагменты нуклеиновой кислоты из штамма Elstree вируса осповакцины и штамма NZ2 орф-вируса. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты содержит фрагменты нуклеиновой кислоты из штамма Elstree вируса осповакцины и штамма TJS псевдопоксвируса коров.

[0187] В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты содержит фрагменты нуклеиновой кислоты из штамма CL вируса осповакцины и штамма Lederle-Chorioallantoic вируса осповакцины. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты содержит фрагменты нуклеиновой кислоты из штамма CL вируса осповакцины и штамма AS вируса осповакцины. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты содержит фрагменты нуклеиновой кислоты из штамма CL вируса осповакцины и штамма NZ2 орф-вируса. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты содержит фрагменты нуклеиновой кислоты из штамма CL вируса осповакцины и штамма TJS псевдопоксвируса коров.

[0188] В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты содержит фрагменты нуклеиновой кислоты из штамма Lederle-Chorioallantoic вируса осповакцины и штамма AS вируса осповакцины. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты содержит фрагменты нуклеиновой кислоты из штамма Lederle-Chorioallantoic вируса осповакцины и штамма NZ2 орф-вируса. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты содержит фрагменты нуклеиновой кислоты из штамма Lederle-Chorioallantoic вируса осповакцины и штамма TJS псевдопоксвируса коров.

[0189] В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты содержит фрагменты нуклеиновой кислоты из штамма AS вируса осповакцины и штамма NZ2 орф-вируса. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты содержит фрагменты нуклеиновой кислоты из штамма AS вируса осповакцины и штамма TJS псевдопоксвируса коров. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты содержит фрагменты нуклеиновой кислоты из штамма NZ2 орф-вируса и штамма TJS псевдопоксвируса коров.

[0190] В вариантах осуществления химерный поксвирус содержит последовательность нуклеиновой кислоты, имеющую идентичность последовательности, составляющую по меньшей мере 70% с SEQ ID NO: 1, и при этом последовательность нуклеиновой кислоты содержит фрагменты нуклеиновой кислоты из штамма Brighton вируса коровьей оспы, штамма Herman поксвируса енотов, штамма Utrecht поксвируса кроликов, штамма WR вируса осповакцины, штамма IHD вируса осповакцины, штамма Elstree вируса осповакцины, штамма CL вируса осповакцины, штамма Lederle-Chorioallantoic вируса осповакцины или штамма AS вируса осповакцины. В вариантах осуществления химерный поксвирус содержит последовательность нуклеиновой кислоты, имеющую идентичность последовательности, составляющую по меньшей мере 70% с SEQ ID NO: 1, и при этом последовательность нуклеиновой кислоты содержит фрагменты нуклеиновой кислоты из штамма Brighton вируса коровьей оспы, штамма Herman поксвируса енотов, штамма Utrecht поксвируса кроликов, штамма WR вируса осповакцины, штамма IHD вируса осповакцины, штамма Elstree вируса осповакцины, штамма CL вируса осповакцины, штамма Lederle-Chorioallantoic вируса осповакцины и штамма AS вируса осповакцины.

[0191] В вариантах осуществления химерный поксвирус содержит последовательность нуклеиновой кислоты, имеющую идентичность последовательности, составляющую по меньшей мере 70% с SEQ ID NO: 1, и при этом последовательность нуклеиновой кислоты содержит фрагменты нуклеиновой кислоты из штамма Brighton поксвируса коров. В вариантах осуществления химерный поксвирус содержит последовательность нуклеиновой кислоты, имеющую идентичность последовательности, составляющую по меньшей мере 70% с SEQ ID NO: 1, и при этом последовательность нуклеиновой кислоты содержит фрагменты нуклеиновой кислоты из штамма Herman поксвируса енотов. В вариантах осуществления химерный поксвирус содержит последовательность нуклеиновой кислоты, имеющую идентичность последовательности, составляющую по меньшей мере 70% с SEQ ID NO: 1, и при этом последовательность нуклеиновой кислоты содержит фрагменты нуклеиновой кислоты из штамма Utrecht поксвируса кроликов. В вариантах осуществления химерный поксвирус содержит последовательность нуклеиновой кислоты, имеющую идентичность последовательности, составляющую по меньшей мере 70% с SEQ ID NO: 1, и при этом последовательность нуклеиновой кислоты содержит фрагменты нуклеиновой кислоты из штамма WR вируса осповакцины. В вариантах осуществления химерный поксвирус содержит последовательность нуклеиновой кислоты, имеющую идентичность последовательности, составляющую по меньшей мере 70% с SEQ ID NO: 1, и при этом последовательность нуклеиновой кислоты содержит фрагменты нуклеиновой кислоты из штамма IHD вируса осповакцины. В вариантах осуществления химерный поксвирус содержит последовательность нуклеиновой кислоты, имеющую идентичность последовательности, составляющую по меньшей мере 70% с SEQ ID NO: 1, и при этом последовательность нуклеиновой кислоты содержит фрагменты нуклеиновой кислоты из штамма Elstree вируса осповакцины. В вариантах осуществления химерный поксвирус содержит последовательность нуклеиновой кислоты, имеющую идентичность последовательности, составляющую по меньшей мере 70% с SEQ ID NO: 1, и при этом последовательность нуклеиновой кислоты содержит фрагменты нуклеиновой кислоты из штамма CL вируса осповакцины. В вариантах осуществления химерный поксвирус содержит последовательность нуклеиновой кислоты, имеющую идентичность последовательности, составляющую по меньшей мере 70% с SEQ ID NO: 1, и при этом последовательность нуклеиновой кислоты содержит фрагменты нуклеиновой кислоты из штамма Lederle-Chorioallantoic вируса осповакцины или штамм AS вируса осповакцины.

[0192] В вариантах осуществления химерный поксвирус содержит последовательность нуклеиновой кислоты, имеющую идентичность последовательности, составляющую по меньшей мере 70% с SEQ ID NO: 2, и при этом последовательность нуклеиновой кислоты содержит фрагменты нуклеиновой кислоты из штамма NZ2 орф-вируса и штамма TJS псевдопоксвируса коров. В вариантах осуществления химерный поксвирус содержит последовательность нуклеиновой кислоты, имеющую идентичность последовательности, составляющую по меньшей мере 70% с SEQ ID NO: 2, и при этом последовательность нуклеиновой кислоты содержит фрагменты нуклеиновой кислоты из штамма NZ2 орф-вируса. В вариантах осуществления химерный поксвирус содержит последовательность нуклеиновой кислоты, имеющую идентичность последовательности, составляющую по меньшей мере 70% с SEQ ID NO: 2, и при этом последовательность нуклеиновой кислоты содержит фрагменты нуклеиновой кислоты из штамма TJS псевдопоксвируса коров.

[0193] В вариантах осуществления химерный поксвирус содержит последовательность нуклеиновой кислоты, имеющую идентичность последовательности, составляющую по меньшей мере 80% с SEQ ID NO: 1, и при этом последовательность нуклеиновой кислоты содержит фрагменты нуклеиновой кислоты из штамма Brighton вируса коровьей оспы, штамма Herman поксвируса енотов, штамма Utrecht поксвируса кроликов, штамма WR вируса осповакцины, штамма IHD вируса осповакцины, штамма Elstree вируса осповакцины, штамма CL вируса осповакцины, штамма Lederle-Chorioallantoic вируса осповакцины или штамма AS вируса осповакцины. В вариантах осуществления химерный поксвирус содержит последовательность нуклеиновой кислоты, имеющую идентичность последовательности, составляющую по меньшей мере 80% с SEQ ID NO: 1, и при этом последовательность нуклеиновой кислоты содержит фрагменты нуклеиновой кислоты из штамма Brighton вируса коровьей оспы, штамма Herman поксвируса енотов, штамма Utrecht поксвируса кроликов, штамма WR вируса осповакцины, штамма IHD вируса осповакцины, штамма Elstree вируса осповакцины, штамма CL вируса осповакцины, штамма Lederle-Chorioallantoic вируса осповакцины и штамма AS вируса осповакцины.

[0194] В вариантах осуществления химерный поксвирус содержит последовательность нуклеиновой кислоты, имеющую идентичность последовательности, составляющую по меньшей мере 80% с SEQ ID NO: 1, и при этом последовательность нуклеиновой кислоты содержит фрагменты нуклеиновой кислоты из штамма Brighton поксвируса коров. В вариантах осуществления химерный поксвирус содержит последовательность нуклеиновой кислоты, имеющую идентичность последовательности, составляющую по меньшей мере 80% с SEQ ID NO: 1, и при этом последовательность нуклеиновой кислоты содержит фрагменты нуклеиновой кислоты из штамма Herman поксвируса енотов. В вариантах осуществления химерный поксвирус содержит последовательность нуклеиновой кислоты, имеющую идентичность последовательности, составляющую по меньшей мере 80% с SEQ ID NO: 1, и при этом последовательность нуклеиновой кислоты содержит фрагменты нуклеиновой кислоты из штамма Utrecht поксвируса кроликов. В вариантах осуществления химерный поксвирус содержит последовательность нуклеиновой кислоты, имеющую идентичность последовательности, составляющую по меньшей мере 80% с SEQ ID NO: 1, и при этом последовательность нуклеиновой кислоты содержит фрагменты нуклеиновой кислоты из штамма WR вируса осповакцины. В вариантах осуществления химерный поксвирус содержит последовательность нуклеиновой кислоты, имеющую идентичность последовательности, составляющую по меньшей мере 80% с SEQ ID NO: 1, и при этом последовательность нуклеиновой кислоты содержит фрагменты нуклеиновой кислоты из штамма IHD вируса осповакцины. В вариантах осуществления химерный поксвирус содержит последовательность нуклеиновой кислоты, имеющую идентичность последовательности, составляющую по меньшей мере 80% с SEQ ID NO: 1, и при этом последовательность нуклеиновой кислоты содержит фрагменты нуклеиновой кислоты из штамма Elstree вируса осповакцины. В вариантах осуществления химерный поксвирус содержит последовательность нуклеиновой кислоты, имеющую идентичность последовательности, составляющую по меньшей мере 80% с SEQ ID NO: 1, и при этом последовательность нуклеиновой кислоты содержит фрагменты нуклеиновой кислоты из штамма CL вируса осповакцины. В вариантах осуществления химерный поксвирус содержит последовательность нуклеиновой кислоты, имеющую идентичность последовательности, составляющую по меньшей мере 80% с SEQ ID NO: 1, и при этом последовательность нуклеиновой кислоты содержит фрагменты нуклеиновой кислоты из штамма Lederle-Chorioallantoic вируса осповакцины или штамм AS вируса осповакцины.

[0195] В вариантах осуществления химерный поксвирус содержит последовательность нуклеиновой кислоты, имеющую идентичность последовательности, составляющую по меньшей мере 80% с SEQ ID NO: 2, и при этом последовательность нуклеиновой кислоты содержит фрагменты нуклеиновой кислоты из штамма NZ2 орф-вируса и штамма TJS псевдопоксвируса коров. В вариантах осуществления химерный поксвирус содержит последовательность нуклеиновой кислоты, имеющую идентичность последовательности, составляющую по меньшей мере 80% с SEQ ID NO: 2, и при этом последовательность нуклеиновой кислоты содержит фрагменты нуклеиновой кислоты из штамма NZ2 орф-вируса. В вариантах осуществления химерный поксвирус содержит последовательность нуклеиновой кислоты, имеющую идентичность последовательности, составляющую по меньшей мере 80% с SEQ ID NO: 2, и при этом последовательность нуклеиновой кислоты содержит фрагменты нуклеиновой кислоты из штамма TJS псевдопоксвируса коров.

[0196] В вариантах осуществления химерный поксвирус содержит последовательность нуклеиновой кислоты, имеющую идентичность последовательности, составляющую по меньшей мере 90% с SEQ ID NO: 1, и при этом последовательность нуклеиновой кислоты содержит фрагменты нуклеиновой кислоты из штамма Brighton вируса коровьей оспы, штамма Herman поксвируса енотов, штамма Utrecht поксвируса кроликов, штамма WR вируса осповакцины, штамма IHD вируса осповакцины, штамма Elstree вируса осповакцины, штамма CL вируса осповакцины, штамма Lederle-Chorioallantoic вируса осповакцины или штамма AS вируса осповакцины. В вариантах осуществления химерный поксвирус содержит последовательность нуклеиновой кислоты, имеющую идентичность последовательности, составляющую по меньшей мере 90% с SEQ ID NO: 1, и при этом последовательность нуклеиновой кислоты содержит фрагменты нуклеиновой кислоты из штамма Brighton вируса коровьей оспы, штамма Herman поксвируса енотов, штамма Utrecht поксвируса кроликов, штамма WR вируса осповакцины, штамма IHD вируса осповакцины, штамма Elstree вируса осповакцины, штамма CL вируса осповакцины, штамма Lederle-Chorioallantoic вируса осповакцины и штамма AS вируса осповакцины.

[0197] В вариантах осуществления химерный поксвирус содержит последовательность нуклеиновой кислоты, имеющую идентичность последовательности, составляющую по меньшей мере 90% с SEQ ID NO: 1, и при этом последовательность нуклеиновой кислоты содержит фрагменты нуклеиновой кислоты из штамма Brighton поксвируса коров. В вариантах осуществления химерный поксвирус содержит последовательность нуклеиновой кислоты, имеющую идентичность последовательности, составляющую по меньшей мере 90% с SEQ ID NO: 1, и при этом последовательность нуклеиновой кислоты содержит фрагменты нуклеиновой кислоты из штамма Herman поксвируса енотов. В вариантах осуществления химерный поксвирус содержит последовательность нуклеиновой кислоты, имеющую идентичность последовательности, составляющую по меньшей мере 90% с SEQ ID NO: 1, и при этом последовательность нуклеиновой кислоты содержит фрагменты нуклеиновой кислоты из штамма Utrecht поксвируса кроликов. В вариантах осуществления химерный поксвирус содержит последовательность нуклеиновой кислоты, имеющую идентичность последовательности, составляющую по меньшей мере 90% с SEQ ID NO: 1, и при этом последовательность нуклеиновой кислоты содержит фрагменты нуклеиновой кислоты из штамма WR вируса осповакцины. В вариантах осуществления химерный поксвирус содержит последовательность нуклеиновой кислоты, имеющую идентичность последовательности, составляющую по меньшей мере 90% с SEQ ID NO: 1, и при этом последовательность нуклеиновой кислоты содержит фрагменты нуклеиновой кислоты из штамма IHD вируса осповакцины. В вариантах осуществления химерный поксвирус содержит последовательность нуклеиновой кислоты, имеющую идентичность последовательности, составляющую по меньшей мере 90% с SEQ ID NO: 1, и при этом последовательность нуклеиновой кислоты содержит фрагменты нуклеиновой кислоты из штамма Elstree вируса осповакцины. В вариантах осуществления химерный поксвирус содержит последовательность нуклеиновой кислоты, имеющую идентичность последовательности, составляющую по меньшей мере 90% с SEQ ID NO: 1, и при этом последовательность нуклеиновой кислоты содержит фрагменты нуклеиновой кислоты из штамма CL вируса осповакцины. В вариантах осуществления химерный поксвирус содержит последовательность нуклеиновой кислоты, имеющую идентичность последовательности, составляющую по меньшей мере 90% с SEQ ID NO: 1, и при этом последовательность нуклеиновой кислоты содержит фрагменты нуклеиновой кислоты из штамма Lederle-Chorioallantoic вируса осповакцины или штамм AS вируса осповакцины.

[0198] В вариантах осуществления химерный поксвирус содержит последовательность нуклеиновой кислоты, имеющую идентичность последовательности, составляющую по меньшей мере 90% с SEQ ID NO: 2, и при этом последовательность нуклеиновой кислоты содержит фрагменты нуклеиновой кислоты из штамма NZ2 орф-вируса и штамма TJS псевдопоксвируса коров. В вариантах осуществления химерный поксвирус содержит последовательность нуклеиновой кислоты, имеющую идентичность последовательности, составляющую по меньшей мере 90% с SEQ ID NO: 2, и при этом последовательность нуклеиновой кислоты содержит фрагменты нуклеиновой кислоты из штамма NZ2 орф-вируса. В вариантах осуществления химерный поксвирус содержит последовательность нуклеиновой кислоты, имеющую идентичность последовательности, составляющую по меньшей мере 90% с SEQ ID NO: 2, и при этом последовательность нуклеиновой кислоты содержит фрагменты нуклеиновой кислоты из штамма TJS псевдопоксвируса коров.

[0199] В вариантах осуществления химерный поксвирус содержит последовательность нуклеиновой кислоты, имеющую идентичность последовательности, составляющую по меньшей мере 95% с SEQ ID NO: 1, и при этом последовательность нуклеиновой кислоты содержит фрагменты нуклеиновой кислоты из штамма Brighton вируса коровьей оспы, штамма Herman поксвируса енотов, штамма Utrecht поксвируса кроликов, штамма WR вируса осповакцины, штамма IHD вируса осповакцины, штамма Elstree вируса осповакцины, штамма CL вируса осповакцины, штамма Lederle-Chorioallantoic вируса осповакцины или штамма AS вируса осповакцины. В вариантах осуществления химерный поксвирус содержит последовательность нуклеиновой кислоты, имеющую идентичность последовательности, составляющую по меньшей мере 95% с SEQ ID NO: 1, и при этом последовательность нуклеиновой кислоты содержит фрагменты нуклеиновой кислоты из штамма Brighton вируса коровьей оспы, штамма Herman поксвируса енотов, штамма Utrecht поксвируса кроликов, штамма WR вируса осповакцины, штамма IHD вируса осповакцины, штамма Elstree вируса осповакцины, штамма CL вируса осповакцины, штамма Lederle-Chorioallantoic вируса осповакцины и штамма AS вируса осповакцины.

[0200] В вариантах осуществления химерный поксвирус содержит последовательность нуклеиновой кислоты, имеющую идентичность последовательности, составляющую по меньшей мере 95% с SEQ ID NO: 1, и при этом последовательность нуклеиновой кислоты содержит фрагменты нуклеиновой кислоты из штамма Brighton поксвируса коров. В вариантах осуществления химерный поксвирус содержит последовательность нуклеиновой кислоты, имеющую идентичность последовательности, составляющую по меньшей мере 95% с SEQ ID NO: 1, и при этом последовательность нуклеиновой кислоты содержит фрагменты нуклеиновой кислоты из штамма Herman поксвируса енотов. В вариантах осуществления химерный поксвирус содержит последовательность нуклеиновой кислоты, имеющую идентичность последовательности, составляющую по меньшей мере 95% с SEQ ID NO: 1, и при этом последовательность нуклеиновой кислоты содержит фрагменты нуклеиновой кислоты из штамма Utrecht поксвируса кроликов. В вариантах осуществления химерный поксвирус содержит последовательность нуклеиновой кислоты, имеющую идентичность последовательности, составляющую по меньшей мере 95% с SEQ ID NO: 1, и при этом последовательность нуклеиновой кислоты содержит фрагменты нуклеиновой кислоты из штамма WR вируса осповакцины. В вариантах осуществления химерный поксвирус содержит последовательность нуклеиновой кислоты, имеющую идентичность последовательности, составляющую по меньшей мере 95% с SEQ ID NO: 1, и при этом последовательность нуклеиновой кислоты содержит фрагменты нуклеиновой кислоты из штамма IHD вируса осповакцины. В вариантах осуществления химерный поксвирус содержит последовательность нуклеиновой кислоты, имеющую идентичность последовательности, составляющую по меньшей мере 95% с SEQ ID NO: 1, и при этом последовательность нуклеиновой кислоты содержит фрагменты нуклеиновой кислоты из штамма Elstree вируса осповакцины. В вариантах осуществления химерный поксвирус содержит последовательность нуклеиновой кислоты, имеющую идентичность последовательности, составляющую по меньшей мере 95% с SEQ ID NO: 1, и при этом последовательность нуклеиновой кислоты содержит фрагменты нуклеиновой кислоты из штамма CL вируса осповакцины. В вариантах осуществления химерный поксвирус содержит последовательность нуклеиновой кислоты, имеющую идентичность последовательности, составляющую по меньшей мере 95% с SEQ ID NO: 1, и при этом последовательность нуклеиновой кислоты содержит фрагменты нуклеиновой кислоты из штамма Lederle-Chorioallantoic вируса осповакцины или штамм AS вируса осповакцины.

[0201] В вариантах осуществления химерный поксвирус содержит последовательность нуклеиновой кислоты, имеющую идентичность последовательности, составляющую по меньшей мере 95% с SEQ ID NO: 2, и при этом последовательность нуклеиновой кислоты содержит фрагменты нуклеиновой кислоты из штамма NZ2 орф-вируса и штамма TJS псевдопоксвируса коров. В вариантах осуществления химерный поксвирус содержит последовательность нуклеиновой кислоты, имеющую идентичность последовательности, составляющую по меньшей мере 95% с SEQ ID NO: 2, и при этом последовательность нуклеиновой кислоты содержит фрагменты нуклеиновой кислоты из штамма NZ2 орф-вируса. В вариантах осуществления химерный поксвирус содержит последовательность нуклеиновой кислоты, имеющую идентичность последовательности, составляющую по меньшей мере 95% с SEQ ID NO: 2, и при этом последовательность нуклеиновой кислоты содержит фрагменты нуклеиновой кислоты из штамма TJS псевдопоксвируса коров.

[0202] В вариантах осуществления химерный поксвирус содержит последовательность нуклеиновой кислоты, имеющую идентичность последовательности, составляющую по меньшей мере 98% с SEQ ID NO: 1, и при этом последовательность нуклеиновой кислоты содержит фрагменты нуклеиновой кислоты из штамма Brighton вируса коровьей оспы, штамма Herman поксвируса енотов, штамма Utrecht поксвируса кроликов, штамма WR вируса осповакцины, штамма IHD вируса осповакцины, штамма Elstree вируса осповакцины, штамма CL вируса осповакцины, штамма Lederle-Chorioallantoic вируса осповакцины или штамма AS вируса осповакцины. В вариантах осуществления химерный поксвирус содержит последовательность нуклеиновой кислоты, имеющую идентичность последовательности, составляющую по меньшей мере 98% с SEQ ID NO: 1, и при этом последовательность нуклеиновой кислоты содержит фрагменты нуклеиновой кислоты из штамма Brighton вируса коровьей оспы, штамма Herman поксвируса енотов, штамма Utrecht поксвируса кроликов, штамма WR вируса осповакцины, штамма IHD вируса осповакцины, штамма Elstree вируса осповакцины, штамма CL вируса осповакцины, штамма Lederle-Chorioallantoic вируса осповакцины и штамма AS вируса осповакцины.

[0203] В вариантах осуществления химерный поксвирус содержит последовательность нуклеиновой кислоты, имеющую идентичность последовательности, составляющую по меньшей мере 98% с SEQ ID NO: 1, и при этом последовательность нуклеиновой кислоты содержит фрагменты нуклеиновой кислоты из штамма Brighton поксвируса коров. В вариантах осуществления химерный поксвирус содержит последовательность нуклеиновой кислоты, имеющую идентичность последовательности, составляющую по меньшей мере 98% с SEQ ID NO: 1, и при этом последовательность нуклеиновой кислоты содержит фрагменты нуклеиновой кислоты из штамма Herman поксвируса енотов. В вариантах осуществления химерный поксвирус содержит последовательность нуклеиновой кислоты, имеющую идентичность последовательности, составляющую по меньшей мере 98% с SEQ ID NO: 1, и при этом последовательность нуклеиновой кислоты содержит фрагменты нуклеиновой кислоты из штамма Utrecht поксвируса кроликов. В вариантах осуществления химерный поксвирус содержит последовательность нуклеиновой кислоты, имеющую идентичность последовательности, составляющую по меньшей мере 98% с SEQ ID NO: 1, и при этом последовательность нуклеиновой кислоты содержит фрагменты нуклеиновой кислоты из штамма WR вируса осповакцины. В вариантах осуществления химерный поксвирус содержит последовательность нуклеиновой кислоты, имеющую идентичность последовательности, составляющую по меньшей мере 98% с SEQ ID NO: 1, и при этом последовательность нуклеиновой кислоты содержит фрагменты нуклеиновой кислоты из штамма IHD вируса осповакцины. В вариантах осуществления химерный поксвирус содержит последовательность нуклеиновой кислоты, имеющую идентичность последовательности, составляющую по меньшей мере 98% с SEQ ID NO: 1, и при этом последовательность нуклеиновой кислоты содержит фрагменты нуклеиновой кислоты из штамма Elstree вируса осповакцины. В вариантах осуществления химерный поксвирус содержит последовательность нуклеиновой кислоты, имеющую идентичность последовательности, составляющую по меньшей мере 98% с SEQ ID NO: 1, и при этом последовательность нуклеиновой кислоты содержит фрагменты нуклеиновой кислоты из штамма CL вируса осповакцины. В вариантах осуществления химерный поксвирус содержит последовательность нуклеиновой кислоты, имеющую идентичность последовательности, составляющую по меньшей мере 98% с SEQ ID NO: 1, и при этом последовательность нуклеиновой кислоты содержит фрагменты нуклеиновой кислоты из штамма Lederle-Chorioallantoic вируса осповакцины или штамм AS вируса осповакцины.

[0204] В вариантах осуществления химерный поксвирус содержит последовательность нуклеиновой кислоты, имеющую идентичность последовательности, составляющую по меньшей мере 98% с SEQ ID NO: 2, и при этом последовательность нуклеиновой кислоты содержит фрагменты нуклеиновой кислоты из штамма NZ2 орф-вируса и штамма TJS псевдопоксвируса коров. В вариантах осуществления химерный поксвирус содержит последовательность нуклеиновой кислоты, имеющую идентичность последовательности, составляющую по меньшей мере 98% с SEQ ID NO: 2, и при этом последовательность нуклеиновой кислоты содержит фрагменты нуклеиновой кислоты из штамма NZ2 орф-вируса. В вариантах осуществления химерный поксвирус содержит последовательность нуклеиновой кислоты, имеющую идентичность последовательности, составляющую по меньшей мере 98% с SEQ ID NO: 2, и при этом последовательность нуклеиновой кислоты содержит фрагменты нуклеиновой кислоты из штамма TJS псевдопоксвируса коров.

[0205] В вариантах осуществления химерный поксвирус представляет собой онколитический вирус. Онколитический вирус в рамках изобретения представляет собой вирус, способный выделять и уничтожать раковые клетки. В вариантах осуществления онколитический вирус выделяет клетки рака легкого. В вариантах осуществления онколитический вирус выделяет клетки рака яичников. В вариантах осуществления онколитический вирус выделяет клетки рака поджелудочной железы. В вариантах осуществления онколитический вирус предпочтительно выделяет раковые клетки относительно нераковых клеток.

[0206] В вариантах осуществления миРНК-связывающая последовательность образует часть гена ДНК-полимеразы химерного поксвируса. В вариантах осуществления поксвирус включает миРНК-связывающую последовательность. В вариантах осуществления поксвирус включает множество миРНК-связывающих последовательностей. В вариантах осуществления множество миРНК-связывающих последовательностей независимо отличаются. В вариантах осуществления множество миРНК-связывающих последовательностей являются одинаковыми. В вариантах осуществления миРНК-связывающая последовательность составляет приблизительно 22 нуклеотида в длину. В вариантах осуществления миРНК-связывающая последовательность составляет по меньшей мере 22 нуклеотида в длину. В вариантах осуществления миРНК-связывающая последовательность составляет 22 нуклеотида в длину. В вариантах осуществления миРНК-связывающая последовательность составляет приблизительно 22 нуклеотида в длину. В вариантах осуществления каждая из множества миРНК-связывающих последовательностей составляет по меньшей мере нуклеотида в длину. В вариантах осуществления каждая из множества миРНК-связывающих последовательностей составляет приблизительно 22 нуклеотида в длину. В вариантах осуществления каждая из множества миРНК-связывающих последовательностей составляет 22 нуклеотида в длину.

[0207] В одном аспекте изобретение относится ка выделенная нуклеиновая кислота, кодирующая химерный поксвирус, который описан в настоящем описании. В вариантах осуществления выделенная нуклеиновая кислота представляет собой SEQ ID NO: 1. В вариантах осуществления выделенная нуклеиновая кислота представляет собой SEQ ID NO: 2.

III. Вирусные композиции, содержащие трансгены

[0208] Химерные поксвирусы в рамках настоящего изобретения, включая его варианты осуществления, могут содержать трансгены. Трансгены, включенные в химерный поксвирус в рамках изобретения, могут повышать онколитическую активность химерного поксвируса по сравнению с химерным поксвирусом с отсутствующим указанным трансгеном. Трансгены могут, кроме того, увеличивать способность химерного поксвируса дифференцированно экспрессироваться/реплицироваться в раковых клетках по сравнению со здоровыми (нераковыми) клетками. Если химерный поксвирус включает трансгены, нуклеиновая кислота химерного поксвируса содержит противораковую последовательность нуклеиновой кислоты, связывающую последовательность нуклеиновой кислоты, последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую определяемый фрагмент, или любую их комбинацию. Таким образом, в одном аспекте изобретение относится к химерный поксвирус, содержащий последовательность нуклеиновой кислоты, имеющую идентичность последовательности, составляющую по меньшей мере 70% с SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 2, при этом последовательность нуклеиновой кислоты содержит: (i) фрагменты нуклеиновой кислоты по меньшей мере из двух штаммов поксвируса, выбранных из группы, состоящей из штамма Brighton вируса коровьей оспы, штамма Herman поксвируса енотов, штамма Utrecht поксвируса кроликов, штамма WR вируса осповакцины, штамма IHD вируса осповакцины, штамма Elstree вируса осповакцины, штамма CL вируса осповакцины, штамма Lederle-Chorioallantoic вируса осповакцины, штамма AS вируса осповакцины, штамма NZ2 орф-вируса и штамма TJS псевдопоксвируса коров; (ii) одну или более противораковых последовательностей нуклеиновой кислоты; или (iii) последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую определяемый фрагмент.

[0209] В одном аспекте изобретение относится к химерный поксвирус, содержащий последовательность нуклеиновой кислоты, имеющую идентичность последовательности, составляющую по меньшей мере 70% с SEQ ID NO: 1, при этом последовательность нуклеиновой кислоты содержит: (i) фрагменты нуклеиновой кислоты из штамма Brighton вируса коровьей оспы, штамма Herman поксвируса енотов, штамма Utrecht поксвируса кроликов, штамма WR вируса осповакцины, штамма IHD вируса осповакцины, штамма Elstree вируса осповакцины, штамм CL вируса осповакцины, штамма Lederle-Chorioallantoic вируса осповакцины и штамма AS вируса осповакцины; (ii) одну или более противораковых последовательностей нуклеиновой кислоты; или (iii) последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую определяемый фрагмент.

[0210] В одном аспекте изобретение относится к химерный поксвирус, содержащий последовательность нуклеиновой кислоты, имеющую идентичность последовательности, составляющую по меньшей мере 70% с SEQ ID NO: 2, при этом последовательность нуклеиновой кислоты содержит: (i) фрагменты нуклеиновой кислоты из штамма NZ2 орф-вируса и штамма TJS псевдопоксвируса коров; (ii) одну или более противораковых последовательностей нуклеиновой кислоты; или (iii) последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую определяемый фрагмент.

[0211] В одном аспекте изобретение относится к химерный поксвирус, содержащий последовательность нуклеиновой кислоты, имеющую идентичность последовательности, составляющую по меньшей мере 70% с SEQ ID NO: 3, при этом последовательность нуклеиновой кислоты содержит: (i) фрагменты нуклеиновой кислоты из штамма Brighton вируса коровьей оспы, штамма Herman поксвируса енотов, штамма Utrecht поксвируса кроликов, штамма WR вируса осповакцины, штамма IHD вируса осповакцины, штамма Elstree вируса осповакцины, штамма CL вируса осповакцины, штамма Lederle-Chorioallantoic вируса осповакцины и штамма AS вируса осповакцины; (ii) одну или более противораковых последовательностей нуклеиновой кислоты; или (iii) последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую определяемый фрагмент.

[0212] В рамках изобретения термины «противораковая последовательность нуклеиновой кислоты» или «противораковые последовательности нуклеиновых кислот» относятся к последовательностям нуклеиновых кислот, обладающим антинеопластическими свойствами и/или способностью ингибировать рост или пролиферацию раковых клеток, и/или предусматривающих селективную экспрессию химерного поксвируса в рамках изобретения, включая его варианты осуществления, в раковой клетке по сравнению со здоровой клеткой. Противораковые последовательности нуклеиновых кислот могут ингибировать прогрессирование или замедлять прогрессирование рака временно или постоянно. Примеры противораковых последовательностей нуклеиновой кислоты включают последовательности, кодирующие белки, экспрессия которых прямо или опосредованно ингибирует рост раковых клеток. Например, противораковую последовательность нуклеиновой кислоты в рамках изобретения может кодировать белок, который экспрессируется на более высоком уровне в раковой клетке по сравнению со здоровой клеткой (например, натрий-йодидный транспортер)). В другом неограничивающем примере противораковая последовательность нуклеиновой кислоты может кодировать полипептид (антитело), способное дерепрессировать противоопухолевые иммунные ответы (например, анти-PD-L1 антитела или их фрагменты). В вариантах осуществления противораковая последовательность нуклеиновой кислоты содержит последовательность нуклеиновой кислоты, способную увеличивать экспрессию/репликацию химерного поксвируса в раковой клетке по сравнению со здоровой клеткой. Таким образом, в вариантах осуществления скорость экспрессии (например, транскрипции, трансляции) химерного поксвируса, включающего противораковую последовательность нуклеиновой кислоты, уменьшается в здоровой клетке по сравнению с раковой клеткой. В вариантах осуществления химерный поксвирус, включающий противораковую последовательность нуклеиновой кислоты, не экспрессируется в обнаруживаемом количестве в здоровой клетке. В вариантах осуществления противораковая последовательность нуклеиновой кислоты представляет собой связывающую последовательность нуклеиновой кислоты. В вариантах осуществления противораковая последовательность нуклеиновой кислоты содержит связывающую последовательность нуклеиновой кислоты.

[0213] В рамках изобретения «связывающая последовательность нуклеиновой кислоты» относится к последовательности нуклеиновой кислоты, способной к связыванию (гибридизации) с по меньшей мере частично комплементарной клеточной нуклеиновой кислотой (например, ДНК, РНК, миРНК), при этом клеточная нуклеиновая кислота присутствует в повышенном количестве в здоровой клетке по сравнению с раковой клеткой. Связывающая последовательность нуклеиновой кислоты в рамках изобретения может образовывать часть нуклеиновой кислоты, состоящую из химерного поксвируса, и может быть функционально связана с геном химерного поксвируса. При связывании клеточной нуклеиновой кислоты со связывающей последовательностью нуклеиновой кислоты ген химерного поксвируса можно нацелить на деградацию (гидролиз), тем самым уменьшая экспрессию/репликацию химерного поксвируса. В вариантах осуществления связывающая последовательность нуклеиновой кислоты представляет собой ДНК-связывающую последовательность. В вариантах осуществления связывающую последовательность нуклеиновой кислоты представляет собой РНК-связывающую последовательность. В вариантах осуществления связывающая последовательность нуклеиновой кислоты представляет собой миРНК-связывающую последовательность. Вследствие этого, в вариантах осуществления противораковая последовательность нуклеиновой кислоты представляет собой связывающую последовательность нуклеиновой кислоты. В вариантах осуществления противораковая последовательность нуклеиновой кислоты представляет собой ДНК-связывающую последовательность. В вариантах осуществления противораковая последовательность нуклеиновой кислоты представляет собой РНК-связывающую последовательность. В вариантах осуществления противораковая последовательность нуклеиновой кислоты представляет собой миРНК-связывающую последовательность.

[0214] «Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая определяемый фрагмент» в рамках изобретения относится к последовательности нуклеиновой кислоты, которая кодирует композицию, определяемую спектроскопическим, фотохимическим, биохимическим, иммунохимическим, химическим или другим физическим способом. Последовательности нуклеиновых кислот, кодирующие определяемый фрагмент, могут кодировать флуоресцентный фрагмент. Неограничивающими примерами флуоресцентных фрагментов являются mCherry, Emerald и люцифераза светлячков.

[0215] В одном аспекте изобретение относится к химерный поксвирус, содержащий последовательность нуклеиновой кислоты, имеющую идентичность последовательности, составляющую по меньшей мере 70% с SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 2, при этом последовательность нуклеиновой кислоты содержит: (i) фрагменты нуклеиновой кислоты по меньшей мере из двух штаммов поксвируса, выбранных из группы, состоящей из штамма Brighton вируса коровьей оспы, штамма Herman поксвируса енотов, штамма Utrecht поксвируса кроликов, штамма WR вируса осповакцины, штамма IHD вируса осповакцины, штамма Elstree вируса осповакцины, штамма CL вируса осповакцины, штамма Lederle-Chorioallantoic вируса осповакцины, штамма AS вируса осповакцины, штамма NZ2 орф-вируса и штамма TJS псевдопоксвируса коров; (ii) одну или более противораковых последовательностей нуклеиновой кислоты; (iii) одну или более связывающих последовательностей нуклеиновой кислоты; или (iv) последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую определяемый фрагмент.

[0216] В другом аспекте изобретение относится к химерный поксвирус, содержащий последовательность нуклеиновой кислоты, имеющую идентичность последовательности, составляющую по меньшей мере 70% с SEQ ID NO: 1, при этом последовательность нуклеиновой кислоты содержит: (i) фрагменты нуклеиновой кислоты из штамма Brighton вируса коровьей оспы, штамма Herman поксвируса енотов, штамма Utrecht поксвируса кроликов, штамма WR вируса осповакцины, штамма IHD вируса осповакцины, штамма Elstree вируса осповакцины, штамма CL вируса осповакцины, штамма Lederle-Chorioallantoic вируса осповакцины и штамма AS вируса осповакцины; (ii) одну или более противораковых последовательностей нуклеиновой кислоты; (iii) одну или более связывающих последовательностей нуклеиновой кислоты; или (iv) последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую определяемый фрагмент.

[0217] В другом аспекте изобретение относится к химерный поксвирус, содержащий последовательность нуклеиновой кислоты, имеющую идентичность последовательности, составляющую по меньшей мере 70% с SEQ ID NO: 2, при этом последовательность нуклеиновой кислоты содержит: (i) фрагменты нуклеиновой кислоты из штамма NZ2 орф-вируса и штамма TJS псевдопоксвируса коров; (ii) одну или более противораковых последовательностей нуклеиновой кислоты; (iii) одну или более связывающих последовательностей нуклеиновой кислоты; или (iv) последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую определяемый фрагмент.

[0218] В другом аспекте изобретение относится к химерный поксвирус, содержащий последовательность нуклеиновой кислоты, имеющую идентичность последовательности, составляющую по меньшей мере 70% с SEQ ID NO: 3, при этом последовательность нуклеиновой кислоты содержит: (i) фрагменты нуклеиновой кислоты из штамма Brighton вируса коровьей оспы, штамма Herman поксвируса енотов, штамма Utrecht поксвируса кроликов, штамма WR вируса осповакцины, штамма IHD вируса осповакцины, штамма Elstree вируса осповакцины, штамма CL вируса осповакцины, штамма Lederle-Chorioallantoic вируса осповакцины и штамма AS вируса осповакцины; (ii) одну или более противораковых последовательностей нуклеиновой кислоты; (iii) одну или более связывающих последовательностей нуклеиновой кислоты; или (iv) последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую определяемый фрагмент.

[0219] В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты содержит: (i) фрагменты нуклеиновой кислоты по меньшей мере из двух штаммов поксвируса, выбранных из группы, состоящей из штамма Brighton вируса коровьей оспы, штамма Herman поксвируса енотов, штамма Utrecht поксвируса кроликов, штамма WR вируса осповакцины, штамма IHD вируса осповакцины, штамма Elstree вируса осповакцины, штамма CL вируса осповакцины, штамма Lederle-Chorioallantoic вируса осповакцины, штамма AS вируса осповакцины, штамма NZ2 орф-вируса и штамма TJS псевдопоксвируса коров; и (ii) одну или более противораковых последовательностей нуклеиновой кислоты. В вариантах осуществления фрагменты нуклеиновой кислоты происходят из штамма Brighton вируса коровьей оспы, штамма Herman поксвируса енотов, штамма Utrecht поксвируса кроликов, штамма WR вируса осповакцины, штамма IHD вируса осповакцины, штамма Elstree вируса осповакцины, штамма CL вируса осповакцины, штамма Lederle-Chorioallantoic вируса осповакцины и штамма AS вируса осповакцины. В вариантах осуществления фрагменты нуклеиновой кислоты происходят из штамма NZ2 орф-вируса и штамма TJS псевдопоксвируса коров.

[0220] В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты содержит: (i) фрагменты нуклеиновой кислоты по меньшей мере из двух штаммов поксвируса, выбранных из группы, состоящей из штамма Brighton вируса коровьей оспы, штамма Herman поксвируса енотов, штамма Utrecht поксвируса кроликов, штамма WR вируса осповакцины, штамма IHD вируса осповакцины, штамма Elstree вируса осповакцины, штамма CL вируса осповакцины, штамма Lederle-Chorioallantoic вируса осповакцины, штамма AS вируса осповакцины, штамма NZ2 орф-вируса и штамма TJS псевдопоксвируса коров; и (ii) одну или более связывающих последовательностей нуклеиновой кислоты. В вариантах осуществления фрагменты нуклеиновой кислоты происходят из штамма Brighton вируса коровьей оспы, штамма Herman поксвируса енотов, штамма Utrecht поксвируса кроликов, штамма WR вируса осповакцины, штамма IHD вируса осповакцины, штамма Elstree вируса осповакцины, штамма CL вируса осповакцины, штамма Lederle-Chorioallantoic вируса осповакцины и штамма AS вируса осповакцины. В вариантах осуществления фрагменты нуклеиновой кислоты происходят из штамма NZ2 орф-вируса и штамма TJS псевдопоксвируса коров.

[0221] В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты содержит: (i) фрагменты нуклеиновой кислоты по меньшей мере из двух штаммов поксвируса, выбранных из группы, состоящей из штамма Brighton вируса коровьей оспы, штамма Herman поксвируса енотов, штамма Utrecht поксвируса кроликов, штамма WR вируса осповакцины, штамма IHD вируса осповакцины, штамма Elstree вируса осповакцины, штамма CL вируса осповакцины, штамма Lederle-Chorioallantoic вируса осповакцины, штамма AS вируса осповакцины, штамма NZ2 орф-вируса и штамма TJS псевдопоксвируса коров; и (ii) последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую определяемый фрагмент. В вариантах осуществления фрагменты нуклеиновой кислоты происходят из штамма Brighton вируса коровьей оспы, штамма Herman поксвируса енотов, штамма Utrecht поксвируса кроликов, штамма WR вируса осповакцины, штамма IHD вируса осповакцины, штамма Elstree вируса осповакцины, штамма CL вируса осповакцины, штамма Lederle-Chorioallantoic вируса осповакцины и штамма AS вируса осповакцины. В вариантах осуществления фрагменты нуклеиновой кислоты происходят из штамма NZ2 орф-вируса и штамма TJS псевдопоксвируса коров.

[0222] В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты содержит: (i) фрагменты нуклеиновой кислоты по меньшей мере из двух штаммов поксвируса, выбранных из группы, состоящей из штамма Brighton вируса коровьей оспы, штамма Herman поксвируса енотов, штамма Utrecht поксвируса кроликов, штамма WR вируса осповакцины, штамма IHD вируса осповакцины, штамма Elstree вируса осповакцины, штамма CL вируса осповакцины, штамма Lederle-Chorioallantoic вируса осповакцины, штамма AS вируса осповакцины, штамма NZ2 орф-вируса и штамма TJS псевдопоксвируса коров; (ii) одну или более противораковых последовательностей нуклеиновой кислоты; и (iii) последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую определяемый фрагмент. В вариантах осуществления фрагменты нуклеиновой кислоты происходят из штамма Brighton вируса коровьей оспы, штамма Herman поксвируса енотов, штамма Utrecht поксвируса кроликов, штамма WR вируса осповакцины, штамма IHD вируса осповакцины, штамма Elstree вируса осповакцины, штамма CL вируса осповакцины, штамма Lederle-Chorioallantoic вируса осповакцины и штамма AS вируса осповакцины. В вариантах осуществления фрагменты нуклеиновой кислоты происходят из штамма NZ2 орф-вируса и штамма TJS псевдопоксвируса коров.

[0223] В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты содержит: (i) фрагменты нуклеиновой кислоты по меньшей мере из двух штаммов поксвируса, выбранных из группы, состоящей из штамма Brighton вируса коровьей оспы, штамма Herman поксвируса енотов, штамма Utrecht поксвируса кроликов, штамма WR вируса осповакцины, штамма IHD вируса осповакцины, штамма Elstree вируса осповакцины, штамма CL вируса осповакцины, штамма Lederle-Chorioallantoic вируса осповакцины, штамма AS вируса осповакцины, штамма NZ2 орф-вируса и штамма TJS псевдопоксвируса коров; (ii) одну или более противораковых последовательностей нуклеиновой кислоты; и (iii) одну или более связывающих последовательностей нуклеиновой кислоты. В вариантах осуществления фрагменты нуклеиновой кислоты происходят из штамма Brighton вируса коровьей оспы, штамма Herman поксвируса енотов, штамма Utrecht поксвируса кроликов, штамма WR вируса осповакцины, штамма IHD вируса осповакцины, штамма Elstree вируса осповакцины, штамма CL вируса осповакцины, штамма Lederle-Chorioallantoic вируса осповакцины и штамма AS вируса осповакцины. В вариантах осуществления фрагменты нуклеиновой кислоты происходят из штамма NZ2 орф-вируса и штамма TJS псевдопоксвируса коров.

[0224] Противораковые последовательности нуклеиновых кислот (трансгены) могут образовывать часть генома химерного поксвируса в рамках изобретения, включая его варианты осуществления. Геном химерного поксвируса содержит гены, необходимые для экспрессии и репликации поксвируса. Гены, необходимые для экспрессии и репликации химерного поксвируса, называются в настоящем описании «основными генами». Гены, которые не требуются для экспрессии и репликации химерного поксвируса, называются в настоящем описании «второстепенными генами». Противораковые последовательности нуклеиновых кислот можно заключить в геном химерного поксвируса посредством вставки в гены, или они могут быть функционально связаны с генами. После вставки противораковой последовательности нуклеиновой кислоты в ген химерного поксвируса ген (например, второстепенный ген) или его части можно удалить. В вариантах осуществления одна или более противораковых последовательностей нуклеиновой кислоты образуют часть второстепенного гена химерного поксвируса. В вариантах осуществления одну или более противораковых последовательностей нуклеиновой кислоты вставляют во второстепенный ген химерного поксвируса. В вариантах осуществления второстепенный ген представляет собой ген тимидинкиназы. В вариантах осуществления второстепенный ген представляет собой ген J2R. В вариантах осуществления второстепенный ген представляет собой ген F14.5L.

[0225] Как обсуждалось выше, противораковые последовательности нуклеиновых кислот могут кодировать полипептиды, пригодные для лечения рака. В вариантах осуществления одна или более противораковых последовательностей нуклеиновой кислоты независимо кодируют ингибитор PD-L1 или натрий-йодидный симпортер. В вариантах осуществления ингибитор PD-L1 представляет собой анти-PD-L1 scFv. В вариантах осуществления анти-PD-L1 scFv содержит последовательность SEQ ID NO: 17. В вариантах осуществления анти-PD-L1 scFv представляет собой последовательность SEQ ID NO: 17. В вариантах осуществления натрий-йодидный симпортер содержит последовательность SEQ ID NO: 13. В вариантах осуществления натрий-йодидный симпортер представляет собой последовательность SEQ ID NO: 13.

[0226] «PD-L1» или «белок PD-L1», который упомянут в настоящем описании, содержит любую из рекомбинантных или встречающихся в природе форм лиганда программируемой смерти 1 (PD-L1), также известного как кластер дифференциации 274 (CD 274), или его варианты или гомологи, которые сохраняют активность PD-L1 (например, в пределах по меньшей мере 50%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% активности по сравнению с PD-L1). В некоторых аспектах варианты или гомологи имеют по меньшей мере 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичность аминокислотных последовательностей по всей последовательности или части последовательности (например, непрерывной части из 50, 100, 150 или 200 аминокислот) по сравнению с белком PD-L1 природного происхождения. В вариантах осуществления белок PD-L1 по существу идентичен белку, идентифицированному UniProt, ссылочный номер Q9NZQ7, или варианту или гомологу, имеющему существенную с ним идентичность.

[0227] Термин «ингибитор PD-L1» в рамках изобретения относится к веществу (например, антителу, фрагменту антитела, одноцепочечному вариабельному фрагменту [scFv]), способному определяемо уменьшать экспрессию или уровень активности PD-L1 по сравнению с контролем. Ингибированная экспрессия или активность PD-L1 может составлять 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% или менее, чем в контроле. В некоторых случаях ингибирование составляет 1,5, 2, 3, 4, 5, 10 или более раз по сравнению с контролем. Ингибитор PD-L1 ингибирует PD-L1, например, по меньшей мере в какой-то мере, частично или полностью блокируя стимуляцию, уменьшая, предотвращая или задерживая активацию, или инактивируя, десенсибилизируя или понижающе регулируя трансдукцию сигнала, активность или количество PD-L1 по сравнению с отсутствием ингибитора PD-L1.

[0228] Термины «натрий-йодидный симпортер», «NIS», или «hNIS», как упомянуто в настоящем описании, включают любую из рекомбинантных или встречающихся в природе форм натрий-йодидного симпортера или его варианты или гомологи, которые сохраняют активность натрий-йодидного симпортера (например, в пределах по меньшей мере 50%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% активности по сравнению с натрий-йодидным симпортером). В некоторых аспектах варианты или гомологи имеют по меньшей мере 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичность аминокислотных последовательностей по всей последовательности или части последовательности (например, непрерывной части из 50, 100, 150 или 200 аминокислот) по сравнению с натрий-йодидным симпортером природного происхождения. В вариантах осуществления натрий-йодидный симпортер по существу идентичен белку, идентифицированному UniProt, ссылочный номер Q92911, или варианту или гомологу, имеющему существенную с ним идентичность. В вариантах осуществления натрий-йодидный симпортер содержит последовательность SEQ ID NO: 13. В вариантах осуществления натрий-йодидный симпортер представляет собой последовательность SEQ ID NO: 13.

[0229] Экспрессия противораковой последовательности нуклеиновой кислоты в рамках изобретения может контролироваться промотором. Вследствие этого в вариантах осуществления одна или более противораковых последовательностей нуклеиновой кислоты каждая функционально связана с промотором. В вариантах осуществления промотор представляет собой ранний промотор вируса осповакцины. В вариантах осуществления промотор представляет собой синтетический ранний промотор. В вариантах осуществления синтетический ранний промотор содержит последовательность SEQ ID NO: 19. В вариантах осуществления синтетический ранний промотор представляет собой последовательность SEQ ID NO: 19. В вариантах осуществления промотор представляет собой поздний промотор вируса осповакцины. В вариантах осуществления промотор представляет собой промотор Н5 или промотор 11К. В вариантах осуществления промотор Н5 содержит последовательность SEQ ID NO: 18. В вариантах осуществления промотор Н5 представляет собой последовательность SEQ ID NO: 18. В вариантах осуществления промотор 11К содержит последовательность SEQ ID NO: 20. В вариантах осуществления промотор 11К представляет собой последовательность SEQ ID NO: 20.

[0230] Противораковую последовательность нуклеиновой кислоты (связывающую последовательность нуклеиновой кислоты), предоставленную в настоящем описании, можно заключить в геном химерного поксвируса так, чтобы она находилась в функциональных отношениях (функционально связана) с определенным геном поксвируса. Например, противораковая последовательность нуклеиновой кислоты (связывающая последовательность нуклеиновой кислоты) может быть функционально связана с геном поксвируса, если она воздействует на транскрипцию или трансляцию гена поксвируса. В целом, противораковая последовательность нуклеиновой кислоты (связывающая последовательность нуклеиновой кислоты) и ген поксвируса функционально связаны, когда они являются смежными и/или в фазе считывания. В вариантах осуществления одна или более противораковых последовательностей нуклеиновой кислоты (одна или более связывающих последовательностей нуклеиновой кислоты) функционально связаны с основным геном химерного поксвируса. В вариантах осуществления одна или более противораковых последовательностей нуклеиновой кислоты (одна или более связывающих последовательностей нуклеиновой кислоты) функционально связаны с геном ДНК-полимеразы химерного поксвируса. В вариантах осуществления одна или более противораковых последовательностей нуклеиновой кислоты (одна или более связывающих последовательностей нуклеиновой кислоты) функционально связаны с 3'-концом гена ДНК-полимеразы химерного поксвируса. В вариантах осуществления одна или более противораковых последовательностей нуклеиновой кислоты (одна или более связывающих последовательностей нуклеиновой кислоты) функционально связаны с геном урацил-ДНК-гликозилазы. В вариантах осуществления одна или более противораковых последовательностей нуклеиновой кислоты (одна или более связывающих последовательностей нуклеиновой кислоты) функционально связаны 3'-концом гена урацил-ДНК-гликозилазы.

[0231] В вариантах осуществления одна или более противораковых последовательностей нуклеиновой кислоты (одна или более связывающих последовательностей нуклеиновой кислоты) независимо кодирует миРНК-связывающую последовательность. В вариантах осуществления миРНК-связывающая последовательность представляет собой miR100-связывающую последовательность или let7c-связывающую последовательность. В вариантах осуществления миРНК-связывающая последовательность представляет собой miR100-связывающую последовательность. В вариантах осуществления miR100-связывающая последовательность содержит последовательность SEQ ID NO: 9. В вариантах осуществления miR100-связывающая последовательность представляет собой последовательность SEQ ID NO: 9. В вариантах осуществления miR100-связывающая последовательность содержит последовательность SEQ ID NO: 10. В вариантах осуществления miR100-связывающая последовательность представляет собой последовательность SEQ ID NO: 10. В вариантах осуществления миРНК-связывающая последовательность представляет собой let7c-связывающую последовательность. В вариантах осуществления let7c-связывающая последовательность содержит последовательность SEQ ID NO: 11. В вариантах осуществления let7c-связывающая последовательность представляет собой последовательность SEQ ID NO: 11.

[0232] В вариантах осуществления одна или более противораковых последовательностей нуклеиновой кислоты представляют собой первую противораковую последовательность нуклеиновой кислоты и вторую противораковую последовательность нуклеиновой кислоты. В рамках изобретения первая противораковая последовательность нуклеиновой кислоты может являться первой последовательностью, связывающей нуклеиновые кислоты, и вторая противораковая последовательность нуклеиновой кислоты может являться второй последовательностью, связывающей нуклеиновые кислоты.

[0233] В вариантах осуществления первая противораковая последовательность нуклеиновой кислоты кодирует натрий-йодидный симпортер, и указанная вторая противораковая последовательность нуклеиновой кислоты (вторая связывающая последовательность нуклеиновой кислоты) кодирует миРНК-связывающую последовательность. В вариантах осуществления первая противораковая последовательность нуклеиновой кислоты образует часть гена тимидинкиназы, а вторая противораковая последовательность нуклеиновой кислоты (вторая связывающая последовательность нуклеиновой кислоты) функционально связана с геном урацил-ДНК-гликозилазы. В вариантах осуществления первая противораковая последовательность нуклеиновой кислоты образует часть гена тимидинкиназы, а вторая противораковая последовательность нуклеиновой кислоты (вторая связывающая последовательность нуклеиновой кислоты) функционально связана с геном ДНК-полимеразы.

[0234] В вариантах осуществления первая противораковая последовательность нуклеиновой кислоты кодирует натрий-йодидный симпортер, а вторая противораковая последовательность нуклеиновой кислоты кодирует ингибитор PD-L1. В вариантах осуществления первая противораковая последовательность нуклеиновой кислоты образует часть гена тимидинкиназы, а вторая противораковая последовательность нуклеиновой кислоты образует часть гена F14.5L.

[0235] В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты содержит: (i) фрагменты нуклеиновой кислоты по меньшей мере из двух штаммов поксвируса, выбранных из группы, состоящей из штамма Brighton вируса коровьей оспы, штамма Herman поксвируса енотов, штамма Utrecht поксвируса кроликов, штамма WR вируса осповакцины, штамма IHD вируса осповакцины, штамма Elstree вируса осповакцины, штамма CL вируса осповакцины, штамма Lederle-Chorioallantoic вируса осповакцины, штамма AS вируса осповакцины, штамма NZ2 орф-вируса и штамма TJS псевдопоксвируса коров; и (ii) указанную последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую определяемый фрагмент. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая определяемый фрагмент, кодирует флуоресцентный фрагмент. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая определяемый фрагмент, образует часть второстепенного гена химерного поксвируса. В вариантах осуществления второстепенный ген представляет собой ген тимидинкиназы. В вариантах осуществления части второстепенного гена удалены.

[0236] В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая определяемый фрагмент, функционально связанный с промотором. В вариантах осуществления промотор представляет собой ранний промотор вируса осповакцины. В вариантах осуществления промотор представляет собой синтетический ранний промотор. В вариантах осуществления синтетический ранний промотор содержит последовательность SEQ ID NO: 19. В вариантах осуществления синтетический ранний промотор представляет собой последовательность SEQ ID NO: 19. В вариантах осуществления промотор представляет собой поздний промотор вируса осповакцины. В вариантах осуществления промотор представляет собой промотор Н5 или промотор 11К. В вариантах осуществления промотор Н5 содержит последовательность SEQ ID NO: 18. В вариантах осуществления промотор Н5 представляет собой последовательность SEQ ID NO: 18. В вариантах осуществления промотор 11К содержит последовательность SEQ ID NO: 20. В вариантах осуществления промотор 11К представляет собой последовательность SEQ ID NO: 20.

[0237] В одном варианте осуществления противораковая последовательность нуклеиновой кислоты (связывающая последовательность нуклеиновой кислоты) кодирует миРНК-связывающую последовательность, имеющую последовательность SEQ ID NO: 10 и функционально связанную с 3'-концом гена урацил-ДНК-гликозилазы.

[0238] В одном варианте осуществления противораковая последовательность нуклеиновой кислоты (связывающая последовательность нуклеиновой кислоты) кодирует миРНК-связывающую последовательность, имеющую последовательность SEQ ID NO: 9 и функционально связанную с 3'-концом гена урацил-ДНК-гликозилазы.

[0239] В одном варианте осуществления противораковая последовательность нуклеиновой кислоты (связывающая последовательность нуклеиновой кислоты) кодирует миРНК-связывающую последовательность, имеющую последовательность SEQ ID NO: 11 и функционально связанную с 3'-концом гена урацил-ДНК-гликозилазы.

[0240] В одном варианте осуществления противораковая последовательность нуклеиновой кислоты (связывающая последовательность нуклеиновой кислоты) кодирует миРНК-связывающую последовательность, имеющую последовательность SEQ ID NO: 9 и функционально связанную с 3'-концом гена ДНК-полимеразы.

[0241] В одном варианте осуществления противораковая последовательность нуклеиновой кислоты (связывающая последовательность нуклеиновой кислоты) кодирует миРНК-связывающую последовательность, имеющую последовательность SEQ ID NO: 11 и функционально связанную с 3'-концом гена ДНК-полимеразы.

[0242] В одном варианте осуществления ген тимидинкиназы химерного поксвируса имеет последовательность SEQ ID NO: 5.

[0243] В одном варианте осуществления противораковая последовательность нуклеиновой кислоты кодирует натрий-йодидный симпортер, функционально связанный с синтетическим ранним промотором, и образует часть гена тимидинкиназы, при этом натрий-йодидный симпортер имеет последовательность SEQ ID NO: 13, а синтетический ранний промотор имеет последовательность SEQ ID NO: 19.

[0244] В одном варианте осуществления последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая определяемый фрагмент, кодирует флуоресцентный фрагмент, имеющий последовательность SEQ ID NO: 14, функционально связанный с промотором Н5, и образует часть гена тимидинкиназы, при этом промотор Н5 имеет последовательность SEQ ID NO: 18.

[0245] В одном варианте осуществления последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая определяемый фрагмент, кодирует флуоресцентный фрагмент, имеющий последовательность SEQ ID NO: 15, функционально связанный с синтетическим ранним промотором, и образует часть гена тимидинкиназы, при этом синтетический ранний промотор имеет последовательность SEQ ID NO: 19.

[0246] В одном варианте осуществления последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая определяемый фрагмент, кодирует флуоресцентный фрагмент, имеющий последовательность SEQ ID NO: 15, функционально связанный с промотором Н5, и образует часть гена тимидинкиназы, при этом промотор Н5 имеет последовательность SEQ ID NO: 18.

[0247] В одном варианте осуществления последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая определяемый фрагмент, кодирует флуоресцентный фрагмент, имеющий последовательность SEQ ID NO: 15, функционально связанный с промотором 11К, и образует часть гена тимидинкиназы, при этом промотор 11К имеет последовательность SEQ ID NO: 20.

[0248] В одном варианте осуществления последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая определяемый фрагмент, кодирует флуоресцентный фрагмент, имеющий последовательность SEQ ID NO: 16, функционально связанный с промотором Н5, и образует часть гена тимидинкиназы, при этом промотор Н5 имеет последовательность SEQ ID NO: 18.

[0249] В одном варианте осуществления последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая определяемый фрагмент, кодирует флуоресцентный фрагмент, имеющий последовательность SEQ ID NO: 16, функционально связанный с промотором 11К, и образует часть гена тимидинкиназы, при этом промотор 11К имеет последовательность SEQ ID NO: 20.

[0250] В одном варианте осуществления первая противораковая последовательность нуклеиновой кислоты кодирует натрий-йодидный симпортер, функционально связанный с синтетическим ранним промотором, и образует часть гена тимидинкиназы; и вторая противораковая последовательность нуклеиновой кислоты (связывающая последовательность нуклеиновой кислоты) кодирует миРНК-связывающую последовательность, имеющую последовательность SEQ ID NO: 10, и функционально связанную с 3'-концом гена урацил-ДНК-гликозилазы, при этом натрий-йодидный симпортер имеет последовательность SEQ ID NO: 13, а синтетический ранний промотор имеет последовательность SEQ ID NO: 19.

[0251] В одном варианте осуществления первая противораковая последовательность нуклеиновой кислоты кодирует натрий-йодидный симпортер, функционально связанный с синтетическим ранним промотором, и образует часть гена тимидинкиназы; и вторая противораковая последовательность нуклеиновой кислоты (связывающая последовательность нуклеиновой кислоты) кодирует миРНК-связывающую последовательность, имеющую последовательность SEQ ID NO: 9, и функционально связанную с 3'-концом гена урацил-ДНК-гликозилазы, при этом натрий-йодидный симпортер имеет последовательность SEQ ID NO: 13, а синтетический ранний промотор имеет последовательность SEQ ID NO: 19.

[0252] В одном варианте осуществления первая противораковая последовательность нуклеиновой кислоты кодирует натрий-йодидный симпортер, функционально связанный с синтетическим ранним промотором, и образует часть гена тимидинкиназы; и вторая противораковая последовательность нуклеиновой кислоты (связывающая последовательность нуклеиновой кислоты) кодирует миРНК-связывающую последовательность, имеющую последовательность SEQ ID NO: 11, и функционально связанную с 3'-концом гена урацил-ДНК-гликозилазы, при этом натрий-йодидный симпортер имеет последовательность SEQ ID NO: 13, а синтетический ранний промотор имеет последовательность SEQ ID NO: 19.

[0253] В одном варианте осуществления первая противораковая последовательность нуклеиновой кислоты кодирует натрий-йодидный симпортер, функционально связанный с синтетическим ранним промотором, и образует часть гена тимидинкиназы; и вторая противораковая последовательность нуклеиновой кислоты (связывающая последовательность нуклеиновой кислоты) кодирует миРНК-связывающую последовательность, имеющую последовательность SEQ ID NO: 9, и функционально связанную с 3'-концом гена ДНК-полимеразы, при этом натрий-йодидный симпортер имеет последовательность SEQ ID NO: 13, а синтетический ранний промотор имеет последовательность SEQ ID NO: 19.

[0254] В одном варианте осуществления первая противораковая последовательность нуклеиновой кислоты кодирует натрий-йодидный симпортер, функционально связанный с синтетическим ранним промотором, и образует часть гена тимидинкиназы; и вторая противораковая последовательность нуклеиновой кислоты (связывающая последовательность нуклеиновой кислоты) кодирует миРНК-связывающую последовательность, имеющую последовательность SEQ ID NO: 11, и функционально связанную с 3'-концом гена ДНК-полимеразы, при этом натрий-йодидный симпортер имеет последовательность SEQ ID NO: 13, а синтетический ранний промотор имеет последовательность SEQ ID NO: 19.

[0255] В одном варианте осуществления ген F14.5L химерного поксвируса имеет последовательность SEQ ID NO: 7.

[0256] В одном варианте осуществления противораковая последовательность нуклеиновой кислоты кодирует анти-PD-L1 scFv, функционально связанный с промотором Н5, и образует часть гена F14.5L, при этом анти-PD-L1 scFv имеет последовательность SEQ ID NO: 17, а промотор Н5 имеет последовательность SEQ ID NO: 18.

[0257] В одном варианте осуществления противораковая последовательность нуклеиновой кислоты кодирует натрий-йодидный симпортер, функционально связанный с синтетическим ранним промотором, и образует часть гена тимидинкиназы, и ген F14.5L имеет последовательность SEQ ID NO: 7, при этом натрий-йодидный симпортер имеет последовательность SEQ ID NO: 13, а синтетический ранний промотор имеет последовательность SEQ ID NO: 19.

[0258] В одном варианте осуществления первая противораковая последовательность нуклеиновой кислоты кодирует натрий-йодидный симпортер, функционально связанный с синтетическим ранним промотором, и образует часть гена тимидинкиназы; и вторая противораковая последовательность нуклеиновой кислоты кодирует анти-PD-L1 scFv, функционально связанный с промотором Н5, и образует часть гена F14.5L, при этом натрий-йодидный симпортер имеет последовательность SEQ ID NO: 13, синтетический ранний промотор имеет последовательность SEQ ID NO: 19, анти-PD-L1 scFv имеет последовательность SEQ ID NO: 17, а промотор Н5 имеет последовательность SEQ ID NO: 18.

IV. Способы получения химерного поксвируса

[0259] В другом аспекте изобретение относится к способ получения химерного поксвируса, при этом способ включает: инфицирование клетки по меньшей мере двумя штаммами поксвируса, выбранными из группы, содержащей штамм Brighton вируса коровьей оспы, штамм Herman поксвируса енотов, штамм Utrecht поксвируса кроликов, штамм WR вируса осповакцины, штамм IHD вируса осповакцины, штамм Elstree вируса осповакцины, штамм CL вируса осповакцины, штамм Lederle-Chorioallantoic вируса осповакцины, штамм AS вируса осповакцины, штамм NZ2 орф-вируса и штамм TJS псевдопоксвируса коров; и обеспечение возможности репликации по меньшей мере двух штаммов поксвируса, тем самым получая химерный поксвирус.

[0260] Способы получения химерного поксвируса в рамках настоящего изобретения можно использовать для образования химерных поксвирусов, содержащих трансгены (например, противораковую последовательность нуклеиновой кислоты, связывающую последовательность нуклеиновой кислоты, последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую определяемый фрагмент), как описано в настоящем описании.

[0261] В вариантах осуществления по меньшей мере два штамма вируса поксвируса каждый присутствует при множественности заражения, составляющей менее чем приблизительно 1,0. В вариантах осуществления по меньшей мере два штамма вируса поксвируса каждый присутствует при множественности заражения, составляющей менее чем приблизительно 0,5. В вариантах осуществления по меньшей мере два штамма вируса поксвируса каждый присутствует при множественности заражения, составляющей менее чем приблизительно 0,1. В вариантах осуществления по меньшей мере два штамма вируса поксвируса каждый присутствует при множественности заражения, составляющей менее чем приблизительно 0,05. В вариантах осуществления по меньшей мере два штамма вируса поксвируса каждый присутствует при множественности заражения, составляющей менее чем приблизительно 0,01.

[0262] В вариантах осуществления химерный поксвирус получают посредством способа, включающего: инфицирование клетки по меньшей мере двумя штаммами поксвируса, выбранными из группы, содержащей штамм Brighton вируса коровьей оспы, штамм Herman поксвируса енотов, штамм Utrecht поксвируса кроликов, штамм WR вируса осповакцины, штамм IHD вируса осповакцины, штамм Elstree вируса осповакцины, штамм CL вируса осповакцины, штамм Lederle-Chorioallantoic вируса осповакцины, штамм AS вируса осповакцины, штамм NZ2 орф-вируса и штамм TJS псевдопоксвируса коров; и обеспечение возможности репликации по меньшей мере двух штаммов поксвируса, тем самым получая химерный поксвирус.

[0263] В вариантах осуществления клетку инфицируют штаммом Brighton вируса коровьей оспы, штаммом Herman поксвируса енотов, штаммом Utrecht поксвируса кроликов, штаммом WR вируса осповакцины, штаммом IHD вируса осповакцины, штаммом Elstree вируса осповакцины, штаммом CL вируса осповакцины, штаммом Lederle-Chorioallantoic вируса осповакцины и штаммом AS вируса осповакцины.

[0264] В вариантах осуществления фрагменты нуклеиновой кислоты происходят из штамма Brighton вируса коровьей оспы, штамма Herman поксвируса енотов, штамма Utrecht поксвируса кроликов, штамма WR вируса осповакцины, штамма IHD вируса осповакцины, штамма Elstree вируса осповакцины, штамма CL вируса осповакцины, штамма Lederle-Chorioallantoic вируса осповакцины и штамма AS вируса осповакцины.

[0265] В вариантах осуществления клетку инфицируют штаммом Brighton поксвируса коров и штаммом Herman поксвируса енотов. В вариантах осуществления клетку инфицируют штаммом Brighton поксвируса коров и штаммом Utrecht поксвируса кроликов. В вариантах осуществления клетку инфицируют штаммом Brighton поксвируса коров и штаммом WR вируса осповакцины. В вариантах осуществления клетку инфицируют штаммом Brighton поксвируса коров и штаммом IHD вируса осповакцины. В вариантах осуществления клетку инфицируют штаммом Brighton поксвируса коров и штаммом Elstree вируса осповакцины. В вариантах осуществления клетку инфицируют штаммом Brighton поксвируса коров и штаммом CL вируса осповакцины. В вариантах осуществления клетку инфицируют штаммом Brighton поксвируса коров и штаммом Lederle-Chorioallantoic вируса осповакцины. В вариантах осуществления клетку инфицируют штаммом Brighton поксвируса коров и штаммом AS вируса осповакцины. В вариантах осуществления клетку инфицируют штаммом Brighton поксвируса коров и штаммом NZ2 орф-вируса. В вариантах осуществления клетку инфицируют штаммом Brighton поксвируса коров и штаммом TJS псевдопоксвируса коров.

[0266] В вариантах осуществления клетку инфицируют штаммом Utrecht поксвируса кроликов и штаммом WR вируса осповакцины. В вариантах осуществления клетку инфицируют штаммом Utrecht поксвируса кроликов и штаммом IHD вируса осповакцины. В вариантах осуществления клетку инфицируют штаммом Utrecht поксвируса кроликов и штаммом Elstree вируса осповакцины. В вариантах осуществления клетку инфицируют штаммом Utrecht поксвируса кроликов и штаммом CL вируса осповакцины. В вариантах осуществления клетку инфицируют штаммом Utrecht поксвируса кроликов и штаммом Lederle-Chorioallantoic вируса осповакцины. В вариантах осуществления клетку инфицируют штаммом Utrecht поксвируса кроликов и штаммом AS вируса осповакцины. В вариантах осуществления клетку инфицируют штаммом Utrecht поксвируса кроликов и штаммом NZ2 орф-вируса. В вариантах осуществления клетку инфицируют штаммом Utrecht поксвируса кроликов и штаммом TJS псевдопоксвируса коров.

[0267] В вариантах осуществления клетку инфицируют штаммом WR вируса осповакцины и штаммом IHD вируса осповакцины. В вариантах осуществления клетку инфицируют штаммом WR вируса осповакцины и штаммом Elstree вируса осповакцины. В вариантах осуществления клетку инфицируют штаммом WR вируса осповакцины и штаммом CL вируса осповакцины. В вариантах осуществления клетку инфицируют штаммом WR вируса осповакцины и штаммом Lederle-Chorioallantoic вируса осповакцины. В вариантах осуществления клетку инфицируют штаммом WR вируса осповакцины и штаммом AS вируса осповакцины. В вариантах осуществления клетку инфицируют штаммом WR вируса осповакцины и штаммом NZ2 орф-вируса. В вариантах осуществления клетку инфицируют штаммом WR вируса осповакцины и штаммом TJS псевдопоксвируса коров.

[0268] В вариантах осуществления клетку инфицируют штаммом IHD вируса осповакцины и штаммом Elstree вируса осповакцины. В вариантах осуществления клетку инфицируют штаммом IHD вируса осповакцины и штаммом CL вируса осповакцины. В вариантах осуществления клетку инфицируют штаммом IHD вируса осповакцины и штаммом Lederle-Chorioallantoic вируса осповакцины. В вариантах осуществления клетку инфицируют штаммом IHD вируса осповакцины и штаммом AS вируса осповакцины. В вариантах осуществления клетку инфицируют штаммом IHD вируса осповакцины и штаммом NZ2 орф-вируса. В вариантах осуществления клетку инфицируют штаммом IHD вируса осповакцины и штаммом TJS псевдопоксвируса коров.

[0269] В вариантах осуществления клетку инфицируют штаммом Elstree вируса осповакцины и штаммом CL вируса осповакцины. В вариантах осуществления клетку инфицируют штаммом Elstree вируса осповакцины и штаммом Lederle-Chorioallantoic вируса осповакцины. В вариантах осуществления клетку инфицируют штаммом Elstree вируса осповакцины и штаммом AS вируса осповакцины. В вариантах осуществления клетку инфицируют штаммом Elstree вируса осповакцины и штаммом NZ2 орф-вируса. В вариантах осуществления клетку инфицируют штаммом Elstree вируса осповакцины и штаммом TJS псевдопоксвируса коров.

[0270] В вариантах осуществления клетку инфицируют штаммом CL вируса осповакцины и штаммом Lederle-Chorioallantoic вируса осповакцины. В вариантах осуществления клетку инфицируют штаммом CL вируса осповакцины и штаммом AS вируса осповакцины. В вариантах осуществления клетку инфицируют штаммом CL вируса осповакцины и штаммом NZ2 орф-вируса. В вариантах осуществления клетку инфицируют штаммом CL вируса осповакцины и штаммом TJS псевдопоксвируса коров.

[0271] В вариантах осуществления клетку инфицируют штаммом Lederle-Chorioallantoic вируса осповакцины и штаммом AS вируса осповакцины. В вариантах осуществления клетку инфицируют штаммом Lederle-Chorioallantoic вируса осповакцины и штаммом NZ2 орф-вируса. В вариантах осуществления клетку инфицируют штаммом Lederle-Chorioallantoic вируса осповакцины и штаммом TJS псевдопоксвируса коров.

[0272] В вариантах осуществления клетку инфицируют штаммом AS вируса осповакцины и штаммом NZ2 орф-вируса. В вариантах осуществления клетку инфицируют штаммом AS вируса осповакцины и штаммом TJS псевдопоксвируса коров. В вариантах осуществления клетку инфицируют штаммом NZ2 орф-вируса и штаммом TJS псевдопоксвируса коров.

[0273] В вариантах осуществления клеткой является клетка, представляющая собой почечный фибробласт. В вариантах осуществления клетка представляет собой эпителиальную клетку. В вариантах осуществления клеткой является клетка, представляющая собой клетку CV-1. В вариантах осуществления клетка представляет собой эпителиальную клетку почки коровы.

V. Фармацевтические композиции

[0274] В одном аспекте изобретение относится ка фармацевтическая композиция, содержащая терапевтически эффективное количество химерного поксвируса в рамках изобретения, включая его варианты осуществления. В вариантах осуществления химерный поксвирус включает трансгены (например, противораковую последовательность нуклеиновой кислоты, связывающую последовательность нуклеиновой кислоты, последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую определяемый фрагмент, или любую их комбинацию).

[0275] «Фармацевтически приемлемый эксципиент» и «фармацевтически приемлемый носитель» относятся к веществу, которое способствует введению активного вещества, его абсорбции пациентом и которое можно включать в композиции согласно настоящему изобретению, не вызывая значительного неблагоприятного токсикологического воздействия на пациента. Неограничивающие примеры фармацевтически приемлемых эксципиентов включают воду, NaCl, физиологические солевые растворы, лактат Рингера, физиологический раствор сахарозы, физиологический раствор глюкозы, связующие вещества, наполнители, дезинтегранты, смазочные материалы, покрытия, подсластители, ароматизаторы, солевые растворы (такие как раствор Рингера), спирты, масла, желатины, углеводы, такие как лактоза, амилоза или крахмал, сложные эфиры жирных кислот, гидроксиметилцеллюлозу, поливинилпирролидин, красители и тому подобное. Такие препараты можно стерилизовать и, при необходимости, смешивать со вспомогательными агентами, такими как смазывающие вещества, консерванты, стабилизаторы, увлажняющие вещества, эмульгаторы, соли для воздействия на осмотическое давление, буферные агенты, красители и/или ароматические вещества и др., которые не вступают во вредную реакцию с соединениями согласно настоящему изобретению. Специалист в данной области поймет, что в настоящем изобретении пригодны и другие фармацевтические эксципиенты.

[0276] Композиции химерного поксвируса в рамках настоящего изобретения, включая его варианты осуществления, можно вводить перорально, через желудочно-кишечный тракт или ректально. Введение может быть в форме однократной болюсной дозы или может быть, например, с помощью помпы для непрерывной перфузии. В вариантах осуществления химерный поксвирус в рамках изобретения комбинируют с одним или более эксципиентов, например, дезинтегранта, наполнителя, вещества, способствующего скольжению, или консерванта. В вариантах осуществления химерный поксвирус в рамках изобретения образует часть капсулы. Подходящие капсулы включают капсулы с твердой оболочкой или капсулы с мягкой оболочкой. Для образования капсулы можно использовать любой коллоид на основе липидов или полимеров. Иллюстративные полимеры, пригодные для коллоидных препаратов, включают желатин, растительные полисахариды или их производные, такие как каррагинаны, и модифицированные формы крахмала и целлюлозы, например, гипромеллозу. Необязательно, к раствору гелеобразующего агента можно добавить другие ингредиенты, например пластификаторы, такие как глицерин и/или сорбит, для уменьшения твердости капсулы, красители, консерванты, дезинтегранты, смазывающие вещества и обработку поверхности.

[0277] Композиции химерного поксвируса можно составить в виде стандартной лекарственной формы, причем каждая дозировка содержит, например, от приблизительно 0,005 до приблизительно 2000 мг определенного химерного поксвируса, имеющего минимальную уреазную активность на дозу. Термин «стандартные лекарственные формы» относится к физически дискретным единицам, подходящим в качестве единичных доз для пациентов людей и других млекопитающих, причем каждая единица содержит предварительно определенное количество активного материала, рассчитанное для получения желаемого терапевтического эффекта, в сочетании с подходящим фармацевтическим эксципиентом. Для приготовления твердых композиций, таких как таблетки, основной активный ингредиент смешивают с фармацевтическим эксципиентом с образованием твердой композиции до придания ей лекарственной формы, содержащей гомогенную смесь соединения согласно настоящему изобретению. Когда эти композиции до придания ей лекарственной формы называют гомогенными, активный ингредиент обычно равномерно распределен по всей композиции, так что композицию можно легко подразделить на одинаково эффективные стандартные лекарственные формы, такие как таблетки, пилюли и капсулы.

[0278] В некоторых вариантах осуществления таблетки или пилюли согласно настоящему изобретению могут быть покрыты оболочкой или составлены иным образом для получения лекарственной формы, обеспечивающей преимущество пролонгированного действия. Например, таблетка или пилюля могут содержать внутренний лекарственный и наружный лекарственный компонент, причем последний находится в форме оболочки над первым. Два компонента могут быть разделены энтеросолюбильным слоем, который служит для противодействия распаду в желудке и позволяет внутреннему компоненту без изменений проходить в двенадцатиперстную кишку или задерживаться при высвобождении. Для таких энтеросолюбильных слоев или покрытий можно использовать ряд материалов; такие материалы включают ряд полимерных кислот и смеси полимерных кислот с такими материалами, как шеллак, цетиловый спирт и ацетат целлюлозы.

[0279] Жидкие формы, в которые можно включить композиции согласно настоящему изобретению, для перорального введения или посредством инъекции, включают водные растворы, подходящие ароматизированные сиропы, водные или масляные суспензии и ароматизированные эмульсии с пищевыми маслами, такими как хлопковое масло, кунжутное масло, кокосовое масло или арахисовое масло, а также эликсиры и аналогичные фармацевтические несущие среды.

VI. Способы лечения

[0280] В другом аспекте изобретение относится к способ лечения рака у пациента, при этом способ включает введение пациенту терапевтически эффективное количество химерного поксвируса в рамках изобретения, включая его варианты осуществления, тем самым осуществляя лечение рака у пациента. В вариантах осуществления рак представляет собой рак молочной железы, рак толстой кишки, рак почек, лейкоз, рак легкого, меланому, рак яичников, рак предстательной железы, рак поджелудочной железы, рак мозга, рак печени, рак желудка или саркому. В вариантах осуществления рак представляет собой рак молочной железы. В вариантах осуществления рак представляет собой рак толстой кишки. В вариантах осуществления рак представляет собой рак почки. В вариантах осуществления рак представляет собой лейкоз. В вариантах осуществления рак представляет собой рак легкого. В вариантах осуществления рак представляет собой меланому. В вариантах осуществления рак представляет собой рак яичников. В вариантах осуществления рак представляет собой рак предстательной железы. В вариантах осуществления рак представляет собой рак поджелудочной железы. В вариантах осуществления рак представляет собой рак головного мозга. В вариантах осуществления рак представляет собой рак печени. В вариантах осуществления рак представляет собой рак желудка. В вариантах осуществления рак представляет собой саркому. В вариантах осуществления рак представляет собой Трижды негативный рак молочной железы.

[0281] В вариантах осуществления введение включает введение первого химерного поксвируса и второго химерного поксвируса. В вариантах осуществления первый химерный поксвирус и второй химерный поксвирус вводят в комбинированном синергическом количестве. В вариантах осуществления первый химерный поксвирус и второй химерный поксвирус вводят одновременно. В вариантах осуществления первый химерный поксвирус и второй химерный поксвирус вводят последовательно.

[0282] В вариантах осуществления поксвирус вводят по меньшей мере при 10³ бляшкообразующих единиц (БОЕ)/кг. В вариантах осуществления поксвирус вводят по меньшей мере при 10⁴ бляшкообразующих единиц (БОЕ)/кг. В вариантах осуществления поксвирус вводят по меньшей мере при 10⁵ бляшкообразующих единиц (БОЕ)/кг. В вариантах осуществления поксвирус вводят по меньшей мере при 10⁶ бляшкообразующих единиц (БОЕ)/кг. В вариантах осуществления поксвирус вводят по меньшей мере при 10⁷ бляшкообразующих единиц (БОЕ)/кг. В вариантах осуществления поксвирус вводят по меньшей мере при 10⁸ бляшкообразующих единиц (БОЕ)/кг.

[0283] В вариантах осуществления поксвирус вводят при 10³ бляшкообразующих единиц (БОЕ)/кг. В вариантах осуществления поксвирус вводят при 10⁴ бляшкообразующих единиц (БОЕ)/кг. В вариантах осуществления поксвирус вводят при 10⁵ бляшкообразующих единиц (БОЕ)/кг. В вариантах осуществления поксвирус вводят при 10⁶ бляшкообразующих единиц (БОЕ)/кг. В вариантах осуществления поксвирус вводят при 10⁷ бляшкообразующих единиц (БОЕ)/кг. В вариантах осуществления поксвирус вводят при 10⁸ бляшкообразующих единиц (БОЕ)/кг.

[0284] В вариантах осуществления поксвирус вводят в количестве по меньшей мере 10³ бляшкообразующих единиц (БОЕ)/кг. В вариантах осуществления поксвирус вводят при 10³ бляшкообразующих единиц (БОЕ)/кг. В вариантах осуществления поксвирус вводят в количестве приблизительно 4×10⁴ бляшкообразующих единиц (БОЕ)/кг. В вариантах осуществления поксвирус вводят при 4×10⁴ бляшкообразующих единиц (БОЕ)/кг. В вариантах осуществления поксвирус вводят в количестве приблизительно 5×10⁴ бляшкообразующих единиц (БОЕ)/кг. В вариантах осуществления поксвирус вводят при 5×10⁴ бляшкообразующих единиц (БОЕ)/кг.

[0285] В одном аспекте изобретение относится к способу ингибирования клеточной пролиферации клетки, при этом способ включает приведение в контакт клетки с химерным поксвирусом, как описано в настоящем описании. В вариантах осуществления клетка представляет собой раковую клетку. В вариантах осуществления раковая клетка представляет собой клетку рака молочной железы, клетку рака толстой кишки, клетку рака почки, лейкозную клетку, клетку рака легкого, клетку меланомы, клетку рака яичников, клетку рака предстательной железы, клетку рака поджелудочной железы, клетку рака головного мозга, клетку рака печени, клетку рака желудка или клетку саркомы. В вариантах осуществления раковая клетка представляет собой клетку рака молочной железы. В вариантах осуществления раковая клетка представляет собой клетку рака толстой кишки. В вариантах осуществления раковая клетка представляет собой клетку рака почки. В вариантах осуществления раковая клетка представляет собой лейкозную клетку. В вариантах осуществления раковая клетка представляет собой клетку рака легкого. В вариантах осуществления раковая клетка представляет собой меланому. В вариантах осуществления раковая клетка представляет собой клетку рака яичников. В вариантах осуществления раковая клетка представляет собой клетку рака предстательной железы. В вариантах осуществления раковая клетка представляет собой клетку рака поджелудочной железы. В вариантах осуществления раковая клетка представляет собой клетку рака головного мозга. В вариантах осуществления раковая клетка представляет собой клетку рака печени. В вариантах осуществления раковая клетка представляет собой клетку рака желудка. В вариантах осуществления раковая клетка представляет собой клетку саркомы. В вариантах осуществления раковая клетка представляет собой клетку трижды негативного рака молочной железы.

[0286] В соответствии со способами в рамках изобретения, пациенту вводят эффективное количество одного или более агентов в рамках изобретения. Термины эффективное количество и эффективная доза используют взаимозаменяемо. Термин эффективное количество определяется как любое количество, необходимое для получения желаемого физиологического ответа (например, для лечения рака). Специалист в данной области может эмпирически определить эффективные количества и схемы введения агента. Диапазоны доз для введения являются диапазоны, достаточно большие для получения желаемого эффекта, при котором затрагиваются один или несколько симптомов заболевания или расстройства (например, уменьшаются или отсрочиваются). Дозировка не должна быть настолько большой, чтобы вызывать существенные побочные эффекты, такие как нежелательные перекрестные реакции, анафилактические реакции и тому подобное. Как правило, дозировка будет варьировать в зависимости от возраста, состояния, пола, типа заболевания, степени заболевания или расстройства, пути введения или от того, включены ли в схему другие лекарственные препараты, и может быть определена специалистом в данной области. Дозировку может скорректировать конкретный врач в случае каких-либо противопоказаний. Дозировки можно варьировать и можно вводить в виде одного или нескольких введений ежедневно, в течение одного или нескольких дней. Рекомендации по соответствующим дозировкам для данных классов фармацевтических продуктов можно найти в литературе. Например, для данного параметра эффективное количество будет показывать увеличение или уменьшение по меньшей мере на 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 40%, 50%, 60%, 75%, 80%, 90% или по меньшей мере на 100%. Эффективность также может быть выражена как «кратное» увеличение или уменьшение. Например, терапевтически эффективное количество может иметь по меньшей мере 1,2-кратное, 1,5-кратное, 2-кратное, 5-кратное или более влияние по сравнению с контролем. Точная доза и состав будут зависеть от цели лечения и будут определены специалистом в данной области с использованием известных методик (см., например, Lieberman, Pharmaceutical Dosage Forms (vols. 1-3, 1992); Lloyd, The Art, Science and Technology of Pharmaceutical Compounding (1999); Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20^th Edition, Gennaro, Editor (2003), и Pickar, Dosage Calculations (1999)).

[0287] Для профилактического применения терапевтически эффективное количество композиции химерного поксвируса, описанной в настоящем описании, вводят пациенту до или во время раннего начала (например, при начальных признаках и симптомах рака). Терапевтическое лечение включает введение пациенту терапевтически эффективного количества агентов, описанных в настоящем описании, после постановки диагноза или развития заболевания. Таким образом, в другом аспекте предложен способ лечения заболевания (например, рака) у пациента.

[0288] Термины «пациент», «пациент», «индивидуум» и т.д. не предназначены быть ограничивающими и в целом могут быть взаимозаменяемыми. Таким образом, индивидуум, описанный как «пациент», не обязательно имеет данное заболевание, но может просто обратиться за медицинской помощью.

[0289] В рамках изобретения «лечить» или «лечение» состояния, заболевания или расстройства или симптомов, ассоциированных с состоянием, заболеванием или расстройством, относится к подходу для получения благотворных или желаемых результатов, включая клинические результаты. Благотворные или желаемые клинические результаты могут включать, без ограничения, облегчение или улучшение одного или более симптомов или состояний, уменьшение степени состояния, расстройства или заболевания, стабилизацию течения состояния, расстройства или заболевания, предотвращение развития состояния, расстройства или заболевания, предотвращение распространения состояния, расстройства или заболевания, задержку или замедление прогрессирования состояния, расстройства или заболевания, задержку или замедление состояния, расстройства или начала заболевания, улучшение или временное облегчение течения состояния, расстройства или заболевания, и ремиссию, частичную ли или полную. «Лечение» также может означать продление выживаемости пациента сверх ожидаемого при отсутствии лечения. «Лечение» также может означать ингибирование прогрессирования состояния, расстройства или заболевания, замедление прогрессирования состояния, расстройства или заболевания, хотя в некоторых случаях оно предполагает постоянное прекращение прогрессирования состояния, расстройства или заболевания. В рамках изобретения термины «лечение», «лечить» или «обработка» относятся к способу уменьшения воздействия одного или нескольких симптомов заболевания или состояния, характеризующегося экспрессией протеазы или симптома заболевания или состояния, характеризующегося экспрессией протеазы. Таким образом, в раскрытом способе лечение может означать уменьшение тяжести установленного заболевания, состояния или симптома заболевания или состояния (например, рака) на 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% или 100%. Например, способ лечения заболевания считается лечением, если у пациента наблюдается уменьшение на 10% одного или нескольких симптомов заболевания по сравнению с контролем. Таким образом, уменьшение может быть на 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100% или уменьшением на любой процент сокращением между 10% и 100% по сравнению с нативными или контрольными уровнями. Понятно, что лечение не обязательно относится к излечению или полного прекращения заболевания, состояния или симптомов заболевания или состояния. Кроме того в рамках изобретения ссылки на уменьшение, снижение или ингибирование включают изменение на 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% или более по сравнению с контрольным уровнем, и такие термины могут включать, но не обязательно включать полную элиминацию.

[0290] Независимо от того, как составлены композиции химерного поксвируса, требуемая дозировка будет зависеть от пути введения, природы состава, природы состояния пациента, например, незрелости иммунной системы или желудочно-кишечного расстройства, размеров, массы, площади поверхности, возраста и пола пациента, других вводимых лекарственных препаратов и суждений лечащих врачей-клиницистов. в качестве альтернативы или в дополнение, дозировку можно выразить в виде БОЕ/кг сухой массы.

[0291] Введение может быть однократным или множественным (например, 2- или 3-, 4-, 6-, 8-, 10-, 20-, 50-, 100-, 150-кратные или более). Продолжительность лечения любой композицией, предоставленной в настоящем описании, может быть любой длительности времени, начиная с одного дня и заканчивая продолжительностью жизни хозяина (например, много лет). Например, композицию можно вводить один раз в неделю (например, в течение от 4 недель до многих месяцев или лет); один раз в месяц (например, от трех до двенадцати месяцев или в течение многих лет) или один раз в год в течение периода 5 лет, десять лет или дольше Также отмечено, что частоту лечения можно изменять. Например, композиции согласно настоящему изобретению можно вводить один раз (или два раза, три раза и т.д.) ежедневно, еженедельно, ежемесячно или ежегодно.

[0292] Композиции также можно вводить в сочетании с другими терапевтическими агентами. В вариантах осуществления композиции также можно вводить в сочетании с противораковыми агентами. Другие терапевтические агенты будут варьировать в зависимости от конкретного расстройства, но могут включать, например, модификацию диеты, гемодиализ, терапевтические агенты, такие как бензоат натрия, фенилацетат, аргинин или хирургические средства. Одновременное введение двух или более терапевтических агентов не требует, чтобы агенты вводили в одно и то же время или одним и тем же путем, при условии, что имеется наложение периода времени, в течение которого агенты оказывают свое терапевтическое действие. Предполагается одновременное или последовательное введение, как и введение в разные дни или недели.

[0293] Соединения, описанные в настоящем описании, можно применять в комбинации друг с другом, с другими активными агентами (например, противораковыми агентами), о которых известно, что они полезны при лечении заболеваний, описанных в настоящем описании, (например, рака молочной железы, рака толстой кишки, рака почки, лейкоза, рака легкого, меланомы, рака яичников, рака предстательной железы, рака поджелудочной железы, рака головного мозга, рака печени, рака желудка или саркомы), или со вспомогательными агентами, могут быть неэффективными сами по себе, но могут способствовать эффективности активного агента.

[0294] В вариантах осуществления способ включает введение терапевтического агента. В вариантах осуществления терапевтический агент представляет собой ингибитор белка контрольной точки. В вариантах осуществления терапевтический агент представляет собой ипилимумаб. В вариантах осуществления терапевтический агент представляет собой пембролизумаб. В вариантах осуществления терапевтический агент представляет собой ниволумаб. В вариантах осуществления терапевтический агент представляет собой талимоген лагерпарепвек. В вариантах осуществления терапевтический агент представляет собой дурвалумаб. В вариантах осуществления терапевтический агент представляет собой даклизумаб. В вариантах осуществления терапевтический агент представляет собой авелумаб. В вариантах осуществления терапевтический агент представляет собой атезолизумаб. В вариантах осуществления химерный поксвирус и терапевтический агент вводят в комбинированном синергическом количестве. В вариантах осуществления химерный поксвирус и терапевтический агент вводят одновременно. В вариантах осуществления химерный поксвирус и терапевтический агент вводят последовательно.

[0295] В некоторых вариантах осуществления совместное введение включает введение одного активного агента в течение 0,5, 1, 2, 4, 6, 8, 10, 12, 16, 20 или 24 часов после второго активного агента (например, противоракового агента). Совместное введение включает введение двух активных агентов одновременно, приблизительно одновременно (например, в течение приблизительно 1, 5, 10, 15, 20, или 30 минут один после другого) или последовательно в любом порядке. В некоторых вариантах осуществления совместное введение можно осуществлять посредством приготовления совместного состава, то есть получения единой фармацевтической композиции, включающей оба активных агента. В других вариантах осуществления активные агенты можно составить отдельно. В другом варианте осуществления активные и/или вспомогательные агенты могут быть связаны или конъюгированы друг с другом.

[0296] «Противораковый агент» используют в соответствии с его общим, обычным значением, и он относится к композиции (например, соединению, лекарственному средству, антагонисту, ингибитору, модулятору), обладающей противоопухолевыми свойствами или способностью ингибировать рост или пролиферацию клеток. В некоторых вариантах осуществления противораковое средство представляет собой химиотерапевтическое средство. В некоторых вариантах осуществления противораковый агент представляет собой агент, идентифицированный в настоящем описании, который можно использовать в способах лечения рака. В некоторых вариантах осуществления противораковый агент представляет собой агент, одобренный FDA или аналогичным регулирующим органом страны, не являющейся США, для лечения рака. Примеры противораковых агентов включают, без ограничения, ингибиторы MEK (например, MEK1, MEK2, или MEK1 и MEK2) (например, XL518, CI-1040, PD035901, селуметиниб/AZD6244, GSK1120212/траметиниб, GDC-0973, ARRY-162, ARRY-300, AZD8330, PD0325901, U0126, PD98059, TAK-733, PD318088, AS703026, BAY 869766), алкилирующие агенты (например, циклофосфамид, ифосфамид, хлорамбуцил, бусульфан, мелфалан, мехлоретамин, урамустин, тиотепа, нитрозомочевину, азотистые иприты (например, мехлорэтамин, циклофосфамид, хлорамбуцил, мейфалан), этиленимин и метилмеламины (например, гексаметилмеламин, тиотепа), алкилсульфонаты (например, бусульфан), препараты нитрозомочевины (например, кармустин, ломустин, семустин, стрептозоцин), триазены (декарбазин)), антиметаболиты (например, 5-азатиоприн, лейковорин, капецитабин, флударабин, гемцитабин, пеметрексед, ралтитрексед, аналог фолиевой кислоты (например, метотрексат) или аналоги пиримидина (например, фторурацил, флоксуридин, цитарабин), аналоги пурина (например, меркаптопурин, тиогуанин, пентостатин) и т.д.), растительные алкалоиды (например, винкристин, винбластин, винорелбин, виндезин, подофиллотоксин, паклитаксел, доцетаксел и т.д.), ингибиторы топоизомеразы (например, иринотекан, топотекан, амсакрин, этопозид (VP16), этопозид фосфат, тенипозид и т.д.), противоопухолевые антибиотики (например, доксорубицин, адриамицин, даунорубицин, эпирубицин, актиномицин, блеомицин, митомицин, митоксантрон, пликамицин и т.д.), соединения на основе платины или платиносодержащие агенты (например, цисплатин, оксалоплатин, карбоплатин), антрацендион (например, митоксантрон), замещенная мочевина (например, гидроксимочевина), производное метилгидразина (например, прокарбазин), супрессоры синтеза коры надпочечников (например, митотан, аминоглутетимид), эпиподофиллотоксины (например, этопозид), антибиотики (например, даунорубицин, доксорубицин, блеомицин), ферменты (например, L-аспарагиназа), ингибиторы сигнального пути митоген-активируемой протеинкиназы (например, U0126, PD98059, PD184352, PD0325901, ARRY-142886, SB239063, SP600125, BAY 43-9006, вортманнин или LY294002, ингибиторы Syk, ингибиторы mTOR, антитела (например, ритуксан), госсифол, генасенс, полифенол Е, хлорофузин, полностью трансретиноевая кислота (ATRA), бриостатин, родственный фактору некроза опухоли лиганд, индуцирующий апоптоз (TRAIL), 5-аза-2'-дезоксицитидин, полностью трансретиноевая кислота, доксорубицин, винкристин, этопозид, гемцитабин, иматиниб (Гливек.RTM.), гелданамицин, 17-N-аллиламино-17-деметоксигелданамицин (17-AAG), флавопиридол, LY294002, бортезомиб, герцептин, BAY 11-7082, PKC412, PD184352, 20-эпи-1, 25 дигидроксивитамин D3; 5-этинилурацил; абиратерон; акларубицин; ацилфульвен; адеципенол, адозелесин, альдеслейкин, ALL-TK антагонисты, алтретамин, амбамустин, амидокс, амифостин, аминолевулиновую кислоту, амрубицин, амсакрин, анагрелид, анастрозол, андрографолид; ингибиторы ангиогенеза, антагонист D, антагонист G, антареликс; антидорсализующий морфогенетический белок-1; антиандроген, карциному предстательной железы, антиэстроген; антинеопластон; антисмысловые олигонуклеотиды, афидиколина глицинат, гены-модуляторы апоптоза, регуляторы апоптоза, аруриновую кислоту, apa-CDP-DL-РТВА, аргинин-деаминазу, асулакрин, атаместан, атримустин, аксинастатин 1, аксинастатин 2, аксинастатин 3, азасетрон, азатоксин, азатирозин, производные баккатина III; баланол, батимастат, антагонисты BCR/ABL, бензохлорины, бензоилстауроспорин, производные бета-лактама, бета-алетин, бетакламицин В, бетулиновую кислоту; ингибитор bFGF; бикалутамид, бисантрен, бисазиридинил спермин, биснафид, бистратен А, бизелесин, брефлат, бропиримин, будотитан, бутионина сульфоксимин, кальципотриол, калфостин С, производные камптотецина, канарипокс IL-2; капецитабин, карбоксамид -аминотриазол, карбоксиамидотриазол, CaRest M3, CARN 700; ингибитор на основе хрящей, карзелесин, ингибиторы казеин - киназы (ICOS), кастаноспермин, цекропин В, цетрореликс, хлорины, хлорхиноксалина сульфонамид, цикапрост, цис-порфирин, кладрибин, аналоги кломифена, клотримазол, коллистмицин А, коллисмицин В, комбретастатин А4, аналог комбретастатина, конагенин, крамбесцидин 816, криснатол, криптофицин 8; производные криптофицина А; курацин А, циклопентантрахиноны, циклоплатам, ципемицин, цитарабина окфосфат, цитолитический фактор, цитостатин, дакликсимаб, децитабин, дегидродидемин В, деслорелин, дексаметазон, дексифосфамид, дексразоксан, дексверапамил, диазиквон, дидемнин В, дидокс, диэтилнорспермин, дигидро-5-азацитин, 9-диоксамицин, дифенилспиромустин, докозанол; доласетрон, доксифлуридин, дролоксифен, дронабинол, дуокармицин SA, эбселен, экомустин, эделфосин, эдреколомаб, эфлорнитин, элемен, эмитефур, эпирубицин, эпристерид, аналог эстрамустина, агонисты эстрогенов, антагонисты эстрогенов, этанидазол, этопозида фосфат, эксеместан, фадрозол, фазарабин, фенретинид, филграстим, финастерид; флавопиритол; флезеластин, флуастерон, флударабин, флуородаунорубицина гидрохлорид, форфенимекс, форместан, фостриецин, фотемустин, гадолиния тексафирин, галлия нитрат, галоцитабин, ганиреликс, ингибиторы желатиназы, гемцитабин, ингибиторы глутатиона; гепсульфам, герегулин, гексаметиленбисацетамид, гиперицин, ибандроновую кислоту, идарубицин, идоксифен, идрамантон, илмофосин, иломастат, имидазоакридоны, имиквимод, иммуностимулирующие пептиды; ингибитор рецептора инсулиноподобного фактора-1 роста, агонисты интерферона, интерфероны, интерлейкины, йобенгуан, иододоксорубицин, ипомеанол, 4-, ироплакт, ирсогладин, изобенгазол, ламелларина-N триацетат; ланреотид, лейнамицин, ленограстим, летинана сульфат, лептолстатин, летрозол, фактор ингибирования лейкоза; альфа-интерферон лейкоцитов, лейпролид+эстроген+прогестерон, лейпрорелин, левамизол, лиарозол, аналог линейного полиамина, липофильный дисахарид - пептид, липофильные соединения платины, лиссоклинамид 7, лобаплатин, ломбрицин, лометрексол, лонидамин, лосоксантрон, ловастатин, локсоринбин, луртотекан; лютеция тексафирин, лизофиллин, литические пептиды, маитансин, манностатин А, маримастат, мазопрокол, маспин, ингибиторы матрилизина, ингибиторы матриксной металлопротеиназы, меногарил, мербарон, метерелин, мепиониназу, метоклопромид; ингибитор MIF; мифепристон, милтефосин, миримостим, «ошибочная» двухнитевая РНК, митогуазон, митолактол, аналоги митомицина, митонафид; митотоксиновый фактор роста фибробластов сапорин; митоксантрон, мофаротен, молграмостим, моноклональное антитело, хорионический гонадотропный гормон человека; монофосфорил-липид А+sk клеточной стенки микобактерии; мопидамол; ингибитор гена множественной устойчивости к лекарственным препаратам; терапия супрессором множественных опухолей-1; противораковый агент горчицы; микапероксид В, экстракт стенок микобактериальных клеток, мириапорон, N-ацетилдиналин, N-замещенные бензамиды, нафарелин, нагрестип, налоксон+пентазоцин, напавин, нафтерпин, нартограстим, недаплатин, неморубицин, неридроновую кислоту, нейтральную эндопептидазу, нилутамид, нисамицин, модуляторы закиси азота, нитроксидный антиоксидант, нитруллин, 06-бензилгуанин, октреотид, окиценон, олигонуклеотиды, онапристон, ондансетрон, орацин, индуктор орального цитокина, ормаплатин, осатерон, оксалиплатин; оксауномицин, палауамин, пальмитоилризоксин, памидроновую кислоту, панакситриол, паномифен, парабактин, пазеллиптин, пегаспаргазу, пелдесин; пентозанполисульфат натрия; пентостатин, пентрозол, перфлуброн, перфосфамид, периллиловый спирт, феназиномицин, фенилацетат, ингибиторы фосфатазы, пицибанил; пилокарпина гидрохлорид, пирарубицин, пиритрексим; плацетин А, плацетин В; ингибитор активатора плазминогена, комплекс платины, соединения платины, комплекс платина-триамин, порфимер натрия; порфиромицин, преднизон, пропил-бис-акридон, простагландин J2, ингибиторы протеасом; иммуномодулятор на основе белка А; ингибитор протеинкиназы С, ингибиторы протеинкиназы С, микроалгал, ингибиторы протеинтирозин фосфатазы, ингибиторы пуриннуклеозид-фосфорилазы, пурпурины, пиразолакридин; конъюгат пиридоксилированного гемоглобина с полиоксиэтиленом; антагонисты raf; ралтитрексед, рамосетрон, ингибиторы ras-фарнезилротеинтрансферазы, ингибиторы ras; ингибитор ras-GAP; деметилированный ретеллиптин, этидронат рения Re 186, ризоксин, рибозимы, ретинамид RII, роглетимид, рогитукин, ромуртид; рохинимекс; рубигинон B1; рубоксил, сафингол, сайнтопин, SarCNU, саркофитол А, сарграмостим, миметики Sdi 1, семустин; образующийся при старении ингибитор 1; смысловые олигонуклеотиды; ингибиторы трансдукции сигнала; модуляторы трансдукции сигнала; одноцепочечный антигенсвязывающий белок; сизофиран; собузоксан; натрия борокаптат; натрия фенилацетат; солверол; соматомединсвязывающий белок; сонермин; спарфозовая кислота; спикамицин D; спиромустин; спленопентин; спонгистатин 1; скваламин; ингибитор стволовых клеток; ингибиторы деления стволовых клеток; стипиамид; ингибиторы стромелизина; сульфинозин; антагонист суперактивного вазоактивного интестинального пептида; сурадиста; сурамин; свайнсонин; синтетические гликозаминогликаны; таллимустин; тамоксифена метиодид; тауромустин; тазаротен; натриевая соль текогалана; тегафур; теллурапирилиум; ингибиторы теломеразы; темопорфин; темозоломид; тенипозид; тетрахлородекаоксид; тетразомин; талибластин; тиокоралин; тромбопоэтин; миметик тромбопоэтина; тималфазин; агонист рецептора тимопоэтина; тимотринан; тиреотропный гормон; тинэтилэтиопурпурин; тирапазамин; титаноцена бихлорид; топсентин; торемифен; фактор тотипотентных стволовых клеток; ингибиторы трансляции; третиноин; триацетилуридин; трицирибин; триметрексат; трипторелин; трописетрон; туростерид; ингибиторы тирозинкиназы; тирфостины; ингибиторы UBC; убенимекс; выведенный из урогенитального синуса ингибирующий рост фактор; антагонисты рецептора урокиназы; вапреотид; вариолин В; векторная система, генная терапия эритроцитов; веларезол; верамин; вердинс; вертепорфин; винорелбин; винксалтин; витаксин; ворозол; занотерон; зениплатин; зиласкорб; зиностатина стималамер, адриамицин, дактиномицин, блеомицин, винбластин, цисплатин, ацивицин; акларубицин; акодазола гидрохлорид; акронин; адозелезин; алдеслейкин; алтретамин; амбомицин; аметантрона ацетат; аминоглютетимид; амсакрин; анастрозол; антрамицин; аспарагиназа; асперлин; азацитидин; азетепа; азотомицин; батимастат; бензодепа; бикалутамид; бисантрена гидрохлорид; биснафида димесулат; бизелезин; блеомицина сульфат; бреквинар натрия; бропиримин; бусульфан; кактиномицин; калустерон; карацемид; карбетимер; карбоплатин; кармустин; карубицина гидрохлорид; карзелесин; цедефингол; хлорамбуцил; циролемицин; кладрибин; криснатола мезилат; циклофосфамид; цитарабин; дакарбазин; даунорубицина гидрохлорид; децитабин; дексормаплатин; дезагуанин; дезагуанина мезилат; диазиквон; доцетаксел; доксорубицин; доксорубицина гидрохлорид; дролоксифен; дролоксифена цитрат; дромостанолона пропионат; дуазомицин; эдатрексат; эфлорнитина гидрохлорид; элсамитруцин; энлоплатин; энпромат; эпипропидин; эпирубицина гидрохлорид; эрбулозол; эзорубицина гидрохлорид; эстрамустин; эстрамустина фосфат натрия; этанидазол; этопосид; этопосида фосфат; этоприн; фадрозола гидрохлорид; фазарабин; фенретинид; флоксуридин; флударабина фосфат; фторурацил; фторцитабин; фосквидон; фостриэцин-натрий; гемцитабин; гемцитабина гидрохлорид; гидроксимочевина; идарубицина гидрохлорид; ифосфамид; илмофосин; интерлейкин II (включая рекомбинантный интерлейкин II или rIL.sub.2), интерферон альфа-2a; интерферон альфа-2b; интерферон альфа-n1; интерферон альфа-n3; интерферон бета-1a; интерферон гамма-1b; ипроплатин; иринотекана гидрохлорид; ланреотида ацетат; летрозол; леупролида ацетат; лиарозола гидрохлорид; лометрексол натрий; ломустин; лозоксантрона гидрохлорид; масопрокол; майтансин; мехлорэтамина гидрохлорид; мегестрола ацетат; меленгестрола ацетат; мелфалан; меногарил; меркаптопурин; метотрексат; метотрексат натрия; метоприн; метуредепа; митиндомид; митокарцин; митокромин; митогиллин; митомалцин; митомицин; митоспер; митотан; митоксантрона гидрохлорид; микофеноловая кислота; нокодазол; ногаламицин; ормаплатин; оксисуран; пегаспаргаза; пелиомицин; пентамустин; пепломицина сульфат; перфосфамид; пипоброман; пипосульфан; пироксантрона гидрохлорид; пликармицин; пломестан; порфимер натрия; порфиромицин; преднимустин; прокарбазина гидрохлорид; пуромицин; пуромицина гидрохлорид; пиразофурин; рибоприн; роглетимид; сафингол; сафингола гидрохлорид; семустин; симтразен; спарфосат натрия; спарсомицин; спирогермания гидрохлорид; спиромустин; спироплатин; стрептонигрин; стрептозоцин; сулофенур; тализомицин; текогалан натрия; тегафур; телоксантрона гидрохлорид; темопорфин; тенипозид; тероксирон; тестолактон; тиамиприн; тиогуанин; тиотепа; тиазофурин; тирапазамин; торемифена цитрат; трестолона ацетат; трицирибина фосфат; триметрексат; триметрексата глукуронат; трипторелин; тубулозола гидрохлорид; урациловый иприт; уредепа; вапреотид; вертепорфин; винбластина сульфат; винкристина сульфат; виндесин; виндесина сульфат; винепидина сульфат; винглицината сульфат; винлеурозина сульфат; винорелбина тартрат; винросидина сульфат; винзолидина сульфат; ворозол; зениплатин; зиностатин; зорубицина гидрохлорид, агенты, которые останавливают клетки в фазах G2-M и/или модулируют образование или стабильность микротрубочек, (например, Taxol.TM (т.е. паклитаксел), Taxotere.TM, соединения, содержащие таксановый скелет, эрбулозол (т.е. R-55104), доластатин 10 (т.е. DLS-10 и NSC-376128), мивобулин изетионат (т.е. в виде CI-980), винкристин, NSC-639829, дискодермолид (т.е. в виде NVP-XX-A-296), ABT-751 (Abbott, т.е. E-7010), алториртины (например, алториртин и алториртин C), Спонгистатины (например, спонгистатин 1, спонгистатин 2, спонгистатин 3, спонгистатин 4, спонгистатин 5, спонгистатин 6, спонгистатин 7, спонгистатин 8 и спонгистатин 9), цемадотина гидрохлорид (т.е. LU-103793 и NSC-D-669356), эпотилоны (например, эпотилон A, эпотилон B, эпотилон C (т.е. дезоксиэпотилон или dEpoA), эпотилон D (т.е. KOS-862, dEpoB и дезоксиэпотилон B), эпотилон E, эпотилон F, эпотилон B N-оксид, эпотилон A N-оксид, 16-аза-эпотилон B, 21-аминоэпотилон B (т.е. BMS-310705), 21-гидроксиэпотилон D (т.е. дезоксиэпотилон F и dEpoF), 26-фторэпотилон, ауристатин PE (т.е. NSC-654663), соблидотин (т.е. TZT-1027), винкристина сульфат, криптофицин 52 (т.е. LY-355703), витилевуамид, тубулизин А, канаденсол, центауреидин (т.е. NSC-106969), онкоцидин A1 (т.е. BTO-956 и DIME), фиджанолид В, лаулималид, наркозин (также известный как NSC-5366), наскапин, гемиастерлин, ванадоцен ацетилацетонат, монсатрол, инаноцин (т.е. NSC-698666), элеутеробины (такие как дезметилэлеутеробин, дезэтилэлеутеробин, изоэлеутеробин A и Z-элеутеробин), карибеозид, карибеолин, галихондрин В, диазонамид А, таккалонолид А, диозостатин, (-)-фенилагистин (т.е. NSCL-96F037), миосеверин B, ресверастатин фосфат натрий, стероиды (например, дексаметазон), финастерид, ингибиторы ароматазы, агонисты гонадотропин-рилизинг-гормона (GnRH), такие как гозерелин или лейпролид, адренокортикостероиды (например, преднизон), прогестины (например, гидроксипрогестерон капроат, мегестрол ацетат, медроксипрогестерон ацетат), эстрогены (например, диэтилстилбестрол, этинилэстрадиол), антиэстрогены (например, тамоксифен), андрогены (например, тестостерона пропионат, флуоксиместерон), антиандрогены (например, флутамид), иммуностимуляторы (например, Bacillus Calmette-Guérin (BCG), левамизол, интерлейкин-2, альфа-интерферон и т. д.), моноклональные антитела (например, моноклональные анти-CD20, анти-HER2, анти-CD52, анти-HLA-DR и анти-VEGF антитела), иммунотоксины (например, конъюгат моноклонального анти-CD33 антитела и калихеамицина, конъюгат моноклонального анти-CD22 антитела и экзотоксина синегнойной палочки и т.д.), радиоиммунтеапия (например, моноклональное анти-CD20 антитело, конъюгированное с¹¹¹In,⁹⁰Y или¹³¹I и т.д.), триптолид, гомогаррингтонин, дактиномицин, доксорубицин, эпирубицин, топотекан, итраконазол, виндезин, церивастатин, винкристин, дезоксиаденозин, сертралин, питавастатин, иринотекан, клофазимин, 5-нонилокситриптамин, вемурафениб, дабрафениб, эрлотиниб, гефитиниб, ингибиторы EGFR, терапия или препарат, нацеленный на рецептор эпидермального фактора роста (EGFR) (например, гефитиниб (Iressa™), эрлотиниб (Tarceva™), цетуксимаб (Erbitux™), лапатиниб (Tykerb™), панитумумаб (Vectibix™), вандетаниб (Caprelsa™), афатиниб/BIBW2992, CI-1033/канертиниб, нератиниб/HKI-272, CP-724714, TAK-285, AST-1306, ARRY334543, ARRY-380, AG-1478, дакомитиниб/PF299804, OSI-420/ десметил эрлотиниб, AZD8931, AEE788, пелитиниб/EKB-569, CUDC-101, WZ8040, WZ4002, WZ3146, AG-490, XL647, PD153035, BMS-599626.

VII. Способы обнаружения

[0297] В другом аспекте изобретение относится к способ обнаружения рака у пациента, при этом способ включает в себя приведение в контакт раковой клетки с химерным поксвирусом в рамках изобретения, включая его варианты осуществления, и обеспечение возможности репликации химерного поксвируса, тем самым обнаруживая раковую клетку. В вариантах осуществления химерный поксвирус содержит последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую определяемый фрагмент. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая определяемый фрагмент, кодирует флуоресцентный фрагмент. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая определяемый фрагмент, кодирует mCherry. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая определяемый фрагмент, кодирует Emerald. В вариантах осуществления последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая определяемый фрагмент, кодирует люциферазу светлячков. В вариантах осуществления раковая клетка находится в пациенте. В вариантах осуществления пациент представляет собой млекопитающее. В вариантах осуществления пациент представляет собой человека.

ПРИМЕРЫ

[0298] Следующие примеры предложены для иллюстрации, но не для ограничения заявленного изобретения.

Пример 1. Новые эффективные химерные поксвирусы для онколитической иммунотерапии рака

[0299] Рак является второй по значимости причиной смерти в Соединенных Штатах. В последние годы был достигнут значительный прогресс в иммунотерапии рака, включающий ингибиторы иммунных контрольных точек, Т-клетки с химерными антигенными рецепторами и онколитические вирусы.

[0300] Онколитические вирусы представляют собой встречающиеся в природе или генетически модифицированные вирусы, которые инфицируют, размножаются и в конечном итоге убивают раковые клетки, оставляя при этом здоровые клетки неповрежденными (1, 2). Недавно было завершено клиническое исследование III фазы онколитического вируса простого герпеса T-VEC на 436 пациентах с нерезектабельной меланомой IIIB, IIIC или IV стадии, которое, как сообщалось, достигло своей первичной конечной точки с устойчивой частотой ответа 16,3% у пациентов, получавших T-VEC по сравнению с 2,1% у пациентов, получавших GM-CSF (3). На основании результатов этого испытания FDA одобрило T-VEC 27 октября 2015 года. Одобрение FDA первого онколитического вируса проложило путь к перспективной области.

[0301] На различных фазах клинических испытаний протестировали конструкты онколитического вируса по меньшей мере восьми различных видов, включая аденовирус, вирус простого герпеса-1, вирус ньюкаслской болезни, реовирус, вирус кори, вирус Коксаки, вирус Сенека-Вэлли и вирус осповакцины. Стало ясно, что онколитические вирусы хорошо переносятся больными раком. Однако клинические преимущества онколитических вирусов в качестве самостоятельного лечения остаются ограниченными (5). Вследствие опасений по поводу безопасности онколитических вирусов как в доклинических, так и в клинических исследованиях использовали только высоко аттенуированные онколитические вирусы (либо авирулентные естественным образом, либо аттенуированные посредством генной инженерии). Поскольку безопасность онколитических вирусов в настоящее время четко установлена, пришло время разработать и протестировать онколитические вирусы с максимальной противоопухолевой активностью. Онколитические вирусы с сильным онколитическим эффектом высвобождают многочисленные опухолевые антигены, что приводит к сильному иммунотерапевтическому эффекту.

[0302] Вирус осповакцины, прототип члена семейства поксвирусов, использовали в качестве противооспенной вакцины для ликвидации оспы, которая, по оценкам, убила 500 миллионов человек только в 19 и 20 веках. Таким образом, это, вероятно, наиболее успешный живой биотерапевтический агент. Безопасность вируса осповакцины хорошо продемонстрирована миллионами людей во всем мире. Вирус осповакцины также является первым онколитическим вирусом, продемонстрировавшим вирусный онколиз в лаборатории. Вирус осповакцины в качестве онколитического вируса протестировали во многих клинических испытаниях, и было показано, что он хорошо переносится пациентами с поздней стадией рака (2). Несколько исследований показывают, что с точки зрения онколитической активности вирус осповакцины превосходит аденовирус (6), один из наиболее изученных видов онколитических вирусов и первый онколитический вирус, одобренный для лечения рака в Китае (7). Помимо вируса осповакцины другие члены семейства поксвирусов также протестировали в качестве онколитических вирусов, в том числе поксвирус енотов (8), орф-вирус (9) и вирус миксомы (10).

[0303] Химерные поксвирусы обладают потенциалом комбинировать благоприятные свойства от разных видов вирусов и, таким образом, превосходят отдельные вирусы дикого типа. Поскольку ортопоксвирусы и парапоксвирусы являются антигенно различимыми, эффективный химерный ортопоксвирус и эффективный химерный парапоксвирус, полученные в этом исследовании, потенциально можно объединить в одну и ту же схему лечения для достижения максимальной терапевтической эффективности. Заявители получили базы химерных ортопоксвирусов и химерных парапоксвирусов. Некоторые изоляты химерных ортопоксвирусов и парапоксвирусов демонстрируют превосходную способность уничтожать клетки в клеточных линиях рака панели NCI-60 по сравнению с их отдельными родительскими вирусами дикого типа.

[0304] Получение пулов химерных вирусов и выделение отдельных химерных вирусов. Пул химерных ортопоксвирусов был получен путем коинфицирования клеток CV-1 штаммом Brighton вируса коровьей оспы, штаммом Herman поксвируса енотов, штаммом Utrecht поксвируса кроликов и штаммами WR, IHD, Elstree, CL, Lederle-Chorioallantoic и AS вируса осповакцины при множественности заражения (MOI) 0,01 на вирус. Для получения пула химерных парапоксвирусов клетки MDBK коинфицировали штаммом NZ2 орф-вируса и штаммом TJS псевдопоксвируса коров при MOI 0,1. Пилотные эксперименты заявителей показывают, что клетки CV-1 восприимчивы ко всем ортопоксвирусам, использованным в этом исследовании, и что и орф-вирус, и псевдопоксвирус коров инфицируют и образуют бляшки в клетках MDBK.

[0305] 100 бляшек химерных ортопоксвирусов и 100 бляшек химерных парапоксвирусов были отобраны из клеток CV-1, инфицированных пулом химерного ортопоксвируса, и клеток MDBK, инфицированных пулом химерного парапоксвируса, соответственно. Эти двести бляшек дополнительно очищали методом бляшкообразования еще два раза в соответствующих клетках с получением 200 клонально очищенных индивидуальных изолятов химерного вируса. Вирусы # 14-113 являются изолятами химерных ортопоксвирусов, тогда как вирусы # 114-213 являются изолятами химерных парапоксвирусов.

[0306] Идентификация новых эффективных изолятов химерного поксвируса посредством скрининга высокой производительности в клеточных линиях NCI-60. Активность по уничтожению опухолевых клеток у 200 изолятов химерных ортопоксвирусов и химерных парапоксвирусов, а также 11 штаммов родительского вируса и 2 контрольных онколитических вирусов (GLV-1h68 и OncoVEX GFP) оценивали и сравнивали на панели клеточных линий NCI-60 (Таблица 1). GLV-1h68 является одним из наиболее изученных онколитических вирусов коровьей оспы и в настоящее время находится в клинической разработке. OncoVEX GFP имеет такую же основу, что и T-VEC, онколитический вирус простого герпеса-1 и первый онколитический вирус, одобренный FDA. Каждую клеточную линию инфицировали каждым вирусом при MOI 0,01. Жизнеспособность клеток измеряли через 96 ч после инфицирования, используя анализы MTS. Используемое количество вируса (MOI 0,01) в этом эксперименте со скринингом высокой производительности намеренно поддерживали на низком уровне и оптимизировали для сравнения уничтожения клеток в адгезивных клеточных линиях (большинство клеточных линий на панели NCI-60 являются адгезивными клетками), поэтому можно выделять новые эффективные изоляты вируса. Это количество вируса, однако, было слишком малым, чтобы увидеть значительное и последовательное уничтожение клеток в суспензионных клеточных линиях. Вот почему результаты для 6 клеточных линий лейкоза не включили в анализ с целью сравнения вирусов.

[0307] Таблица 1. Каталог клеточных линий NCI-60

[0308] Среди 100 новых изолятов химерных ортопоксвирусов изоляты #17 (SEQ ID NO: 3) и #33 (SEQ ID NO: 1) продемонстрировали значительно лучшее уничтожение клеток в клеточных линиях солидных опухолей NCI-60, чем 9 родительских штаммов ортопоксвируса и два контрольных вируса (Фиг. 1). Из 100 новых изолятов парапоксвируса выделили изолят #189 (SEQ ID NO: 2), продемонстрировавший значительно лучшее уничтожение клеток, чем два родительских штамма парапоксвируса и контрольные вирусы (Фиг. 2). Все три новых изолята химерных вирусов (#17, #33 и #189) вызывали значительную гибель клеток в большинстве клеточных линиях солидного рака NCI-60 даже при низкой MOI 0,01. В целом, штаммы ортопоксвируса и изоляты химерного ортопоксвируса были более эффективными, чем штаммы парапоксвируса и изоляты химерного парапоксвируса в уничтожении раковых клеток при низкой MOI 0,01.

[0309] Геномное секвенирование #33 и #189. Геномные ДНК новых изолятов поксвирусов #33 и #189 выделяли из очищенных вирионов и подвергали секвенированию следующего поколения с использованием Illumina Hiseq 2500 с покрытием более чем 1000х. Гэпы амплифицировали посредством ПЦР и секвенировали посредством секвенирования по Сэнгеру. 189 415 пар оснований (bps) генома #33 были полностью секвенированы, тогда как из 189 генома было получено 138 203 bps. Первоначальный BLAST против GenBank показал, что геномные последовательности как #33, так и #189 не идентичны никаким геномным последовательностям GenBank. #33 ближе к штаммам вируса осповакцины, чем к любым другим ортопоксвирусам. #189 очень близок к штамму NZ2 орф-вируса, одному из родительских парапоксвирусов. Нуклеотидные последовательности всех орф-вирусов, идентифицированных в штамме NZ2 орф-вируса, идентичны таковым в #189. В геноме #189 имеется одна вставка «G» в позиции 6755 по сравнению с NZ2 орф-вируса. В областях инвертированых концевых повторов одна копия повторяющегося элемента удалена, а одна копия другого повторяющегося элемента вставлена в геном #189. В целом, и #33, и #189 представляют новые уникальные изоляты поксвируса.

[0310] Способы и материалы: Клеточные линии: Все линии раковых клеток выращивали в RPMI-1640 (Mediatech, Manassas, VA). Почечный фибробласт клеток (CV-1) африканской зеленой обезьяны и эпителиальные клетки почки коровы (MDBK) получили из Американской коллекции типовых культур (ATCC; Rockville, MD, USA) и выращивали на DMEM (Mediatech, Manassas, VA). Все среды были обогащены 10% FBS (Mediatech, Manassas, VA) и 1% раствором пенициллин-стрептомицина (Mediatech, Manassas, VA). Клетки культивировали при 37°C в 5% CO₂.

[0311] Вирусы: штамм Brighton вируса коровьей оспы, штамм Herman поксвируса енотов, штамм Utrecht поксвируса кроликов, штаммы WR, IHD, Elstree, CL, Lederle-Chorioallantoic и AS вируса осповакцины, штамм NZ2 орф-вируса и штамм TJS псевдопоксвируса коров закупили у ATCC. Все штаммы ортопоксвируса выращивали и титровали в клетках CV-1, а штаммы парапоксвируса выращивали и титровали в клетках MDBK.

[0312] Создание пулов химерного ортопоксвируса и химерного парапоксвируса и выделение отдельных клональных изолятов химерных вирусов: Пул химерных ортопоксвирусов создали посредством коинфицирования клеток CV-1 штаммом Brighton вируса коровьей оспы, штаммом Herman поксвируса енотов, штаммом Utrecht поксвируса кроликов и штаммами WR, IHD, Elstree, CL, Lederle-Chorioallantoic и AS вируса осповакцины при множественности заражения (MOI) 0,01 на вирус. Для создания пула химерных парапоксвирусов клетки MDBK коинфицировали штаммом NZ2 орф-вируса и штаммом TJS псевдопоксвируса коров при MOI 0,1. Инфицированные клетки собирали через 3 дня после инфицирования. Исходный пул химерного ортопоксвируса дополнительно пассировали три раза в клетке CV-1 при MOI 0,1, где исходный пул химерного парапоксвируса дополнительно пассировали три раза в клетках MDBK при MOI 0,1. 100 бляшек химерного ортопоксвируса и 100 бляшек химерного парапоксвируса отобрали из клеток CV-1, инфицированных полученным в итоге пулом химерного ортопоксвируса, и клеток MDBK, инфицированных полученным в итоге пулом химерного парапоксвируса, соответственно. Эти двести бляшек дополнительно очищали методом бляшкообразования два раза в соответствующих клетках с получением 200 клонально очищенных индивидуальных изолятов химерного вируса.

[0313] Скрининг высокой производительности: клеточные линии рака NCI-60 и панель клеточной линии рака поджелудочной железы, включающую PANC-1, MIA-PaCa2, BxPC3, FG, Capan-2 и Su.86.86, распределяли в 96-луночные планшеты (3000 клеток/лунка для клеточных линий солидного рака и 5000/лунка для клеточных линий лейкоза), используя жидкостный манипулятор epMotion 5075 (Eppendorf) в стерильных условиях, инкубировали в течение ночи при 37°C в 5% (об./об.) CO₂. Затем клетки инфицировали 200 изолятами химерного ортопоксвируса и химерного парапоксвируса наряду с 11 родительскими вирусными штаммами и 2 контрольными онколитическими вирусами GLV-1h68 и OncoVEX GFP при MOI 0,01. Жизнеспособность клеток определяли через 96 ч после инфицирования, используя анализы MTS (Promega). Поглощение при 490 нм измеряли с использованием автоматического планшет-ридера BMG PHERAstar (BMG Labtech). Каждый эксперимент проводился в двух повторах. Жизнеспособность клеток для ложно-инфицированных клеток была установлена на 100%.

[0314] Цитотоксичность вирусов в клеточных линиях рака желудка: клетки MKN-45, OCUM-2M и KATO-3 засеивали в 96-луночные планшеты при концентрации 3000 клеток на лунку и инкубировали в течение ночи при 37°C в 5% (об./об.) CO₂. Клетки инфицировали #33, #189, GLV-1h68 и OncoVEX GFP при MOI 0,01, 0,1 и 1. Ежедневно в течение 4 дней проводили мониторинг жизнеспособности клеток, используя анализы MTS. 37°C в 5% (об./об.) CO₂.

[0315] Геномное секвенирование: Геномные ДНК #33 и #189 экстрагировали из очищенных вирионов, используя Wizard Genomic DNA Purification kit (Promega), и фрагментировали посредством обработки ультразвуком. Библиотеки получали, используя KAPA LTP Library Preparation Kit. Секвенирование выполняли, используя Illumina Hiseq 2500

Пример 2. Скрининг высокой производительности в клеточных линиях рака поджелудочной железы

[0316] Клеточные линии рака NCI-60 содержат только солидный рак из 8 различных органов (см. Таблицу 1). Чтобы изучить, будут ли результаты клеточных линий рака NCI-60 воспроизведены при солидном раке из других органов, шесть клеточных линий рака поджелудочной железы (BxPC3, FG, MIA PaCa-2, Capan-2, PANC-1 и SU.86.86) инфицировали при MOI 0,1 теми же вирусами, которые применяли при скрининге высокой производительности в клеточных линиях рака NCI-60. Жизнеспособность клеток вновь измеряли через 96 ч после инфицирования, используя анализы MTS. Изоляты химерного ортопоксвируса #17 и #33 продемонстрировали наилучшее уничтожение клеток среди всех изолятов химерного ортопоксвируса, тогда как изолят химерного парапоксвируса #189 продемонстрировал наилучшее уничтожение клеток среди всех изолятов химерного парапоксвируса. Все они были лучше в уничтожении клеточных линий рака поджелудочной железы, как показано в таблице 2 и на Фиг. 3 и Фиг. 4, чем соответствующие им штаммы родительского вируса и контрольные вирусы GLV-1h68 и OncoVEX GFP. Таким образом, результаты линий раковых клеток NCI-60 были очень хорошо воспроизведены на панели клеточных линий рака поджелудочной железы.

[0317] Таблица 2. Выживаемость клеток рака поджелудочной железы (VACV = вируса осповакцины).

Пример 3. Изолят нового химерного ортопоксвируса #33 и изолят химерного парапоксвируса #189 демонстрируют мощное уничтожение клеток в клеточных линиях рака желудка

[0318] На основе результатов скрининга высокой производительности клеточных линий рака NCI-60 и панели клеточных линий рака поджелудочной железы изолят нового химерного ортопоксвируса #33 и изолят химерного парапоксвируса #189 выбрали для описания дополнительных характеристик. Активность по уничтожению опухолевых клеток изолятов #33 и #189 дополнительно исследовали на трех клеточных линиях рака желудка. Клетки MKN-45, OCUM-2M и KATO-3 инфицировали #33, #189, GLV-1h68 и OncoVEX GFP при MOI 0,01, 0,1 и 1. Ежедневно в течение 4 дней проводили мониторинг жизнеспособности клеток, используя анализы MTS. Клеточные линии MKN-45 и OCUM-2M были наиболее чувствительны к #33, промежуточно чувствительны к GFP OncoVEX и наименее чувствительны к GLV-1h68. При том, что KATO-3 были наиболее чувствительными к GFP OncoVEX при низком MOI 0,01, #33, #189, и GFP OncoVEX одинаково хорошо уничтожали клетки KATO-3 при более высоком MOI (0,1 и 1). Клетки КАТО-3 были наименее чувствительны к GLV-1h68. В целом, #33 наиболее эффективно уничтожает клеточные линии рака желудка, тогда как GLV-1h68 наименее эффективно уничтожает клеточные линии рака желудка (Фиг. 5A-5C).

[0319] 90 генов, которые присутствуют во всех секвенированных ChPV, перечислены вместе с их функцией, если она известна, как указано в таблице 3. Гены названы в честь их аналога VACV-COP. Звездочка * указывает гены, также присутствующие в двух EnPV. Таблица 3 адаптирована из Gubser et al. (Gubser, C., Hue, S., Kellam, P., and Smith, G.L. (2004). Poxvirus genomes: a phylogenetic analysis. J Gen Virol 85, 105-117), который полностью включен в данный документ посредством ссылки и для всех целей.

[0320] Таблица 3. Минимальный генный комплемент хордопоксвирусов. Сокращения: IMV, внутриклеточный зрелый вирус; IEV, внутриклеточный оболочечный вирус; EEV, внеклеточный оболочечный вирус

[0321] Понятно, что примеры и варианты осуществления, описанные в настоящем описании, предназначены только для иллюстративных целей и что различные модификации или изменения в их свете будут предложены специалистам в данной области техники и должны быть включены в сущность и сферу охвата этой заявки и в объем правовых притязаний приложенной формулы изобретения. Все публикации, патенты и патентные заявки, процитированные, в настоящем описании, тем самым включены в качестве ссылки во всей их полноте для всех целей.

Пример 4. Новый химерный парапоксвирус hov-189 в качестве онколитической иммунотерапии при трижды негативном раке молочной железы

[0322] Трижды негативный рак молочной железы (TNBC) является агрессивным подтипом рака молочной железы с высокой частотой рецидивов и неблагоприятным прогнозом. Здесь заявители описывают новый полученный методом генной инженерии парапоксвирус, который эффективно уничтожает TNBC.

[0323] Способы: Новый химерный парапоксвирус (HOV-189) получили посредством гомологической рекомбинации и идентифицировали посредством скрининга высокой производительности. Цитотоксичность оценивали in vitro на четырех клеточных линиях TNBC. Репликацию вируса исследовали посредством стандартного анализа бляшкообразования. Ортотопные ксенотрансплантаты TNBC получали посредством имплантации MDA-MB-468 в жировые слои второй и четвертой молочных желез бестимусных голых мышей и обрабатывали вирусом.

[0324] Результаты: HOV-189 продемонстрировал дозозависимую цитотоксичность при низкой множественности заражения (MOI) с гибелью >90% клеток через шесть дней после обработки. Значительное уменьшение размера опухоли наблюдали через две недели после интратуморальной инъекции при дозах всего 10³ БОЕ по сравнению с контролем (P<0,01). Кроме того, был продемонстрирован абскопальный эффект (сокращение неинъецированных отдаленных опухолей).

[0325] Заключение: HOV-189 продемонстрировали эффективную цитотоксичность in vitro и мощный противоопухолевый эффект in vivo в дозах всего лишь 10³ БОЕ. Эти данные подтверждают клинические исследования этого сильнодействующего агента против TNBC.

[0326] Введение

[0327] Приблизительно 12-20% одного миллиона вновь диагностированных случаев рака молочной железы во всем мире каждый год являются трижды негативным раком молочной железы11, что означает отсутствие у них экспрессии эстрогенового рецептора (ER), прогестеронового рецептора и рецептора эпидермального фактора роста человека 2 (HER2). Трижды негативный рак молочной железы (TNBC) демонстрирует худшие клинические результаты, как вследствие его агрессивного поведения, так и из-за отсутствия эффективных видов таргетной терапии. Пациенты с TNBC имеют более высокий риск рецидива и развития метастазирования в первые пять лет после постановки диагноза, чем пациенты без TNBC12.

[0328] В настоящее время основой адъювантной терапии TNBC является цитотоксическая химиотерапия, но были проведены интенсивные исследования и разработки таргетной терапии, включая исследования ингибиторов поли(АДФ-рибоза)полимеразы 1 (PARP1), ингибиторов PI3K, ингибиторов МЕК и ингибиторов лиганда программируемой смерти 1 (PD-L1)^11,13.

[0329] Иммунотерапия долгое время была областью исследования для многих типов рака, включая рак молочной железы. TNBC демонстрирует повышенную генетическую нестабильность, более высокий уровень неоантигенов и имеет частоту инфильтрирующих опухоль лимфоцитов (TIL) в микроокружении, что делает TNBC более иммуногенным, чем заболевание, не являющееся трижды негативным14. Эти факторы делают TNBC подходящим кандидатом для иммунотерапии. Заявители ранее исследовали противоопухолевый эффект онколитического вируса осповакцины в модели TNBC15. Здесь заявители представляют данные о новом химерном парапоксвирусе, который эффективен в моделях TNBC как in vitro и in vivo.

[0330] Способы

[0331] Клеточная культура и клеточные линии. Клеточные линии трижды негативного рака молочной железы человека MDA-MB-231 (любезно предоставленные доктором Sangkil Nam, City of Hope), MDA-MB-468 (любезно предоставленные доктором John Yim, City of Hope), BT549 (Dr. Yim) и Hs578T (Dr. Yim) культивировали в RPMI 1640 (Corning, Corning NY) с добавлением 10% фетальной сыворотки крупного рогатого скота (FBS) и 100 МЕ/мл стрептомицина и пенициллина. Все линии TNBC протестировали и проверили на подлинность посредством Genetica Cell Line Testing (Burlington, NC). Фибробласты почек (CV-1) африканской зеленой обезьяны и клетки MDBK получили из Американской коллекции типовых культур (Mannassus, VA) и культивировали в модифицированной Дульбекко среде Игла (DMEM, Corning, Corning NY), обогащенной 0% FBS и 100 МЕ/мл стрептомицина и пенициллина. Все клетки выращивали при 37°C в 5% влажном CO₂-инкубаторе.

[0332] Разработка и селекция химерного парапоксвируса. Для создания пула химерных парапоксвирусов клетки MDBK коинфицировали штаммом NZ2 орф-вируса (ATCC) и штаммом TJS псевдопоксвируса коров (ATCC). Инфицированные клетки собирали через 3 дня после инфицирования. Сто бляшек химерного парапоксвируса отобрали из клеток MDBK, инфицированных пулом химерного парапоксвируса. Эти 100 бляшек дополнительно очищали методом бляшкообразования два раза в клетках MDBK с получением 100 клонально очищенных индивидуальных изолятов химерного вируса, которые вместе с их родительскими вирусами подвергали скринингу высокой производительности в клеточных линиях NCI-60. Для этого исследования был выбран изолят HOV-189, который продемонстрировал наиболее сильные противоопухолевые свойства против клеточных линий NCI-60.

[0333] Анализы цитотоксичности. Клетки высевали при 1000 клеток/лунка для MDA-MB-231, BT549 и Hs578T и при 3000 клеток/лунка для MDA-MB-468 в 96-луночные планшеты и инкубировали в течение ночи. Клетки инфицировали 0,1, 1 и 10 MOI каждого вируса для MDA-MB-231 и 0,01, 0,1 и 1 для MDA-MB-468, BT549 и Hs578T. Жизнеспособность клеток измеряли в трех повторах каждые 24 часа в течение от одного до шести дней с использованием раствора CellTiter 96 Awater One (Promega, Madison, WI) на спектрофотометре (Tecan Spark 10M, Mannedorf, Switzerland) при 490 нм.

[0334] Анализы репликации вируса. Репликацию вируса в TNBC определяли количественно, используя стандартный анализ бляшкообразования. Клетки высевали до слияния в 6-луночные планшеты в 2 мл питательной среды, затем инфицировали 0,01 MOI каждого вируса. Клетки собирали в трех повторах в течение трех дней подряд. Клетки MDBK инфицировали серийными разведениями образцов, обработанных HOV-189, в 24-луночных планшетах.

[0335] Ортотопические ксенотрансплантатные модели. Двадцати шести Самкам Hsd:бестимусных голых мышей Nude-Foxn1^nu (Envigo, Indianapolis, IN) инъецировали 10⁷ клеток MDA-MB-468 с 6 мг/мл матригел (Corning) в жировые слои второй и четвертой молочных желез в возрасте 12 недель. Когда опухоли достигали размера приблизительно 100-150 мм³, мышей рандомизировали, и в опухоли интратуморально инъецировали либо только PBS (n= 4), 10³ БОЕ (n=6), 10⁴БОЕ (n=6), либо 10⁵БОЕ (n=7) в 50 мкл PBS. Дисперсия размеров опухоли существенно не различалась между группами до обработки. Затем размер опухоли измеряли каждые три дня в течение шести недель. Объем опухоли рассчитывали по V (мм³)=(4/3 ×(π)×(a/2)²×(b/2), где а представляет собой наименьший диаметр, а b представляет собой наибольший диаметр. Через семь дней после интратуморальной инъекции от двух до четырех мышей на группу умерщвляли так, что опухоль и органы (легкие, сердце, печень, почку, селезенку, яичник, головной мозг) быстро замораживали в жидком азоте и использовали для дальнейшего гистопатологического окрашивания, иммуногистохимического окрашивания и анализов вирусного бляшкообразования. У оставшихся трех мышей опухоли только вторых молочных желез обрабатывали 10⁵ БОЕ в 50 мкл PBS для того, чтобы наблюдать действие, если таковое имеется, на неинъецированную опухоль четвертой молочной железы. Через две недели после обработки обе опухоли собирали для определения вирусного титра в каждой.

[0336] РЕЗУЛЬТАТЫ

[0337] HOV-189 эффективно уничтожает TNBC in vitro зависимым от времени и дозы образом. Учитывая гетерогенную природу TNBC, две клеточные линии метастатического происхождения (MDA-MB-231 и MDA-MB-468) и две клеточные линии неметастатического происхождения (Hs578T и BT549) обрабатывали HOV-189 при MOI в диапазоне от 0,01 до 10 в течение шести дней. HOV-189 наиболее эффективно уничтожал Hs578T (LD₅₀ через 96 ч: MOI 0,396) и MDA-MB-468 (LD₅₀, MOI 0,185) с >80% гибелью клеток через шесть дней при обработке с MOI 1 (фиг. 6A и 6C). Хотя LD₅₀ была выше для BT549 и MDA-MB-231 (LD₅₀, MOI 1,636 и MOI 1,712, соответственно), данные MDA-MB-231 показывают, что увеличение концентрации HOV-189 приводит к >90% гибели клеток при MOI 10 после шесть дней (Фиг. 6D).

[0338] HOV-189 реплицируется в TNBC in vitro. Репликацию вируса оценивали во всех четырех клеточных линиях TNBC посредством стандартного анализа бляшкообразования инфицированных клеток, собранных в течение трех дней. Эффективная репликация вируса происходила в BT549, Hs578T и MDA-MB-231 при MOI 0,01, при этом максимальная репликация происходила в течение 24-48 часов (Фиг. 7). Однако репликация HOV-189 в MDA-MB-468 была слабой при MOI 0,01, несмотря на демонстрацию эффективной цитотоксичности при низкой MOI. Репликацию вируса улучшили посредством увеличения концентрации до MOI 10 в линии MDA-MB-468 (Фиг. 7).

[0339] Интратуморальная инъекция HOV-189 эффективно редуцирует размер опухоли в ортотопических ксенотрансплантатах TNBC без значительной вирусной токсичности. Ортотопические ксенотрансплантаты создали посредством имплантации клеток MDA-MB-468 в жировые слои второй и четвертой молочных желез бестимусных голых мышей. Обе опухоли получали одну интратуморальную инъекцию либо PBS, либо HOV-189 (10³ БОЕ, 10⁴ БОЕ или 10⁵ БОЕ). Все группы, обработанные HOV-189, продемонстрировали значительную редукцию относительного размера опухоли к 13 дню после обработки по сравнению с контрольными животными, обработанными PBS, и этот эффект обработки сохранялся через шесть недель после инъекции (Фиг. 8). Интратуморальные инъекции хорошо переносились мышами без заметной вирусной токсичности, что они продемонстрировали отсутствием значительного снижения массы тела в группах обработки по сравнению с контрольной группой (Фиг. 9).

[0340] Биораспределение HOV-189 в течение одной недели и шести недель после обработки демонстрирует присущую опухолеспецифичность in vivo. Через одну и шесть недель после инъекции HOV-189 от двух до четырех мышей из каждой группы умерщвляли для исследования биораспределения вируса. Титры вируса инфицированной опухолевой ткани продемонстрировали титр HOV-189 на 2 порядка выше по сравнению с другими органами в оба момента времени, отражая естественную тропность HOV-189 к раковым клеткам по сравнению с нормальными клетками (таблица 4). Помимо инъецированной опухолевой ткани, HOV-189 был обнаружен только в ткани сердца и легкого через одну неделю после инъекции и в легочной ткани через шесть недель после инъекции, что коррелирует с отсутствием значительной наблюдаемой системной токсичности.

[0341] Инфицирование и репликация HOV-189 в орпотопической ксенотранстплантантной модели подтверждена иммунофлуоресцентной визуализацией. Через неделю после инъекции HOV-189 иммунофлуоресцентное обнаружение поликлонального антитела против орф-вируса демонстрирует инфицирование вирусом опухолевой ткани, обработанной HOV-189, при 10⁵ БОЕ на опухоль по сравнению с контролем (Фиг. 10A и 10B). Кроме того, схема детектирования антител, слитых с контрастным красителем DAPI, согласуется с активной репликацией на вирусных фабриках, поскольку антитела против орф-вируса локализуются в областях только за пределами ядра (Фиг. 10C).

[0342] Интратуморальная инъекция HOV-189 инъекция оказывает опухолевое действие на отдаленные неинъецированные опухоли. Трех животных обработали HOV-189 при 10⁵ БОЕ только во второй опухоли молочной железы, тогда как четвертую опухоль молочной железы оставляли необработанной. Размер опухоли измеряли каждые три дня по сравнению с обработанными PBS контролями, и титры вирусов количественно определяли посредством стандартного анализа бляшкообразования в конце двух недель. В то время как относительный размер опухоли первоначально увеличивался в группе инъецированных опухолей (вероятно, из-за травмы вследствие самой инъекции), размер опухоли уменьшался после шестого дня со значительной редукцией по сравнению с контролем на 13 день (р<0,05). Относительный размер опухоли в группе неинъецированных опухолей оставался стабильным, несмотря на то, что их никогда не подвергали непосредственной обработке HOV-189 (фиг. 11). Титры вируса в конце двух недель показали, что средний титр в инъецированных опухолях составил 3,37×10³ БОЕ/г ткани по сравнению по сравнению со средним значением неинъецированных опухолей при 1,15×10³ БОЕ/г ткани.

[0343] Обсуждение

[0344] Трижды негативный рак молочной железы (TNBC) составляет 15-20% всех диагнозов рака молочной железы. Он имеет тенденцию проявлять агрессивную биологию, часто поражая более молодых женщин и предвещая более высокую частоту рецидивов и худшую общую выживаемость^16,17. В отличие от гормон-рецептор-положительного заболевания TNBC не имеет известных биологических маркеров для разработки и применения эффективных методов таргетной терапии. Поэтому основой неоадъювантной и адъювантной терапии остается цитотоксическая химиотерапия, которая может быть ассоциирована с многочисленными системными побочными эффектами^11,13.

[0345] В октябре 2015 года Управление по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов США (FDA) одобрило вирус простого герпеса (HSV-1) под названием T-VEC (талимоген лагерпарепвек) в качестве первого онколитического вируса (OV) для применения у людей18. Это одобрение стало знаковым событием в области вирусологии и иммунотерапии, вызвавшее большой интерес к дальнейшей разработке OV для лечения других видов рака, включая TNBC. OV демонстрируют естественную тропность к раковым клеткам по сравнению с нормальными клетками, используя патологические нарушения в раковых клетках, такие как измененные внутриклеточные пути передачи сигналов и сверхэкспрессия рецепторов клеточной поверхности, чтобы преимущественно инфицировать раковые клетки^19-21. Кроме того, OV-опосредованное разрушение инфицированных клеток высвобождает цитокины, опухолеассоциированные антигены (TAA), молекулярные фрагменты, ассоциированные с повреждениями (DAMP), и молекулярные фрагменты, ассоциированные с патогеном (PAMP), которые запускают как врожденную, так и адаптивную иммунную систему против раковых клеток^20,22-26. TNBC демонстрирует повышенную генетическую нестабильность, увеличение количества неоантигенов и увеличение количества инфильтрирующих опухоль лимфоцитов (TIL) в микроокружении¹⁴. Это делает TNBC более иммуногенным, чем заболевание, не являющееся трижды негативным, и подходящим кандидатом на OV-направленную терапию.

[0346] Это исследование демонстрирует, что новый химерный парапоксвирус, HOV-189, обладает цитотоксическим действием in vitro в четырех различных клеточных линиях TNBC, как метастатического, так и неметастатического происхождения. Однократная интратуморальная инъекция HOV-189 в ксенотрансплантаты TNBC бестимусных голых мышей значительно редуцировала размер опухоли без признаков значительной токсичности. Кроме того, вирус также был обнаружен в неинъецированных отдаленных участках опухоли со стабилизацией размера этих опухолей. Таким образом, HOV-189 демонстрирует способность системно перемещаться и нацеливаться на отдаленные участки заболевания, что может найти применение в неоадъювантной терапии, а также в условиях метастазирования.

[0347] Следует отметить, что редукция размеров опухоли in vivo наблюдалось при дозах HOV-189, составляющих всего 10³ БОЕ на опухоль. Это говорит о том, что противоопухолевый эффект вряд ли является результатом прямого онколиза в результате вирусной репликации, поскольку HOV-189 продемонстрировал слабую репликацию in vitro. Генетическое секвенирование HOV-189 обнаруживает тесную связь с одним из его родительских вирусов, орф-вирусом (ORFV) парапоксвирусов. Предыдущие исследования ORFV показали, что обработка ORFV вызывает сильный иммуномодулирующий эффект, особенно в отношении активации натуральных клеток-киллеров (NK)^27,28. Даже обработка инактивированным ультрафиолетом (УФ) ORFV вызвала сходную, хотя и более слабую реакцию, демонстрируя, что сам вирус, вероятно, содержит антигенный структурный компонент, который способен индуцировать иммунный ответ независимо от его фактической репликации. Учитывая, что генетическая последовательность HOV-189 очень тесно связана с NZ2 вируса ORFV, заявители выдвигают гипотезу о том, что противоопухолевый механизм действия HOV-189, вероятно, опосредован иммунными клетками, может быть, опосредован NK-клетками, объясняя эффект, наблюдаемый при низких дозах и его плохой репликация in vitro.

[0348] По сравнению с другими OV ORFV не был хорошо изучен в контексте разработки клинической терапии. Многое из того, что известно о естественном развитии вызванного им заболевания, было взято из ветеринарной медицины. Тем не менее, есть несколько свойств ORFV, которые могут быть полезны для разработки его в качестве OV для лечения видов рака у человека. Во-первых, инфекция ORVF не вызывает серьезных заболеваний у людей²⁹. Во-вторых, инфекция ORFV вызывает сильную стимуляцию иммунной системы (с доминированием Th1), и способность вызывать иммунный ответ сохраняют даже инактивированные вирусные частицы^30,31. В-третьих, нейтрализующие антитела встречаются редко, и реинфекция может возникать, несмотря на выработку антител против ORF. Это означает, что повторные дозы потенциально можно назначать одному и тому же пациенту²⁸, что является логичным улучшением по сравнению с другими OV в клинической разработке, которые требуют переключения серотипа или повторных доз уникальных в антигенном отношении вирусов для продолжения ответа. Наконец, клинический ответ с использованием более низких вирусных титров ORFV является еще одним практическим улучшением разработки OV, поскольку получение OV является сложным, дорогостоящим и времязатратным и обычно требует титров в диапазоне 10⁶-10⁹БОЕ на инъекцию.

[0349] Итак, HOV-189 является новым химерным парапоксвирусом дикого типа, эффективным против TNBC как in vitro, так и in vivo. С таргетной терапией, отсутствующей в лечении TNBC, HOV-189 представляет собой перспективный путь для иммунотерапии в этой области. Что касается будущих направлений, заявители планируют дальнейшие доклинические испытания в других ксенотрансплантатных моделях, а также генетические модификации вируса дикого типа для повышения селективности опухоли и общей активности

Таблица 4. Биораспределение вируса HOV-189 в различных органах через 1 и 6 недель после обработки.

Пример 5. Конструирование рекомбинантных химерных поксвирусов

[0350] Конструирование челночных векторов для вставки кассет экспрессии чужеродного гена в геном химерного поксвируса #33

[0351] Для конструирования челночного вектора тимидинкиназы (ТК) левые и правые фланкирующие последовательности гена ТК химерного поксвируса #33 амплифицировали посредством ПЦР из геномной ДНК #33, используя Q5 High-Fidelity 2X Master Mix (New England Biolabs Inc., Ipswich, MA) и праймеры: 5'-GCGCATATGATCTATGGATTACCATGGATGACAACTC-3' (SEQ ID NO: 21) и 5'-CGTTTAACTCGTCTAATTAATTCTGTAC-3' (SEQ ID NO: 22) (левая фланкирующая), 5'-CAGGTAAAAGTACAGAATTAATTAGACGAGTTAAACGAGCTCGTCGACGGATCCGCTAGC

GGCCGCGGAGGTAATGATATGTATCAATCGGTGTGTAG-3' (SEQ ID NO: 23) и 5'-GCGGAATTCGTAATTACTTAGTAAATCCGCCGTACTAGG-3' (SEQ ID NO: 24) (правая фланкирующая). Два фрагмента объединили, используя метод сплайсинга генов путем перекрывающегося удлинения³². Полученный фрагмент расщепляли с помощью NdeI и EcoRI и клонировали в таким же образом резанную плазмиду pGPT с получением p33NC-TK. Фланкирующие последовательности TK в челночном векторе подтверждали секвенированием. p33NC-TK содержит левую и правую фланкирующие последовательности TK, разделенные SacI, SalI, BamHI, NheI и NotI и геном гуанинфосфорибозилтрансферазы (gpt) Escherichia coli, управляемым ранним промотором вируса осповакцины (VACV) p7.5E в качестве транзиентно-доминантного селектируемого маркера.

[0352] Челночный вектор F14.5L сконструировали аналогично. Левую и правую фланкирующие последовательности гена F14.5L химерного поксвируса #33 амплифицировали посредством ПЦР из геномной ДНК #33, используя Q5 High-Fidelity 2X Master Mix (New England Biolabs Inc., Ipswich, MA) и праймеры: 5'-GCGCATATGTAGAAGAATTGATAAATATGAAACCTTTTAAG-3' (SEQ ID NO: 25) и 5'-CCTCTCTAGCTTTCACTTAAACTGTATCG-3' (SEQ ID NO: 26) (левая фланкирующая), 5'-GAATAATCGATACAGTTTAAGTGAAAGCTAGAGAGGAAGCTTGAGCTCGA GGATCCGCTAGCGGCCGCTGAAGAGGATGCTAGAATCAAGGAGGAGCAAG-3' (SEQ ID NO: 27) и 5'-GCGGAATTCTCCGGGCAGTGACTTTGTAGCTCTCCCAG-3' (SEQ ID NO: 28) (правая фланкирующая). Два фрагмента объединили, используя метод сплайсинга генов путем перекрывающегося удлинения. Полученный фрагмент расщепляли с помощью NdeI и EcoRI и клонировали в таким же образом разрезанную плазмиду pGPT с получением p33NC-F14.5L. Фланкирующие последовательности F14.5L в челночном векторе подтверждали секвенированием. p33NC-F14.5L содержит левую и правую фланкирующие последовательности F14.5L, разделенные HindIII, SacI, XhoI, BamHI, NheI и NotI и gpt Escherichia coli, управляемого ранним промотором p7.5E в качестве транзиентно-доминантного селектируемого маркера.

[0353] Конструирование челночных векторов для слияния целевых последовательностей микроРНК с основными генами химерного поксвируса #33

[0354] Для слияния целевой последовательности miR-100 с 3'-концом урацил-ДНК-гликозилазы (кодируемой геном D4R в вирусе осповакцины) химерного поксвируса #33, левую и правую фланкирующие последовательности гена D4R химерного поксвируса #33 амплифицировали посредством ПЦР из геномной ДНК #33, используя Q5 High-Fidelity 2X Master Mix (New England Biolabs Inc., Ipswich, MA) и праймеры: 5'-GCGCATATGCACGCGCCATATACTATTACTTATCACGATG-3' (SEQ ID NO: 29) и 5'-TTAATAAATAAACCCTTGAGCCCAATTTATAGG-3' (SEQ ID NO: 30) (левая фланкирующая), 5'-CCTATAAATTGGGCTCAAGGGTTTATTTATTAACACAAGTT CGGATCTACGGGTTcgatCACAAGTTCGGATCTACGGGTTaccggtCACAAGTTCGGATCTACG

GGTTtcacCACAAGTTCGGATCTACGGGTTTGCTTTAGTGAAATTTTAACTTGTGTTC-3' (SEQ ID NO: 31) и 5'-GCGGAATTCCTAGTACCTACAACCCGAAGAGTTG-3' (SEQ ID NO: 32) (правая фланкирующая). Два фрагмента объединили, используя метод сплайсинга генов путем перекрывающегося удлинения. Полученный фрагмент расщепляли с помощью NdeI и EcoRI и клонировали в таким же образом разрезанную плазмиду pGPT с получением p33NCD4R-miR100t и p33NCD4R-miR100t-2. Фланкирующие последовательности D4R в челночном векторе подтверждали секвенированием. p33NCD4R-miR100t содержит 4 копии целевой последовательности miR-100, слитой с 3'-концом D4R, как и предполагалось, тогда как p33NCD4R-miR100t-2 представляет собой спонтанный мутант с удаленными 2 копиями целевой последовательности miR-100. Оба вектора содержат Escherichia coligpt, управляемого ранним промотором p7.5E VACV в качестве транзиентно-доминантного селектируемого маркера.

[0355] Для слияния целевой последовательности Let-7c с 3'-концом урацил-ДНК-гликозилазы (кодируемой геном D4R в вирусе осповакцины) химерного поксвируса #33, левую и правую фланкирующие последовательности гена D4R химерного поксвируса #33 амплифицировали посредством ПЦР из геномной ДНК #33, используя Q5 High-Fidelity 2X Master Mix (New England Biolabs Inc., Ipswich, MA) и праймеры: 5'-GCGCATATGCACGCGCCATATACTATTACTTATCACGATG-3' (SEQ ID NO: 33) и 5'-TTAATAAATAAACCCTTGAGCCCAATTTATAGG-3' (SEQ ID NO: 34) (левая фланкирующая), 5'-CCTATAAATTGGGCTCAAGGGTTTATTTATTAAAACCATACAACCT ACTACCTCAcgatAACCATACAACCTACTACCTCAaccggtAACCATACAACCTACTACCTCAtc acAACCATACAACCTACTACCTCATGCTTTAGTGAAATTTTAACTTGTGTTC-3' (SEQ ID NO: 35) и 5'-GCGGAATTCCTAGTACCTACAACCCGAAGAGTTG-3' (SEQ ID NO: 36) (правая фланкирующая). Два фрагмента объединили, используя метод сплайсинга генов путем перекрывающегося удлинения. Полученный фрагмент расщепляли с помощью NdeI и EcoRI и клонировали в таким же образом разрезанную плазмиду pGPT с получением p33NCD4R-Let7ct. Фланкирующие последовательности D4R в челночном векторе подтверждали секвенированием. p33NCD4R-Let7ct содержит 4 копии целевой последовательности Let-7c слитой с 3'-концом D4R, как и предполагалось. Она содержит gpt Escherichia coli, управляемого ранним промотором p7.5E VACV в качестве транзиентно-доминантного селектируемого маркера.

[0356] С целью слияния целевой последовательности miR-100 с 3'-концом ДНК-полимеразы (кодируемой геном E9L в вирусе осповакцины) химерного поксвируса #33, левую и правую фланкирующие последовательности гена E9L химерного поксвируса #33 амплифицировали посредством ПЦР из геномной ДНК #33, используя Q5 High-Fidelity 2X Master Mix (New England Biolabs Inc., Ipswich, MA) и праймеры: 5'-GCGGGCGCCGAGTTTGAGGCGGTATATAAGAAT CTGATTATGC-3' (SEQ ID NO: 37) и 5'-TTATGCTTCGTAAAATGTAGGTTTTGAACC-3' (SEQ ID NO: 38) (левая фланкирующая), 5'-GGTTCAAAACCTACATTTTACGAAGCATAA CACAAGTTCGGATCTACGGGTTcgatCACAAGTTCGGATCTACGGGTTaccggtCACAAGTTCG GATCTACGGGTTtcacCACAAGTTCGGATCTACGGGTTAATAATTTACAACAGTTGTACGTC GCTCTTTG-3' (SEQ ID NO: 39) и 5'-GCGCAATTGCATTGCTAATGGAT CGTTCTCTGGTAGATACG-3' (SEQ ID NO: 40) (правая фланкирующая). Два фрагмента объединили, используя метод сплайсинга генов путем перекрывающегося удлинения. Полученный фрагмент расщепляли с помощью NdeI и EcoRI и клонировали в нарезанную NarI и EcoRI плазмиду pGPT с получением p33NCE9L-miR100t. Фланкирующие последовательности ELL в челночном векторе подтверждали секвенированием. p33NCE9L-miR100t содержит 4 копии целевой последовательности miR-100 слитой с 3'-концом E9L, как и предполагалось. Она также содержит gptEscherichia coli управляемого ранним промотором p7.5E VACV в качестве транзиентно-доминантного селектируемого маркера.

[0357] Для слияния целевой последовательность Let-7c с 3'-концом ДНК-полимеразы (кодируемой геном E9L в вирусе осповакцины) химерного поксвируса #33 левую и правую фланкирующие последовательности гена E9L химерного поксвируса #33 амплифицировали посредством ПЦР из геномной ДНК #33, используя Q5 High-Fidelity 2X Master Mix (New England Biolabs Inc., Ipswich, MA) и праймеры: 5'-GCGGGCGCCGAGTTTGAGGCGGTATATAAGAATCTGATTATGC-3' (SEQ ID NO: 41) и 5'-TTATGCTTCGTAAAATGTAGGTTTTGAACC-3' (SEQ ID NO: 42) (левая фланкирующая), 5'-GGTTCAAAACCTACATTTTACGAAGCATAAAACCATACAACCTACTACCTCAcgatAACCAT ACAACCTACTACCTCAaccggtAACCATACAACCTACTACCTCAtcacAACCATACAACCTACT ACCTCAAATAATTTACAACAGTTGTACGTCGCTCTTTG-3' (SEQ ID NO: 43) и 5'-GCGCAATTGCATTGCTAATGGATCGTTCTCTGGTAGATACG-3' (SEQ ID NO: 44) (правая фланкирующая). Два фрагмента объединили, используя метод сплайсинга генов путем перекрывающегося удлинения. Полученный фрагмент расщепляли с помощью NdeI и EcoRI и клонировали в плазмиду pGPT, разрезанную NarI и EcoRI, с получением p33NCE9L-Let7ct. Фланкирующие последовательности E9L в челночном векторе подтверждали секвенированием. p33NCE9L-Let7ct содержит 4 копии целевой последовательности Let-7c, слитой с 3'-концом E9L, как и предполагалось. Она также содержит gptEscherichia coli, управляемый ранним промотором p7.5E VACV в качестве транзиентно-доминантного селектируемого маркера.

[0358] Вставка кассет экспрессии чужеродного гена в челночные векторы TK и F14.5L

[0359] Кассета экспрессии натрий-йодидного симпортера человека (hNIS). Кассету экспрессии hNIS с синтетическим ранним промотором (SE) VACV амплифицировали посредством ПЦР, используя Q5 High-Fidelity 2X Master Mix (New England Biolabs Inc., Ipswich, MA) и праймеры: 5'-GCGAAGCTTGAGCTCAAAAATTGAAAAACTAGCGTCTTTTTTTGCTCGAAGTCGACCACC ATGGAGGCCGTGGAG-3' (SEQ ID NO: 45) и 5'-GCGGATCCATAAAAATTAATT AATCAGAGGTTTGTCTCCTGCTGGTCTCG-3' (SEQ ID NO: 46). ПЦР-фрагмент расщепляли с помощью NdeI и EcoRI и клонировали в таким же образом разрезанную плазмиду p33NC-TK с получением p33NCTK-SE-hNIS. Последовательность кассеты экспрессии hNIS подтверждали секвенированием.

[0360] Кассета экспрессии Emerald (вариант GFP). Кассету экспрессии Emerald с ранним/поздним промотором H5 VACV амплифицировали посредством ПЦР из плазмиды Emerald-pBAD (Addgene, Cambridge, MA), используя Q5 High-Fidelity 2X Master Mix (New England Biolabs Inc., Ipswich, MA) и праймеры: 5'-GCGAAGCTTGAGCTCAAAAATTGAAAATAAATACAAAGGTTCTTGAGGGTTGTGTTAAAT TGAAAGCGAGAAATAATCATAAATAGTCGACCACCATGGTGAGCAAGGGCGAGGAGCTG TTCACC-3' (SEQ ID NO: 47) и 5'-GCGGGATCCATAAAAATTAATTA ATCAGTACAGCTCGTCCATGCCGAGAGTGATC-3' (SEQ ID NO: 48). ПЦР-фрагмент расщепляли с помощью NdeI и EcoRI и клонировали в таким же образом разрезанную плазмиду p33NC-TK с получением p33NCTK-H5-Emerald. Последовательность кассеты экспрессии Emerald подтверждали секвенированием.

[0361] Кассеты экспрессии люциферазы светлячков. Кассету экспрессии люциферазы светлячков с поздним промотором 11K VACV амплифицировали посредством ПЦР из плазмиды pCDNA3.1(+)/Luc2=tdT (Addgene, Cambridge, MA), используя Q5 High-Fidelity 2X Master Mix (New England Biolabs Inc., Ipswich, MA) и праймеры: 5'-GCGAAGCTTGAGCTCTAGTAGAATTTCATTTTGTTTTTTTCTATGCTATAAATAGTCGACC

ACCATGGAAGATGCCAAAAACATTAAGAAGGGCCCAGC-3' (SEQ ID NO: 49) и 5'-GCGGGATCCATAAAAATTAATTAATCACACGGCGATCTTGCCGCCCTTCTTGGCCTTAATG

AG-3' (SEQ ID NO: 50). ПЦР-фрагмент расщепляли с помощью NdeI и EcoRI и клонировали в таким же образом разрезанную плазмиду p33NC-TK с получением p33NCTK-11K-Fluc2. Последовательность кассеты экспрессии люциферазы светлячков подтверждали секвенированием. Для получения плазмид, содержащих кассеты экспрессии люциферазы светлячков с VACV SE и промотор H5s, cDNA люциферазы светлячков амплифицировали посредством ПЦР из плазмиды pCDNA3.1(+)/Luc2=tdT (Addgene, Cambridge, MA), используя Q5 High-Fidelity 2X Master Mix (New England Biolabs Inc., Ipswich, MA) и праймеры: 5'-GCGGTCGACCACCATGGAAGATGCCAAAAACATTAAGAAGGGCCCAGC-3' (SEQ ID NO: 51) и 5'-GCGGGATCCATAAAAATTAATTAATCACACGGCGATCTTGCC GCCCTTCTTGGCCTTAATGAG-3' (SEQ ID NO: 52). ПЦР-фрагмент расщепляли с помощью SalI и BamHI и клонировали в таким же образом разрезанные плазмиды p33NCTK-SE-hNIS и p33NCTK-H5-Emerald, заменяя hNIS и Emerald с получением p33NCTK-SE-Fluc2 и p33NCTK-H5-Fluc2, соответственно. Последовательность cDNA люциферазы светлячков в обоих векторах подтверждали секвенированием.

[0362] Кассеты экспрессии mCherry. cDNA mCherry амплифицировали посредством ПЦР из плазмиды pLV-mCherry (Addgene, Cambridge, MA), используя Q5 High-Fidelity 2X Master Mix (New England Biolabs Inc., Ipswich, MA) и праймеры: 5'-GCGGTCGACCACCATGGTGAGCAAGGGCGAGGAGGATAACATGG-3' (SEQ ID NO: 53) и 5'-GCGGGATCCATAAAAATTAATTAATCACTTGTACAGCTCGTCCATGCCG CCGGTGGAGTGG-3' (SEQ ID NO: 54). ПЦР-фрагмент расщепляли с помощью SalI и BamHI и клонировали в таким же образом разрезанные плазмиды p33NCTK-H5-Emerald и p33NCTK-11K-Fluc2, заменяя Emerald и люциферазы светлячков с получением p33NCTK-H5-mCherry и p33NCTK-11K-mCherry, соответственно. Последовательность cDNA mCherry в обоих векторах подтверждали секвенированием.

[0363] Кассета экспрессии анти-PD-L1 одноцепочечного антитела. Кассету экспрессии анти-PD-L1 одноцепочечного антитела, содержащую промотор Н5 VACV, лидерная последовательность легкой цепи Igκ, последовательности цепей V_H и V_L атезолизумаба, разделенную (G4S)3 линкерной последовательностью, и С-концевую последовательность маркера FLAG, синтезировали посредством Integrated DNA Technologies (Coralville, Iowa). Фрагмент расщепляли с помощью HindIII и BamHI и клонировали в таким же образом разрезанные плазмиды p33NC-F14.5L с получением p33NCF14.5L-H5-anti-PD-L1. Последовательность кассеты экспрессии анти-PD-L1 одноцепочечного антитела подтверждали секвенированием.

[0364] Получение рекомбинантных химерных поксвирусов

[0365] Клетки CV-1 инфицировали родительскими вирусами при множественности заражения (MOI) 0,1 в течение 1 ч, затем трансфицировали векторами для переноса генов (Таблица 5), используя jetPRIME in vitro DNA & siРНК transfection reagent (Polyplus-transfection Inc. New York, NY). Через два дня после инфицирования собирали инфицированные/трансфицированные клетки, и рекомбинантные вирусы отбирали и очищали по методу бляшкообразования, как описано ранее³³_.

[0366] Таблица 5. Список рекомбинантных химерных поксвирусов

Пример 6. Композиции химерного поксвируса и их применение

[0367] Заявители недавно разработали новые онколитические химерные поксвирусы, используя свою уникальную методологию для получения вирусных химер с последующим скринингом высокой производительности в клеточных линиях NCI-60 и панкреатических клеточных линиях. Эти новые химерные поксвирусы используют наилучший потенциал нацеливания нескольких родительских вирусов, демонстрируя превосходную противоопухолевую активность в более чем 70 клеточных линиях рака по сравнению с их родительскими вирусами и онколитическими вирусами, которые в настоящее время проходят клинические испытания на людях. В ксенотрансплантантных моделях человеческого трижды негативного рака молочной железы, рака поджелудочной железы и рака легкого новые химерные поксвирусы могут уменьшать опухоли при одной внутриопухолевой инъекции всего 1000 бляшкообразующих единиц вируса без явных побочных эффектов. Это на 2-5 порядков ниже, чем у большинства онколитических вирусов, проходящих клинические испытания. Кроме того, химерные поксвирусы эффективно распространяются из инъецированных опухолей к неинъецированным опухолям, что приводит к значительным абскопальным эффектам (сокращение неинъецированных отдаленных опухолей).

[0368] Чтобы помочь осуществлению мониторинга инфицирования и репликации вируса in vitro и in vivo, в химерные поксвирусы вставили кассеты экспрессии Emerald (варианта GFP), mCherry (красного флуоресцентного белка) и люциферазы светлячков. Экспрессия этих генов оптической визуализации легко обнаруживается, что значительно облегчает мониторинг репликации и распространения вируса in vivo без существенного влияния на репликацию и эффективность вируса.

[0369] Вооружение онколитических вирусов терапевтическими генами является широко распространенной стратегией для повышения противоопухолевой эффективности онколитических вирусов. Среди всех испытанных терапевтических генов, натрий-йодидный симпортер человека (hNIS) показал большие перспективы как в доклинических, так и в клинических исследованиях. hNIS представляет собой мембраносвязанный гликопротеин, присутствующий на базолатеральной поверхности фолликулярных клеток щитовидной железы. Он облегчает транспорт йода в цитоплазму, где в процессе синтеза гормонов щитовидной железы происходит его органификация. Эта молекула была успешно использована для накопления радиоактивного йода как при визуализации, так и при лечении дифференцированного рака щитовидной железы, что дает высокий ответ и скорость излечения (>90%). Кассету экспрессии hNIS вставили в химерные поксвирусы, чтобы превратить нетиреоидные виды рака в «тиреоидоподобный» рак, который, как ожидается, отвечает на терапию радиоактивным йодом или рением-188. Таким образом, нетиреоидные виды рака после превращения в «тиреоидоподобный» рак станет визуализируемым при использовании радиоактивного йода, и будет потенциально уничтожен по меньшей мере тремя механизмами: внутренней онколитической активностью онколитических вирусов, нацеленной лучевой терапией и противоопухолевыми иммунными ответами, опосредованными онколитическими вирусами и лучевой терапией. Заявители продемонстрировали, что hNIS должным образом экспрессируется на клеточной мембране опухолевых клеток после инфицирования hNIS-экспрессирующим химерным поксвирусом. Кроме того, первоначальные экспериментальные результаты показывают, что вставка кассеты экспрессии hNIS не влияет на внутреннюю онколитическую активность родительских вирусов как in vitro, так и на животных моделях. Кроме того, заявители показали, что химерные поксвирусы, экспрессирующие hNIS, безопасны для мышей, имеющих опухоли.

[0370] Иммунные ингибиторы контрольной точки представляют собой инновационные лекарственные препараты для лечения солидных опухолей и были одобрены для лечения меланомы, немелкоклеточного рака легкого и почечно-клеточного рака. Эти препараты требуют наличия уже существующего противоопухолевого иммунного ответа. Праймированием иммунной системы онколитическими вирусами можно повысить чувствительность иммунного репертуара пациента стать более благоприятным для терапии анти-PD-1/PD-L1 и анти-CTLA-4. Комбинируя онколитические вирусы с ингибиторами иммунных контрольных точек, можно преодолеть множество иммунных путей, индуцирующих иммунную толерантность. Кроме того, онколитические вирусы способствуют инфильтрации цитотоксических CD8 T-клеток в инфицированные опухоли и индуцируют повышающую регуляцию CTLA-4 или PD-L1 посредством активации продуцирующих IFN-γ цитотоксических CD8 T-клеток, тем самым позволяя анти-CTLA-4 и анти-CTLA-4-PD-1/PD-L1 терапии достигать максимального терапевтического потенциала. Данные нескольких доклинических исследований подтверждают сочетание терапии онколитическими вирусами с блокадой контрольных точек. Клинические испытания по оценке комбинации первого одобренного FDA онколитического вируса T-VEC с анти-CTLA-4 и анти-PD-1 антителами продолжаются. Первые результаты обнадеживают. Для усиления противоопухолевых иммунных ответов, инициируемых химерными поксвирусами, особенно химерными поксвирусами, экспрессирующими hNIS, экспрессионная кассета анти-PD-L1 вставляют в химерные поксвирусы или химерные поксвирусы, экспрессирующие hNIS. Заявители ожидают, что, хотя вставление hNIS в онколитические вирусы будет способствовать синергическому уничтожению опухолевых клеток с помощью радиоактивного йода и визуализации в ядерной медицине инфицированных опухолевых клеток, экспрессия иммуностимулирующих трансгенов, таких как анти-PD-L1, в этих же векторах значительно усилит противоопухолевые иммунные ответы при потенциальном снижении целевой аутоиммунной токсичности.

Пример 7. Таргетинг рака поджелудочной железы терапией онколитическими вирусами

[0371] Анализ Цитотоксичности

[0372] Анализ цитотоксичности проводили на клеточных линиях рака Panc-1 (Фиг. 12A-12B), MiaPaCa-2 (Фиг. 12C-12D), BxPC-3 (Фиг. 12E-12F), SU.86.86 (Фиг. 12G-12H), Capan-1 (Фиг. 12I-12J) и AsPC-1 (Фиг. 12K-12K) посредством культивирования 3×10³ раковых клеток на лунку в 100 мкл RPMI 5% FBS, 1% раствора антибиотика-антимикотика в течение 24 часов. Затем добавляли 20 мкл вируса, либо #33, OncoVEX^GFP, GLV-1h68, либо #189, при множественности заражения (MOI) 1, 0,1 и 0,01. Ежедневный анализ жизнеспособности клеток проводили, добавляя 20 мкл CellTiter 96 Aqueous One Solution Cell Proliferation Assay во все лунки и считывая колориметрические показатели после 1 часа инкубации. Результаты эксперимента стандартизировали только для среды и контроля с MOI 0. Этот эксперимент повторяли в трех повторах. Статистический анализ проводили, сравнивая #33 с другими экспериментальными группами, используя однофакторный дисперсионный анализ в каждый момент времени. Для SU.86.86 статистический анализ проводили, используя непарный t-тест для каждой MOI.

[0373] Кривая роста вирусов

[0374] Кривую репликации вируса строили на клеточных линиях рака Panc-1 (Фиг. 13A-13B), MiaPaCa-2 (Фиг. 13C-13D), BxPC-3 (Фиг. 13E-13F), SU.86.86 (Фиг. 13G-13H), Capan-1 (Фиг. 13I-13J) и AsPC-1 (Фиг. 13K-13L) посредством культивирования клеток при 5×10⁵клеток на лунку в 2 мл RPMI 10% FBS, 1% раствора антибиотика-антимикотика в течение 24 часов в трех повторах. Затем среды аспирировали, и добавляли #33, OncoVEX^GFP, GLV-1h68, или #189 при множественности заражения (MOI) 0,01 в 500 мкл RPMI 2,5% FBS, 1% раствора антибиотика-антимикотика в течение 1 часа, встряхивая каждые 20 минут. Через один час среды аспирировали, и добавляли 1,5 мл RPMI 2,5% FBS, 1% раствора антибиотика-антимикотика. Через 24, 48 и 72 часа собирали клетки и супернатант и после трех циклов заморозки и оттаивания выполняли серийные разведения в двух повторах. Этот эксперимент повторяли в двух повторах. Статистический анализ проводили, сравнивая #33 с другими экспериментальными группами, используя однофакторный дисперсионный анализ в каждый момент времени.

[0375] Обработка опухолей при раке поджелудочной железы in vivo

[0376] Восемнадцати самкам бестимусных голых мышей Nude-Foxn1^nu(Envigo, Indianapolis, IN) имплантировали 2×10⁶ двусторонних боковых опухолей MiaPaCa-2. Как только размеры опухоли достигали 400 мм³, в левостороннюю опухоль инъецировали 50 мкл PBS (3 мыши), #33 (5 мышей), #33-(SE)hNIS или #33-(SE)hNIS-E9LmiR100t (5 мышей) при приблизительно 1×10⁵ БОЕ/доза. Фактическая доза HOV-33 составила 7,8×10⁴. Фактическая доза HOV-33-SE/hNIS составила 4,5×10⁴. Фактическая доза HOV-33-SE/hNIS-E9L-miR100t составила 1,6×10⁵. Чистое процентное изменение массы и процентное изменение инъецированной опухоли и неинъецированных опухолей регистрировали два раза в неделю в течение 43 дней (Фиг. 14A-14C). Всех мышей умерщвляли через 43 дня, и на органах мышей проводили титрование вируса. Значительные различия в инъецированных опухолях были отмечены при сравнении контроля PBS с #33, #33-(SE) hNIS и #33-(SE) hNIS-E9LmiR100t (фиг. 14B; p=0,01, p=0,01 и p=0,0001, соответственно). Значительные различия были отмечены только в группах неинъецированных опухолей между контролем PBS и # 33-(SE)hNIS (Фиг. 14C; p=0,03).

[0377] Двадцати шести самкам бестимусных голых мышей Nude-Foxn1^nu(Envigo, Indianapolis, IN) имплантировали 1,25×10⁶ двусторонних боковых опухолей Panc-1. Как только размеры опухоли достигали приблизительно 250 мм³, в левостороннюю опухоль инъецировали 50 мкл PBS (4 мыши), #33 (6 мыши), #33-(SE)hNIS (6 мыши), #33-(SE)hNIS-E9LmiR100t (5 мышей) или #33-(H5)Fluc2 при приблизительно 1×10³ БОЕ/доза. Фактическая доза HOV-33 составила 8,6×10². Фактическая доза HOV-33-SE/hNIS составила 6,3×10². Фактическая доза HOV-33-H5Fluc составила 1×10⁴. Фактическая доза HOV-33-SE/hNIS-E9L-miR100t составила 1,0×10³. Чистое процентное изменение массы и процентное изменение инъецированной и неинъецированных опухолей регистрировали два раза в неделю в течение 43 дней (Фиг. 15A-15C). Всех мышей умерщвляли через 45 дней. Значительные различия в проценте изменения объема инъецированных опухолей были отмечены при сравнении контроля PBS во всехгруппах (Фиг. 15B; p=0,0001). Значительные различия были отмечены только в группах неинъецированных опухолей между контролем PBS и #33, #33-(H5)Fluc2 и #33-(SE)hNIS-E9LmiR100t (Фиг. 15C; p=0,003, p=0,008, p=0,002, соответственно).

[0378] Два раза в неделю одной контрольной PBS-мыши и 3 инъецированным #33-(H5)Fluc2 мышам интраперитонеально инъецировали 4,28 мг люциферина в 150 мкл PBS. Через 7 минут люциферазную визуализацию получали при стандартной выдержке. Относительную единицу регистрировали в каждый момент времени и анализировали относительно контрольных мышей PBS в качестве исходного уровня (Фиг. 16).

Пример 8. Таргетинг рак толстой кишки терапией онколитическими вирусами

[0379] Анализ цитотоксичности

[0380] Анализ цитотоксичности проводили на клеточных линиях рака HT-29 (Фиг. 17A-17B) и HCT-116 (Фиг. 17C-17D) посредством культивирования клеток при 3×10³ на лунку в 100 мкл среды МакКоя 5А, 5% FBS, 1% раствора антибиотика-антимикотика в течение 24 часов. Затем добавляли 20 мкл вируса, либо #33, OncoVEX^GFP, GLV-1h68, либо #189, при множественности заражения (MOI) 1, 0,1 и 0,01. Ежедневный анализ жизнеспособности клеток проводили, добавляя 20 мкл CellTiter 96 Aqueous One Solution Cell Proliferation Assay во все лунки и считывая колориметрические показатели после 1 часа инкубации. Результаты эксперимента стандартизировали только для среды и контроля с MOI 0. Этот эксперимент повторяли в трех повторах. Статистический анализ проводили, сравнивая #33 с другими экспериментальными группами, используя однофакторный дисперсионный анализ в каждый момент времени.

[0381] Анализ цитотоксичности проводили на клеточных линиях рака SW620 (Фиг. 18A-18B), SW480 (Фиг. 18C-18D) и COLO 320DM (Фиг. 18E-F) посредством культивирования клеток при 3×10³ на лунку в 100 мкл RPMI, 5% FBS, 1% раствора антибиотика-антимикотика в течение 24 часов. Затем добавляли 20 мкл вируса, либо #33, OncoVEX^GFP, GLV-1h68, либо #189, при множественности заражения (MOI) 1, 0,1 и 0,01. Ежедневный анализ жизнеспособности клеток проводили, добавляя 20 мкл CellTiter 96 Aqueous One Solution Cell Proliferation Assay во все лунки и считывая колориметрические показатели после 1 часа инкубации. Результаты эксперимента стандартизировали только для среды и контроля с MOI 0. Этот эксперимент повторяли в трех повторах. Статистический анализ проводили, сравнивая #33 с другими экспериментальными группами, используя однофакторный дисперсионный анализ в каждый момент времени.

[0382] Анализ цитотоксичности проводили на клеточной линии рака LoVo (Фиг. 19A-19B) посредством культивирования клеток при 3×10³ на лунку в 100 мкл среды F-12K, 5% FBS, 1% раствора антибиотика-антимикотика в течение 24 часов. Затем добавляли 20 мкл вируса, либо #33, OncoVEX^GFP, GLV-1h68, либо #189, при множественности заражения (MOI) 1, 0,1 и 0,01. Ежедневный анализ жизнеспособности клеток проводили, добавляя 20 мкл CellTiter 96 Aqueous One Solution Cell Proliferation Assay во все лунки и считывая колориметрические показатели после 1 часа инкубации. Результаты эксперимента стандартизировали только для среды и контроля с MOI 0. Этот эксперимент повторяли в трех повторах. Статистический анализ проводили, сравнивая #33 с другими экспериментальными группами, используя однофакторный дисперсионный анализ в каждый момент времени.

[0383] Кривая роста вирусов

[0384] Кривую репликации вируса строили на клеточных линиях рака HT-29 (Фиг. 20A-20B) и HCT-116 (Фиг. 20C-20D) посредством культивирования клеток при 5×10⁵ клеток на лунку в 2 мл среды МакКоя 5А 10% FBS, 1% раствора антибиотика-антимикотика в течение 24 часов в трех повторах. Затем среды аспирировали и #33, #33-(SE)hNIS, #33-(H5)Emerald, OncoVEX^GFP, GLV-1h68 или #189 добавляли при множественности заражения (MOI) 0,01 в 500 мкл среды МакКоя 5А 2,5% FBS, 1% раствора антибиотика-антимикотика в течение 1 часа, встряхивая каждые 20 минут. Через один час среды аспирировали, и добавляли 1,5 мл среды МакКоя 5А 2,5% FBS, 1% раствора антибиотика-антимикотика. Через 24, 48 и 72 часа собирали клетки и супернатант и после трех циклов заморозки и оттаивания, выполняли серийные разведения в двух повторах. Этот эксперимент повторяли в двух повторах. Статистический анализ проводили, сравнивая #33 с другими экспериментальными группами, используя однофакторный дисперсионный анализ в каждый момент времени.

[0385] Кривую репликации вируса строили на SW620 (Фиг. 21A-21B) и SW480 (Фиг. 21C-21D) клеточных линиях рака посредством культивирования клеток при 5×10⁵ клеток на лунку в 2 мл RPMI 10% FBS, 1% раствора антибиотика-антимикотика в течение 24 часов в трех повторах. Затем среды аспирировали, и добавляли #33, #33-(SE)hNIS, #33-(H5)Emerald, OncoVEX^GFP, GLV-1h68, или #189 при множественности заражения (MOI) 0,01 в 500 мкл RPMI 2,5% FBS, 1% раствора антибиотика-антимикотика в течение 1 часа, встряхивая каждые 20 минут. Через один час среды аспирировали добавляли и 1,5 мл RPMI 2,5% FBS, 1% раствора антибиотика-антимикотика. Через 24, 48 и 72 часа собирали клетки и супернатант, и после трех циклов заморозки и оттаивания выполняли серийные разведения в двух повторах. Этот эксперимент повторяли в двух повторах. Статистический анализ проводили, сравнивая #33 с другими экспериментальными группами, используя однофакторный дисперсионный анализ в каждый момент времени.

[0386] Иммуногистохимия HCT-116 #33-(SE)hNIS

[0387] Визуализацию in vitro #33-(SE)hNIS проводили в HCT-116 через 24, 48 и 72 часов при MOI 1, 0,1 и 0,01. В каждую лунку 8-луночного предметного стекла добавляли 2×10⁵ клеток HCT 116 в 500 мкл 10% FBS среды МакКоя 5А. Среды аспирировали после инкубации в течение 24 часов, и в каждую лунку добавляли соответствующую MOI #33-(SE)hNIS в 200 мкл 2,5% FBS среды МакКоя 5А. Через 1 час среды аспирировали и клетки дважды промывали PBS. Среды заменяли на 1 мл 10% FBS среды МакКоя 5А. Через 24, 48 или 72 часа среды аспирировали. Фиксацию проводили 4% параформальдегидом в течение 15 минут при комнатной температуре. Затем дважды промывали PBS. Пермеабилизацию проводили 0,1% Triton X-100 в PBS в течение 5 минут на льду. Клетки вновь промывали PBS. Затем предметные стекла инкубировали в блокирующем буфере TNB в течение 30 минут при 37°C (Блокирующий буфер TNB: 0,1M Tris-HCl, рН 7,5, 0,15 NaCl и 0,5% Блокирующего реагента-Perkin Elmer, cat FP1020). В разведении 1:50 добавляли мышиные антитела против человеческого натрий-йодидного транспортера (hNIS) в блокирующем буфере TNB и инкубировали в течение ночи при 4°С (ab 17795). Затем предметные стекла дважды промывали PBS, а затем в разведении 1:100 добавляли козий антимышиный IgG H&L (Alexa Fluor 488) (ab150113) в блокирующем буфере TNB и инкубировали при комнатной температуре в течение 1 часа. Затем клетки дважды промывали PBS. В разведении 1:200 добавляли кроличьи антитела против вируса осповакцины (ab35219) в TNB и инкубировали в течение ночи при 4°C. Затем клетки дважды промывали PBS. Блокирование посредством TNB происходило за 30 минут. Затем в разведении 1:100 добавляли козьи антикроличьи вторичные антитела и помещали в комнатную температуру в течение 1 часа. После двух промываний PBS добавляли DAPI в разведении 1:1000 при комнатной температуре в течение 5 минут. Вновь проводили промывание PBS. Изображения получали, используя EVOS auto cell imaging system (Фиг. 22).

[0388] Иммуногистохимия HT-29 #33-(SE)hNIS

[0389] Визуализацию in vitro #33-(SE)hNIS проводили в HT-29 через 24, 48 и 72 часов при MOI 1, 0,1 и 0,01. В каждую лунку 8-луночного предметного стекла добавляли 2×10⁵ клеток HCT 116 в 500 мкл 10% FBS среды МакКоя 5А. Среды аспирировали после инкубации в течение 24 часов, и в каждую лунку добавляли соответствующую MOI #33-(SE)hNIS в 200 мкл 2,5% FBS среды МакКоя 5А. Через 1 час среды аспирировали и клетки дважды промывали PBS. Среды заменяли на 1 мл 10% FBS среды МакКоя 5А. Через 24, 48 или 72 часа среды аспирировали. Фиксацию проводили 4% параформальдегидом в течение 15 минут при комнатной температуре. Затем дважды промывали PBS. Пермеабилизацию проводили 0,1% Triton X-100 в PBS в течение 5 минут на льду. Клетки вновь промывали PBS. Затем предметные стекла инкубировали в блокирующем буфере TNB в течение 30 минут при 37°C (Блокирующий буфер TNB: 0,1M Tris-HCl, рН 7,5, 0,15 NaCl и 0,5% Блокирующего реагента-Perkin Elmer, cat FP1020). В разведении 1:50 добавляли мышиные антитела против человеческого натрий-йодидного транспортера (hNIS) в блокирующем буфере TNB и инкубировали в течение ночи при 4°С (ab 17795). Затем предметные стекла дважды промывали PBS, а затем в разведении 1:100 добавляли козий антимышиный IgG H&L (Alexa Fluor 488) (ab150113) в блокирующем буфере TNB и инкубировали при комнатной температуре в течение 1 часа. Затем клетки дважды промывали PBS. В разведении 1:200 добавляли кроличьи антитела против вируса осповакцины (ab35219) в TNB и инкубировали в течение ночи при 4°C. Затем клетки дважды промывали PBS. Блокирование посредством TNB происходило за 30 минут. Затем в разведении 1:100 добавляли козьи антикроличьи вторичные антитела и помещали в комнатную температуру в течение 1 часа. После двух промываний PBS добавляли DAPI в разведении 1:1000 при комнатной температуре в течение 5 минут. Вновь проводили промывание PBS. Изображения получали, используя EVOS auto cell imaging system (Фиг. 23).

[0390] Обработка опухолей при раке толстой кишки in vivo

[0391] Четырнадцати самкам бестимусных голых мышей Nude-Foxn1^nu(Envigo, Indianapolis, IN) имплантировали 5×10⁶ клеток на двусторонние боковые опухоли HT-29. Как только размеры опухоли достигали приблизительно 200 мм³, в обе опухоли инъецировали 50 мкл PBS (4 мыши), #33 (5 мышей), или #33-(H5)Fluc2 (5 мышей) при приблизительно 1×10⁵ БОЕ/доза. Чистое процентное изменение массы и процентное изменение опухолей регистрировали два раза в неделю в течение 42 дней. По две мыши из каждой группы умерщвляли через 10 дней и проводили титрование вируса и IHC органов. Всех оставшихся мышей умерщвляли через 42 дня, и на органах мышей проводили титрование вируса. Значительное различие в процентном изменении объема опухоли (фиг. 24) было отмечено при сравнении контроля PBS как с #33 (3 мыши), так и с #33-(H5)Fluc2 (p=0,02 и p=0,03, соответственно).

[0392] Два раза в неделю одной контрольной PBS-мыши и 3 инъецированным #33-(H5)Fluc2 мышам интраперитонеально инъецировали 4,28 мг люциферина в 150 мкл PBS. Через 7 минут получали люциферазную визуализацию при стандартной выдержке. Относительную единицу регистрировали в каждый момент времени и анализировали относительно контрольных мышей PBS в качестве исходного уровня (Фиг. 25).

[0393] Девятнадцати самкам бестимусных голых мышей Nude-Foxn1^nu(Envigo, Indianapolis, IN) имплантировали 5×10⁶ двусторонних боковых опухолей HCT-116. Как только размеры опухоли достигали приблизительно 200 мм³, в обе опухоли инъецировали 50 мкл PBS (2 мыши), #33 (3 мыши), #33-(SE)hNIS или #33-(H5)Fluc2 при приблизительно 1×10⁵ БОЕ/доза. Чистое процентное изменение массы и процентное изменение опухолей регистрировали два раза в неделю в течение 42 дней. По 2 мыши на группу умерщвляли через 10 дней и проводили титрование вируса и IHC органов. Всех оставшихся мышей умерщвляли через 42 дня, и на органах мышей проводили титрование вируса. Значимое различие в ении контроля PBS с #33 (3 мыши), #33-(SE)hNIS и #33-(H5)Fluc2 (Фиг. 26; p=0,0002, p=0,0001 и p=0,0002, соответственно).

[0394] Два раза в неделю одной контрольной PBS-мыши и 3 инъецированным #33-(H5)Fluc2 мышам интраперитонеально инъецировали 4,28 мг люциферина в 150 мкл PBS. Через 7 минут люциферазную визуализацию получали при стандартной выдержке. Относительную единицу регистрировали в каждый момент времени и анализировали относительно контрольных мышей PBS в качестве исходного уровня (Фиг. 27).

Пример 9. Таргетинг рака легкого терапией онколитическими вирусами

[0395] Цитотоксический анализ

[0396] Цитотоксичность, опосредованная онколитичесим вирусом, при раке легкого и легочных клетках-фибробластах через 72 ч после инъекции. 5000 клеток A549, H2199 или фибробластов HF1 культивировали в каждой лунке 96-луночного планшета. На следующий день клетки инфицировали различными вирусами с указанной множественностью заражения (MOI; 0, 0,001, 0,01, 0,1, 1 MOI) или псевдоинфицировали. Применяли вирусы #33, #33-(H5)Emerald, #189, GLV-1h68 и OncoVEX^GFP. Жизнеспособность клеток определяли, используя CellTiter96AQ_ueous One Solution (Promega; Cat#G3581), через 72 часа после инъекции. Выживаемость инфицированных клеток A549 (Фиг. 28A), H2199 (Фиг. 28B) и фибробластов HF1 (Фиг. 28C) вычисляли по отношению к псевдоинфицированным клеткам.

[0397] Обработка опухолей при раке легкого in vivo

[0398] A549, клетки рака легких человека, культивировали, трипсинизировали, промывали PBS и ресуспендировали в 1:1 PBS и матригеле для получения 5×10⁶ клеток на 100 мкл. 100 мкл суспензии клеток подкожно инъецировали с каждой стороны верхнего бока бестимусной голой мыши для получения 2 опухолей на мышь. Через 3 недели после инъекции опухолевых клеток мышей рассортировали по различным группам обработки (n=3), чтобы получить одинаковый средний объем опухоли в каждой группе (~200 мм³). После сортировки 10³ бляшкообразующих единиц (БОЕ) #33-(H5)Emerald, GLV1h68 или OncoVEX^GFP интратуморально инъецировали только в правостороннюю опухоль каждой мыши. Все 3 вируса кодируют ген зеленого флуоресцентного белка (GFP). У мышей визуализировали зеленую флуоресценцию (возбуждение: 465 & эмиссия: 530 нм) два раза в неделю, используя оборудование для создания изображений у мелких животных (система визуализации LagoX) и изображения обрабатывали на программном обеспечении для обработки изображений AMIview (Фиг. 29).

[0399] Масса тела мышей. A549, клетки рака легких человека, культивировали, трипсинизировали, промывали PBS и ресуспендировали в 1:1 PBS и матригеле для получения 5×10⁶ клеток на 100 мкл. 100 мкл суспензии клеток подкожно инъецировали с каждой стороны верхнего бока бестимусной голой мыши для получения 2 опухолей на мышь. Через 3 недели после инъекции опухолевых клеток мышей рассортировали по различным группам обработки (n=4 или 5), чтобы получить одинаковый средний объем опухоли в каждой группе (~200 мм³). После сортировки только в правостороннюю опухоль правой сторон у каждой мыши инъецировали 10³ БОЕ указанных вирусов (#33, #33-(H5)Emerald, GLV-1h68, OncoVEX^GFP, T-VEC^TM, #189, контроль PBS) интратуморально или #33-(H5)Emerald инъецировали интраперитонеально (i.p.). Мышей взвешивали два раза в неделю и определяли процентное изменение их массы (Фиг. 30). На фиг. 30 каждая линия представляет массу отдельной мыши.

[0400] Регрессия опухоли. A549, клетки рака легких человека, культивировали, трипсинизировали, промывали PBS и ресуспендировали в 1:1 PBS и матригеле для получения 5×10⁶клеток на 100 мкл. 100 мкл суспензии клеток подкожно инъецировали с каждой стороны верхнего бока бестимусной голой мыши для получения 2 опухолей на мышь. Через 3 недели после инъекции опухолевых клеток мышей рассортировали по различным группам обработки (n=4 или 5), чтобы получить одинаковый средний объем опухоли в каждой группе (~200 мм³). После сортировки только в правостороннюю опухоль правой сторон у каждой мыши инъецировали 10³ БОЕ указанных вирусов (#33, #33-(H5)Emerald, GLV-1h68, OncoVEX^GFP, T-VEC^TM, #189, контроль PBS) интратуморально или #33-(H5)Emerald инъецировали интраперитонеально (i.p.). Объем опухоли, как для инъецированных (Фиг. 31A), так и для неинъецированных опухолей (Фиг. 31B) измеряли два раза в неделю, используя цифровые штангенциркули (объем={(длина)²× ширина/2}. На фиг. 31A и 31B каждая линия представляет объем опухоли для отдельных мышей.

[0401] Объем инфицированных вирусом опухолей в ксенотранстплантантной модели А549. A549, клетки рака легких человека, культивировали, трипсинизировали, промывали PBS и ресуспендировали в 1:1 PBS и матригеле для получения 5×10⁶ клеток на 100 мкл. 100 мкл суспензии клеток подкожно инъецировали с каждой стороны верхнего бока бестимусной голой мыши для получения 2 опухолей на мышь. Через 3 недели после инъекции опухолевых клеток мышей рассортировали по различным группам обработки (n=4 или 5), чтобы получить одинаковый средний объем опухоли в каждой группе (~200 мм³). После сортировки только в правостороннюю опухоль правой сторон у каждой мыши инъецировали 10³ БОЕ указанных вирусов (#33, #33-(H5)Emerald, GLV-1h68, OncoVEX^GFP, T-VEC^TM, #189, контроль PBS) интратуморально, или #33-(H5)Emerald инъецировали интраперитонеально (i.p). Объем опухоли измеряли два раза в неделю, используя цифровые штангенциркули (объем={(длина)²× ширина/2}. На фиг. 32 каждая линия представляет средний объем инъецированных опухолей с течением времени в отдельных группах обработки со стандартным отклонением. Статистический анализ: однофакторный дисперсионный анализ на 24 день (*=p<0,05).

[0402] Объем неинъецированных опухолей в ксенотранстплантантной модели А549. A549, клетки рака легких человека, культивировали, трипсинизировали, промывали PBS и ресуспендировали в 1:1 PBS и матригеле для получения 5×10⁶клеток на 100 мкл. 100 мкл суспензии клеток подкожно инъецировали с каждой стороны верхнего бока бестимусной голой мыши для получения 2 опухолей на мышь. Через 3 недели после инъекции опухолевых клеток мышей рассортировали по различным группам обработки (n=4 или 5), чтобы получить одинаковый средний объем опухоли в каждой группе (~200 мм³). После сортировки только в правостороннюю опухоль правой сторон у каждой мыши инъецировали 10³ БОЕ указанных вирусов (#33, #33-(H5)Emerald, GLV-1h68, OncoVEX^GFP, T-VEC™, #189, контроль PBS) интратуморально, или #33-(H5)Emerald инъецировали интраперитонеально (i.p.). Объем опухолей измеряли два раза в неделю, используя цифровые штангенциркули (объем={(длина)² × ширина/2}. На фиг. 33 каждая линия представляет средний объем неинъецированных опухолей с течением времени в отдельных группах обработки со стандартным отклонением. Статистический анализ: однофакторный дисперсионный анализ на 24 день (*=p<0,05).

[0403] Кратность изменения объема опухоли инъецированных и неинъецированных опухолей. A549, клетки рака легких человека, культивировали, трипсинизировали, промывали PBS и ресуспендировали в 1:1 PBS и матригеле для получения 5×10⁶клеток на 100 мкл. 100 мкл суспензии клеток подкожно инъецировали с каждой стороны верхнего бока бестимусной голой мыши для получения 2 опухолей на мышь. Через 3 недели после инъекции опухолевых клеток мышей рассортировали по различным группам обработки (n=4 или 5), чтобы получить одинаковый средний объем опухоли в каждой группе (~200 мм³). После сортировки только в правостороннюю опухоль правой сторон у каждой мыши инъецировали 10³ БОЕ указанных вирусов (#33, #33-(H5)Emerald, GLV-1h68, OncoVEX^GFP, T-VEC™, #189, контроль PBS) интратуморально, или #33-(H5)Emerald инъецировали интраперитонеально (i.p.). Объем опухолей измеряли два раза в неделю, используя цифровые штангенциркули (объем={(длина)² × ширина/2}. Кратность изменения объема опухоли рассчитывали путем нормализации объемов опухоли в разные моменты времени с объемами опухоли во время инъекции вируса (т.е. 0 день). Каждая линия представляет среднюю кратность изменения объема опухоли инъецированных (Фиг. 34A) и неинъецированных (Фиг. 34B) опухолей для отдельных групп обработки со стандартным отклонением. Статистический анализ: однофакторный дисперсионный анализ на 24 день (*=p<0,05).

[0404] Биораспределение вирусов в инъецированных и неинъецированных опухолях (модель А549). A549, клетки рака легких человека, культивировали, трипсинизировали, промывали PBS и ресуспендировали в 1:1 PBS и матригеле для получения 5×10⁶клеток на 100 мкл. 100 мкл суспензии клеток подкожно инъецировали с каждой стороны верхнего бока бестимусной голой мыши для получения 2 опухолей на мышь. Через 3 недели после инъекции опухолевых клеток мышей рассортировали по различным группам обработки (n=3), чтобы получить одинаковый средний объем опухоли в каждой группе (~200 мм³). После сортировки только в правостороннюю опухоль правой сторон у каждой мыши интратуморально инъецировали 10³ БОЕ указанных вирусов (#33, #33-(H5)Emerald, GLV-1h68, OncoVEX^GFP, T-VEC™). Через шесть дней после инъекции вируса производили сбор опухолей и нормальных органов. Собранные ткани взвешивали, измельчали на мелкие кусочки и гомогенизировали в 1 мл PBS, используя гомогенизатор Bullet Blender Gold. Гомогенаты подвергали 3 циклам замораживания-оттаивания с последующей обработкой ультразвуком в течение 1 минуты. Гомогенаты центрифугировали при 1000 об/мин в течение 3 минут, а супернатанты собирали. Супернатанты серийно разводили и титр вирусов определяли, используя стандартный анализ бляшкообразования. На фиг. 35A показан титр вирусов в БОЕ/г опухоли для инъецированных опухолей для каждого вируса, а на фиг. 35B показан титр вирусов в БОЕ/г опухоли для неинъецированных опухолей для каждого вируса.

[0405] Титр вирусов в яичниках мышей (модель А549). A549, клетки рака легких человека, культивировали, трипсинизировали, промывали PBS и ресуспендировали в 1:1 PBS и матригеле для получения 5×10⁶клеток на 100 мкл. 100 мкл суспензии клеток подкожно инъецировали с каждой стороны верхнего бока бестимусной голой мыши для получения 2 опухолей на мышь. Через 3 недели после инъекции опухолевых клеток мышей рассортировали по различным группам обработки (n=3), чтобы получить одинаковый средний объем опухоли в каждой группе (~200 мм³). После сортировки только в правостороннюю опухоль правой сторон у каждой мыши интратуморально инъецировали 10³ БОЕ указанных вирусов (#33, #33-(H5)Emerald, GLV-1h68, OncoVEX^GFP, T-VEC™). Через шесть дней после инъекции вируса производили сбор опухолей и нормальных органов. Собранные ткани взвешивали, измельчали на мелкие кусочки и гомогенизировали в 1 мл PBS, используя гомогенизатор Bullet Blender Gold. Гомогенаты подвергали 3 циклам замораживания-оттаивания с последующей обработкой ультразвуком в течение 1 минуты. Гомогенаты центрифугировали при 1000 об/мин в течение 3 минут, а супернатанты собирали. Супернатанты серийно разводили и определяли титр вируса, используя стандартный анализ бляшкообразования. На фиг. 36 показан титр вируса в БОЕ/г ткани (яичников) для каждого вируса. **ND означает, что вирус не был обнаружен.

[0406] Титр вирусов в крови через 20 дней после инъекции вируса. A549, клетки рака легких человека, культивировали, трипсинизировали, промывали PBS и ресуспендировали в 1:1 PBS и матригеле для получения 5×10⁶ клеток на 100 мкл. 100 мкл суспензии клеток подкожно инъецировали с каждой стороны верхнего бока бестимусной голой мыши для получения 2 опухолей на мышь. Через 3 недели после инъекции опухолевых клеток мышей рассортировали по различным группам обработки (n=3), чтобы получить одинаковый средний объем опухоли в каждой группе (~200 мм³). После сортировки только в правостороннюю опухоль правой сторон у каждой мыши интратуморально инъецировали 10³ БОЕ указанных вирусов (#33, #33-(H5)Emerald, GLV-1h68, OncoVEX^GFP, T-VEC™). Кровь брали у мышей (n=3) путем пункции лицевой вены. После 3 циклов замораживания и оттаивания кровь серийно разводили и определяли титр вирусов, используя стандартный анализ бляшкообразования (Фиг. 37). **ND означает, что вирус не был обнаружен.

ССЫЛКИ

[0407] 1. Chen NG & Szalay AA (2011) Oncolytic virotherapy of cancer. Cancer Managment in Man: Chemotherapy, Biological Therapy, Hyperthermia and Supporting Measures, Cancer Growth and Progression, ed Minev BR (Springer, New York), Vol 13, pp 295-316.

[0408] 2. Chen NG & Szalay AA (2010) Oncolytic vaccinia virus: a theranostic agent for cancer. Future Virol. 5(6):763-784.

[0409] 3. Andtbacka RH, et al. (2015) Talimogene Laherparepvec Improves Durable Response Rate in Patients With Advanced Melanoma. J Clin Oncol 33(25):2780-2788.

[0410] 4. Anonymous (2015) First Oncolytic Viral Therapy for Melanoma. Cancer discovery.

[0411] 5. Russell SJ, Peng KW, & Bell JC (2012) Oncolytic virotherapy. Nat Biotechnol 30(7):658-670.

[0412] 6. Thorne SH, et al. (2007) Rational strain selection and engineering creates a broad-spectrum, systemically effective oncolytic poxvirus, JX-963. J Clin Invest 117(11):3350-3358.

[0413] 7. Yu W & Fang H (2007) Clinical trials with oncolytic adenovirus in China. Curr Cancer Drug Targets 7(2):141-148.

[0414] 8. Evgin L, et al. (2010) Potent Oncolytic Activity of Raccoonpox Virus in the Absence of Natural Pathogenicity. Mol Ther.

[0415] 9. Rintoul JL, et al. (2012) ORFV: a novel oncolytic and immune stimulating parapoxvirus therapeutic. Mol Ther 20(6):1148-1157.

[0416] 10. Chan WM & McFadden G (2014) Oncolytic Poxviruses. Annu Rev Virol 1(1):119-141.

[0417] 11. Wahba, H.A. and H.A. El-Hadaad, Current approaches in treatment of triple-negative breast cancer. Cancer Biol Med, 2015. 12(2): p. 106-16.

[0418] 12. Curigliano, G. and A. Goldhirsch, The triple-negative subtype: new ideas for the poorest prognosis breast cancer. J Natl Cancer Inst Monogr, 2011. 2011(43): p. 108-10.

[0419] 13. Bianchini, G., et al., Triple-negative breast cancer: challenges and opportunities of a heterogeneous disease. Nat Rev Clin Oncol, 2016. 13(11): p. 674-690.

[0420] 14. Migali, C., et al., Strategies to modulate the immune system in breast cancer: checkpoint inhibitors and beyond. Ther Adv Med Oncol, 2016. 8(5): p. 360-74.

[0421] 15. Gholami, S., et al., A novel vaccinia virus with dual oncolytic and anti-angiogenic therapeutic effects against triple-negative breast cancer. Breast Cancer Res Treat, 2014. 148(3): p. 489-99.

[0422] 16. Dent, R., et al., Pattern of metastatic spread in triple-negative breast cancer. Breast Cancer Res Treat, 2009. 115(2): p. 423-8.

[0423] 17. Liedtke, C., et al., Response to neoadjuvant therapy and long-term survival in patients with triple-negative breast cancer. J Clin Oncol, 2008. 26(8): p. 1275-81.

[0424] 18. Andtbacka, R.C., M; Li, A; Shilkrut, M; Ross, MI, Phase 2, multicenter, randomized, open-label trial assessing efficacy and safety of talimogene laherparepvec (T-VEC) neoadjuvant treatment plus surgery vs surgery for resectable stage IIIB/C and IVM1a melanoma. J Clin Oncol, 2015. 33: TPS9094.

[0425] 19. Anderson, B.D., et al., High CD46 receptor density determines preferential killing of tumor cells by oncolytic measles virus. Cancer Res, 2004. 64(14): p. 4919-26.

[0426] 20. Kaufman, H.L., F.J. Kohlhapp, and A. Zloza, Oncolytic viruses: a new class of immunotherapy drugs. Nat Rev Drug Discov, 2015. 14(9): p. 642-62.

[0427] 21. Wang, G., et al., Infection of human cancer cells with myxoma virus requires Akt activation via interaction with a viral ankyrin-repeat host range factor. Proc Natl Acad Sci U S A, 2006. 103(12): p. 4640-5.

[0428] 22. Benencia, F., et al., HSV oncolytic therapy upregulates interferon-inducible chemokines and recruits immune effector cells in ovarian cancer. Mol Ther, 2005. 12(5): p. 789-802.

[0429] 23. Gauvrit, A., et al., Measles virus induces oncolysis of mesothelioma cells and allows dendritic cells to cross-prime tumor-specific CD8 response. Cancer Res, 2008. 68(12): p. 4882-92.

[0430] 24. Guillerme, J.B., et al., Measles virus vaccine-infected tumor cells induce tumor antigen cross-presentation by human plasmacytoid dendritic cells. Clin Cancer Res, 2013. 19(5): p. 1147-58.

[0431] 25. Haen, S.P. and H.G. Rammensee, The repertoire of human tumor-associated epitopes--identification and selection of antigens and their application in clinical trials. Curr Opin Immunol, 2013. 25(2): p. 277-83.

[0432] 26. Tang, D., et al., PAMPs and DAMPs: signal 0s that spur autophagy and immunity. Immunol Rev, 2012. 249(1): p. 158-75.

[0433] 27. Fiebig, H.H., et al., Inactivated orf virus (Parapoxvirus ovis) induces antitumoral activity in transplantable tumor models. Anticancer Res, 2011. 31(12): p. 4185-90.

[0434] 28. Rintoul, J.L., et al., ORFV: a novel oncolytic and immune stimulating parapoxvirus therapeutic. Mol Ther, 2012. 20(6): p. 1148-57.

[0435] 29. Robinson, A.J. and G.V. Petersen, Orf virus infection of workers in the meat industry. N Z Med J, 1983. 96(725): p. 81-5.

[0436] 30. Fachinger, V., et al., Poxvirus-induced immunostimulating effects on porcine leukocytes. J Virol, 2000. 74(17): p. 7943-51.

[0437] 31. Friebe, A., et al., Characterization of immunostimulatory components of orf virus (parapoxvirus ovis). J Gen Virol, 2011. 92(Pt 7): p. 1571-84.

[0438] 32. Horton RM, Ho SN, Pullen JK, Hunt HD, Cai Z, Pease LR. Gene splicing by overlap extension. Methods in enzymology. 1993;217:270-9. Epub 1993/01/01. PubMed PMID: 8474334.

[0439] 33. Falkner FG, Moss B. Transient dominant selection of recombinant vaccinia viruses. J Virol. 1990;64(6):3108-11. Epub 1990/06/01. PubMed PMID: 2159565.

Варианты осуществления P

[0440] Вариант осуществления P1. Химерный поксвирус, содержащий последовательность нуклеиновой кислоты, имеющую идентичность последовательности, составляющую по меньшей мере 70% с SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 2, при этом указанная последовательность нуклеиновой кислоты включает фрагменты нуклеиновой кислоты по меньшей мере из двух штаммов поксвируса, выбранных из группы, состоящей из штамма Brighton вируса коровьей оспы, штамма Herman поксвируса енотов, штамма Utrecht поксвируса кроликов, штамма WR вируса осповакцины, штамма IHD вируса осповакцины, штамма Elstree вируса осповакцины, штамма CL вируса осповакцины, штамма Lederle-Chorioallantoic вируса осповакцины, штамма AS вируса осповакцины, штамма NZ2 орф-вируса и штамма TJS псевдопоксвируса коров.

[0441] Вариант осуществления P2. Химерный поксвирус по варианту осуществления P1, при этом указанная последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую по меньшей мере 80%.

[0442] Вариант осуществления P3. Химерный поксвирус по варианту осуществления P1 или P2, при этом указанная последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую по меньшей мере 85%.

[0443] Вариант осуществления P4. Химерный поксвирус по одному из вариантов осуществления P1-P3, при этом указанная последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую по меньшей мере 90%.

[0444] Вариант осуществления P5. Химерный поксвирус по одному из вариантов осуществления P1-P4, при этом указанная последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую по меньшей мере 95%.

[0445] Вариант осуществления P6. Химерный поксвирус по одному из вариантов осуществления P1-P5, при этом указанная последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую по меньшей мере 98%.

[0446] Вариант осуществления P7. Химерный поксвирус по одному из вариантов осуществления P1-P6, при этом указанные фрагменты нуклеиновой кислоты происходят из штамма Brighton вируса коровьей оспы, штамма Herman поксвируса енотов, штамма Utrecht поксвируса кроликов, штамма WR вируса осповакцины, штамма IHD вируса осповакцины, штамма Elstree вируса осповакцины, штамма CL вируса осповакцины, штамма Lederle-Chorioallantoic вируса осповакцины и штамма AS вируса осповакцины.

[0447] Вариант осуществления P8. Химерный поксвирус по одному из вариантов осуществления P1-P6, при этом указанные фрагменты нуклеиновой кислоты происходят из штамма NZ2 орф-вируса и штамма TJS псевдопоксвируса коров.

[0448] Вариант осуществления P9. Химерный поксвирус по варианту осуществления P1, при этом указанный химерный поксвирус получают согласно способу, включающему: (i) инфицирование клетки по меньшей мере двумя штаммами поксвируса, выбранными из группы, состоящей из штамма Brighton вируса коровьей оспы, штамма Herman поксвируса енотов, штамма Utrecht поксвируса кроликов, штамма WR вируса осповакцины, штамма IHD вируса осповакцины, штамма Elstree вируса осповакцины, штамма CL вируса осповакцины, штамма Lederle-Chorioallantoic вируса осповакцины, штамма AS вируса осповакцины, штамма NZ2 орф-вируса и штамма TJS псевдопоксвируса коров; и (ii) обеспечение возможности репликации указанных по меньшей мере двух штаммов поксвируса, получая таким образом химерный поксвирус.

[0449] Вариант осуществления P10. Химерный поксвирус по варианту осуществления P9, при этом указанную клетку инфицируют штаммом Brighton вируса коровьей оспы, штаммом Herman поксвируса енотов, штаммом Utrecht поксвируса кроликов, штаммом WR вируса осповакцины, штаммом IHD вируса осповакцины, штаммом Elstree вируса осповакцины, штаммом CL вируса осповакцины, штаммом Lederle-Chorioallantoic вируса осповакцины и штаммом AS вируса осповакцины.

[0450] Вариант осуществления P11. Химерный поксвирус по варианту осуществления P9, при этом указанную клетку инфицируют штаммом NZ2 орф-вируса и штаммом TJS псевдопоксвируса коров.

[0451] Вариант осуществления P12. Химерный поксвирус по одному из вариантов осуществления P1-P11, при этом указанный химерный поксвирус представляет собой онколитический вирус.

[0452] Вариант осуществления P13. Химерный поксвирус по одному из вариантов осуществления P1-P12, при этом указанный поксвирус включает миРНК-связывающую последовательность.

[0453] Вариант осуществления P14. Химерный поксвирус по варианту осуществления P13, при этом указанная миРНК-связывающая последовательность образует часть гена ДНК-полимеразы указанного химерного поксвируса.

[0454] Вариант осуществления P15. Выделенная нуклеиновая кислота, кодирующая химерный поксвирус по одному из вариантов осуществления P1-P14.

[0455] Вариант осуществления P16. Фармацевтическая композиция, содержащая терапевтически эффективное количество химерного поксвируса по одному из вариантов осуществления P1-P14.

[0456] Вариант осуществления P17. Способ лечения рака у пациента, при этом указанный способ включает введение указанному пациенту терапевтически эффективного количества химерного поксвируса по одному из вариантов осуществления P1-P14, таким образом выполняя лечение рака у указанного пациента.

[0457] Вариант осуществления P18. Способ по варианту осуществления P17, при этом указанный рак представляет собой рак молочной железы, рак толстой кишки, рак почки, лейкоз, рак легкого, меланому, рак яичников, рак предстательной железы, рак поджелудочной железы, рак головного мозга, рак печени, рак желудка или саркому.

[0458] Вариант осуществления P19. Способ по варианту осуществления P17 или P18, при этом указанное введение включает введение первого химерного поксвируса и второго химерного поксвируса.

[0459] Вариант осуществления P20. Способ по варианту осуществления P19, при этом указанный первый химерный поксвирус содержит последовательность нуклеиновой кислоты, имеющую идентичность последовательности, составляющую по меньшей мере 70% с SEQ ID NO: 1, и при этом указанная последовательность нуклеиновой кислоты включает фрагменты нуклеиновой кислоты из штамма Brighton вируса коровьей оспы, штамма Herman поксвируса енотов, штамма Utrecht поксвируса кроликов, штамма WR вируса осповакцины, штамма IHD вируса осповакцины, штамма Elstree вируса осповакцины, штамма CL вируса осповакцины, штамма Lederle-Chorioallantoic вируса осповакцины и штамма AS вируса осповакцины.

[0460] Вариант осуществления P21. Способ по варианту осуществления P19 или P20, при этом указанный второй химерный поксвирус содержит последовательность нуклеиновой кислоты, имеющую идентичность последовательности, составляющую по меньшей мере 70% с SEQ ID NO: 2, и при этом указанная последовательность нуклеиновой кислоты включает фрагменты нуклеиновой кислоты из штамма NZ2 орф-вируса и штамма TJS псевдопоксвируса коров.

[0461] Вариант осуществления P22. Способ по одному из вариантов осуществления P19-P21, при этом указанный первый химерный поксвирус и указанный второй химерный поксвирус вводят в комбинированном синергическом количестве.

[0462] Вариант осуществления P23. Способ по одному из вариантов осуществления P19-P22, при этом указанный первый химерный поксвирус и указанный второй химерный поксвирус вводят одновременно.

[0463] Вариант осуществления P24. Способ по одному из вариантов осуществления P19-P22, при этом указанный первый химерный поксвирус и указанный второй химерный поксвирус вводят последовательно.

[0464] Вариант осуществления P25. Способ под одному из вариантов осуществления P19-P24, при этом указанный поксвирус вводят в количестве по меньшей мере 10⁴ бляшкообразующих единиц (БОЕ)/кг.

[0465] Вариант осуществления P26. Способ по одному из вариантов осуществления P19-P25, при этом указанный поксвирус вводят в количестве по меньшей мере 10⁶ бляшкообразующих единиц (БОЕ)/кг.

[0466] Вариант осуществления P27. Способ по одному из вариантов осуществления P19-P26, при этом указанный поксвирус вводят в количестве приблизительно 10⁸ бляшкообразующих единиц (БОЕ)/кг.

[0467] Вариант осуществления P28. Способ получения химерного поксвируса, при этом указанный способ включает: (i) инфицирование клетки по меньшей мере двумя штаммами поксвируса, выбранными из группы, состоящей из штамма Brighton вируса коровьей оспы, штамма Herman поксвируса енотов, штамма Utrecht поксвируса кроликов, штамма WR вируса осповакцины, штамма IHD вируса осповакцины, штамма Elstree вируса осповакцины, штамма CL вируса осповакцины, штамма Lederle-Chorioallantoic вируса осповакцины, штамма AS вируса осповакцины, штамма NZ2 орф-вируса и штамма TJS псевдопоксвируса коров; и (ii) обеспечение возможности указанным по меньшей мере двух штаммам поксвируса реплицироваться, тем самым получая указанный химерный поксвирус.

[0468] Вариант осуществления P29. Способ по варианту осуществления P28, при этом каждый из указанных по меньшей мере двух вирусных штаммов поксвируса присутствует при множественности заражения, составляющей менее чем приблизительно 1.

[0469] Вариант осуществления P30. Способ по варианту осуществления P28 или P29, при этом каждый из указанных по меньшей мере двух вирусных штаммов поксвируса присутствует при множественности заражения, составляющей менее чем приблизительно 0,1.

[0470] Вариант осуществления P31. Способ по одному из вариантов осуществления P28-P30, при этом при этом каждый из указанных по меньшей мере двух штаммов поксвируса присутствует при множественности заражения, составляющей приблизительно 0,01.

[0471] Вариант осуществления P32. Способ по варианту осуществления P28, при этом указанную клетку инфицируют штаммом Brighton вируса коровьей оспы, штаммом Herman поксвируса енотов, штаммом Utrecht поксвируса кроликов, штаммом WR вируса осповакцины, штаммом IHD вируса осповакцины, штаммом Elstree вируса осповакцины, штаммом CL вируса осповакцины, штаммом Lederle-Chorioallantoic вируса осповакцины и штаммом AS вируса осповакцины.

[0472] Вариант осуществления P33. Способ по варианту осуществления P28, при этом указанную клетку инфицируют штаммом NZ2 орф-вируса и штаммом TJS псевдопоксвируса коров.

[0473] Вариант осуществления P34. Способ по одному из вариантов осуществления P28-P33, при этом указанный химерный поксвирус представляет собой онколитический вирус.

[0474] Вариант осуществления P35. Способ по одному из вариантов осуществления P28-P34, при этом указанный поксвирус включает миРНК-связывающую последовательность.

[0475] Вариант осуществления P36. Способ ингибирования клеточной пролиферации клетки, при этом указанный способ включает приведение в контакт клетки с химерным поксвирусом по одному из вариантов осуществления P1-P14.

[0476] Вариант осуществления P37. Способ по варианту осуществления P36, при этом указанная клетка представляет собой раковую клетку.

[0477] Вариант осуществления P38. Способ по варианту осуществления P37, при этом указанная раковая клетка представляет собой клетку рака молочной железы, клетку рака толстой кишки, клетку рака почки, лейкозную клетку, клетку рака легкого, клетку меланомы, клетку рака яичников, клетку рака предстательной железы, клетку рака поджелудочной железы, клетку рака головного мозга, клетку рака печени, клетку рака желудка или клетку саркомы.

Варианты осуществления

[0478] Вариант осуществления 1. Химерный поксвирус, содержащий последовательность нуклеиновой кислоты, имеющую идентичность последовательности, составляющую по меньшей мере 70% с SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 2, при этом указанная последовательность нуклеиновой кислоты включает: (i) фрагменты нуклеиновой кислоты по меньшей мере из двух штаммов поксвируса, выбранных из группы, состоящей из штамма Brighton вируса коровьей оспы, штамма Herman поксвируса енотов, штамма Utrecht поксвируса кроликов, штамма WR вируса осповакцины, штамма IHD вируса осповакцины, штамма Elstree вируса осповакцины, штамма CL вируса осповакцины, штамма Lederle-Chorioallantoic вируса осповакцины, штамма AS вируса осповакцины, штамма NZ2 орф-вируса и штамма TJS псевдопоксвируса коров; (ii) одну или более противораковых последовательностей нуклеиновой кислоты; или (iii) последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую определяемый фрагмент.

[0479] Вариант осуществления 2. Химерный поксвирус по варианту осуществления 1, при этом указанная последовательность нуклеиновой кислоты включает: (i) фрагменты нуклеиновой кислоты по меньшей мере из двух штаммов поксвируса, выбранных из группы, состоящей из штамма Brighton вируса коровьей оспы, штамма Herman поксвируса енотов, штамма Utrecht поксвируса кроликов, штамма WR вируса осповакцины, штамма IHD вируса осповакцины, штамма Elstree вируса осповакцины, штамма CL вируса осповакцины, штамма Lederle-Chorioallantoic вируса осповакцины, штамма AS вируса осповакцины, штамма NZ2 орф-вируса и штамма TJS псевдопоксвируса коров; и (ii) одну или более противораковых последовательностей нуклеиновой кислоты.

[0480] Вариант осуществления 3. Химерный поксвирус по варианту осуществления 1 или 2, при этом указанная одна или более противораковых последовательностей нуклеиновой кислоты образуют часть второстепенного гена указанного химерного поксвируса.

[0481] Вариант осуществления 4. Химерный поксвирус по варианту осуществления 3, при этом указанный второстепенный ген представляет собой ген тимидинкиназы.

[0482] Вариант осуществления 5. Химерный поксвирус по варианту осуществления 3, при этом указанный второстепенный ген представляет собой ген F14.5L.

[0483] Вариант осуществления 6. Химерный поксвирус по одному из вариантов осуществления 1-5, при этом указанная одна или более противораковых последовательностей нуклеиновой кислоты независимо кодируют ингибитор PD-L1 или натрий-йодидный симпортер.

[0484] Вариант осуществления 7. Химерный поксвирус по варианту осуществления 6, при этом указанный ингибитор PD-L1 представляет собой анти-PD-L1 scFv.

[0485] Вариант осуществления 8. Химерный поксвирус по одному из вариантов осуществления 1-7, при этом части указанного второстепенного гена удалены.

[0486] Вариант осуществления 9. Химерный поксвирус по одному из вариантов осуществления 1-8, при этом каждая из указанных одной или более противораковых последовательностей нуклеиновой кислоты функционально связана с промотором.

[0487] Вариант осуществления 10. Химерный поксвирус по варианту осуществления 9, при этом указанный промотор представляет собой ранний промотор вируса осповакцины.

[0488] Вариант осуществления 11. Химерный поксвирус по варианту осуществления 9 или 10, при этом указанный промотор представляет собой синтетический ранний промотор.

[0489] Вариант осуществления 12. Химерный поксвирус по варианту осуществления 9, при этом указанный промотор представляет собой поздний промотор вируса осповакцины.

[0490] Вариант осуществления 13. Химерный поксвирус по варианту осуществления 9 или 12, при этом указанный промотор представляет собой промотор Н5 или промотор 11К.

[0491] Вариант осуществления 14. Химерный поксвирус по одному из вариантов осуществления 1-8, при этом указанная одна или более противораковых последовательностей нуклеиновой кислоты функционально связаны с основным геном указанного химерного поксвируса.

[0492] Вариант осуществления 15. Химерный поксвирус по одному из вариантов осуществления 1-14, при этом указанная одна или более противораковых последовательностей нуклеиновой кислоты функционально связаны с геном ДНК-полимеразы указанного химерного поксвируса.

[0493] Вариант осуществления 16. Химерный поксвирус по одному из вариантов осуществления 1-15, при этом указанная одна или более противораковых последовательностей нуклеиновой кислоты функционально связаны с 3'-концом гена ДНК-полимеразы указанного химерного поксвируса.

[0494] Вариант осуществления 17. Химерный поксвирус по одному из вариантов осуществления 1-16, при этом указанная одна или более противораковых последовательностей нуклеиновой кислоты функционально связаны с геном урацил-ДНК-гликозилазы.

[0495] Вариант осуществления 18. Химерный поксвирус по одному из вариантов осуществления 1-17, при этом указанная одна или более противораковых последовательностей нуклеиновой кислоты функционально связаны с 3'-концом гена урацил-ДНК-гликозилазы.

[0496] Вариант осуществления 19. Химерный поксвирус по одному из вариантов осуществления 1-18, при этом указанная одна или более противораковых последовательностей нуклеиновой кислоты независимо кодируют миРНК-связывающую последовательность.

[0497] Вариант осуществления 20. Химерный поксвирус по варианту осуществления 19, при этом указанная миРНК-связывающая последовательность представляет собой miR100-связывающую последовательность или let7c-связывающую последовательность.

[0498] Вариант осуществления 21. Химерный поксвирус по одному из вариантов осуществления 1-20, при этом указанная одну или более противораковых последовательностей нуклеиновой кислоты представляют собой первую противораковую последовательность нуклеиновой кислоты и вторую противораковую последовательность нуклеиновой кислоты.

[0499] Вариант осуществления 22. Химерный поксвирус по варианту осуществления 21, при этом указанная первая противораковая последовательность нуклеиновой кислоты кодирует натрий-йодидный симпортер, а указанная вторая противораковая последовательность нуклеиновой кислоты кодирует миРНК-связывающая последовательность.

[0500] Вариант осуществления 23. Химерный поксвирус по варианту осуществления 22, при этом указанная первая противораковую последовательность нуклеиновой кислоты образует часть гена тимидинкиназы и указанная вторая противораковую последовательность нуклеиновой кислоты функционально связана с геном урацил-ДНК-гликозилазы.

[0501] Вариант осуществления 24. Химерный поксвирус по варианту осуществления 22, при этом указанная первая противораковая последовательность нуклеиновой кислоты образует часть гена тимидинкиназы, а указанная вторая противораковая последовательность нуклеиновой кислоты функционально связана с геном ДНК-полимеразы.

[0502] Вариант осуществления 25. Химерный поксвирус по варианту осуществления 21, при этом указанная первая противораковая последовательность нуклеиновой кислоты кодирует натрий-йодидный симпортер, а указанная вторая противораковая последовательность нуклеиновой кислоты кодирует ингибитор PD-L1.

[0503] Вариант осуществления 26. Химерный поксвирус по варианту осуществления 25, при этом указанная первая противораковая последовательность нуклеиновой кислоты образует часть гена тимидинкиназы, а указанная вторая противораковая последовательность нуклеиновой кислоты образует часть гена F14.5L.

[0504] Вариант осуществления 27. Химерный поксвирус по варианту осуществления 1, при этом указанная последовательность нуклеиновой кислоты включает: (i) фрагменты нуклеиновой кислоты по меньшей мере из двух штаммов поксвируса, выбранных из группы, состоящей из штамма Brighton вируса коровьей оспы, штамма Herman поксвируса енотов, штамма Utrecht поксвируса кроликов, штамма WR вируса осповакцины, штамма IHD вируса осповакцины, штамма Elstree вируса осповакцины, штамма CL вируса осповакцины, штамма Lederle-Chorioallantoic вируса осповакцины, штамма AS вируса осповакцины, штамма NZ2 орф-вируса и штамма TJS псевдопоксвируса коров; и (ii) указанную последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая определяемый фрагмент.

[0505] Вариант осуществления 28. Химерный поксвирус по варианту осуществления 27, при этом указанная последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая определяемый фрагмент, кодирует флуоресцентный фрагмент.

[0506] Вариант осуществления 29. Химерный поксвирус по варианту осуществления 27 или 28, при этом указанная последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая определяемый фрагмент, образует часть второстепенного гена указанного химерного поксвируса.

[0507] Вариант осуществления 30. Химерный поксвирус по варианту осуществления 29, при этом указанный второстепенный ген представляет собой ген тимидинкиназы.

[0508] Вариант осуществления 31. Химерный поксвирус по варианту осуществления 29 или 30, при этом части указанного второстепенного гена удалены.

[0509] Вариант осуществления 32. Химерный поксвирус по одному из вариантов осуществления 27-31, при этом указанная последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая определяемый фрагмент, функционально связана с промотором.

[0510] Вариант осуществления 33. Химерный поксвирус по варианту осуществления 32, при этом указанный промотор представляет собой ранний промотор вируса осповакцины.

[0511] Вариант осуществления 34. Химерный поксвирус по варианту осуществления 33, при этом указанный промотор представляет собой синтетический ранний промотор.

[0512] Вариант осуществления 35. Химерный поксвирус по варианту осуществления 32, при этом указанный промотор представляет собой поздний промотор вируса осповакцины.

[0513] Вариант осуществления 36. Химерный поксвирус по варианту осуществления 35, при этом указанный промотор представляет собой промотор Н5 или промотор 11К.

[0514] Вариант осуществления 37. Химерный поксвирус по одному из вариантов осуществления 1-36, при этом указанная последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую по меньшей мере 80%.

[0515] Вариант осуществления 38. Химерный поксвирус по одному из вариантов осуществления 1-37, при этом указанная последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую по меньшей мере 85%.

[0516] Вариант осуществления 39. Химерный поксвирус по одному из вариантов осуществления 1-38, при этом указанная последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую по меньшей мере 90%.

[0517] Вариант осуществления 40, Химерный поксвирус по одному из вариантов осуществления 1-39, при этом указанная последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую по меньшей мере 95%.

[0518] Вариант осуществления 41. Химерный поксвирус по одному из вариантов осуществления 1-40, при этом указанная последовательность нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательностей, составляющую по меньшей мере 98%.

[0519] Вариант осуществления 42. Химерный поксвирус по одному из вариантов осуществления 1-41, при этом указанные фрагменты нуклеиновой кислоты происходят из штамма Brighton вируса коровьей оспы, штамма Herman поксвируса енотов, штамма Utrecht поксвируса кроликов, штамма WR вируса осповакцины, штамма IHD вируса осповакцины, штамма Elstree вируса осповакцины, штамма CL вируса осповакцины, штамма Lederle-Chorioallantoic вируса осповакцины и штамма AS вируса осповакцины.

[0520] Вариант осуществления 43. Химерный поксвирус по одному из вариантов осуществления 1-41, при этом указанные фрагменты нуклеиновой кислоты происходят из штамма NZ2 орф-вируса и штамма TJS псевдопоксвируса коров.

[0521] Вариант осуществления 44. Химерный поксвирус по одному из вариантов осуществления 1-43, при этом указанный химерный поксвирус получают согласно способу, включающему: (i) инфицирование клетки по меньшей мере двумя штаммами поксвируса, выбранными из группы, состоящей из штамма Brighton вируса коровьей оспы, штамма Herman поксвируса енотов, штамма Utrecht поксвируса кроликов, штамма WR вируса осповакцины, штамма IHD вируса осповакцины, штамма Elstree вируса осповакцины, штамма CL вируса осповакцины, штамма Lederle-Chorioallantoic вируса осповакцины, штамма AS вируса осповакцины, штамма NZ2 орф-вируса и штамма TJS псевдопоксвируса коров; и (ii) обеспечение возможности указанным по меньшей мере двух штаммам поксвируса реплицироваться, тем самым получая указанный химерный поксвирус.

[0522] Вариант осуществления 45. Химерный поксвирус по варианту осуществления 44, при этом указанную клетку инфицируют штаммом Brighton вируса коровьей оспы, штаммом Herman поксвируса енотов, штаммом Utrecht поксвируса кроликов, штаммом WR вируса осповакцины, штаммом IHD вируса осповакцины, штаммом Elstree вируса осповакцины, штаммом CL вируса осповакцины, штаммом Lederle-Chorioallantoic вируса осповакцины и штаммом AS вируса осповакцины.

[0523] Вариант осуществления 46. Химерный поксвирус по варианту осуществления 44, при этом указанную клетку инфицируют штаммом NZ2 орф-вируса и штаммом TJS псевдопоксвируса коров.

[0524] Вариант осуществления 47. Химерный поксвирус по одному из вариантов осуществления 1-46, при этом указанный химерный поксвирус представляет собой онколитический вирус.

[0525] Вариант осуществления 48. Химерный поксвирус по одному из вариантов осуществления 1-47, при этом указанный поксвирус включает миРНК-связывающую последовательность.

[0526] Вариант осуществления 49. Химерный поксвирус по варианту осуществления 48, при этом указанная миРНК-связывающая последовательность образует часть гена ДНК-полимеразы указанного химерного поксвируса.

[0527] Вариант осуществления 50. Выделенная нуклеиновая кислота, кодирующая химерный поксвирус по одному из вариантов осуществления 1-49.

[0528] Вариант осуществления 51. Фармацевтическая композиция, содержащая терапевтически эффективное количество химерного поксвируса по одному из вариантов осуществления 1-49.

[0529] Вариант осуществления 52. Способ лечения рака у пациента, при этом указанный способ включает введение указанному пациенту терапевтически эффективного количества химерного поксвируса по одному из вариантов осуществления 1-49, таким образом выполняя лечение рака у указанного пациента.

[0530] Вариант осуществления 53. Способ по варианту осуществления 52, при этом указанный рак представляет собой рак молочной железы, рак толстой кишки, рак почки, лейкоз, рак легкого, меланому, рак яичников, рак предстательной железы, рак поджелудочной железы, рак головного мозга, рак печени, рак желудка или саркому.

[0531] Вариант осуществления 54. Способ по варианту осуществления 52 или 53, при этом указанный рак представляет собой трижды негативный рак молочной железы.

[0532] Вариант осуществления 55. Способ по одному из вариантов осуществления 52-54, при этом указанное введение включает введение первого химерного поксвируса и второго химерного поксвируса.

[0533] Вариант осуществления 56. Способ по варианту осуществления 55, при этом указанный первый химерный поксвирус содержит последовательность нуклеиновой кислоты, имеющую идентичность последовательности, составляющую по меньшей мере 70% с SEQ ID NO: 1, и при этом указанная последовательность нуклеиновой кислоты включает фрагменты нуклеиновой кислоты из штамма Brighton вируса коровьей оспы, штамма Herman поксвируса енотов, штамма Utrecht поксвируса кроликов, штамма WR вируса осповакцины, штамма IHD вируса осповакцины, штамма Elstree вируса осповакцины, штамма CL вируса осповакцины, штамма Lederle-Chorioallantoic вируса осповакцины и штамма AS вируса осповакцины.

[0534] Вариант осуществления 57. Способ по варианту осуществления 55 или 56, при этом указанный второй химерный поксвирус содержит последовательность нуклеиновой кислоты, имеющую идентичность последовательности, составляющую по меньшей мере 70% с SEQ ID NO: 2, и при этом указанная последовательность нуклеиновой кислоты включает фрагменты нуклеиновой кислоты из штамма NZ2 орф-вируса и штамма TJS псевдопоксвируса коров.

[0535] Вариант осуществления 58. Способ по одному из вариантов осуществления 55-57, при этом указанный первый химерный поксвирус и указанный второй химерный поксвирус вводят в комбинированном синергическом количестве.

[0536] Вариант осуществления 59. Способ по одному из вариантов осуществления 55-58, при этом указанный первый химерный поксвирус и указанный второй химерный поксвирус вводят одновременно.

[0537] Вариант осуществления 60, Способ по одному из вариантов осуществления 55-58, при этом указанный первый химерный поксвирус и указанный второй химерный поксвирус вводят последовательно.

[0538] Вариант осуществления 61. Способ по одному из вариантов осуществления 52-60, при этом указанный поксвирус вводят в количестве по меньшей мере 10³ бляшкообразующих единиц (БОЕ)/кг.

[0539] Вариант осуществления 62. Способ по одному из вариантов осуществления 52-61, при этом указанный поксвирус вводят в количестве по меньшей мере 10³ бляшкообразующих единиц (БОЕ)/кг.

[0540] Вариант осуществления 63. Способ по одному из вариантов осуществления 52-61, при этом указанный поксвирус вводят в количестве по меньшей мере 10⁴ бляшкообразующих единиц (БОЕ)/кг.

[0541] Вариант осуществления 64. Способ по одному из вариантов осуществления 52-61, при этом указанный поксвирус вводят в количестве приблизительно 4×10⁴ бляшкообразующих единиц (БОЕ)/кг.

[0542] Вариант осуществления 65. Способ по одному из вариантов осуществления 52-61, при этом указанный поксвирус вводят в количестве приблизительно 5×10⁴ бляшкообразующих единиц (БОЕ)/кг.

[0543] Вариант осуществления 66. Способ по одному из вариантов осуществления 52-61, при этом указанный поксвирус вводят в количестве по меньшей мере 10⁶ бляшкообразующих единиц (БОЕ)/кг.

[0544] Вариант осуществления 67. Способ по одному из вариантов осуществления 52-61, при этом указанный поксвирус вводят при приблизительно 10⁸ бляшкообразующих единиц (БОЕ)/кг.

[0545] Вариант осуществления 68. Способ получения химерного поксвируса, при этом указанный способ включает: (i) инфицирование клетки по меньшей мере двумя штаммами поксвируса, выбранными из группы, состоящей из штамма Brighton вируса коровьей оспы, штамма Herman поксвируса енотов, штамма Utrecht поксвируса кроликов, штамма WR вируса осповакцины, штамма IHD вируса осповакцины, штамма Elstree вируса осповакцины, штамма CL вируса осповакцины, штамма Lederle-Chorioallantoic вируса осповакцины, штамма AS вируса осповакцины, штамма NZ2 орф-вируса и штамма TJS псевдопоксвируса коров; и (ii) обеспечение возможности указанным по меньшей мере двух штаммам поксвируса реплицироваться, тем самым получая указанный химерный поксвирус.

[0546] Вариант осуществления 69. Способ по варианту осуществления 68, при этом каждый из указанных по меньшей мере двух вирусных штаммов поксвируса присутствует при множественности заражения, составляющей менее чем приблизительно 1.

[0547] Вариант осуществления 70. Способ по варианту осуществления 68 или 69, при этом каждый из указанных по меньшей мере двух вирусных штаммов поксвируса присутствует при множественности заражения, составляющей менее чем приблизительно 0,1.

[0548] Вариант осуществления 71. Способ по одному из вариантов осуществления 68-70, при этом при этом каждый из указанных по меньшей мере двух штаммов поксвируса присутствует при множественности заражения, составляющей приблизительно 0,01.

[0549] Вариант осуществления 72. Способ по варианту осуществления 68, при этом указанную клетку инфицируют штаммом Brighton вируса коровьей оспы, штаммом Herman поксвируса енотов, штаммом Utrecht поксвируса кроликов, штаммом WR вируса осповакцины, штаммом IHD вируса осповакцины, штаммом Elstree вируса осповакцины, штаммом CL вируса осповакцины, штаммом Lederle-Chorioallantoic вируса осповакцины и штаммом AS вируса осповакцины.

[0550] Вариант осуществления 73. Способ по варианту осуществления 68, при этом указанную клетку инфицируют штаммом NZ2 орф-вируса и штаммом TJS псевдопоксвируса коров.

[0551] Вариант осуществления 74. Способ по одному из вариантов осуществления 68-73, при этом указанный химерный поксвирус представляет собой онколитический вирус.

[0552] Вариант осуществления 75. Способ по одному из вариантов осуществления 68-74, при этом указанный поксвирус включает миРНК-связывающую последовательность.

[0553] Вариант осуществления 76. Способ ингибирования клеточной пролиферации клетки, при этом указанный способ включает приведение в контакт клетки с химерным поксвирусом по одному из вариантов осуществления 1-49.

[0554] Вариант осуществления 77. Способ по варианту осуществления 76, при этом указанная клетка представляет собой раковую клетку.

[0555] Вариант осуществления 78. Способ по варианту осуществления 77, при этом указанная раковая клетка представляет собой клетку рака молочной железы, клетку рака толстой кишки, клетку рака почки, лейкозную клетку, клетку рака легкого, клетку меланомы, клетку рака яичников, клетку рака предстательной железы, клетку рака поджелудочной железы, клетку рака головного мозга, клетку рака печени, клетку рака желудка или клетку саркомы.

[0556] Вариант осуществления 79. Способ по варианту осуществления 77 или 78, при этом указанная раковая клетка представляет собой клетку трижды негативного рака молочной железы.

--->

СПИСОК ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

<110> City of Hope

Fong, Yuman

Chen, Nanhai

<120> Композиции химерных поксвирусов и их применение<130> 48440-606001WO

<150> US 62/372,408

<151> 2016-08-09

<150> US 62/519,010

<151> 2017-06-13

<160> 54

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 189415

<212> ДНК

<213> Искуственная последовательность

<220>

<223> Синтетический полинуклеотид

<400> 1

gagaaagaga taaaactttt ttacgactcc atcagaaaga ggtttaatat ttttgtgaga 60

ccatcgaaga gagaaagaga aagagatagt tagtctagat atttttctta gtacaaaagt 120

caatgtttta aaatatatgg acaagaattt gtctgtataa aaacttgtgt gaaattttgt 180

accaaagaaa aaatgtgagc agtatcccct acatggattt tactagatca tttatatacc 240

aaaaaatatt atacgatcta cgttttatta tatgatttta acgtgtaaat tataaacatt 300

attttatgat atacaattgt ctggtaacct agatgggcat aggggatgtt gataagctcg 360

acgagtatat gttgttggac gttattgttt aagaaatagt tgatgcatca gaaagagaat 420

aaaaaatatt ttagtgagac catcgaagag agaaagagat aaaacttttt tacgactcca 480

tcagaaagag gtttaatatt tttgtgagac catcgaagag agaaagagaa taaaaatatt 540

ttatgactcc attgaagaga gaaagagaaa atgagaatga gaataaaaat attttagtga 600

caccatcaga aagaggttta atatttttgt gagaccatcg aagagagaaa gagaataaaa 660

atattttatg actccattga agagagaaag agaaaatgag aatgagaata aaaatatttt 720

agtgacacca tcagaaagag gtttaatatt ttttatgaga ccatcaaaga gagaaagaga 780

ataaaaatat ttttgtaaaa ctttttttat gagaccatca aagagagaaa gagaataaaa 840

atatttttgt aaaacttttt ttatgagacc atcaaagaga gaaagagaat aaaaatattt 900

ttgtaaaact ttttttatga gaccatcaaa gagagaaaga gaataaaaat atttttgtaa 960

aacttttttt atgagaccat caaagagaga aagagaataa aaatattttt gtaaaacttt 1020

ttttatgaga ccatcaaaga gagaaagaga ataaaaaaat atttttgtaa aacttttttt 1080

atgagaccat cagaaagagg tttaatattt ttgtgatacc ctgaaaggaa ataggaatag 1140

gaatagtgtc ataatcgtat cacactattg agacagaaaa agaagaagtc gcgagaggta 1200

actttttgtt ttgcaaaccg gaatatagtg tccggtacac ttttttaatt cgtggtgtgc 1260

ctgaatcgtt cgattaaccc tactcatcca atttcagatg aatagagtta tcgattcaga 1320

cacacgcttt gagttttgtt gaatcgatga gtgaagtatc atcggttgca ccttcagatg 1380

ccgatccgtc gacatacttg acctcaagtt cagatgattc cttgcacatg tctccgatac 1440

gaacgctaaa ctctagattc ttgacacatt ttgtatcgac gatcgttgaa ccgatgatat 1500

cttcgtaact cactttctta tgagagatgt tagacccgag tactggatgg gtcttgatgt 1560

cgctgtcttt ctcttcttcg ctacatctga tgtcgataga cacctcacag tctttccatc 1620

agcggattct gagatggatt taatctgagg acatttggtg aatccaaagt tcattctcag 1680

acctccaccg atgatggagt aataagtggt aggaggatct acatcctcga ctgattccac 1740

ctcgggatct ggatctgact cggactctgt aatttccgtt acggattggc aaatcttatc 1800

atcggtcggt gtttggtctt gctttgtgac tttgataata acatcgattc ccatatgatg 1860

tttgttttct tcttccgtac acgatgagga tgattgctga agactggcag gcacatgcat 1920

gccagtacga tatattgttt catgattgct attgattgag tactgttctt tatgattcta 1980

cttccttacc gtgcaataaa ttagaatata ttttctactt ttacgagaaa ttaattattg 2040

tatttatggg tgaaaaactt actataaaaa gcgggtgggt ttggaattag tgatcagttt 2100

atgtatatcg caactaccgg gcatatggct acattaccca catgataaga gattgtatca 2160

gtttcgtagt cttgagtatt ggtattacta tatagtatat agatgtcgac gctagagtta 2220

ctgtctccga atgcggcatg atagtatcat tctttgcttt cgttaactgt ttggaggaag 2280

aatctttgtt attgcattta atctcgaaat tcagagtgca cacctttctc ctgtaaagaa 2340

tcctgaagtt gctaccttat taagaacgga gaagtatcca tcacgaaaga cgggattaca 2400

gtctttatga ttcatagtaa tagttagttc cgacgttgag atggattcgc tgagaccggt 2460

agtggtcgtc cgagtacacg atgtgtcgtt gacgggatac agattaattt ccacatcgat 2520

atagttaaag gtatttctgg gtacgggttt gagatcgtcg tacatgggaa atgaaatgtg 2580

actgtctgaa tgtatggctt taagatagct gtgataccgt atacaggtcg gtgtcggaga 2640

ttcgaatctc tttaaggcga cttatgtcac gatgatggaa tctatcttat cgaatgatat 2700

atttttcata aatacacttt tatagtcctc gtttaaacag aatttactat gtagttccgc 2760

gaatgactcg tcccttaata ggcagtaggc tagtatcttt tttacgtagt aatcgtcgta 2820

gggagagaca tcttgtagaa caacgattta atcataggta gagatacttt cagtctgtgg 2880

tggatgatgt cattcacaac atccgccttg tatatgatgt ttctgttttc aaacaccaag 2940

tcgaataccg tctttagtcg gaaggttgat gtcgtatccg atgtatgagg caacattgtt 3000

gttacaattt tgaaaggcgg tattatagta ttcgtctttc tgaatgtcga acctatctag 3060

tagataccgt agtatattga gagtgtatcc ttgattatgt tttatgaata gataaagtag 3120

atgttgtcct tcttcctttt gttcgtgcca attgagtaac attatgagaa tatgacctgt 3180

tgcacaatcg ttccatgatg ggtgtacaat caagattatt acgtatcctc gtatcggctc 3240

ctcgagataa aagagcatac accacacgag gactatgttt ggtatactgt tgaaggtaag 3300

tgtgtaaccg cgttaatgtt tgctccataa tctattatcg cgtagatgaa tcgcttctcg 3360

gctcgcatct tagtgtgact taacttgtaa taattgcttt tgtagaacgt ggatatgtgt 3420

ttacagtagt aatgaagaga agtgagtcca tcctcgtcga cgcaattagg gtcggatcct 3480

ttgtacagaa cgtaatagtt taagctccca ttgaatttat atctaagata acacagcaat 3540

agatcggatg atttactaaa gtcatcaatg gtgtccgtta gtatatcaaa gatcttgtta 3600

tcgattgata gtgaatgaat cagatagtgg tgtagaggaa tatgtccttt ttcatccttg 3660

ctatcaaagt tacgcatgcc gtggtgtaac aatatcttta atacagatgg attaaatcgt 3720

gtattcatcg tatagcaatg taatggagag ttacctcgtt tattcagatc gcagtgttta 3780

ataactagct taaacagatg agacgatgta tccacatcaa agaacgtaaa atacatatga 3840

caaacattgt tgacagaaac gtgaccttca ttcttaccgt cgtccataaa tacgttaggt 3900

atgtaccaca tactgtcgcg aacgatgcgt acaatctcgt ccatctcata atgatttact 3960

ttttcataat taaagatgtg aaagaaaaac agaacaatat atttttttag taatgtttat 4020

gcgagacata taaaataaac tccgtgttta tgatcatttt taacagcaac acattcaata 4080

ttgtattgtt atttttatat tatttacaca attaacaata tattattagt ttatattact 4140

gaattaataa tataaaattc ccaatcttgt cataaacaca cactgagaaa cagcataaac 4200

acaaaatcca tcaaaaatgt cgatgaaata tctgatgttg ttgttcgctg ctatgataat 4260

cagatcattc gccgatagtg gtaacgctat cgaaacgaca tcgccagaaa ttacaaacgc 4320

tacaacagat attccagcta tcagattatg cggtccagag ggagatggat attgtttaca 4380

cggtgactgt atccacgcta gagatattga cggtatgtat tgtagatgct ctcatggtta 4440

tacaggcatt agatgtcagc atgtagtatt agtagactat caacgttcag aaaacccaaa 4500

cactacaacg tcatatatcc catctcccgg tattatgctt gtattagtag gcattattat 4560

tattacgtgt tgtctattat ctgtttatag gttcactcga cgaactaaac tacctataca 4620

agatatggtt gtgccataat ttttataaat ttttttatga gtatttttac aaaaaaaatg 4680

tataaagtgt atgtcttatg tatatttata aaaatgctaa gtatgcgatg tatctatgtt 4740

atttgtattt atctaaacaa tacctctacc tctagatatt atacaaaaat tttttatttc 4800

ggcatattaa agtaaaatct agttaccttg aaaatgaata cagtgggtgg ttccgtatca 4860

ccagtaagaa cataatagtc gaatacagta tccgattgag attttgcata caatactagt 4920

ctagaaagaa atttgtaatc atcttctgtg acgggagtcc atatatctgt atcatcgtct 4980

agtttatcag tgtcccatgc tatattcctg ttatcatcat tagttaatga aaataactct 5040

cgtgcttcag aaaagtcaaa tattgtatcc atacatacat ctccaaaact atcgcttata 5100

cgtttatctt taacgatacc tatacctaga tggttattta ctaacagaca ttttccagat 5160

ctattgacta taactcctat agtttccaca tcaaccaagt aatgatcatc tattgttata 5220

taacaataac ataactcttt tccattttta tcagtatgta tatctatatc aacgtcgtcg 5280

ttgtagtgaa tagtagtcat tgatctatta tatgaaacgg atatgtctag aacggcaatt 5340

gttttacgtc cagttaacac tttctttgat ttaaagtcta gagtctttgc aaacataata 5400

tccttatccg actttatatt tcctgtaggg tggtataatt ttattttgcc tccacatatc 5460

ggtgtttcca aatatattac tagacaatat tccatatagt tattagttaa gggtacccaa 5520

ttagaacacg tacgcttatt atcatcattt ggatcgtatt tcataaaagt tattgtacta 5580

tcgatgtcaa cacattctac attttttaat cgtctatata gtatttttct gatattttct 5640

ataatatcag aattgtcttc catcggaagt tgtatactat cggaatcagt tacatgttta 5700

aataattctc tgatgtcatt ccttatacaa tcaaattcat tattaaacag tttaatagtc 5760

tgtagacctt tatcgtcgta aatatccatt gtcttattag ttacgcttat ttttatgtgt 5820

tttacgttgc tttattatat tttataagaa tgattgtttg acgaatcacg agaactatta 5880

agacacatta ttaggtatat attataaaaa agtttttgat tacgatgtta taagaggaaa 5940

gaggacacat taacatcata catcaattaa ctacattctt ataacatcgt aatcaaaaga 6000

attgcaattt tgatgtataa caactgtcaa tgggttatgg aattgtatat tacatattat 6060

acggtatgtt ggtaacgaca aataccgatc ggtaattgtc tgccggtgta atagaattat 6120

atatatctat ctattacacc ggctgagtat gcataataat aagttgtggt agtatgatct 6180

ccatatttat aatttaggac tttgtattca gtatttttgg aatcataaaa aataaaaaaa 6240

agttttacta atttaaaatt taaaaagtat ttacattttt ttcactgttt agtcgcggat 6300

atggaattcg atcctgccaa aatcaataca tcatctatag atcatgtaac aatattacaa 6360

tacatagatg aaccaaatga tataagacta acagtatgca ttatccgaaa tattaataac 6420

attacatatt atatcaatat cacaaaaata aatacacatt tggctaatca atttcgggct 6480

tggaaaaaac gtatcgccgg aagggactat atgactaact tatctagaga tacaggaata 6540

caacaatcaa aacttactga aactatacgt aactgtcaaa aaaatagaaa catatatggt 6600

ctatatatac actacaattt agttattaat gtggttattg attggataac cgatgtgatt 6660

gttcaatcaa tattaagagg gttggtaaat tggtacatag ctaataatac ctatactcca 6720

aatacaccca ataatacaac aaccatttct gagttggata tcatcaaaat actggataaa 6780

tacgaggacg tgtatagagt aagtaaagaa aaagaatgtg gaatttgcta tgaagttgtt 6840

tactcaaaac gatagatact ttggtttatt ggattcgtgt actcatatat tttgcataac 6900

atgcatcaat atatggcata aaacacgaag agaaaccggt gcgtcggata attgtcctat 6960

atgtcgtacc cgttttagaa acataacaat gagcaagttc tataagctag ttaactaata 7020

aataaaaagt ttaatttgtt gacgacgtat gtcgttattt ttctcgtatg aaagattaaa 7080

ttcaattcaa ttcgttgttt ctaatataat ctgccgtatt ggatggattc tcaagacaat 7140

tgcatttaga ttatattatc atgaataaaa atagtagcac gcactacttc agccaaatat 7200

tcttttttga aacgccatct atcgtagtga ggacacaagt gaacctataa ttatcaaatt 7260

tattagtatc agtcacatga aggactttct gtagagtgac gattctacca tctatggtac 7320

taacggtttc atcctccttg ataccctcac ccaaatgttc tataaattta gcatcctcgt 7380

ccgatctcat atcctttgcc aaccaataca tgtagctaaa attaggcata aatttcacac 7440

atccagtgca acgaaattct ccagaagatg ttacgatgtt taggttagga catttgattt 7500

cgtcggcatt aacatatggg tgaacacacc catacatgaa agcgatgaga aataggattc 7560

tcatcttgcc aaaatatcac tagaaaaaat ttatttatca attttaaagg tataaaaaat 7620

acttattgtt gctcgaatat tttgtatttg atggtatacg gaagattaga aatgtaggta 7680

ttatcatcaa ctgattctat ggttttatgt attctatcat gtttcactat tgcgtcggaa 7740

ataatatcat atgcttccac atatatttta ttttgtttta actcataata ctcacgtaat 7800

tctggattat tggcatatct atgaataatt ttagctccat gatcagtaaa tattaatgag 7860

aacatagtat taccacctac cattattttt ttcatttcgt tcaattcttg attgcaaaga 7920

tctatataat cattatagcg ttgacttatg gactctggaa tcttagacga tgtacagtca 7980

tctataatca tggcatattt aatacattgt tttatagcat agtagttatc tacgatgtta 8040

gatatttctc tcaatgaatc aatcacacaa tctaatgtag gtttatgaca taatagcatt 8100

ttcagcagtt caatgtttct agattcgttg atggcaatgg ctatacatgt atatccgtta 8160

tttgatctaa tgttgacatc tgaaccggat tctagcagta aagatactag agattgttta 8220

ttatatctaa cagccttgtg aagaagtgtt tctcctcgtt tgtcaatcat gttaatgtct 8280

ttaagataag gtaggcaaat gtttatagta ctaagaattg ggcaagcata agacatgtca 8340

caaagaccct ttttgtatgt ataagtgtaa aaattataac attcatagtt ggatttacat 8400

aggtgtccaa tcgggatctc tccatcatcg agataattga tggcatctcc cttccttttt 8460

tagtagatat ttcatcgtgt aagaatcaat attaatattt ctaaagtatt cgtgtatagc 8520

ctctttattt accacagttc catattccac tagagggata tcgccgaatg tcatatactc 8580

aattagtata tgttggagga catccgagtt cattgttttc aatatcaaaa agatggtttc 8640

cttatcattt ctccatagtg gtacaatact acacattatt ccgtgcggct ttccattttc 8700

caaaaacaat ttgaccaaat ctaaatctac atctttattg tatctataat cactatttag 8760

ataatcagcc ataattactc gagtgcaaca tgttagatcg tctatatatg aataagcagt 8820

gttatctatt cctttcatta acaatttaac gatgtctata tctatatgag atgacttaat 8880

ataatattga agagctgtac aatagttttt atctatagaa gacggcttga ttccgtgatt 8940

aattagacat ttaacaactt ccggacgcac atatgctctc gtatccgact ttgaatacag 9000

atgagagatg atatacagat gcaatacggt accgcaattt cgtagttgat aatcatcata 9060

cgcgtatcag tactcgtcct cataaagaac actgcagcca ttttctatga acaaatcaat 9120

aattttagga acaggatcat tgtcattaca taattttcta taactgaacg atggttttca 9180

catttaacac tcaagtcaaa tccatgttct accaacacct ttatcaagtc aacgtctaca 9240

tttttggatt tcatatagct gaatatatta aagtcattta tgttgctaaa tccagtggct 9300

tctagtagag ccatcgctat atcctttaac tttaacatgt ctactatttg tgtattcttc 9360

taatggggta gctgtctcca atttttgcgt aatggattag tgccactgtc tagtagtagt 9420

ttgacgacct cgacattatt acaatgctca ttaaaaaggt atgcgtgtaa agcattattc 9480

ttgaattggt tcctggtatc attaggatct ctgtctctca acatctgttt aagttcatcg 9540

agagccacct cctcattttc cagatagtca aacattttga ctgaatgagc tactgtgaac 9600

tctatacacc cacacaacta atgtcattaa atattatttt tttgaatgta tttataccat 9660

gtcaaaaact tgtacaatta ttaataaaaa taatttagtg tttaaatttt accagttcca 9720

gattttacac ctccgttaac cccacttttt acaccactgg acgatcctcc tccccacatt 9780

ccaccgccac cagatgtata agttttagat cctttattac taccatcatg tccatggata 9840

aagacactcc acatgccgcc actactaccc cctttagaag acatattaat aagacttaag 9900

gacaagttta acaataaaat taatcacgag taccctacta ccaacctaca ctattatatg 9960

attatagttt ctatttttac agtaccttaa ctaaagtctc tagtcacaag agcaatacta 10020

ccaacctaca ctattatatg attatagttt ctatttttat aggaacgcgt acgagaaaat 10080

caaatgtcta atttctaacg gtagtgttga taaacgatta tcgtcaatgg atacctcctc 10140

tatcatgtcg tctattttct tactttgttc tattaactta ttagcattat atattatttg 10200

attataaaac ttatattgct tattagccca atctgtaaat atcggattat taacatatcg 10260

tttctttgta ggtttattta acatgtacat cactgtaagc atgtccgtac catttatttt 10320

aatttgacgc atatccgcaa tttctttttc gcagtcggtt ataaattcta tatatgatgg 10380

atacatgcta catgtgtact tataatcgac taatatgaag tacttgatac atattttcag 10440

taacgattta ttattaccac ctatgaataa gtacctgtga tcgtctaggt aatcaactgt 10500

tttcttaata cattcgatgg ttggtaattt actcagaata atttccaata tcttaatata 10560

taattctgct atttctggga tatatttatc tgccagtata acacaaatag taatacatgt 10620

aaacccatat tttgttatta tattaatgtc tgcgccatta tctattaacc attctactag 10680

gctgacacta tgcgacttaa tacaatgata aagtatacta catccatgtt tatctatttt 10740

gtttatatca tcaatatacg gcttacaaag ttttagtatc gataacacat ccaactcacg 10800

catagagaag gtagggaata atggcataat atttattagg ttatcatcat tgtcattatc 10860

tacaactaag tttccatttt ttaaaatata ctcgacaact ttaggatctc tattgccaaa 10920

tttttgaaaa tatttattta tatgcttaaa tctatataat gtagctcctt catcaatcat 10980

acatttaata acattgatgt atactgtatg ataagataca tattctaaca atagatcttg 11040

tatagaatct gtatatcttt taagaattgt ggatattagg atattattac gtaaactatt 11100

acacaattct aaaatataaa acgtatcacg gtcgaataat agttgatcaa ctatataatt 11160

atcgattttg tgatttttct tcctaaactg tttacgtaaa tagttagata gaatattcat 11220

tagttcatga ccactatagt tactatcgaa taacgcgtca aatatttccc gtttaatatc 11280

gcatttgtca agataataat agagtgtggt atgttcacga taagtataat aacgcatctc 11340

ttttttgtgt gaaattaaat agtttatcac gtccaaagat gtagcataac catcttgtga 11400

cctagtaata atataataat agagaactgt tttacccatt ctatcatcat aatcagtggt 11460

gtagtcgtaa tcgtaatcgt ctaattcatc atcccaatta taatattcac cagcacgtct 11520

aatctgttct attttgatct tgtatccata ctgtatgttg ctacatgtag gtattccttt 11580

atccaataat agtttaaaca catctacatt gggatttgat gttgtagcgt atttctctac 11640

aatattaata ccatttttga tactatttat ttctatacct ttcgaaatta gtaatttcaa 11700

taagtctata tcgatgttat cagaacatag atattcgaat atatcaaaat cattgatatt 11760

tttatagtcg actgacgaca ataacaaaat cacaacatcg tttttgatat tattattttt 11820

cttggtaacg tatgccttta atggagtttc accatcatac tcatataatg gatttgcacc 11880

actttctatc aatgattgtg cactgctggc atcgatgtta aatgttttac aactatcata 11940

gagtatctta tcgttaacca tgattggttg ttgatgctat cgcatttttt ggtttctttc 12000

atttcagtta tgtatggatt tagcacgttt gggaagcatg agctcatatg atttcagtac 12060

tgtagtgtca gtactattag tttcgatcag atcaatgtct agatctatag aatcaaaaca 12120

cgataggtca gaagataatg aatatctgta cgcttctttt tgtactgtaa cttctggttt 12180

tgttagatgg ttgcatcgtg ctttaacatc aatggtacaa attttatcct cgctttgtgt 12240

atcatattcg tctctagtat aaaattctat attcagatta tcatgcgatg tgtatacgct 12300

aacggtatca ataaacggag cacaccattt agtcataaca gtaatccaaa attttttaaa 12360

gtatatctta acgaaagaag ttgtgtcatt gtctacggtg tatggtacta gatcctcata 12420

agtgtatata tctagagtaa tgtttaattt attaaatggt tgataatatg gatcctcatg 12480

acaatttccg aagatggaaa tgagatatag acatgcaata aatctaatcg aagacatggt 12540

tactccttaa aaaaatacga ataatcacct tggctattta gtaagtgtca tttaacacta 12600

tactcatatt aatccatgga ctcataatct ctatacggga ttaacggatg ttctatatac 12660

ggggatgagt agttttcttc tttaacttta tactttttac taatcatatt tagactgatg 12720

tatgggtaat agtgtttaaa gagttcgttc tcatcatcag aataaatcaa tatctctgtt 12780

tttttgttat acagatgtat tacagcctca tatattacgt aatagaacgt gtcatctacc 12840

ttattaactt tcaccgcata gttgtttgca aatacggtta atcctttgac ctcgtcgatt 12900

tccgaccaat ctgggcgtat aatgaatcta aactttaatt tcttgtaatc attcgaaata 12960

atttttagtt tgcatccgta gttatcccct ttatgtaact gtaaatttct caacgcgata 13020

tctccattaa taatgatgtc gaattcgtgc tgtataccca tactgaatgg atgaactaac 13080

gaatatcaac ggcgttaata gtaatttact ttttcatctt tacatattgg gtactagttt 13140

tactatcata agtttataaa ttccacaagc tactatggaa taagccaacc atcttagtat 13200

accacacatg tcttaaagtt tattaattaa ttacatgttg ttttatatat atcgctacga 13260

atttaaagag aaatcagttt aggaagaaaa aaattatcta tctacatcat cacgtctctg 13320

tattctacga tagagtgcta ctttaagatg agacatatcc gtgtcatcaa aaatatactc 13380

cattaaaatg attattccgg cagcgaactt gatattggat atatcacaac ctttgttaat 13440

atctacgaca atagacagca gtcccatggt tccataaaca gtgagtttat ctttctttga 13500

agcgatagtt tgtagagatc ttataaaacc gtcaaacgac atcgcattta tatctttagc 13560

taattcatat atgttaccat cgtaatatct aaccgcgtct atcttaaacg tttccatcgc 13620

tttaaagacg tttccgatag atggtctcat ttcatcagtc atactgagcc aacaaatata 13680

atcgtgtata acatctttga tagaatcaga ctctaaagaa aacgaatcgg ctttattata 13740

cgcattcatg ataaacttaa tgaaaaatgt ttttcgttgt ttaagttgga tgaatagtat 13800

gtcttaataa ttgttattat ttcattaatt aatatttagt aacgagtaca ctctataaaa 13860

acgagaatga cataactagt tatcaaagtg tctaggacgc gtaattttca tatggtatag 13920

atcctgtaag cattgtctgt attctggagc tattttcttt atcgcattag taagttcaga 13980

atatgttata aatttaaatc gaataacgaa catgacttta gtaaagtcgt ctatattaac 14040

tcttttattt tctagccatc gtaataccat gtttaagata gtatattctc tagttactac 14100

gatctcatcg ttgtctagaa tatcacatac tgaatctaca tccaatttta gaaattggtc 14160

tgtgttacat atctcttcta tattattgtt gatgtattgt cgtagaaaac tattacgtag 14220

accattttct ttataaaacg aatatatagt actccaatta tctttaccga tatatttgca 14280

cacataatcc attctctcaa tcactacatc tttaagattt tcgttgttaa gatatttggc 14340

taaactatat aattctatta gatcatcaac agaatcagta tatatttttc tagatccaaa 14400

gacgaactct ttggcgtcct ctataatatt cccagaaaag atattttcgt gttttagttt 14460

atcgagatct gatctgttca tatacgccat gattgtacgg tacgttatga taaccgcata 14520

aaataaaaat ccattttcat ttttaaccaa tactattcat aattgagatt gatgtaatac 14580

tttgttactt tgaacgtaaa gacagtacac ggatccgtat ctccaacaag cacgtagtaa 14640

tcaaatttgg tgttgttaaa cttcgcaata ttcatcaatt tagatagaaa cttatactca 14700

tcatctgttt taggaatcca tgtattatta ccactttcca acttatcatt atcccaggct 14760

atgtttcgtc catcatcgtt gcgcagagtg aataattctt ttgtattcgg tagttcaaat 14820

atatgatcca tgcatagatc ggcaaagcta ttgtagatgt gatttttcct aaatctaata 14880

taaaactcgt ttactagcaa acactttcct gatttatcga ccaagacaca tatggtttct 14940

aaatctatca agtggtgggg atccatagtt atgacgcagt aacatagatt attacattct 15000

tgactgtcgc taatatctaa atatttattg ttatcgtatt ggattctgca tatagatggc 15060

ttgtatgtca aagatataga acacataacc aatttatagt cgcgctttac attctcgaat 15120

ctaaagttaa gagatttaga aaacattata tcctcggatg atgttatcac tgtttctgga 15180

gtaggatata ttaaagtctt tacagatttc gtccgattca aataaatcac taaataatat 15240

cccacattat catctgttag agtagtatca ttaaatctat tatattttat gaaagatata 15300

tcactgctca cctctatatt tcgtacattt ttaaactgtt tgtataatat ctctctgata 15360

caatcagata tatctattgt gtcggtagac gataccgtta catttgaatt aatggtgttc 15420

cattttacaa cttttaacaa gttgaccaat tcatttctaa tagtatcaaa ctctccatga 15480

ttaaatattt taatagtatc cattttatat cactacggac acaaagtagc tgacataaac 15540

cattgtataa tttttatgtt ttatgtttat tagcgtacac attttggaag ttccggcttc 15600

catgtatttc ctggagagca agtagatgat gaggaaccag atagtttata tccgtacttg 15660

cacttaaagt ctacattgtc gttgtatgag tatgatcttt taaacccgct agacaagtat 15720

ccgtttgata ttgtaggatg tggacattta acaatctgac acgtgggtgg atcggaccat 15780

tctcctcctg aacacaggac accagagtta ccaatcaacg aatatccact attgcaacta 15840

taagttacaa cgctcccatc ggtataaaaa tcctcgtatc cgttatgtct tccgttggat 15900

atagatggag gggattggca tttaacagat tcacaaatag gtgcctcggg attccatacc 15960

atagatccag tagatcctaa ttcacaatac gatttagatt caccgatcaa ctgatatccg 16020

ctattacaag agtacgttat actagagcca aagtctactc cgccaatatc aagttggcca 16080

ttatcgatat ctcgaggcga tgggcatctc cgtttaatac attgattaaa gagtgtccat 16140

ccagtacctg tacatttagc atatataggt cccatttttt gctttctgta tccaggtaga 16200

catagatatt ctatagtgtc tcctatgttg taattagcat tagtttccac actattctta 16260

aattttatat taatgggacg tgaaggaata ggacagtatg atagaacgca tcctattccc 16320

aacaatgtca ggaacgtcac gctctccacc ttcatattta tttatccgta aaaatgttat 16380

cctggacatc gtacaaataa taaaaaagcc catatatgtt tgctattgta gaaattgttt 16440

ttcacagttg ctcaaaaacg atggcagtga cttatgagtt tcatctttag taaacatatc 16500

ataatattcg atattacgag ttgacatatc gaacaaattc caagtatttg attttggata 16560

atattcgtat tttgcatctg ctataattaa gatataatca ccgcaagaac acacgaacat 16620

ctttcctaca tggttaaagt acatgtataa ttctatccat ttgtcttcct taactatata 16680

tttgtataga taattacgag tctcataagt aattccagta attgcataga tgtcaccatc 16740

gtactctaca gcataaacta tactatgatg tctaggcatg ggagactttt ttatccaacg 16800

atttttagtg aaacattcta catcgtttaa tactacatat ttctcatacg tggtataaac 16860

tccacccatt acatatatat catcgtttac gaataccgac gcgcctgaat atctaggagt 16920

aattaagttt ggaagtctta tccatttcga agtgccgtgt ttcaaatatt ctgccacacc 16980

cgttgaaata gaaaattcta atcctcctat tacatataac tttccatcgt taacacaagt 17040

actaacttct gattttaacg acgacatatt agtaaccgtt ttccattttt tcgttttaag 17100

atctacccgc gatacggaat aaacatgtct attgttaatc atgccgccaa taatgtatag 17160

acaattatgt aaaacatttg cattatagaa ttgtctatct gtattaccga ctatcgtcca 17220

atattctgtt ctaggagagt aatgggttat tgtggatata taatcagagt ttttaatgac 17280

tactatatta tgttttatac catttcgtgt cactggcttt gtagatttgg atatagttaa 17340

tcccaacaat gatatagcat tgcgcatagt attagtcata aacttgggat gtaaaatgtt 17400

gatgatatct acatcgtttg gatttttatg tatccacttt aataatatca tagctgtaac 17460

atcctcatga tttacgttaa cgtcttcgtg ggataagata gttgtcagtt catcctttga 17520

taattttcca aattctggat cggatgtcac cgcagtaata ttgttgatta tttctaacat 17580

cgacgcatta tatagttttt taattccata ttgtttagaa aagttaaaca tccttataca 17640

atttgtggaa ttaatattat gaatcatagt ttttacacat agatctacta caggcgtaac 17700

atcaattatt acggcagcaa ctagtatcat ttctacattg tttatggtga tgtttatctt 17760

cttccagcgc atatagtcta atagcgattc aaacgcgtga tagtttatac cattcaatat 17820

aatcacttca tcatttatat ggtgctcctg aatgcgttta aaaaaattat acggagacgc 17880

cgtaataatt tccttattca cttgtataat ttccccattg atagaaaata tcacgctttc 17940

cattcttgaa gtactataag taattatagt ataatgtaaa cgtttatata ttcaatattt 18000

ttataaaaat cattttgaca ttaattcctt tttaaatttc cgtctatcat ctatagaaac 18060

gtattctatg aatttataaa atgcttttac gtgtcctatc gtaggcgata gaaccgctaa 18120

aaagcctatc gaatttctac aaaagaatct attatatggt atagggagag tataaaacat 18180

taaatgcccg tacttattaa agtattcagt agccaatcct aactctttcg aatacttatt 18240

aatggctctt gttctgtacg aatctatttt tttgaacaac ggacctagtg gtatatcttg 18300

ttctatgtat ctaaaataat gtctgactag atccgttagt ttaatatcct cagtcatctt 18360

gtctagaatg gcaaatctaa ctgcgggttt aggctttagt ttagttttta tatctacatc 18420

tatgtcttta tctaacacca aaaatataat agctaatatt ttattacaat catccggata 18480

ttcttctacg atctcactaa ctaatgtttc tttggttata ctagtatagt cacgatcaga 18540

caaataaaga aaatcagatg atcgatgaat aatacattta aattcatcat ctgtaagatt 18600

tttgagatgt ctcattaaaa tattattagg gttagtactc attatcattc ggcagctatt 18660

acttatttta ttatttttca ccatatagat caatcattag atcatcaaaa tatgtttcaa 18720

tcatcctaaa gagtatggtg aatgactctt cccatctaat ttctgaacgt tcaccaatgt 18780

ctctagccac tttggcacta atagcgatca ttcgcttagc gtcttctata ttattaactg 18840

gttgattcaa tctatctagc aatggaccgt cggacagcgt cattctcatg ttcttaatca 18900

atgtacatac atcgccgtca tctaccaatt catccaacaa cataagcttt ttaaaatcat 18960

cattataata ggtttgatcg ttgtcatttc tccaaagaat atatctaata agtagagtcc 19020

tcatgattag ttaacaacta ttttttatgt taaatcaatt agtacaccgc tatgtttaat 19080

acttattcat attttagttt ttaggattga gaatcaatac aaaaaattaa tgcatcatta 19140

attttagaaa tacttagttt ccacgtagtc aatgaaacat ttgaactcat cgtacaggac 19200

gttctcgtac aggacgtaac tataaaccgg tttatatttg ttcaagatag atacaaatcc 19260

gataactttt tttacgaatt ctacgggatc cactttaaaa gtgtcatacc gggttctttt 19320

tattctttta aacagatcaa tggtgtgatg ttgattaggt cttttacgaa tttgatatag 19380

aatagcgttc acatatcctc cataatggtc aatcgccatt tgttcgtatg tcataaattc 19440

tttaattata tgacactgtg tattatttag ttcatccttg ttcatcatta ggaatctatc 19500

caaaatggca attatactag aactataggt gcgttgtata cacatattga tgtgtctgtt 19560

tatacaatcc atgatatttg gatccatgct actaccttcg ggtaaaattg tagcatcata 19620

taccatttct agtactttag gttcattatt atccattgca gaggacgtca tgatcgaatc 19680

ataaaaaaat atattatttt tatgttattt tgttaaaaat aatcatcgaa tacttcgtaa 19740

gatactcctt catgaacata atcagttaca aaacgtttat atgaagtaaa gtatctacga 19800

tttttacaaa agtccggatg cataagtaca aagtacgcga taaacggaat aataatagat 19860

ttatctagtc tatctttttc tatagctttc atagttagat acatggtctc agaagtagga 19920

ttatgtaaca tcagcttcga taaaatgact gggttattta gtcttacaca ttcgctcata 19980

catgtatgac cgttaactac agagtctaca ctaaaatgat tgaacaatag atagtctacc 20040

attgtttcgt attcagatag tacagcgtag tacatggcat cttcacaaat tatatcattg 20100

tctaatagat atttgacgca tcttatggat cccacttcaa cagccatctt aaaatcggta 20160

aaatcatatt gctttccttt atcattaata atttctaaaa catcatctct atcataaaag 20220

atacaaatat taactgtttg atccgtaata acattgctag tcgatagcaa tttgttaata 20280

agatgcgctg ggctcaatgt cttaataaga agtgtaagag gactatctcc gaatttgttt 20340

tgtttattaa catccgttga tggaagtaaa agatctataa tgtctacatt cttgactgtt 20400

ttagagcata caatatggag aggtgtattt ccatcatgat ctggttttga gggactaatt 20460

cctagtttca tcatccatga gattgtagaa gcttttggat tgtctgacat aagatgtcta 20520

tgaatatgat ttttgccaaa tttatccact atcctggctt cgaatccgat ggacattatt 20580

tttttaaaca ctctttctga aggatctgta cacgccaaca acggaccaca tccttcttca 20640

tcaaccgagt tgttaatctt ggctccatac tgtaccaata aatttattct ctctatgact 20700

tcatcatctg ttcccgagag ataatataga ggtgttttat tatgtttatc acacgcgttt 20760

ggatctgcgc cgtgcgtcag cagcatcgcg actattctat tattattaat tttagaagct 20820

atatgcaatg gataatttcc atcatcatcc gtctcatttg gagagtatcc tctatgaaga 20880

agttcttcga caaatcgttc atctagtcct ttaattccac aatacgcatg tagaatgtga 20940

taattatttc cagaaggttc gatagcttgt agcatattcc taaatacatc taaattttta 21000

ctattatatt tggcataaag agatagataa tactcggccg acataatgtt gtccattgta 21060

gtataaaaat taatatttct atttctattt ctgtatattt gcaacaattt actctctata 21120

acaaatatca taacttagtt cttttatgtc aagaaggcac tggtttagtt catctataaa 21180

tgtcacgcca taactaccac gcatgccata ctcagaatta tgataaagat atttatcctt 21240

ggggtgtagg taatggggat taatctttgt tggatcagtc tctaagttaa cacatgtcac 21300

acatgatcca tttatagtta tatcacacga tgatgattta tgaattgatt ccggaagatc 21360

gctatcgtat tttgtggttc cacaattcat ttccatacat gttattgtca cactaatatt 21420

atgatgaact ttatctagcc gctgagtggt aaacaacaga acagatagtt tattatcttt 21480

accaacaccc tcagccgctg ccacaaatct ctgatccgta tccatgatgg tcatgtttat 21540

ttctagtccg tatccagtca acactatgtt agcatttctg tcgatatagc tttcactcat 21600

atgacactca ccaataatag tagaattaat gtcgtaattt acaccaatag tgagttcggc 21660

ggcaaagtac caataccggt aatcttgtcg aggaggacat atagtattct tgtattctac 21720

tgaatacccg agagatgcga tacaaaagag taagactaat ttgtaaacca tcttactcaa 21780

aatatgtaac aatagtacga tgcaatgagt aagacaatag gaaatctatc ttatatacac 21840

ataattattc tatcaatttt accaattagt tagtgtaatg ttaacaaaaa tgtgggagaa 21900

tctaattagt ttttctttac acaattgacg tacatgagtc tgagttcctt gtttttgcta 21960

attatttcat ccaatttatt attcttgact atatcgagat cttttgtata ggagtcagac 22020

ttgtattcaa catgcttttc tataatcatt ttagctattt cggcatcatc caatagtaca 22080

ttttccagat tagcagaata gatattaatg tcgtatttga acagagcctg taacatctca 22140

atgtctttat tatctatagc caatttaatg tccggaatga agagaaggga attattggtg 22200

tttgtcgacg tcatatagtc gagcaagaga atcatcatat ccacgtgtcc attttttata 22260

gtggtgtgaa tacaactaag gagaatagcc agatcaaaag tagatggtat ctctgaaaga 22320

aagtaggaaa caatacttac atcattaagc atgacggcat gataaaatga agttttccat 22380

ccagttttcc catagaacat cagtctccaa tttttcttaa caaacagttt taccgtttgc 22440

atgttaccac tatcaaccgc ataatacaat gcggtgtttc ccttgtcatc aaattgtgaa 22500

tcatccagtc cactgaatag caaaatcttt actattttgg tatcttccaa tgtggctgcc 22560

tgatgtaatg gaaattcatt ctctagaaga tttttcaatg ctccagcgtt caacaacgta 22620

catactagac gcacgttatt atcagctatt gcataataca aggcactatg tccatggaca 22680

tccgccttaa atgcatcttt gctagagaga aagcttttca gctgcttaga cttccaagta 22740

ttaattcgtg acagatccat gtctgaaacg agacgctaat tagtgtatat tttttcattt 22800

tttataattt tgtcatattg caccagaatt aataatatct ctaatagatc tgattagtag 22860

atacatggct atcgcaaaac aacatataca catttaataa aaataatatt tattaagaaa 22920

attcagattt cacgtaccca tcaatataaa taaaataatg attccttaca ccgtacccat 22980

attaaggaga ttccacctta cccataaaca atataaatcc agtaatatca tgtctgatga 23040

tgaacacaaa tggtgtatta aattccagtt tttcaggaga tgatctcgcc gtagctacca 23100

tgatagtaga tgcctctgct acagttcctt gttcgtcgac atctatcttt gcattctgaa 23160

acattttata aatatataat gggtccctag tcatatgttt aaacaacgca ttatctggat 23220

taaacatact aggagccatc atttcggcta tcgacttaat atccctctta ttttcgatag 23280

aaaatttagg gagtttaaga ttgtacactt tattccctaa ttgaaacgac caatagtcta 23340

attttgcagc cgtaatagaa tctgtgaaat gggtcatatt atcacctatt gccaggtaca 23400

tactaatatt agcatcctta tacggaaggc gtaccatatc atattcttcg tcatcgattg 23460

tgattgtatt tccttgcaat ttagtaacta cgttcatcat gggaaccgtt ttcgtaccgt 23520

acttattagt aaaactagca ttgcgtgttt tagtgatatc aaacggatat tgccatatac 23580

ctttaaaata tatagtatta atgattgccc atagagtatt attgtcgagc atattagaat 23640

ctactacatt agacataccg gatctacgtt ctactataga attaatttta ttaaccgcat 23700

ctcgtctaaa gtttaatcta tataggccga atctatgata ttgttgataa tacgacggtt 23760

taatgcacac agtattatct acgaaacttt gataagttag atcagtgtac gtatatttag 23820

atgttttcag cttagctaat cctgatatta attctgtaaa tgctggaccc agatctcttt 23880

ttctcaaatc catagtcttc aataattcta ttctagtatt acctgatgca ggcaatagcg 23940

acataaacat agaaaacgaa taaccaaacg gtgagaagac aatattatca tcttgaatat 24000

ttttatacgc tactataccg gcattggtaa atccttgcag acgataggta gacactgaac 24060

acgttaacga tagtatcaat aacgcaatca tgattttatg gtattaataa ttaaccttat 24120

ttttatgttc ggtataaaaa ttattgatgt ctacacatcc ttttgtaatt gacatctata 24180

tatccttttg tataatcaac tctaatcact ttaactttta cagttttccc taccagttta 24240

tccctatatt caacatatct atccatatgc atcttaacac tctctgccaa gatagcttca 24300

aagtgaggat agtcaaaaag ataaatatat agagcataat cattctcgta tactctgccc 24360

tttattacat cacccgcatt gggcaacgaa taacaaaatg caagcatctt gttaacgggc 24420

tcgtaaattg ggataaaaat tatgttttta tatctatttt attcaagaga atattcagga 24480

atttcttttt ccggttgtat ctcatcgcag tatatatcat ttgtacattg tttcatattt 24540

tttaatagtc tacacctttt agtaggacta gtatcgtaca attcatagct gtattttgaa 24600

ttccaatcac gcataaaaat atcttccaat tgttgacgaa gacctaatcc atcatccggt 24660

gtaatattaa tagatgctcc acatgtatcc gtaaagtaat ttcctgtcca atttgaggta 24720

cctatatacg ccgttttatc ggttaccata tatttggcat ggtttaccct agaatacgga 24780

atgggaggat cagcatctgg tacaataaat agctttactt ctatatttat gtttttagat 24840

tttagcatag cgatagatct taaaaagttt ctcatgataa acgaagatcg ttgccagcaa 24900

ctaatcaata gcttaacgga tacttgtctg tctatagcgg ctcttcttaa ttcatcttct 24960

atataaggcc aaaacaaaat attgcctgcc ttcgaataaa taatagggat aaagttcata 25020

acagatacat aaacgaattt actcgcattt ctaatacatg acaataaagc ggttaaatca 25080

ttggttcttt ccatagtaca tagttgttgc ggtgcagaag caataaatac agagtgtgga 25140

acaccactta cgttaatact aagaggatga tctgtattat aatacgacgg ataaaagttt 25200

ttccaattat atggtagatt gttaactcca agataccagt atacctcaaa aatttgagtg 25260

agatccgctg ccaagttcct attattgaag atcgcaatac ccaattcttt gacctgagtt 25320

agtgatctcc aatccatgtt agcgcttcct aaataaatat gtgtattatc agatatccaa 25380

aattttgtat gaagaactcc tcctaggata tttgtaatat ctatgtatcg tacttcaact 25440

ccggccattt gtagtctttc aacatccttt aatggtttgt tagatttatt gacggctact 25500

ctaactctta ctcctctttt gggtaattgt acaatctcgt ttaatattat cgtgccgaaa 25560

ttcgtaccca cttcatccga taaactccaa taaaaagatg atatatctag tgtttttgtg 25620

gtattggata gaatttccct ccacatgtta aatgtagaca aatatacttt atcaaattgc 25680

atacctatag gaatagtctc tgtaatcact gcgattgtat tatccggatt cattttattt 25740

gttaaaaaat aatcctatat cacttcactc tattaaaaat ccaagtttct atttctttca 25800

tgactgattt tttaacttca tccgtttcct tatgaagatg atgtttggca ccttcataaa 25860

tttttatttc tctattacaa tttgcatgtt gcatgaaata atatgcacct aaaacatcgc 25920

taatctcatt gtttgttccc tggagtatga gagtcggggg gtgttaatct tgggaattat 25980

ttttctaacc ttgttggtag ccttcaagac ctgactagca aatccagcct taattttttc 26040

atgattgatt aatgggtcgt attggtattt ataaacttta tccatatctc tagatactga 26100

ttctggacat agctttccga ctggcgcatt tggtgtgatg gttcccataa gtttggcagc 26160

tagcagattc agttttgaaa cagcatctgc attaactaga ggagacatta gaatcattgc 26220

tgtaaacaag tttggattat cgtaagaggc tagtatagaa attgttgctc ccatggaatg 26280

cccaataaga agactggaac tcctaaataa gtagatttaa tagttaccac gtgctgtacc 26340

acatctctaa catacgtacc aaagtcatca atcatcattt tttcaccatt acttcttcca 26400

tgtccaatat gatcatgtga gaatactaaa attcctaacg atgatatgtt ttcagctagt 26460

tcgtcataac gtccagaatg tttaccagct ccatgactta tgaatactaa tgccttagga 26520

tatgtaatag gtttccaata tatgtaatca ttgtccagat tgaacataca gtttgcactc 26580

atgattcacg ttatataact atcaatatta acagttcgtt tgatgatcat attattttta 26640

tgttttattg ataattgtaa aaacatacaa ttaaatcaat atagaggaag gagacggcta 26700

ctgtcttttg tgagatagtc atggcgacta aattagatta tgaggatgct gttttttact 26760

ttgtggatga tgataaaata tgtagtcgcg actccatcat cgatctaata gatgaatata 26820

ttacgtggag aaatcatgtt atagtgttta acaaagatat taccagttgt ggaagactgt 26880

acaaggaatt gatgaagttc gatgatgtcg ctatacggta ctatggtatt gataaaatta 26940

atgagattgt cgaagctatg agcgaaggag accactacat caattttaca aaagtccatg 27000

atcaggaaag tctattcgct accataggaa tatgtgctaa aatcactgaa cattggggat 27060

acaaaaagat ttcagaatct agattccaat cattgggaaa cattacagat ctgatgaccg 27120

acgataatat aaacatcttg atactttttc tagaaaaaaa attgaattga tgatataggg 27180

gtcttcataa cgcataatta ttacgttagc attctatatc cgtgttaaaa aaaattatcc 27240

tatcatgtat ttgagagttt tatatgtagc aaacatgata gctgtgatgc caataagctt 27300

tagatattca cgcgtgctag tgttagggat ggtattatct ggtggtgaaa tgtccgttat 27360

ataatctaca aaacaatcat cgcatatagt atgcgatagt agagtaaaca tttttatagt 27420

ttttactgga ttcatacatc gtctacccaa tttggttata aatgaaattg tcgccaatct 27480

tacacccaac cccttgttat ccattagtat agtattaact tcgttattta tgtcataaac 27540

tgtaaatgat tttgtagatg ccatatcata catgatattc atgtccctat tataatcatt 27600

actaacttta tcacaatata tgttgataat atctatatat gatctagtct ttgtgggcaa 27660

ctgtctatac aagtcgtcta aacgttgttt actcatatag tatcgaacag ccatcattac 27720

atggtcccgt tccgttgata gataatcgag tatgttagtg gacttgtcaa atctatatac 27780

catattttct ggaagtggat atacatagtc gtgatcaaca ttattgctag cctcatcttc 27840

tatatcatgt actataccat tatctatatc atctacataa tctacgatat tattacacat 27900

aaacatcgac aacatactat tgtttattat ctaagtcctg ttgatccaaa cccttgatct 27960

cctctatttg tactatctag agattgtact tcttccagtt ctggataata tatacgttga 28020

tagattagct gagctattct atctccagta tttacattaa acgtacattt tccattatta 28080

ataagaatga ctcctatgtt tcccctataa tcttcgtcta ttacaccacc tcctatatca 28140

atgcctttta gtgacagacc agacctagga gctattctac catagcaaat cttaggcatg 28200

gacatactaa tatctgtctt aattaactgt ctttctcctg gagggatagt ataatcgtaa 28260

gcgctataca aatcatatcc ggcagcaccc ggcgattgcc tagtaggaga tttagctctg 28320

ttagtttcct taacaaatct aactggtgag ttaatattca tgttgaacat aaaactaata 28380

ttttatttca aaattattta ccatcccata tattccatga ataagtgtga tgattgtaca 28440

cttctatagt atctatatac gattcacgat aaaatcctcc tatcaatagc agtttattat 28500

ccactatgat caattctgga ttatccctcg gataaatagg atcatctatc agagtccatg 28560

tattgctgga ttcacaataa aattccgcat ttctaccaac caagaataac cttctaccga 28620

acactaacgc gcatgattta taatgaggat aataagtgga tggtccaaac tgccactgat 28680

catgattggg tagcaaatat tctgtagttg tatcagtttc agaatgtcct cccattacgt 28740

atataacatt gtttatagat gccactgctg gattacatct aggtttcaga agactcggca 28800

tattaaccca agcagcatcc ccgtggaacc aacgctcaac agatgtggga tttggtagac 28860

ctcctactac gtataattta ttgttagcgg gtatcccgct agcatacagt ctggggctat 28920

tcatcggagg aattggaatc caattgtttg atatataatt tacagctata gcattgttat 28980

gtatttcatt gttcatccat ccaccgatga gatatactac ttctccaaca tgagtacttg 29040

tacacatatg gaatatatct ataatttgat ccatgttcat aggatactct atgaatggat 29100

acttgtatga tttgcgtggt tgtttatcac aatgaaatat tttggtacag tctagtatcc 29160

attttacatt atttatacct ctgggagaaa gataatttga cctgattaca tttttgataa 29220

ggagtagcag atttcctaat ttatttcttc gctttatata ccacttaatg acaaaatcaa 29280

ctacataatc ctcatctgga acatttagtt catcgctttc tagaataagt ttcatagata 29340

gataatcaaa attgtctatg atgtcatctt ccagttccaa aaagtgtttg gcaataaagt 29400

ttttagtatg acataagaga ttggatagtc cgtattctat acccatcatg taacactcga 29460

cacaatattc ctttctaaaa tctcgtaaga taaagtttat acaagtgtag atgataaatt 29520

ctacagaggt taatatagaa gcacgtaata aattgacgac gttatgacta tctatatata 29580

cctttccagt atacgagtaa ataactatag aagttaaact gtgaatgtca aggtctagac 29640

aaaccctcgt aactggatct ttatttttcg tgtatttttg acgtaaatgt gtgcgaaagt 29700

aaggagataa ctttttcaat atcgtagaat tgactattat attgccacct atagcatcaa 29760

taattgtttt gaatttctta gtcatagaca atgctaatat attcttacag tacacagtat 29820

taacaaatat cggcatttat gtttctttaa aagtcaacat ctagagaaaa atgattatct 29880

ttttgagaca taactcccat tttttggtat tcacccacac gtttttcgaa aaaattagtt 29940

tttccttcca atgatatatt ttccatgaaa tcaaacggat tggtaacatt ataaattttt 30000

ttaaatccca attcagaaat caatctatcc gcgacgaatt ctatatatgt tttcatcatt 30060

tcacaattca ttcctataag tttaactgga agagccgcag taagaaattc ttgttcaatg 30120

gatactgcat ctgttataat agatctaacg gtttcttcac tcggtggata caataaatgt 30180

ttaaacatca aacatgcgaa gtcgcagtgt agaccctcgt ctctactaat tagttcgttg 30240

gaaaacgtga gtccgggcat taggccacgc tttttaagcc aaaatatgga agcgaatgat 30300

ccggaaaaga agattccttc tactgcagca aaggcaataa gtctctctcc ataaccggcg 30360

ctgtcatgta tccacttttg agcccaatcg gccttctttt ttacacaagg catcgtttct 30420

atggcattaa agagatagtt tttttcatta ctatctttaa cataagtatc gatcaaaaga 30480

ctatacattt ccgaatgaat gttttcaatg gccatctgaa atccgtagaa acatctagcc 30540

tcggtaatct gtacttctgt acaaaatcgt tccgccaaat tttcattcac tattccgtca 30600

ctggctgcaa aaaacgccaa tacatgtttt ataaaatatt tttcgtctgg tgttagttta 30660

ttccaatcat tgatatcttt agatatatct acttcttcca ctgtccaaaa tgatgcctct 30720

gcctttttat acatgttcca gatgtcataa tattggattg ggaaaataac aaatctattt 30780

ggatttggtg caaggatggg ttccataact aaattaacaa tatcaataaa ttttttttca 30840

gttatctata tgcctgtact tggatttttt gtacatcgat atcgccgcaa tcactacaat 30900

aattacaagt attattgata gcattgttat tagtactatc ataattaaat tatcgacatt 30960

catgggtgct gaataatcgt tattatcatc attatcattt tgtaattgtg acatcatact 31020

aaataaatcg tttgcgagat tgttgtggga agcgggcatg gaggatgcat tatcattatt 31080

atttaacgcc ttccatttgg attcacaaat gttacgcaca ttcaacattt tatggaaact 31140

ataattttgt gaaaacagat aacaagaaaa ctcgttatcg ttcaaatttt taacgatagt 31200

aaaccgatta aacgtcgagc taatttctaa cgctagcgac tctgttggat atgggtttcc 31260

agatatatat cttttcagtt cccctacgta tctataatca tctgtaggaa atggaagata 31320

tttccattta tctactgttc ctaatatcat atgtggtggt gtagtagaac cattaagcgc 31380

gaaagatgtt atttcgcatc gtattttaac ttcgcaataa tttctggtta gataacgcac 31440

tctaccagtc aagtcaatga tattagcctt tacagatata ttcatagtag tcgtaacgat 31500

gactccatct tttagatgcg atactccttt gtatgtacca gaatcttcgt acctcaaact 31560

cgatatattt aaacaagtta atgagatatt aacgcgtttt atgaatgatg atatataacc 31620

agaagtttta tcctcggtgg ctagcgctat aaccttatca ttataatacc aactagtgtg 31680

attaatatgt gacacgttag tgtgggtaca aatatgtaca ttatcgtcta cgtcgtattc 31740

gatacatccg catacagcca acaaatataa aatgacaaat actctaacgc cgttcgtacc 31800

catcttgatg cggtttaata aatgttttga tttcaattta ttgtaaaaaa agattcggtt 31860

ttatactgtt cgatattctc attgcttata ttttcatcta tcatctccac acagtcaaat 31920

ccgtggttag catgcacctc atcaaccggt aaaagactat cggactcttc tatcattata 31980

actctagaat atttaatttg gtcattatta atcaagtcaa ttatcttatt tttaacaaac 32040

gtgagtattt tactcatttt ttataaaaac ttttagaaat atacagactc tatcgtgtgt 32100

ctatatcttc tttttatatc caatgtattt atgtctgatt tttcttcatt tatcatatat 32160

aatggtccaa attctacacg tgcttcggat tcatccagat cattaaggtt cttataattg 32220

taacatcctt ctcttccctc ttctacatct tccttcttat tcttattctt agcgtcacag 32280

aatctaccac agcaggatcc catgacgagc gtcatattaa actaattcat tttcaattat 32340

aatatactgg taatgaccat taaaataaaa atattcttca taaccggtaa gaaagtgaaa 32400

agttcacatt gaaactatgt cagtagtata catcatgaaa tgagatgaaa tgatgatata 32460

tatactctat tttggtggag gattatatga tataattcgt ggataatcat ttttaagaca 32520

catttcttta ttcgtaaatc ttttcacgtt aaatgagtgt ccatattttg caatttcttc 32580

atatgatggc ggtgtacgtg gacgaggctg ctcctgttct tgttgtagtc gccgactgtc 32640

gtgtttgcgt ttagatccct ccattatcgc gattgcgtag atggagtact attatatacc 32700

ttgtaattaa atttttttat taattaaacg tataaaaacg ttccgtatct gtatttaaga 32760

gccagatttc gtctaataga acaaatagct acagtaaaaa taactagaat aattgctaca 32820

cccactagaa accacggatc gtaatacggc aatcggtttt cgataatagg tggaacgtat 32880

attttattta aggacttaac aattgtctgt aaaccacaat ttgcttccgc ggatcctgta 32940

ttaactatct gtaaaagcat atgttgaccg ggcggagccg aacattctcc gatatctaat 33000

ttctgtatat ctataatatt attaacctcc gcatacgcat tacagttctt ttctagcttg 33060

gataccgcac taggtacatc gtctagatct attcctattt cttcagcgat agctcttcta 33120

tccttttccg gaagcaatga aatcacttca ataaatgatt caaccatgag tgtgaaacta 33180

agtcgagaat tactcatgca tttgttagtt attcggagcg cgcaattttt aaactgtcct 33240

ataacctctc ctatatgaat agcacaagtg acattagtag ggatagaatg ttgagctaat 33300

ttttgtaaat aactatctat aaaaagatta tacaaagttt taaactcttt agtttccgcc 33360

atttatccag tctgagaaaa tgtctctcat aataaatttt tccaagaaac taattgggtg 33420

aagaatggaa acctttaatc tatatttatc acagtctgtc ttggtacaca tgatgaattc 33480

ttctaatgct gtactaaatt cgatatcttt ttcgatttct ggatatgttt ttaataaagt 33540

atgaacaaag aaatggaaat cgtaatacca gttatgttta actttgaaat tgttttttat 33600

tttcttgtta atgattccag ccacttggga aaagtcaaag tcgtttaatg ccgatttaat 33660

acgttcatta aaaacaaact ttttatcctt tagatgaatt attattggtt cattggaatc 33720

aaaaagtaag atattatcgg gtttaagatc tgcgtgtaaa aagttgtcgc agcatggtag 33780

ttcgtaaatt ttaatgtata acagagccat ctgtaaaaag ataaacttta tgtattgtac 33840

caaagattta aatcctaatt tgatagctaa ctcggtatct actttatctg cagaatacag 33900

tgctagggga aaaattataa tatttcctct ttcgtattcg tagttagttc tcttttcatg 33960

ttcgaaaaag tgaaacatgc ggttaaaata gtttataaca ttaatattac tgttaataac 34020

tgccgggtaa aagtgggata gtaatttcac gaatttgata ctgtcctttc tctcgttaaa 34080

cgcctttaaa aaaactttag aagaatatct caatgagagt tcctgaccat ccatagtttg 34140

tatcaataat agcaacatat gaagaacccg tttatacaga gtatgtaaaa atgttaattt 34200

atagtttaat cccatggccc acgcacacac gattaatttt ttttcatctc cctttagatt 34260

gttgtataga aatttgggta ctgtgaactc cgccgtagtt tccatgggac tatataattt 34320

tgtggcctcg aatacaaatt ttactacata gttatctatc ttaaagacta taccatatcc 34380

tcctgtagat atgtgataaa aatcgtcgtt tataggataa aatcgtttat ccttttgttg 34440

gaaaaaggat gaattaatgt aatcattctc ttctatcttt agtagtgttt ccctattaaa 34500

attcttaaaa taatttaaca atctaactga cggagcccaa ttttggtgta aatctaattg 34560

ggacattata ttgttaaaat acaaacagtc tcctaatata acagtatctg ataatctatg 34620

gggagacatc cattgatatt caggggatga atcattggca acacccattt attgtacaaa 34680

aagccccaat ttacaaacga aagtccaggt ttgatagaga caaactatta actattttgt 34740

ctctgttttt aatttcttta gtaatgaaat tattcacaat atcagtatct tctttatcta 34800

ccagagattt tactaacttg ataaccttgg ctgtctcatt caatagggta gtaatatttg 34860

tatgtgtgat attgatatct ttttgaattg tttcttttag aagtgattct ttgatggtgc 34920

cagcatacga attacaataa tgcagaaact cggttaacat gcaggaatta tagtaagcca 34980

attccaattg ttgcctgtat tgtattagag tattaatatg cgcaatggtg tccttgcgtt 35040

tctctgatag aatgcgagca gcgattttgg cgttatcatt tgacgatatt tctggaatga 35100

cgaatcctgt ttctactaac tttttggtag gacaaagtga aacaatcaag aagatagctt 35160

ctcctcctat ttgtggaaga aattgaactc ctctagatga tctactgacg atagtatctc 35220

cttgacagat attggaccga attacagaag tacctggaat gtaaagccct gaaaccccct 35280

cattttttaa gcagattgtt gccgtaaatc ctgcactgtg accaagatag agagctcctt 35340

tggtgaatcc atctctatgt ttcagtttaa ccaagaaaca gtcagctggt ctaaaatttc 35400

catctctatc taatacagca tctaacttga tgtcaggaac tatgaccggt ttaatgttat 35460

atgtaacatt gagtaaatcc ttaagttcat aatcatcact gtcatcagtt atgtacgatc 35520

caaacaatgt ttctaccggc atagtggata cgaagatgct atccatcaga atgtttccct 35580

gattagtatt ttctatatag ctattcttct ttaaacgatt ttccaaatca gtaactatgt 35640

tcattttttt aggagtagga cgcctagcca gtatggaaga ggattttcta gatcctctct 35700

tcaacatctt tgatctcaat ggaatgcaaa accccatagt gaaacaacca acgataaaaa 35760

taatattgtt tttcactttt tataatttta ccatctgact catggattca ttaatatctt 35820

tataagagct actaacgtat aattctttat aactgaactg agatatatac accggatcta 35880

tggtttccat aattgagtaa atgaatgctc ggcaataact aatggcaaat gtatagaaca 35940

acgaaattat actagagttg ttaaagttaa tattttctat gagctgttcc aataaattat 36000

ttgttgtgac tgcgttcaag tcataaatca tcttgatact atccagtaaa cagtctttaa 36060

gttctggaat attatcatcc cattgtaaag cccctaattc gactatcgaa tatcctgctc 36120

tgatagcagt ttcaatatcg acggacgtca atactgtaat aaaggtggta gtattgtcat 36180

catcgtgata aactactgga atatggtcgt tagtaggtac ggtaacttta cacaacgcga 36240

tatataactt tccttttgta ccatttttaa cgtagttggg acgtcctgca gggtattgtt 36300

ttgaagaaat gatatcgaga acagatttga tacgatattt gttggattcc tgattattta 36360

ctataatata atctagacag atagatgatt cgataaatag aaaaggtata tcgttggtag 36420

gataatacat ccccattcca gtattctcgg atactctatt aatgacacta gttaagaaca 36480

tgtcttctat tctagaaaac gaaaacatcc tacatggact cattaaaact tctaacgctc 36540

ctgattgtgt ctcgaatgcc tcgtacaagg atttcaagga tgccatagat tctttgacca 36600

acgatttaga attgcgttta gcatctgatt tttttattaa atcgaatggt cggctctctg 36660

gtttgctacc ccaatgataa caatagtctt gtaaagataa accgcaagaa aatttatacg 36720

catccatcca aataacccta gcaccatcgg atgatattaa tgtattatta tagattttcc 36780

atccacagtt attgggccag tatactgtta gcaacggtat atcgaataga ttactcatgt 36840

aacctactag aatgatagtt cgtgtactag tcataatatc tttaatccaa tctaagaaat 36900

ataaaattag atcttttaca ctgttaaagt taacaaaggt attacccgga tacgtggata 36960

tcatatatgg cattggtcca ttatcagtaa tagctccata aactgatacg gcgatggttt 37020

ttatatgtgt ttgatctaac gaggaagaaa ttcgcgccca caattcatct ctagatatgt 37080

atttaatatc aaacggtaac acatcaattt cgggacgcgt atatgtttct aaatttttaa 37140

tccaaatata atgatgacct atatgcccta ttatcatact gtcaactata gtacacctag 37200

agaacttacg atacatctgt ttcctgtaat cgttaaattt tacaaatcta taacatgcta 37260

aaccttttga cgacaaccat tcattaattt ctgatatgga atctgtattc tcgataccgt 37320

attgttctaa agccagtgct atatctccct gttcgtggga acgctttcgt ataatatcga 37380

tcaacggata atctgaagtt tttggagaat aatatgactc atgatctatt tcgtccataa 37440

acaatctaga cataggaatt ggaggcgatg atcttaattt tgtgcaatga gtcgtcaatc 37500

ctataacttc taatcttgta atattcatca tcgacataat actatctatg ttatcatcgt 37560

atattagtat accatgacct tcttcatttc gtgccaaaat gatatacagt cttaaatagt 37620

tacgcaatat ctcaatagtt tcataattgt tagctgtttt catcaagatt tgtaccctgt 37680

ttaacatgat ggcgttctat acgtttctat tttctatttt ttaaattttt aacgatttac 37740

tgtggctaga tacccaatct ctctcaaata tttttttagc ctcgcttaca agctgtttat 37800

ctatactatt aaaactgacg aatccgtgat tttggtaatg ggttccgtcg aaatttgccg 37860

aagtgatatg aacatattcg tcgtcgacta tcaacaattt tgtattattc tgaatagtga 37920

aaaccttcac agatagatca ttttgaacac acaacgcgtc tagacttctg gcggttgcca 37980

tagaatatac gtcgttctta tcccaattac caactagaag tctgatctta actcctctat 38040

taatggctgc ttctataatg gagttgtaaa tgtcgggcca atagtagcta ttaccgtcga 38100

cacgtgtagt gggaactatg gccaaatgtt caatatctat actagtctta gctgacctga 38160

gtttatcaat aactacatcg gtatctagat ctctagaata tcccaatagg tgttccggag 38220

aatcagtaaa gaacactcca cctataggat tcttaatatg atacgcagtg ctaactggca 38280

gacaacaagc cgcagagcat aaattcaacc atgaattttt tgcgctatta aaggctttaa 38340

aagtatcaaa tcttctacga agatctgtgg ccagcggggg ataatcagaa tatacaccta 38400

acgttttaat cgtatgtata gatcctccag taaatgacgc gtttcctaca taacatcttt 38460

catcatctga cacccaaaaa caaccgagta gtagtcccac attatttttt ttatctatat 38520

taacggttat aaaatttata tccgggcagt gactttgtag ctctcccaga tttcttttcc 38580

ctcgttcatc tagcaaaact attattttaa tccctttttc agatgcctct tttagtttat 38640

caaaaataag cgctccccta gtcgtactca gaggattaca acaaaaagat gctatgtata 38700

tatatttctt agctagagtg ataatttcgt taaaacattc aaatgttgtt aaatgatcgg 38760

atctaaaatc catattttct ggtagtgttt ctaccagcct acattttgct cccgcaggta 38820

ccgatgcaaa tggccacatt tagttaacat aaaaacttat acatcctgtt ctatcaacga 38880

ttctagaata tcatcggcta tatcgctaaa attttcatca aagtcgacat cacaacctaa 38940

ctcagtcaat atattaagaa gttccatgat gtcatcttcg tttatttcta tatccgtatc 39000

cattgtagat tgttgaccga ttatcgagtt taaatcatta ctaatactca atccttcaga 39060

atacaatctg tgtttcattg taaatttata ggcggtgtat ttaagttggt agattttcaa 39120

ttatgtatca atatagcaac agtagttctt gctcctcctt gattctagca tcctcttcat 39180

tattttcttc tacgtacata aacatgtcca atacgttaga caacacaccg acgatggcgg 39240

ccgccacaga cacgaatatg actaaaccga tgaccattta aaaacccctc tctagctttc 39300

acttaaactg tatcgattat tcttttagaa catgtataat ataaaaacat tattctattt 39360

cgaatttagg cttccaaaaa tttttcatcc gtaaaccgat aataatatat atagacttgt 39420

taatagtcgg aataaataga ttaatgctta aactatcatc atctccacga ttagagatac 39480

aatatttaca ttctttttgc tgtttcgaaa ctttatcaat acacgttaat acaaacccag 39540

gaaggagata ttgaaactga ggctgttgaa aatgaaacgg tgaatacaat aattcagata 39600

atgtaaaatc atgattccgt attctgatga tattagaact gctaatggat gtcgatggta 39660

tgtatctagg agtatctatt ttaacaaagc atcgatttgc taatatacaa ttatcctttt 39720

gattaattgt tattttattc atattcttaa aaggtttcat atttatcaat tcttctacat 39780

taaaaatttc catttttaat ttatgtagcc ccgcaatact cctcattacg tttcattttt 39840

tgtctataat atccattttg ttcatctcgg tacatagatt atccaattga gaagcgcatt 39900

tagtagtttt gtacatttta agtttattga caaatcgtcg aaaactagtt atagttaaca 39960

ttttattatt tgataccctg atattaatac ccctgccgtt actattattt ataactgatg 40020

taatccacgt aacattagaa ttaattatcg atagtaatgc atcgacgctt ccaaaattgt 40080

ctattataaa ctcaccgata atttttttat tgcatgtttt catattcatt aggattatca 40140

aatctttaat cttattacga ttgtatgcgt tgatattgca agacgtcatt ctaaaagacg 40200

gaggatctcc atcaaatgcc aaacaatcac gtacaaagta catggaaata ggttttgttc 40260

tattgcgcat catagattta tatagaacac ccgtagaaat actaatttgt tttactctat 40320

aaaatactaa tgcatctatt tcatcgtttt gtataacgtc tttccaagtg tcaaattcca 40380

aatttttttc attgatagta ccaaattctt ctatctcttt aactacttgc atagataggt 40440

aattacagtg atgcctacat gccgtttttt gaaactgaat agatgcgtct agaagcgatg 40500

ctacgctagt cacaatcacc actttcatat ttagaatata tgtatgtaaa aatatagtag 40560

aatttcattt tgtttttttc tatgctataa atgaattctc attttgcatc tgctcatact 40620

ccgttttata tcaataccaa agaaggaaga tatttggttc taaaagccgt taaagtatgc 40680

gatgttagaa ctgtagaatg tgaaggaagt aaagcttcct gcgtactcaa agtagataaa 40740

ccctcatcac ccgcgtgtga gagaagacct tcgtcccctt ccagatgcga gagaatgaat 40800

aacccaggaa aacaagttcc gtttatgagg acggacatgc tacaaaatat gttcgcggct 40860

aatcgcgata atgtagcttc tagacttttg tcctaaaata ctattatatc cttttcgata 40920

ttaataaatc cgtgtcgtcc aggtttttta tctctttcag tatgtgaata gataggtatt 40980

ttatctctat tcatcatcga atttaagaga tccgataaac attgtttgta ttctccagat 41040

gtcagcatct gatacaacaa tatatgtgca cataaacctc tggcacttat ttcatgtacc 41100

ttccccttat cactaaggag aatagtattt gagaaatatg tatacatgat attatcatga 41160

attagatata cagaatttgt aacactctcg aaatcacacg atgtgtcggc gttaagatct 41220

aatatatcac tcgataacac attttcatct agatacacta gacatttttt aaagctaaaa 41280

tagtctttag tagtgacagt aactatgcga ttattttcat cgatgataca tttcatcggc 41340

atattattac gcttaccatc aaagactata ccatgtgtat atctaacgta ttctagcatg 41400

gttgccatac gcgcattaaa cttttcagga tctttggata gatcttccaa tctatctatt 41460

tgagaaaaca tttttatcat gttcaatagt tgaaacgtcg gatccactat atagatatta 41520

tctataaaga ttttaggaac tacgttcatg gtatcctggc gaatattaaa actatcaatg 41580

atatgattat cgttttcatc ttttatcacc atatagtttc taagatatgg gattttactt 41640

aatataatat tatttcccgt gataaatttt attagaaagg ccaaatctat aagaaaagtc 41700

ctagaattag tctgaagaat atctatatcg ccgtatagta tatttggatt aattagatat 41760

agagaatatg atccgtaaca tatacaactt ttattatggc gtctaagata ttcttccatc 41820

aacttattaa catttttgac tagggaagat acattatgac gtcccattac ttttgccttg 41880

tctattactg cgacgttcat agaatttagc atatctcttg ccaattcttc cattgatgtt 41940

acattataag aaattttaga tgaaattaca tttggagctt taatagtaag aactcctaat 42000

atgtccgtgt atgtggtcac taatacagat tgtagttcta taatcgtaaa taatttacct 42060

atattatatg tttgagtctg tttagaaaag tagctaagta tacgatcttt tatttctgat 42120

gcagatgtat taacatcgga aaaaaatctt tttttattct tttttactaa agatacaaat 42180

atgtctttgt taaaaacagt tattttttga atatttctag cttgtaattt taacatatga 42240

tattcgttca cactaggtac tctgcctaaa taggtttcta taatctttaa tgtaatatta 42300

ggaaaagtat tctgatcagg attcctattc attttgagga tttaaaactc tgattattgt 42360

ctaatatggt ctctacgcaa actttttcac agagcgatag agtttttgat aactcgtttt 42420

tcttaagaaa tataaaacta ctgtctccag agctcgctct atcttttatt ttatctaatt 42480

cgatacaaac tcctgatact ggttcagaaa gtaattcatt aattttcagt cctttataga 42540

agatatttaa tatagataat acaaaatctt cagtttttga tatcgatctg attgatccta 42600

gaactagata tattaataac gtgctcatta ggcagtttat ggcagcttga taattagata 42660

tagtatattc cagttcatat ttattagata ccgcattgcc cagattttga tattctatga 42720

attcctctga aaataaatcc aaaataacta gacattctat tttttgtgga ttagtgtact 42780

ctcttccctc tatcatgttc actactggtg tccacgatga taaatatcta gagggaatat 42840

aatatagtcc ataggatgcc aatctagcaa tgtcgaataa ctgtaatttt attcttcgct 42900

cttcattatg aattgattct tgaggtataa acctaacaca aattatatta ttagactttt 42960

cgtatgtaat gtctttcatg ttataagttt ttaatcctgg aatagaatct attttaatga 43020

ggcttttaaa cgcagagttc tccaacgagt caaagcataa tactctgttg tttttcttat 43080

atacgatgtt acgattttct tctttgaatg gaataggttt ttgaattagt ttataattac 43140

aacataatag ataaggaagt gtgcaaatag tacgcggaaa aaacataata gctcccctgt 43200

tttcatccat ggttttaagt aaatgatcac tggcttcttt agtcaatgga tattcgaaca 43260

ttaaccgttt catcatcatt ggacagaatc catatttttt aatgtaaaga gtgatcaaat 43320

cattgtgttt attgtaccat cttgttgtaa atgtgtattc ggttatcgga tctgctcctt 43380

tttctattaa agtatcgatg tcgatctcgt ctaagaattc aactatatcg acatatttca 43440

tttgtataca cataaccatt actaacgtag aatgtatagg aagagatgta acgggaacag 43500

ggtttgttga ttcgcaaact attctaatac ataattcttc tgttaatacg tcttgcacgt 43560

aatctattat agatgccaag atatctatat aattattttg taagatgatg ttaactatgt 43620

gatctatata agtagtgtaa taattcatgt attttgatat atgttccaac tctgtctttg 43680

tgatgtctag tttcgtaata tctatagcat cctcaaaaaa tatattcgca tatattccca 43740

agtcttcagt tctatcttct aaaaaatctt caacgtatgg aatataataa tctattttac 43800

ctcttctgat atcattaatg atatagtttt tgacactatc ttctgtcaat tgattcttat 43860

tcactatatc taagaaacgg atagcgtccc taggacgaac tactgccatt aatatctcta 43920

ttatagcttc tggacataat tcatctatta taccagaatt aatgggaact attccgtatc 43980

tatctaacat agttttaaga aagtcagaat ctaagacttg atgttcatat attggttcat 44040

acatgaaatg atctctattg atgatagtga ctatttcatt ctctgaaaat tggtaactca 44100

ttctatatat gctttccttg ttgatgaagg atagaatata ctcaatagaa tttgtaccaa 44160

caaactgttc tcttatgaat cgtatatcat catctgaaat aatcatgtaa ggcatacatt 44220

taacaattag agacttgtct cctgttatca atatactatt cttgtgataa tttatgtgtg 44280

aggcaaattt gtccacgttc tttaattttg ttatagtaga tatcaaatcc aatggagcta 44340

cagttcttgg cttaaacaga tatagttttt ctggaacgaa ttctacaaca ttattataaa 44400

ggactttggg tagataagtg ggatgaaatc ctattttaat taatgcgata gccttgtcct 44460

cgtgcagata tccaaacgct tttgtgatag tatggcattc attgtctaga aacgctctac 44520

gaatatctgt gacagatatc atctttagag aatatactag tcgcgttaat agtactacaa 44580

tttgtatttt ttaatctatc tcaataaaaa aattaatatg tatgattcaa tgtataacta 44640

aactactaac tgttattgat aactagaatc agaatctaat gatgacgtaa ccaagaagtt 44700

tatctactgc caatttagct gcattatttt tagcatctcg tttagatttt ccatctgcct 44760

tatcgaatac tcttccgtcg atatctacac aggcataaaa tgtaggagag ttactaggcc 44820

ccactgattc aatacgaaaa gaccaatctc tcttagttat ttggcagtac tcattaataa 44880

tggtgacagg gttagcatct ttccaatcaa taattttttt agccggaata acatcatcaa 44940

aagacttatg atcctctctc attgattttt cgcgggatac atcatctatt atggcgtcag 45000

ccataacatc agcatccggc ttatccgcct ccgttgtcat aaaccaacga ggaggaatat 45060

cgtcggagct gtacaccata gcactacgtt gaagatcgta cagagcttta ttaacttctc 45120

gcttctccat attaagttgt ctagttagtt gtgcagcagt agctccttcg attccaatgt 45180

ttttaatagc cgcacacaca atctctgcgt cagaacgctc gtcaatatag atcttagaca 45240

tttttagaga gaactaacac aaccagcaat aaaactaatt tattttatca tttttttatt 45300

catcatcctc tggtggttcg tcgtttctat cgaatgtgga tctgattaac ccgtcatcta 45360

taggtgatgc tggttctgga gattctggag gagatggatt attatctgga agaatctctg 45420

ttatttcctt gttttcatgt atcgattgcg ttgtaacatt aagattgcga aatgctctaa 45480

atttgggagg cttaaagtgt tgtttgcaat ctctacacgc atgtctaact agtggaggtt 45540

cgtcagcggc tctagtttga atcatcatcg gcgtagtatt cctactttta cagttaggac 45600

acggtgtatt gtatttctcg tcgagaacgt taaaataatc gttgtaactc acatccttta 45660

ttttatctat attgtattct actcctttct taatgcattt tataccgaat aagagatagc 45720

gaaggaattc tttttcggtg ccgctagtac ccttaatcat atcacatagt gttttatatt 45780

ccaaatttgt ggcaatagac ggtttatttc tatacgatag tttgtttctg gaatcctttg 45840

agtattctat accaatatta ttctttgatt cgaatttagt ttcttcgata ttagattttg 45900

tattacctat attcttgatg tagtactttg atgatttttc catggcccat tctattaagt 45960

cttccaagtt ggcatcatcc acatattgtg atagtaattc tcggatatca gtagcggcta 46020

ccgccattga tgtttgttca ttggatgagt aactactaat gtatacattt tccatttata 46080

acacttatgt attaactttg ttcatttata ttttttcatt attatgttga tattaacaaa 46140

agtgaatata tatatatgtt aataattgta ttgtggttat acggctacaa ttttataatg 46200

agtgaaagtc agtgtccgat gatcaatgac gatagcttta ctctgaaaag aaagtatcaa 46260

atcgatagtg cggagtcaac aataaaaatg gataagaaga ggataaagtt tcagaataga 46320

gccaaaatgg taaaagaaat aaatcagaca ataagagcag cacaaactca ttacgagaca 46380

ttgaaactag gatacataaa atttaagaga atgattagga ctactactct agaagatata 46440

gcaccatcta ttccaaataa tcagaaaact tataaactat tctcggacat ttcagccatc 46500

ggcaaagcat cacagaatcc gagtaagatg gtatatgctc tgctgcttta catgtttccc 46560

aatttgtttg gagatgatca tagattcatt cgttatagaa tgcatccaat gagtaaaatc 46620

aaacacaaga tcttctctcc tttcaaactt aatcttatta gaatattagt ggaagaaaga 46680

ttctataata atgaatgcag atctaataaa tggaaaataa ttggaacaca agttgataaa 46740

atgttgatag ctgaatctga taaatataca atagatgcaa ggtataacct aaaacccatg 46800

tatagaatca agggagaatc tgaagaagat accctcttta tcaaacagat ggtagaacaa 46860

tgtgtgacat cccaggaatt ggtggaaaaa gtgttgaaga tactgtttag agatttgttc 46920

aagagtggag aatacaaagc gtacagatac gatgatgatg tagaaaatgg atttattgga 46980

ttggatacac taaaattaaa cattgttcat gatatagttg aaccatgtat gcctgttcgt 47040

aggccagtgg ctaagatact gtgtaaagaa atggtaaata aatactttga gaatccgcta 47100

catattattg gtaaaaatct tcaagagtgc attgactttg ttagtgaata ggcatttcat 47160

ctttctccaa tactaattca aattgttaaa ttaataatgg atagtataaa tagttattag 47220

tgataaaata gtaaaaataa ttattagaat aagagtgtag tatcatagat aactctcttc 47280

tataaaaatg gattttattc gtagaaagta tcttatatac acagtagaaa ataatataga 47340

ttttttaaag gatgatacat taagtaaagt aaacaatttt accctcaatc atgtactagc 47400

tctcaagtat ctagttagca attttcctca acacgttatt actaaggatg tattagctaa 47460

taccaatttt tttgttttca tacatatggt acgatgttgt aaagtgtacg aagcggtttt 47520

acgacacgca tttgatgcac ccacgttgta cgttaaagca ttgactaaga attatttatc 47580

gtttagtaac gcaatacaat cgtacaagga aaccgtgcat aaactaacac aagatgaaaa 47640

atttttagag gttgccgaat acatggacga attaggagaa cttataggcg taaattatga 47700

cttagttctt aatccattat ttcacggagg ggaacccatc aaagatatgg aaatcatttt 47760

tttaaaactg tttaagaaaa cagacttcaa agttgttaaa aaattaagtg ttataagatt 47820

acttatttgg gcatacctaa gcaagaaaga tacaggcata gagtttgcgg ataatgatag 47880

acaagatata tatactctat ttcaacaaac tggtagaatc gtccatagca atctaacaga 47940

aacgtttaga gattatatct ttcccggaga taagactagc tattgggtgt ggttaaacga 48000

aagtatagct aatgatgcgg atatcgttct taatagacac gccattacca tgtatgataa 48060

aattcttagt tatatatact ctgagataaa acagggacgc gttaataaaa acatgcttaa 48120

gttagtttat atctttgagc ctgaaaaaga tatcagagaa cttctgctag aaatcatata 48180

tgatattcct ggagatatcc tatctattat tgatgcaaaa aacgacgatt ggaaaaaata 48240

ttttattagt ttttataaag ctaattttat taacggtaat acatttatta gtgatagaac 48300

gtttaacgag gacttattca gagttgttgt tcaaatagat cccgaatatt tcgataatga 48360

acgaattatg tctttattct ctacgagtgc tgcggacatt aaacgatttg atgagttaga 48420

tattaataac agttatatat ctaatataat ttatgaggtg aacgatatca cattagatac 48480

aatggatgat atgaagaagt gtcaaatctt taacgaggat acgtcgtatt atgttaagga 48540

atacaataca tacctgtttt tgcacgagtc ggatcccatg gtcatagaga acggaatact 48600

aaagaaactg tcatctataa aatccaagag tagacggctg aacttgttta gcaaaaacat 48660

tttaaaatat tatttagacg gacaattggc tcgtctaggt cttgtgttag atgattataa 48720

aggagacttg ttagttaaaa tgataaacca tcttaagtct gtggaggatg tatccgcatt 48780

cgttcgattt tctacagata aaaaccctag tattcttcca tcgctaatca aaactatttt 48840

agctagttat aatatttcca tcatcgtctt atttcaaagg tttttaagag ataatctata 48900

tcatgtagaa gaattcttgg ataaaagcat ccatctaacc aagacggata agaaatatat 48960

acttcaattg ataagacacg gtagatcata gaacagacca aatatattat taataatttg 49020

tatatacata gatataatta tcacatatta aaaattcaca catttttgat aaatgggaac 49080

tgctgcaaca attcagactc ccaccaaatt aatgaataaa gaaaatgcag aaatgatttt 49140

ggaaaaaatt gttgatcata tagttatgta tattagtgac gaatcaagtg attcagaaaa 49200

taatcctgaa tatattgatt ttcgtaacag atacgaagac tatagatctc tcattataaa 49260

aagtgatcac gagtttgtaa agctatgtaa aaatcatgca gagaaaagtt ctccagaaac 49320

gcaacaaatg attatcaaac acatatacga acaatatctt attccagtat ctgaagtact 49380

attaaaacct ataatgtcca tgggtgacat aattacatat aacggatgta aagacaatga 49440

atggatgcta gaacaactct ctaccctaaa ctttaacaat ctccgcacat ggaactcatg 49500

tagcataggc aatgtaacgc gtctgtttta tacatttttt agttatctga tgaaagataa 49560

actaaatata taagtataat cccattctaa tactttaacc tgatgtatta gcatcttatt 49620

agaatattaa cctaactaaa agacataaca taaaaactca ttacatagtt gataaaaagc 49680

ggtaggatat aaatattatg gctgccaccg ttccgcgttt tgacgacgtg tacaaaaatg 49740

cacaaagaag aattctagat caagaaacat tttttagtag aggtctaagt agaccgttaa 49800

tgaaaaacac atatctattt gataattacg cgtatggatg gataccagaa actgcaattt 49860

ggagtagtag atacgcaaac ttagatgcaa gtgactatta tcccatttcg ttgggattac 49920

ttaaaaagtt cgagtttctc atgtctctat ataaaggtcc tattccagta tacgaagaaa 49980

aagtaaatac tgaattcatt gctaatggat cgttctctgg tagatacgta tcatatcttc 50040

gaaagttttc tgctcttcca acaaacgagt ttattagttt tttgttactg acttccattc 50100

caatctataa tatcttgttc tggtttaaaa atactcagtt tgatattact aaacacacat 50160

tattcagata cgtctataca gataatgcca aacacctggc gttggctagg tatatgcatc 50220

aaacaggaga ctataagcct ttgtttagtc gtctcaaaga gaattatata tttaccggtc 50280

ccgttccaat aggtatcaaa gatataaatc accctaatct tagtagagca agaagtccat 50340

ccgattatga gacattagct aatattagta ctatattgta ctttaccaag tatgatccgg 50400

tattaatgtt tttattgttt tacgtacctg ggtattcaat tactacaaaa attactccag 50460

ccgtagaata tctaatggat aaactgaatc taacaaagag cgacgtacaa ctgttgtaaa 50520

ttattttatg cttcgtaaaa tgtaggtttt gaaccaaaca ttctttcaaa gaatgagatg 50580

cataaaactt tattatccaa tagattgact atttcggacg tcaatcgttt aaagtaaact 50640

tcgtaaaata ttctttgatc actgccgagt ttaaaacttc tatcgataat tgtttcatat 50700

gttttaatat ttacaagttt tttggtccat ggtacattag ccggacaaat atatgcaaaa 50760

taatatcgtt ctccaagttc tatagtttct ggattatttt tattatattc agtaaccaaa 50820

tacatattag ggttatctgc ggatttataa tttgagtgat gcattcgact caacataaat 50880

aattctagag gagacgatct actatcaaat tcggatcgta aatctgtttc taaagaacgg 50940

agaatatcta tacatacctg attagaattc atccgtcctt cagacaacat ctcagacagt 51000

ctggtcttgt atgtcttaat catattctta tgaaacttgg aaacatctct tctagtttca 51060

ctagtacctt tattaattct ctcaggtaca gattttgaat tcgacgatgc cgagtatttc 51120

atcgttgtat atttcttctt cgattgcata atcagattct tatataccgc ctcaaactct 51180

attttaaaat tattaaacaa tactctatta ttaatcagtc gttctaactc ctttgctatt 51240

tctatggact tatctacatc ttgactgtct atctctgtaa acacggagtc ggtatctcca 51300

tacacgctac gaaaacgaaa tctgtaatct ataggcaacg atgttttcac aatcggatta 51360

atatctctat cgtccatata aaatggatta cttaatggat tggcaaaccg taacataccg 51420

ttagataact ctgctccatt tagtaccgat tctagataca agatcattct acgtcctatg 51480

gatgtgcaac tcttagccga agcgtatgag tatagagcac tatttctaaa tcccatcaga 51540

ccatatactg agttggctac tatcttgtac gtatattgca tggaatcata gatggccttt 51600

tcagttgaac tggtagcctg ttttaacatc tttttatatc tggctctctc tgccaaaaat 51660

gttcttaata gtctaggaat ggttccttct atcgatctat cgaaaattgc tatttcagag 51720

atgaggttcg gtagtctagg ttcacaatga accgtaatat atctaggagg tggatatttc 51780

tgaagcaaga gctgattatt tatttcttct tccaatctat tggtactaac aacgacaccg 51840

actaatgttt ccggagatag atttccaaag atacacacat taggatacag actgttataa 51900

tcaaagatta atacattatt actaaacatt ttttgttttg gagcaaatac cttaccgcct 51960

tcataaggaa acttttgttt tgtttctgat ctaactaaga tagttttagt ttccaacaat 52020

agctttaaca gtggaccctt gatgactgta ctcgctctat attcgaatac catggattga 52080

ggaagcacat atgttgacgc acccgcgtct gtttttgttt ctactccata atactcccac 52140

aaatactgac acaaacaagc atcatgaata cagtatctag ccatatctaa agctatgttt 52200

agattataat ccttatacat ctgagctaaa tcaacgtcat cctttccgaa agataattta 52260

tatgtatcat taggtaaagt aggacataat agtacgactt taaatccatt ttcccaaata 52320

tctttacgaa ttactttaca tataatatcc tcatcaacag tcacataatt acctgtggtt 52380

aaaacctttg caaatgcagc ggctttgcct ttcgcgtccg tagtatcgtc accgatgaac 52440

gtcatttctc taactcctct atttaatact ttacccatgc aactgaacgc gttcttggat 52500

atagaatcca atttgtacga atccaatttt tcagattttt gaatgaatga atatagatcg 52560

aaaaatatag ttccattatt gttattaacg tgaaacgtag tattggccat gccgcctact 52620

cccttatgac tagactgatt tctctcataa atacagagat gtacagcttc ctttttgtcc 52680

ggagatctaa agataatctt ctctcctgtt aataactcta gacgattagt aatatatctc 52740

agatcaaagt tatgtccgtt aaaggtaacg acatagtcga acgttagttc caacaattgt 52800

ttagctattc gtaacaaaac tatttcagaa cataaaacta gttctcgttc gtaatccatt 52860

tccattagtg actgtatcct caaacatcct ctatcgacgg cttcttgtat ttcctgttcc 52920

gttaacatct cttcattaat gagcgtaaac aataatcgtt taccacttaa atcgatataa 52980

cagtaacttg tatgcgagat tgggttaata aatacagaag gaaacttctt atcgaagtga 53040

cactctatat ctagaaataa gtacgatctt gggatatcga atctaggtat ttttttagcg 53100

aaacagttac gtggatcgtc acaatgataa catccattgt taatctttgt caaatattgc 53160

tcgtccaacg agtaacatcc gtctggagat atcccgttag aaatataaaa ccaactaata 53220

ttgagaaatt catccatggt ggcattttgt atgctgcgtt tctttggctc ttctatcaac 53280

cacatatctg cgacggagca ttttctatct ttaatatcta gattataact tattgtctcg 53340

tcaatgtcta tagttctcat ctttcccaac ggcctcgcat taaatggagg aggagacaat 53400

gactgatata tttcgtccgt cactacgtaa taaaagtaat gaggaaatcg tataaatacg 53460

gtctcaccat ttcgacatct ggatttcaga tataaaaatc tgttttcacc gtgactttca 53520

aaccaattaa tgcaccgaac atccatttat agaatttaga aatatatttt catttaaatg 53580

aatcccaaac attggggaag agccgtatgg accattattt ttatagtact ttcgcaagcg 53640

ggtttagacg gcaacataga agcgtgtaaa cgaaaactat atactatagt tagcactctt 53700

ccatgtcctg catgtagacg gcacgcgact atcgctatag aggacaataa tgtcatgtct 53760

agcgatgatc tgaattatat ttattatttt ttcatcagat tatttaacaa tttggcatct 53820

gatcccaaat acgcgatcga tgtgacaaag gttaaccctt tataaactta acccattata 53880

aaacttatga ttagtcacga ctgaaataac cgcgtgatta ttttttggta taattctaca 53940

cggcatggtt tctgtgacta tgaattcaac ccccgttaca ttagtgaaat ctttaacaaa 54000

cagcaagggt tcgtcaaaga cataaaactc attgtttaca atcgaaatag accccctatc 54060

acacttaaaa taaaaaatat ccttatcctt taccaccaaa taaaattctg attggtcaat 54120

gtgaatgtat tcacttaaca gttccacaaa tttatttatt aactccgagg cacatacatc 54180

gtcggtattt tttatggcaa actttactct tccagcatcc gtttctaaaa aaatattaac 54240

gagttccatt tatatcatcc aatattattg aaatgacgtt gatggacaaa tgatacaaat 54300

aagaaggtac ggtacctttg tccaccatct cctccaattc atgctctatt ttgtcattaa 54360

ctttaatgta tgaaaacagt acgccacatg cttccatgac agtgtgtaac actttggata 54420

caaaatgttt gacattagta taattgttca agactgtcaa tctataatag atagtagcta 54480

taatatattc tatgatggta ttgaagaaga tgacaacctt ggcatattga tcatttaaca 54540

cagacatggt atcaacagat agcttgaatg aaagagaatc agtaattgga ataagcgtct 54600

tctcgatgga gtgtccgtat accaacatgt ctgatatttt gatgtattcc attaaattat 54660

ttagtttttt ctttttattc tcgttaaaca gcatttctgt caacggaccc caacatcgtt 54720

gaccgattaa gttttgattg atttttccgt gtaaggcgta tctagtcaga tcgtatagcc 54780

tatccaataa tccatcgtct gtgcgtagat cacatcgtac actttttaat tctctataga 54840

agagcgacag acatctggag caattacaga cagcaatttc tttattctct acagatgtaa 54900

gatacttgaa gacattccta tgatgatgca gaattttgga taacacggta ttgatggtat 54960

ctgttaccat aattcctttg atggctgata gtgtcagagc acaagatttc caatctttga 55020

caatttttag caccattatc tttgttttga tatctatatc agacagcatg gtgcgtctga 55080

caacacaagg attaagacgg aaagatgaaa tgattctctc aacatcttca atggatacct 55140

tgctattttt tctggcatta tctatatgtg cgagaatatc ctctagagaa tcagtatcct 55200

ttttgatgat agtggatctc aatgacatgg gacgtctaaa ccttcttatt ctatcaccag 55260

attgcatggt gatttgtctt ctttctttta tcataatgta atctctaaat tcatcggcaa 55320

attgtctata tctaaaatca taatatgaga tgtttacctc tacaaatatc tgttcgtcca 55380

atgttagagt atttacatca gttttgtatt ccaaattaaa catggcaacg gatttaattt 55440

tatattcctc tattaagtcc tcgtcgataa taacagaatg tagataatca tttaatccat 55500

cgtacatggt tggaagatgc tcgttgacaa aatctttaat tgtcttgatg aaggtgggac 55560

tatatctaac atcttgatta ataaaattta taacattgtc cataggatac tttgtaacta 55620

gttttataca catctcttca tcggtaagtt tagacagaat atcgtgaaca ggtggtatat 55680

tatattcatc agatatacga agaacaatgt ccaaatctat attgtttaat atattatata 55740

gatgtagtgt agctcctaca ggaatatctt taactaagtc aatgatttca tcaaccgtta 55800

gatctatttt aaagttaatc atataggcat tgatttttaa aaggtatgta gccttgacta 55860

cattctcatt aattaaccat tccaagtcac tgtgtgtaag aagattatat tctatcataa 55920

gcttgactac atttggtccc gataccatta aagaattctt atgatataag gaaacagatt 55980

ttaggtactc atctactcta caagaatttt ggagagcctt aacgatatca gtgacgttta 56040

ttatttcagg aggaaaaaac ctaacattga gaatatcgga attaatagct tccagataca 56100

gtgattttgg caatagtccg tgtaatccat aatccagtaa cacgagctgg tgcttgctag 56160

acaccttttc aatgtttaat ttttttgaaa taagctttga taaagccttc ctcgcaaatt 56220

ccggatacat gaacatgtcg gcgacatgat taagtattgt tttttcatta tttttatatt 56280

ttctcaacaa gttctcaata ccccaataga tgatagaata tcacccaatg cgtccatgtt 56340

gtctatttcc aacaggtcgc tatatccacc aatagaagtt ttcccaaaaa agattctagg 56400

aacagttcta ccaccagtaa tttgttcaaa atagtcacgc aattcatttt cgggtttaaa 56460

ttctttaata tcgacaattt catacgctcc tcttttgaaa ctaaacttat ttagaatatc 56520

cagtgcattt ctacaaaaag gacatgtata cttgacaaaa attgtcactt tgttattggc 56580

caacctttgt tgtacaaatt cctcggccat tttaatattt aagtgatata aaactatctc 56640

gacttattta actctttagt cgagatatat ggacgcagat agctatatga tagccaacta 56700

cagaaggcaa acgctataaa aaacataatt acgacgagca tatttataaa tatttttatt 56760

cagcattact tgatatagta atattaggca cagtcaaaca ttcaaccact ctcgatacat 56820

taactctctc attttcttta acaaattctg caatatcttc gtaaaaagat tcttgaaact 56880

ttttagaata tctatcgact ctagatgaaa tagcgttcgt caacatacta tgttttgtat 56940

acataaaggc gcccatttta acagtttcta gtgacaaaat gctagcgatc ctaggatcct 57000

ttagaatcac atagattgac gattcgtctc tcttagtaac tctagtaaaa taatcataca 57060

atctagtacg cgaaataata ttatccttga cttgaggaga tctaaacaat ctagttttga 57120

gaacatcgat aagttcatcg ggaatgacat acatactatc tttaatagaa ctcttttcat 57180

ccagttgaat ggattcgtcc ttaaccaact gattaatgag atcttctatt ttatcatttt 57240

ccagatgata tgtatgtcca ttaaagttaa attgtgtagc gcttcttttt agtctagcag 57300

ccaatacttt aacatcacta atatcgatat acaaaggaga tgatttatct atggtattaa 57360

gaattcgttt ttcgacatct gtcaaaacca attccttttt gcctgtatca tccagttttc 57420

catcctttgt aaagaaatta ttttctacta gactattaat aagactgata aggattcctc 57480

cataattgca caatccaaac tttttcacaa aactagactt tacaagatct acaggaatgc 57540

gtacttcagg tttcttagct tgtgattttt tcttttgtgg acattttctt gtgaccaact 57600

catctaccat ttcattgatt ttagcagtga aataagcttt caatgcacgg gcactgatac 57660

tattgaaaac gagttgatct tcaaattccg ccatttaagt tcaccaaaca acttttaaat 57720

acaaatatat caatagtagt agaataagaa ctataaaaaa aataataatt aaccaatacc 57780

aaccccaaca accggtatta ttagttgatg tgactgtttt ctcatcactt agaacagatt 57840

taacaatttc tataaagtct gtcaaatcat cttccggaga ccccataaat acaccaaata 57900

tagcggcgta caacttatcc atttatacat tgaatattgg cttttcttta tcgctatctt 57960

catcatattc atcatcaata tcaacaagtc ccagattacg agccagatct tcttctacat 58020

tttcagtcat tgatacacgt tcactatctc cagagagtcc gataacgtta gccaccactt 58080

ctctatcaat gattagtttc ttgagtgcga atgtaatttt tgtttccgtt ccggatctat 58140

agaaaactac aggtgtgata attgccttgg ccaattgtct ttctctttta ctgagtgatt 58200

ctagttcacc ttctatagat ctgagaatgg atgattctcc agtcgaaaca tattctacca 58260

tggctccgtt taatttgttg atgaagatgg attcatcctt aaatgttttc tctgtaatag 58320

tttccaccga aagactatgc aaagaatttg gaatgcgttc cttgtgctta atgtttccat 58380

agacggcttc tagaagttga tacaacatag gactagccgc ggtaactttt atttttagaa 58440

agtatccatc gcttctatct tgtttagatt tatttttata aagtttagtc tctccttcca 58500

acataataaa agtggaagtc atttgactag ataaactatc agtaagtttt atagagatag 58560

acgaacaatt agcgtattga gaagcattta gtgtaacgta ttcgatacat tttgcattag 58620

atttactaat cgattttgca tactctataa cacccgcaca agtctgtaga gaatcgctag 58680

atgcagtagg tcttggtgaa gtttcaactc tcttcttgat taccttactc atgattaaac 58740

ctaaataatt gtactttgta atataatgat atatattttc actttatctc atttgagaat 58800

aaaaatgttt ttgtttaacc actgcatgat gtacagattt cggaatcaca aaccaccggt 58860

ggttttattt tatccttgtc caatgtgaat tgaatgggag cggatgcggg tttcgtacgt 58920

agatagtaca ttcccgtttt tagaccgaga ctccatccgt aaaaatgcat actcgttagt 58980

ttggaataac tcggatctgc tatatggata ttcatagatt gactttgatc gatgaaggct 59040

cccctgtctg cagccatttt tatgatcgtc ttttgtggaa tttcccaaat agttttataa 59100

actcgcttaa tatcttctgg aaggtttgta ttctgaatgg atccaccatc tgccataatc 59160

ctattcttga tctcatcatt ccataatttt ctctcggtta aaactctaag gagatgcgga 59220

ttaactactt gaaattctcc agacaatact ctccgagtgt aaatattact ggtatacggt 59280

tccaccgact cattatttcc caaaatttga gcagttgatg cagtcggcat aggtgccacc 59340

aataaactat ttctaagacc gtatgttctg attttatctt ttagaggttc ccaattccaa 59400

agatccgacg gtacaacatt ccaaagatca tattgtagaa taccgttact ggcgtacgat 59460

cctacatatg tatcgtatgg tccttccttc tcagctagtt cacaactcgc ctctaatgca 59520

ccgtaataaa tggtttcgaa gatcttctta tttagatctt gtgcttccag gctatcaaat 59580

ggataattta agagaataaa cgcgtccgct aatccttgaa caccaatacc gataggtcta 59640

tgtctcttat tagagatttc agcttctgga ataggataat aattaatatc tataatttta 59700

ttgagatttc tgacaattac tttgaccaca tccttcagtt tgagaaaatc aaatcgccca 59760

tctattacaa acatgttcaa ggcaacagat gccagattac aaacggctac ctcattagca 59820

tccgcatatt gtattatctc agtgcaaaga ttactacact tgatagttcc taaattttgt 59880

tgattactct ttttgttaca cgcatcctta taaagaatga atggagtacc agtttcaatc 59940

tgagattcta taatcgcttt ccagacgact cgagccttta ttatagattt gtatctcctt 60000

tctctttcgt atagtgtata caatcgttcg aactcgtctc cccaaacatt gtccaatcca 60060

ggacattcat ccggacacat caacgaccac tctccgtcat ccttcactcg tttcataaag 60120

agatcaggaa tccaaagagc tataaataga tctctggttc tatgttcctc gtttcctgta 60180

ttctttttaa gatcgaggaa cgccataata tcagaatgcc acggttccaa gtatatggcc 60240

ataactccag gccgtttgtt tcctccctga tctatgtatc tagcggtgtt attataaact 60300

ctcaacattg gaataatacc gtttgatata ccattggtac cggagatata gcttccactg 60360

gcacgaatat tactaattga tagacctatt ccccctgcca ttttagagat taatgcgcat 60420

cgttttaacg tgtcatagat accctctatg ctatcatcga tcatgttaag tagaaaacag 60480

ctagacattt ggtgacgact agttcccgca ttaaataagg taggagaagc gtgcgtaaac 60540

catttttcag aaagtagatt gtacgtctca atagctgagt ctatatccca ttgatgaatt 60600

cctactgcga cacgcattaa catgtgctga ggtctttcaa cgatcttgtt gtttattttc 60660

aacaagtagg atttttccaa agttttaaaa ccaaaatagt tgtatgaaaa gtctcgttcg 60720

taaataataa ccgagttgag tttatcctta tatttgttaa ctatatccat ggtgatactt 60780

gaaataatcg gagaatgttt cccattttta ggattaacat agttgaataa atcctccatc 60840

acttcactaa atagtttttt tgtttccttg tgtagatttg atacggctat tctggcggct 60900

agaatggcat aatccggatg ttgtgtagta caagtggctg ctatttcggc tgccagagtg 60960

tccaattcta ccgttgttac tccattatat attccttgaa taaccttcat agctatttta 61020

ataggatcta tatgatccgt gtttaagcca taacataatt ttctaatacg agacgtgatt 61080

ttatcaaaca tgacattttc cttgtatcca tttcgtttaa tgacaaacat ttttgttggt 61140

gtaataaaaa aattatttaa cttttcatta atagggattt gacgtacgta gcgtacaaaa 61200

tgattgttcc tggtatatag ataaagagtc ctatatattt gaaaatcgtt acggctcgat 61260

taaactttaa tgattgcata gtgaatatat cattaggatt taactccttg actatcaggg 61320

cggcaccaga aattaccatc aaaagcatta atacagttat gcctatcgca gttagaacgg 61380

ttatagcatc caccatttat atctaaaaat tagatcaaag aatatgtgac aaagtcctag 61440

ttgtatattg agaattgaca aaacaatgtt tcttacatat ttttttttta ttagtaaccg 61500

acttaatagt aggaactgga aaactagact tgattattct ataagtatag atacccttcc 61560

aaataatatt ctctttgata aaagttccag aaaatgtaga attttttaaa aagttatctt 61620

ttgctattac caagattgtg tttagacgct tattattaat atgagtgatg aaatccacac 61680

cgcctctaga tatcgccttt atttccacat tagatggtaa atccaatagt gaaactatct 61740

ttttaggaat gtatggactc gcgtttagag gagtgaacgt cttgggcgtc ggaaaggatg 61800

attcgtcaaa cgaataaaca atttcacaaa tggatgttaa tgtattagta ggaaattttt 61860

tgacgctagt ggaattgaag attctaatgg atgatgttct acctatttca tccgataaca 61920

tgttaatttc cgacaccaac ggttttaata tttcgatgat atacggtagt ctctctttcg 61980

gacttatata gcttattcca caatacgagt cattatatac tccaaaaaac aaaataacta 62040

gtataaaatc tgtatcgaat gggaaaaacg aaattatcga cataggtata gaatccggaa 62100

cattgaacgt attaatactt aattcttttt ctgtggtaag taccgatagg ttattgacat 62160

tgtatggttt taaatattct ataacttgag acttgataga tattagtgat gaattgaaaa 62220

ttatttttat caccacgtgt gtttcaggat catcgtcgac gcccgtcaac caaccgaatg 62280

gagtaaaata aatatcatta atatatgctc taaatattag tatttttatt aatcctttga 62340

ttatcatctt ctcgtacgcg aatgattcca tgatcaagag tgatttgaga acatcctccg 62400

gagtattaat gggcttagta aacagtacat cgttgcaata ataaaagtta tccaagttaa 62460

aggatattat gcattcgttt aaagatatca cctcatctga cggagacaat tttttggtag 62520

gttttagaga ctttgaagct acttgtttaa caaagttatt catcgtcgtt tactattcta 62580

tttaattttg tagttaattt atcacatatc acattaattg actttttggt ccacttttcc 62640

atacgtttat attcttttaa tcctgcgtta tccgtttccg ttatatccag tgatagatcg 62700

tgcaggttaa atagaatgct cttaaataat gtcattttct tatccgctaa aaatttaaag 62760

aatgtataaa cctttttcag agatttgaaa ctcttaggtg gtgtcctagt acacaatatc 62820

ataaacaaac taataaacat tccacattca gattccaaca gctgattaac ttctacatta 62880

atacagccta ttttcgctcc aaatgtacat tcgaaaaatc tgaataaaac atcgatgtca 62940

caatttgtat tatccaatac agaatgtctg tgattcgtgt taaaaccatc ggagaaggaa 63000

tagaaataaa aattattata gtggtggaat tcagttggaa tattgcctcc ggagtcataa 63060

aaggatacta aacattgttt tttatcataa attacacatt tccaatgaga caaataacaa 63120

aatccaaaca ttacaaatct agaggtagaa cttttaattt tgtctttaag tatatacgat 63180

aagatatgtt tattcataaa cgcgtcaaat ttttcatgaa tcgctaagga gtttaagaat 63240

ctcatgtcaa attgtcctat ataatccact tcggatccat aagcaaactg agagactaag 63300

ttcttaatac ttcgattgct catccaggct cctctctcag gctctatttt catcttgacg 63360

acctttggat tttcaccagt atgtattcct ttacgtgata aatcatcgat tttcaaatcc 63420

atttgtgaga agtctatcgc cttagatact ttttcccgta gtcgaggttt aaagaaatac 63480

gctaacggta tactagtagg taactcaaag acatcatata tagaatggta acgcgtcttt 63540

aactcgtcgg ttaactcttt cttttgatcg agttcgtcgc tactattggg tctgctcagg 63600

tgccccaact ctactagttc caacatcata ccgataggaa tacaagacac tttgccagcg 63660

gttgtagatt tatcatattt ctccactaca tatccgttac aatttgttaa aaatttagat 63720

acatctatat tgctacataa tccagctagt gaatatatat gacataataa attggtaaat 63780

cctagttctg gtattttact aattactaaa tctgtatatc tttccattta tcatggaaaa 63840

gaatttacca gatatcttct tttttccaaa ctgcgttaat gtattctctt acaaatattc 63900

acaagatgaa ttcagtaata tgagtaaaac ggaacgtgat agtttctcat tggccgtgtt 63960

tccagttata aaacatagat ggcataacgc acacgttgta aaacataaag gaatatacaa 64020

agttagtaca gaagcacgtg gaaaaaaagt atctcctcca tcactaggaa aacccgcaca 64080

cataaaccta accgcgaagc aatatatata cagtgaacac acaataagct ttgaatgtta 64140

tagttttcta aaatgtataa caaatacaga aatcaattcg ttcgatgagt atatattaag 64200

aggactatta gaagctggta atagtttaca gatattttcc aattccgtag gtaaacgaac 64260

agatactata ggtgtactag ggaataagta tccatttagc aaaattccat tggcctcatt 64320

aactcctaaa gcacaacgag agatattttc agcgtggatt tctcatagac ctgtagtttt 64380

aactggagga actggagtgg gtaagacgtc acaggtaccc aagttattgc tttggtttaa 64440

ttatttattt ggtggattct ctactctaga taaaatcact aactttcacg aaagaccagt 64500

cattctatct cttcctagga tagctttagt tagattgcat agcaatacca ttttaaaatc 64560

attgggattt aaggtactag atggatctcc tatttcttta cggtacggat ctataccgga 64620

agaattaata aacaaacaac caaaaaaata tggaattgta ttttctaccc ataagttatc 64680

tctaacaaaa ctatttagtt atggcactct tattatagac gaagttcatg agcatgatca 64740

aataggagat attattatag cagtagcgag aaagcatcat acgaaaatag attctatgtt 64800

tttaatgact gccacgttag aggatgaccg agaacggcta aaagtatttt tacctaatcc 64860

cgcatttata catattcctg gagatacact gtttaaaatt agcgaggtat ttattcataa 64920

taagataaat ccatcttcca gaatggcata catagaagaa gaaaagagaa atttagttac 64980

tgctatacag atgtatactc ctcctgatgg atcatccggt atagtctttg tggcatccgt 65040

tgcacagtgt cacgaatata aatcatattt agaaaaaaga ttaccgtatg atatgtatat 65100

tattcatggt aaggtcttag atatagacga aatattagaa aaagtgtatt catcacctaa 65160

tgtatcgata attatttcta ctccttattt ggaatccagc gttactatac gcaatgttac 65220

acacatttat gatatgggta aagtttttgt ccccgctcct tttggaggat cgcaagaatt 65280

tatttctaaa tctatgagag atcaacgaaa aggaagagta ggaagagtta atcctggtac 65340

atacgtctat ttctatgatc tgtcttatat gaagtctata cagcgaatag attcagaatt 65400

tctacataat tatatattgt acgctaataa gtttaatcta acactccccg aagatttgtt 65460

tataatccct acaaatttgg atattctatg gcgtacaaag gaatatatag actcgttcga 65520

tattagtaca gaaacatgga ataaattatt atccaattat tatatgaaga tgatagagta 65580

tgctaaactt tatgtactaa gtcctattct cgctgaggag ttggataact ttgagaggac 65640

gggagaatta actagtattg tacgagaagc cattttatct ctaaatttac gaattaagat 65700

tttaaatttt aaacataaag atgatgatac gtatatacac ttttgtaaaa tattattcgg 65760

tgtctataac ggaacaaacg ctactatata ttatcataga cctctaacgg gatatatgaa 65820

tatgatttca gatactatat ttgttcctgt agataataac taaaaatcaa actctaatga 65880

ccacatcttt ttttagagat gaaaaatttt ccacatctcc ttttgtagac acgactaaac 65940

attttgcaga aaaaagttta ttagtgttta gataatcgta tacttcatca gtgtagatag 66000

taaatgtgaa cagataaaag gtattcttgc tcaatagatt ggtaaattcc atagaatata 66060

ttaatccttt cttcttgaga tcccacatca tttcaaccag agacgtttta tccaatgatt 66120

tacctcgtac tataccacat acaaaactag attttgcagt gacgtcgtac ctggtattcc 66180

taccaaacaa aattttactt ttagttcttt tagaaaattc taaggtagaa tctctatttg 66240

ccaatatgtc atctatggaa ttaccactag caaaaaatga tagaaatata tattgataca 66300

tcgcagctgg ttttgatcta ctatacttta aaaacgaatc agattccata attgcctgta 66360

tatcatcagc tgaaaaacta tgttttacac gtattccttc ggcatttctt tttaatgata 66420

tatcttgttt agacaatgat aaagttatca tgtccatgag agacgcgtct ccgtatcgta 66480

taaatatttc attagatgtt agacgcttca ttaggggtat acttctataa ggtttcttaa 66540

ttagtccatc atttgttgcg tcaagaacta ctatcggatg ttgttgggta tctctagtgt 66600

tacacatggc cttactaaag tttgggtaaa taactatgat atctctatta attatagatg 66660

catatatttc atttgtcaag gatattagta tcgacttgct atcgtcatta atacgtgtaa 66720

tgtaatcata taaatcatgc gatagccaag gaaaattcaa atagatgttc atcatataat 66780

cgtcgctata attcatatta atactttgac attgactaat ttgtaatata gcctcgccac 66840

gaagaaagct ctcgtattca gtttcatcga taaaggatac cgttaaatat aactggttgc 66900

cgatagtctc atagtctatt aagtggtaag tttcgtacaa atacagaatc cctaaaatat 66960

tatctaatgt tggattaatc tttaccataa ctgtataaaa tggagacgga gtcataacta 67020

ttttaccgtt tgtacttact ggaatagacg aaggaataat ctccggacat gctggtaaag 67080

acccaaatgt ctgtttgaag aaatccaatg ttccaggtcc taatctctta acaaaaatta 67140

cgatattcga tcccgatatc ctttgcattc tatttaccag catatcacga actatattaa 67200

gattatctat catgtctatt ctcccaccgt tatataaatc gcctccgcta agaaacgtta 67260

gtatatccat acaatggaat acttcatttc taaaatagta ttcgttttct aattctttaa 67320

tgtgaaatcg tatactagaa agggaaaaat tatctttgag ttttccgtta gaaaagaacc 67380

acgaaactaa tgttctgatt gcgtccgatt ccgttgctga attaatggat ttacaccaaa 67440

aactcatata acttctagat gtagaagcat tcgctaaaaa attagtagaa tcaaaggata 67500

taagtagatg ttccaacaag tgagcaattc ccaagatttc atctatatca ttctcgaatc 67560

cgaaattaga aattcccaag tagatatcct ttttcatccg atcgttgatg aaaatacgaa 67620

ctttattcgg taagacaatc atttactaag gagtaaaata ggaagtaatg ttcgtatgtc 67680

gttatcatcg tataaattaa aggtgtgttt tttaccatta agtgacatta taattttacc 67740

aatattggaa ttataatata ggtgtatttg cgcactcgcg acggttgatg catcggtaaa 67800

tatagctgta tctaatgttc tagtcggtat ttcatcattt cgctgtctaa taatagcgtt 67860

ttctctatct gtttccatta cagctgcctg aagtttattg gtcggataat atgtaaaata 67920

ataagaaata catacgaata acaaaaataa aataagatat aataaagatg ccatttagag 67980

atctaatttt gtttaacttg tccaaattcc tacttacaga agatgaggaa tcgttggaga 68040

tagtgtcttc cttatgtaga ggatttgaaa tatcttatga tgacttgata acttactttc 68100

cagataggaa ataccataaa tatatttcta aagtatttga acatgtagat ttatcggagg 68160

aattaagtat ggaattccat gatacaactc tgagagattt agtctatctt agattgtaca 68220

agtattccaa gtgtatacgg ccgtgttata aattaggaga taatctaaaa ggcatagttg 68280

ttataaagga caggaatatt tatattagag aagcaaatga tgacttgata gaatatctcc 68340

tcaaggaata cactcctcag atttatacat attctaatga gcgcgtcccc ataactggtt 68400

caaaattaat tctttgtgga ttttctcaag ttacatttat ggcgtataca acgtcgcata 68460

taacaacaaa taaaaaggta gatgttctcg tttccaaaaa atgtatagat gaactagtcg 68520

atccaataaa ttatcaaata cttcaaaatt tatttgataa aggaagcgga acaataaaca 68580

aaatactcag gaagatattt tattcggtaa ccggtggcca aactccataa tttgcttttt 68640

ctatttcgga ttttagaatt tccaaattca ccagcgattt atcggttttg gtgaaatcca 68700

aggatttatt aatgtccaca aatgccattt gttttgtctg tggattgtat ttgaaaatgg 68760

aaacgatgta gttagataga tgcgctgcaa agtttcctat tagggttccg cgctttacgt 68820

cacccagcat acttgaatca ccatccttta aaaaaaatga taagatatca acatggagta 68880

tatcatactc ggattttaat tcttctactg catcactgac attttcacaa atactacaat 68940

acggtttacc gaaaataatc agtacgttct tcatttatgg gtatcaaaaa cttaaaatcg 69000

ttactgctgg aaaataaatc actgacgata ttagatgata atttatacaa agtatacaat 69060

ggaatatttg tggatacaat gagtatttat atagccgtcg ccaattgtgt cagaaactta 69120

gaagagttaa ctacggtatt cataaaatac gtaaacggat gggtaaaaaa gggagggcat 69180

gtaacccttt ttatcgatag aggaagtata aaaattaaac aagacgttag agacaagaga 69240

cgtaaatatt ctaaattaac caaggacaga aaaatgctag aattagaaaa gtgtacatcc 69300

gaaatacaaa atgttaccgg atttatggaa gaagaaataa aggcagaaat gcaattaaaa 69360

atcgataaac tcacatttca aatatattta tctgattctg ataacataaa aatatcattg 69420

aatgagatac taacacattt caacaataat gagaatgtta cattatttta ttgtgatgaa 69480

cgagacgcag aattcgttat gtgtctcgag gctaaaacac atttctctac cacaggagaa 69540

tggccgttga taataagtac cgatcaggat actatgctat ttgcatctac tgataatcat 69600

cctaagatga taaaaaactt aactcaactg tttaaatttg ttccctcggc agaggataac 69660

tatttagcaa aattaacggc gttagtgaat ggatgtgatt tctttcctgg actctatggg 69720

gcatctataa cacccaccaa cttaaacaaa atacaattgt ttagtgattt tacaatcgat 69780

aatatagtca ctagtttggc aattaaaaat tattatagaa agactaactc taccgtagac 69840

gtgcgtaata ttgttacgtt tataaacgat tacgctaatt tagacgatgt ctactcgtat 69900

gttcctcctt gtcaatgcac tgttcaagaa tttatatttt ccgcattaga tgaaaaatgg 69960

aacaatttta aatcatctta tttagagacc gttccgttac cctgccaatt aatgtatgca 70020

ttagaaccac gcaaggagat tgatgtttca gaagttaaaa ctttatcatc ttatatagat 70080

ttcgaaaata ctaaatcaga tatcgatgtt ataaaatcta tatcttcgat cttcggatat 70140

tctaacgaaa actgtaacac tatagtgttc ggcatctata aggataattt actactgagt 70200

ataaatagtt cattttactt taacgatagt ctgttaataa ccaatactaa aagtgataat 70260

ataataaata taggttacta gattaaaaat ggtgttccaa ctcgtgtgct ctacatgcgg 70320

caaagatatt tctcacgaac gatataaatt gattatacga aaaaaatcat taaaggatgt 70380

actcgtcagt gtaaagaacg aatgttgtag gttaaaatta tctacacaaa tagaacctca 70440

acgtaactta acagtgcaac ctctattgga tataaactaa tatggatccg gttaatttta 70500

tcaagacata tgcgcctaga ggttctatta tttttattaa ttataccatg tcattaacaa 70560

gtcatttgaa tccatcgata gaaaaacatg tgggtattta ttatggtacg ttattatcgg 70620

aacacttggt agttgaatct acctatagaa aaggagttcg aatagtccca ttggatagtt 70680

tttttgaagg atatcttagt gcaaaagtat acatgttaga gaatattcaa gttatgaaaa 70740

tagcagctga tacgtcatta actttattgg gtattccgta tggatttggt catgatagaa 70800

tgtattgttt taaattggta gctgaatgtt ataaaaatgc cggtattgat acatcgtcta 70860

aacgaatatt aggtaaagat atttttctga gccaaaactt cacagatgat aatagatgga 70920

taaagatata tgattctaat aatttaacat tttggcaaat tgattacctt aaagggtgag 70980

ttaatatgca taactactcc tccgttgttt tttccctcgt tctttttctt aacgttgttt 71040

gccatcactc tcataatgta aagatattct aaaatggtaa acttttgcat atcggacgca 71100

gaaattggta taaatgttgt aattgtatta tttcccgtca atggactagt cacagctcca 71160

tcagttttat atcctttaga gtatttctca ctcgtgtcta acattctaga gcattccatg 71220

atctgtttat cgttgatatt ggccggaaag atagattttt tattttttat tatattacta 71280

ttggcaattg tagatataac ttctggtaaa tatttttcta ccttttcaat ctcttctatt 71340

ttcaagccgg ctatatattc tgctatattg ttgctagtat caataccttt tctggctaag 71400

aagtcatatg tggtattcac tatatcagtt ttaactggta gttccattag cctttccact 71460

tctgcagaat aatcagaaat tggttcttta ccagaaaatc cagctactat aataggctca 71520

ccgatgatca ttggcaaaat cctatattgt accagattaa tgagagcata tttcatttcc 71580

aataattctg ctagttcttg agacattgat ttatttgatg aatctagttg gttctctaga 71640

tactctacca tttctgccgc atacaataac ttgttagata aaatcagggt tatcaaagtg 71700

tttagcgtgg ctagaatagt gggcttgcat gtattaaaga atgcggtagt atgagtaaac 71760

cgttttaacg aattatatag tctccagaaa tctgtggcgt tacatacatg agccgaatga 71820

catcgaagat tgtccaatat ttttaatagc tgctctttgt ccattatttc tatatttgac 71880

tcgcaacaat tgtagatacc attaatcacc gattcctttt tcgatgccgg acaatagcac 71940

aattgtttag ctttggactc tatgtattca gaattaatag atatatctct taatacagat 72000

tgcactatac attttgaaac tatgtcaaaa attgtagaac gacgctgttc tgcagccatt 72060

taactttaaa taatttacaa aaatttaaaa tgagcatccg tataaaaatc gataaactgc 72120

gccaaattgt ggcatatttt tcagagttca gtgaagaagt atctataaat gtagactcga 72180

cggatgagtt aatgtatatt tttgccgcct tgggcggatc tgtaaacatt tgggccatta 72240

tacctctcag tgcatcagtg ttctaccgcg gagccgaaaa cattgtgttt aatcttcctg 72300

tgtccaaggt aaaatcgtgt ttgtgtagtt ttcacaatga tgccatcata gatatagaac 72360

ctgatctgga aaataatcta gtaaaacttt ctagttatca tgtagtaagt gtcgattgta 72420

acaaggaact gatgcctatt aggacagata ctactatttg tctaagtata gatcaaaaga 72480

aatcttacgt gtttaatttt cacaagtatg aagaaaaatg ttgtggtaga accgtcattc 72540

atttagaatg gttgttgggc tttatcaagt gtattagtca gcatcagcat ttggctatta 72600

tgtttaaaga tgacaatatt attatgaaga ctcctggtaa tactgatgcg ttttccaggg 72660

aatattctat gactgaatgt tctcaagaac tacaaaagtt ttctttcaaa atagctatct 72720

cgtctctcaa caaactacga ggattcaaaa agagagtcaa tgtttttgaa actagaatcg 72780

taatggataa tgacgataac attctaggaa tgttgttttc ggatagagtt caatccttta 72840

agatcaacat ctttatgacg tttttagatt aatactttca atgagataaa tatgggtggc 72900

ggagtaagtg ttgagctccc taaacgggat ccgcctccgg gagtacccac tgatgagatg 72960

ttattaaacg tggataaaat gcatgacgtg atagctcccg ctaagctttt agaatatgtg 73020

catataggac cactagcaaa agataaagag gataaagtaa agaaaagata tccagagttt 73080

agattagtca acacaggacc cggtggtctt tcggcattgt taagacaatc gtataatgga 73140

accgcaccca attgctgtcg cacttttaat cgtactcatt attggaagaa ggatggaaag 73200

atatcagata agtatgaaga gggtgcagta ttagaatcgt gttggccaga cgttcacgac 73260

accggaaaat gcgatgttga tttattcgac tggtgtcagg gggatacgtt cgatagaaac 73320

atatgccatc agtggatcgg ttcagccttt aataggagta atagaactgt agagggtcaa 73380

caatcgttaa taaatctgta taataagatg caaacattat gtagtaaaga tgctagtgta 73440

ccaatatgtg aatcattttt gcatcattta cgcgcacaca atacagaaga tagcaaagag 73500

atgatcgatt atattctaag acaacagtct gcggacttta aacagaaata tatgagatgt 73560

agttatccca ctagagataa gttagaagag tcattaaaat atgcggaacc tcgagaatgt 73620

tgggatccag agtgttcgaa tgccaatgtt aatttcttgc taacacgtaa ttataataat 73680

ttaggacttt gcaatattgt acgatgtaat actagcgtga acaacttaca gatggataaa 73740

acttcctcat taagattgtc atgtggatta agcaatagtg atagattttc tactgttccc 73800

gtcaatagag caaaagtagt tcaacataat attaaacact cgttcgacct aaaattgcat 73860

ttgatcagtt tattatctct cttggtaata tggatactaa ttgtagctat ttaaatgggt 73920

gccgcggcaa gcatacagac gacggtgaat acactcagcg aacgtatctc gtctaaatta 73980

gaacaagaag cgaatgctag tgctcaaaca aaatgtgata tagaaatcgg aaatttttat 74040

atccgacaaa accatggatg taacctcact gttaaaaata tgtgctctgc ggacgcggat 74100

gctcagttgg atgctgtgtt atcagccgct acagaaacat atagtggatt aacaccggaa 74160

caaaaagcat acgtgccagc tatgtttact gctgcgttaa acattcagac gagtgtaaac 74220

actgttgtta gagattttga aaattatgtg aaacagactt gtaattctag cgcggtcgtc 74280

gataacaaat taaagataca aaacgtaatc atagatgaat gttacggagc cccaggatct 74340

ccaacaaatt tggaatttat taatacagga tctagcaaag gaaattgtgc cattaaggcg 74400

ttgatgcaat tgacgactaa ggccactact caaatagcac ctaaacaagt tgctggtaca 74460

ggagttcagt tttatatgat tgttatcggt gttataatat tggcagcgtt gtttatgtac 74520

tatgccaagc gtatgttgtt cacatccacc aatgataaaa tcaaacttat tttagccaat 74580

aaggaaaacg tccattggac tacttacatg gacacattct ttagaacttc tccgatggtt 74640

attgctacca cggatatgca aaactgaaaa tatattgata atattttaat agattaacat 74700

ggaagttatc actgatcgtc tagacgatat agtgaaacaa aatatagcgg atgaaaaatt 74760

tgtagatttt gttatacacg gtctagagca tcaatgtcct gctatacttc gaccattaat 74820

taggttgttt attgatatac tattatttgt tatagtaatt tatattttta cggtacgtct 74880

agtaagtaga aattatcaaa tgttgttggc gttggtggcg ctagtcatca cattaactat 74940

tttttattac tttatactat aatagtacta gactgacttc taacaaacat ctcacctgcc 75000

ataaataaat gcttgatatt aaagtcttct atttctaaca ctattccatc tgtggaaaat 75060

aatactctga cattatcgct aattgacaca tcggtgagtg atatgcctat aaagtaataa 75120

tcttctttgg gcacatatac cagtgtacca ggttctaaca acctatttac tggtgctcct 75180

atagcatact ttttctttac cttgagaata tccatcgttt gcttggtcaa tagcgatatg 75240

tgatttttta tcaaccactc gaaaaagtaa ttggagtgtt catatcctct acgggctatt 75300

gtctcatggc cgtgtatgaa atttaagtaa cacgactgtg gtagatttgt tctatagagc 75360

cggttgccgc aaatagatag aactaccaat atgtctgtac aaatgttaaa cattaattga 75420

ttaacagaaa aaacaatgtt cgttctggga atagaaacca gatcaaaaca aaattcgtta 75480

gaatatatgc cacgtttata cattgaatat aaaataacta cagtttgaaa aataacagta 75540

tcatttaaac atttaacttg cggggttaat ctcacaactt tactgttttt gaactgttca 75600

aaatatagca tagatccgtg agaaatacgt ttagccgcct ttaatagagg aaatcccacc 75660

gcctttctgg atctcaccaa cgacgatagt tctgaccagc aactcatttc ttcatcatcc 75720

acctgtttta acatataata ggcaggagat agatatccgt cattgcaata ttccttctcg 75780

taggcacaca atctaatatt gataaaatct ccattctctt ctctgcattt attatcttgt 75840

ttcggtggct gattaggctg tagtcttggt ttaggctttg gtatatcgtt gttgaatcta 75900

ttttggtcat taaatctttc atttcttcct ggtatatttt tatcacctcg tttggttgga 75960

tttttgtcta tattatcgtt tgtaacatcg gtacgggtat tcatttatca caaaaaaaac 76020

ttctctaaat gagtctactg ctagaaaacc tcatcgaaga agataccata ttttttgcag 76080

gaagtatatc tgagtatgat gatttacaaa tggttattgc cggcgcaaaa tccaaatttc 76140

caagatctat gctttctatt tttaatatag tacctagaac gatgtcaaaa tatgagttgg 76200

agttgattca taacgaaaat atcacaggag caatgtttac cacaatgtat aatataagaa 76260

acaatttggg tctaggagat gataaactaa ctattgaagc cattgaaaac tatttcttgg 76320

atcctaacaa tgaagttatg cctcttatta ttaataatac ggatatgact gccgtcattc 76380

ctaaaaaaag tggtaggaga aagaataaga acatggttat cttccgtcaa ggatcatcac 76440

ctatcttgtg tattttcgaa actcgtaaaa agattaatat ttataaagaa aatatggaat 76500

ccgcgtcgac tgagtataca cctatcggag acaacaaggc tttgatatct aaatatgcgg 76560

gaattaatgt cctgaatgtg tattctcctt ccacatccat gagattgaat gccatttacg 76620

gattcaccaa taaaaataaa ctagagaaac ttagtactaa taaggaacta gaatcgtata 76680

gttctagccc tcttcaagaa cccattaggt taaatgattt tctgggacta ttggaatgtg 76740

ttaaaaagaa tattcctcta acagatattc cgacaaagga ttgattacta taaatggaga 76800

atgttcctaa tgtatacttt aatcctgtgt ttatagagcc cacgtttaaa cattctttat 76860

taagtgttta taaacacaga ttaatagttt tatttgaagt attcgttgta ttcattctaa 76920

tatatgtatt ttttagatct gaattaaata tgttctttat gcctaaacga aaaatacccg 76980

atcctattga tagattacga cgtgctaatc tagcgtgtga agacgataaa ttaatgatct 77040

atggattacc atggatgaca actcaaacat ctgcgttatc aataaatagt aaaccgatag 77100

tgtataaaga ttgtgcaaag cttttgcgat caataaatgg atcacaacca gtatctctta 77160

acgatgttct tcgcagatga tgattcattt tttaagtatt tggctagtca agatgatgaa 77220

tcttcattat ctgatatatt gcaaatcact caatatctag actttctgtt attattattg 77280

atccaatcaa aaaataaatt agaagccgtg ggtcattgtt atgaatctct ttcagaggaa 77340

tacagacaat tgacaaaatt cacagacttt caagatttta aaaaactgtt taacaaggtc 77400

cctattgtta cagatggaag ggtcaaactt aataaaggat atttgttcga ctttgtgatt 77460

agtttgatgc gattcaaaaa agaatcctct ctagctacca ccgcaataga tcctattaga 77520

tacatagatc ctcgtcgtga tatcgcattt tctaacgtga tggatatatt aaagtcgaat 77580

aaagtgaaca ataattaatt ctttattgtc atcatgaacg gcggacatat tcagttgata 77640

atcggcccca tgttttcagg taaaagtaca gaattaatta gacgagttaa acgttatcaa 77700

atagctcaat ataaatgcgt gactataaaa tattctaacg ataatagata cggaacggga 77760

ctatggacgc atgataagaa taattttgaa gcattggaag caactaaact atgcgatgtt 77820

ttggaattaa ttacagattt ctccgtgata ggtatcgatg aaggacagtt ctttccagac 77880

attgttgaat tctgtgagcg tatggcaaac gaaggaaaaa tagttatagt agccgcactc 77940

gatgggacat ttcaacgtaa accgtttaat aatattttga atcttattcc attatctgaa 78000

atggtggtaa aactaactgc tgtgtgtatg aaatgcttta aggaggcttc cttttctaaa 78060

cgattgggtg aggaaaccga gataaaaata ataggaggta atgatatgta tcaatcggtg 78120

tgtagaaagt gttacatcga ctcataatat tatatttttt atctaaaaaa ctaaaaataa 78180

acattgatta aattttaata taatacttaa aaatggatgt tgtgtcgtta gataaaccgt 78240

ttatgtattt tgaggaaatt gataatgagt tagattacga accagaaagt gcaaatgagg 78300

tcgcaaaaaa actgccgtat caaggacagt taaaactatt actaggagaa ttattttttc 78360

ttagtaagtt acagcgacac ggtatattag atggtgccac cgtagtgtat ataggatctg 78420

ctcccggtac acatatacgt tatttgagag atcatttcta taatttagga gtgatcatca 78480

aatggatgct aattgacggc cgccatcatg atcctatttt aaatggattg cgtgatgtga 78540

ctctagtgac tcggttcgtt gatgaggaat atctacgatc catcaaaaaa caactgcatc 78600

cttctaagat tattttaatt tctgatgtga gatccaaacg aggaggaaat gaacctagta 78660

cggcggattt actaagtaat tacgctctac aaaatgtcat gattagtatt ttaaaccccg 78720

tggcgtctag tcttaaatgg agatgcccgt ttccagatca atggatcaag gacttttata 78780

tcccacacgg taataaaatg ttacaacctt ttgctccttc atattcagct gaaatgagat 78840

tattaagtat ttataccggt gagaacatga gactgactcg agttaccaaa ttagacgctg 78900

taaattatga aaaaaagatg tactacctta ataagatcgt ccgtaacaaa gtagttgtta 78960

actttgatta tcctaatcag gaatatgact attttcacat gtactttatg ctgaggaccg 79020

tgtactgcaa taaaacattt cctactacta aagcaaaggt actatttcta caacaatcta 79080

tatttcgttt cttaaatatt ccaacaacat caactgaaaa agttagtcat gaaccaatac 79140

aacgtaaaat atctagcaaa aattctatgt ctaaaaacag aaatagcaag agatccgtac 79200

gcggtaataa atagaaacgt gctactgaga tatactaccg atatagagta taatgattta 79260

gttactttaa taaccgttag acataaaatt gattctatga aaactgtgtt tcaggtattt 79320

aacgaatcat ccataaatta tactccggtt gatgatgatt atggagaacc aatcattata 79380

acatcgtatc ttcaaaaagg tcataacaag tttcctgtaa attttctata catagatgtg 79440

gtaatatctg acttatttcc tagctttgtt agactagata ctacagaaac taatatagtt 79500

aatagtgtac tacaaacagg tgatggtaaa aagactcttc gtcttcccaa aatgttagag 79560

acggaaatag ttgtcaagat tctctatcgc cctaatatac cattaaaaat tgttagattt 79620

ttccgcaata acatggtaac tggagtagag atagccgata gatctgttat ttcagtcgct 79680

gattaatcaa ttagtagaga tgagataaga acattataat aatcaataat atatcttata 79740

tcttatatct tatatcttat atcttgttta gaaaaatgct aatattaaaa tagctaacgc 79800

tagtaatcca atcggaagcc atttgatatc tataataggg tatctaattt cctgatttaa 79860

atagcggaca gctatattct cggtagctac tcgtttggaa tcacaaacat tatttacatc 79920

taatttacta tctgtaatgg aaacgtttcc caatgaaatg gtacaatccg atacattgca 79980

ttttgttata ttttttttta aagaggctgg taacaacgca tcgcttcgtt tacatggctc 80040

gtaccaacaa taatagggta atcttgtatc tattcctatc cgtactatgc ttttatcagg 80100

ataaatacat ttacatcgta tatcgtcttt gttagcatca cagaatgcat aaatttgttc 80160

gtccgtcatg ataaaaattt aaagtgtaaa tataactatt atttttatag ttgtaataaa 80220

aagggaaatt tgattgtata ctttcggttc tttaaaagaa actgacttga taaaaatggc 80280

tgtaatctct aaggttacgt atagtctata tgatcaaaaa gagattaatg ctacagatat 80340

tatcattagt catgttaaaa atgacgacga tatcggtacc gttaaagatg gtagactagg 80400

tgctatggat ggggcattat gtaaaacttg tgggaaaacg gaattggaat gtttcggtca 80460

ctggggtaaa gtaagtattt ataaaactca tatagttaag cctgaattta tttcagaaat 80520

tattcgttta ctgaatcata tatgtattca ctgcggatta ttgcgttcac gagaaccgta 80580

ttccgacgat attaacctaa aagagttatc gggacacgct cttaggagat taaaggataa 80640

aatattatcc aagaaaaagt catgttggaa cagcgaatgt atgcaaccgt atcaaaaaat 80700

tactttttca aagaaaaagg tttgtttcgt caacaagttg gatgatatta acgttcctaa 80760

ttctctcatc tatcaaaagt taatttctat tcatgaaaag ttttggccat tattagaaat 80820

tcatcaatat ccagctaact tattttatac agactacttt cccatccctc cgctgattat 80880

tagaccggct attagttttt ggatagatag tatacccaaa gaaaccaatg aattaactta 80940

cttattaggt atgatcgtta agaattgtaa cttgaatgct gatgaacagg ttatccagaa 81000

ggcggtaata gaatacgatg atattaaaat tatttctaat aacactacca gtatcaattt 81060

atcatatatc acatccggca aaaataatat gattagaagt tatatcgtcg cccggcgaaa 81120

agatcagacc gctagatctg taattggtcc cagtacatct atcaccgtta atgaggtagg 81180

aatgcccgca tatattagaa atacacttac agaaaagata tttgttaatg cctttacagt 81240

ggataaagtt aaacaactat tagcgtcaaa ccaagttaaa ttttacttta ataaacgatt 81300

aaaccaatta acaagaatac gccaaggaaa gtttatcaaa aataaaatac atttattgcc 81360

tggtgattgg gtagaagtag ctgttcaaga atatacaagt attatttttg gaagacagcc 81420

gtctctacat agatacaacg tcatcgcttc atctatcaga gctaccgaag gagatactat 81480

caaaatatct cccggaattg ccaactctca aaatgctgat ttcgacgggg atgaggaatg 81540

gatgatatta gaacaaaatc ctaaagctgt aattgaacaa agtattctta tgtatccgac 81600

gacgttactc aaacacgata ttcatggagc ccccgtttat ggatctattc aagatgaaat 81660

cgtagcagcg tattcattgt ttaggataca agatctttgt ttagatgaag tattgaacat 81720

cttggggaaa tatggaagag agttcgatcc taaaggtaaa tgtaaattca gcggtaaaga 81780

tatctatact tacttgatag gtgaaaagat taattatccg ggtctcttaa aggatggtga 81840

aattattgca aacgacgtag atagtaattt tgttgtggct atgaggcatc tgtcattggc 81900

tggactctta tccgatcata agtcgaacgt ggaaggtatc aactttatta tcaagtcatc 81960

ttatgttttt aagagatatc tatctattta cggttttggg gtgacattca aagatctgag 82020

accaaattcg acgttcacta ataaattgga ggccatcaac gtagaaaaaa tagaacttat 82080

caaagaagca tacgccaaat atctcaacga tgtaagagac gggaaaatag ttccattatc 82140

taaagcttta gaggcggact atgtggaatc catgttatcc aacttgacaa atcttaatat 82200

ccgagagata gaagaacata tgagacaaac gctgatagat gatccagata ataacctcct 82260

gaaaatggcc aaagcgggtt ataaagtaaa tcctacagaa ctaatgtata ttctaggtac 82320

gtatggacaa caaaggattg atggtgaacc agcagagact cgagtattgg gtagagtctt 82380

accttactat cttccagact ctaaggatcc agaaggaaga ggttacattc ttaattcttt 82440

aacaaaagga ttaacgggtt ctcaatatta cttttcgatg ctggttgcaa gatctcaatc 82500

tactgatatc gtctgtgaaa catcacgtac cggaacactg gctagaaaaa tcattaaaaa 82560

gatggaggat atggtggtcg acggatacgg acaagtagtt ataggtaata cgctcatcaa 82620

gtacgccgcc aattatacca aaattctagg ctcagtatgt aaacctgtag atcttatcta 82680

tccagatgag tccatgactt ggtatttgga aattagtgct ctgtggaata aaataaaaca 82740

gggattcgtt tactctcaga aacagaaact tgcaaagaag acattggcgc cgtttaattt 82800

cctagtattc gtcaaaccca ccactgagga taatgctatt aaggttaagg atctgtacga 82860

tatgattcat aacgtcattg atgatgtgag agagaaatac ttctttacgg tatctaatat 82920

agattttatg gagtatatat tcttgacgca tcttaatcct tctagaatta gaattacaaa 82980

agaaacggct atcactatct ttgaaaagtt ctatgaaaaa ctcaattata ctctaggtgg 83040

tggaactcct attggaatta tttctgcaca ggtattgtct gagaagttta cacaacaagc 83100

cctgtccagt tttcacacta ctgaaaaaag tggtgccgtc aaacaaaaac ttggtttcaa 83160

cgagtttaat aacttgacta atttgagtaa gaataagacc gaaattatca ctctggtatc 83220

cgatgatatc tctaaacttc aatctgttaa gattaatttc gaatttgtat gtttgggaga 83280

attaaatcca gacatcactc ttcgaaaaga aacagatagg tatgtagtag atataatagt 83340

caatagatta tacatcaaga gagcagaaat taccgaatta gtcgtcgaat atatgattga 83400

acgatttatc tcctttagcg tcattgtaaa ggaatggggt atggaaacat tcattgagga 83460

tgaggataat attagattta ctgtctacct aaatttcgtt gaaccggaag aattgaatct 83520

tagtaagttt atgatggttc ttccgggtgc cgccaacaag ggcaagatta gtaaattcaa 83580

gattcctatc tctgactata cgggatatga cgacttcaat caaacaaaaa agctcaataa 83640

gatgactgta gaactcatga atctaaaaga attgggttct ttcgatttgg aaaacgtcaa 83700

cgtgtatcct ggagtatgga atacatacga tatcttcggt atcgaggccg ctcgtgaata 83760

cttgtgcgaa gccatgttaa acacctatgg agaagggttc gattatctgt atcagccttg 83820

tgatcttctc gctagtttac tatgtgctag ttacgaacca gaatcagtga ataaattcaa 83880

gttcggcgca gctagtactc ttaagagagc tacgttcgga gacaataaag cattgttaaa 83940

cgcggctctt cataaaaagt cagaacctat taacgataat agtagctgcc acttttttag 84000

caaggtccct aatataggaa ctggatatta caaatacttt atcgacttgg gtcttctcat 84060

gagaatggaa aggaaactat ctgataagat atcttctcaa aagatcaagg aaatggaaga 84120

aacagaagac ttttaattct tatcaataac atatttttct atgatctgtc ttttaaacga 84180

tggattttcc acaaatgcgc ctctcaagtc cctcatagaa tgatacacgt ataaaaaata 84240

tagcataggc aatgactcct tatttttaga cattagatat gccaaaatca tagccccgct 84300

tctatttact cccgcagcac aatgaaccaa cacgggctcg tttcgttgat cacatttaga 84360

taaaaaggcg gttacgtcgt caaaatattt actaatatcg gtagttgtat catctaccaa 84420

cggtatatga ataatattaa tattagagtt aggtaatgta tatttatcca tcgtcaaatt 84480

taaaacatat ttgaacttaa cttcagatga tggtgcatcc atagcatttt tataatttcc 84540

caaatacaca ttattggtta cccttgtcat tatagtggga gatttggctc tgtgcatatc 84600

tccagttgaa cgtagtagta agtatttata caaacttttc ttatccattt ataacgtaca 84660

aatggataaa actactttat cggtaaacgc gtgtaattta gaatacgtta gagaaaaggc 84720

tatagtaggc gtacaagcag ccaaaacatc aacacttata ttctttgtta ttatattggc 84780

aattagtgcg ctattactct ggtttcagac gtctgataat ccagtcttta atgaattaac 84840

gagatatatg cgaattaaaa atacggttaa cgattggaaa tcattaacgg atagcaaaac 84900

aaaattagaa agtgatagag gtagacttct agccgctggt aaggatgata tattcgaatt 84960

caaatgtgtg gatttcggcg cctattttat agctatgcga ttggataaga aaacatatct 85020

gccgcaagct attaggcgag gtactggaga cgcgtggatg gttaaaaagg cggcaaaggt 85080

cgatccatct gctcaacaat tttgtcagta tttgataaaa cacaagtcta ataatgttat 85140

tacttgtggt aatgagatgt taaatgaatt aggttatagc ggttatttta tgtcaccgca 85200

ttggtgttcc gattttagta atatggaata gtgttagata aatgcggtaa cgaatgttcc 85260

tgtaaggaac cataacagtt tagatttaac gttaaagatg agcataaaca taataaacaa 85320

aattacaatc aaacctataa cattaatatc aaacaatcca aaaaatgaaa tcagtggagt 85380

agtaaacgcg tacataactc ctggataacg tttagtagct gccgttccta ttctagacca 85440

aaaattcggt ttcatgtttt cgaaacggtg ttctgcaaca agtcggggat cgtgttctac 85500

atatttggcg gcattatcca gtatctgcct attgatcttc atttcgtttt caattctggc 85560

tatttcaaaa taaaatcccg atgatagacc tccagacttt ataatttcat ctacgatgtt 85620

cagcgccgta gtaactctaa taatataggc tgataagcta acatcatacc ctcctgtata 85680

tgtgaatatg gcatgatttt tgtccattac aagctcggtt ttaactttat tgcctgtaat 85740

aatttctctc atctgtagga tatctatttt tttgtcatgc attgccttca agacgggacg 85800

aagaaacgta atatcctcaa taacgttatc gttttctaca ataactacat attctacctt 85860

tttattttct aactcggtaa aaaaattaga atcccatagg gctaaatgtc tagcgatatt 85920

tcttttcgtt tcctctgtac acatagtgtt acaaaaccct gaaaagaagt gagtatactt 85980

gtcatcattt ctaatgtttc ctccagtcca ctgtataaac gcataatcct tgtaatgatc 86040

tggatcatcc ttgactacca caacatttct tttttctggc ataacttcgt tgtcctttac 86100

atcatcgaac ttctgatcat taatatgctc atgaacatta ggaaatgttt ctgatggaag 86160

tctatcaata actggcacaa caataacagg agttttcgcc gccgccattt agttattgaa 86220

attaatcata tacaactctt taatacgagt tatattttcg tctatccatt gtttcacatt 86280

tacatatttc gacaaaaaga tataaaatgc gtattccaat gcttctctgt ttaatgaatt 86340

actaaaatat acaaacacgt cactgtctgg caataaatga tatcttagaa tattgtaaca 86400

atttattttg tattgcacat gttcgtgatc tatgagttct tcttcgaatg gcataggatc 86460

tccgaatctg aaaacgtata aataggagtt agaataataa tatttgagag tattggtaat 86520

atataaactc tttagcggta taattagttt ttttctctca atttctattt ttagatgtga 86580

tggaaaaatg actaattttg tagcattagt atcatgaact ctaatcaaaa tcttaatatc 86640

ttcgtcacac gttagctctt tgaagttttt aagagatgca tcagttggtt cgaccgatgg 86700

agtaggtgca acaatttttt gttcgatgta tgtatgtact ggagccattg ttttaactat 86760

aatggtgctt gtatcgaaaa actttaatgc agatagcgga agctcttcgc cgcgactttc 86820

tacatcgtaa ttgggttcta acgccgatct ctgaatggat actagttttc taagttctaa 86880

tgtgattctc tgaaaatgta aatccaattc ctccggcatt atagatgtgt atacatcggt 86940

aaataaaact atagtatcca acgatccctt ctcgcaaatt ctagtcttaa ccaaaaaatc 87000

gtatataacc acggagatgg cgtatttaag agtggattct tctaccgttt tgttcttgga 87060

tgtcatatag gaaactataa agtccgcact actgttaaga atgattacta acgcaactat 87120

atagttcaaa ttaagcattt tggaaacata aaataactct gtagacgata cttgactttc 87180

gaataagttt gcagacaaac gaagaaagaa cagacctctc ttaatttcag aagaaaactt 87240

tttttcgtat tcctgacgtc tagagtttat atcaataaga aagttaagaa ttagtcggtt 87300

aatgttgtat ttcattaccc aagtttgaga tttcataata ttatcaaaag acatgataat 87360

attaaagata aagcgctgac tatgaacgaa atagctatat ggttcgctca aaaatatagt 87420

cttgttaaac gtggaaacga taactgtatt tttaatcacg tcagcggcat ctaaattaaa 87480

tataggtata tttattccac acactctaca atatgccaca ccatcttcat aataaataaa 87540

ttcgttagca aaattattaa ttttagtgaa atagttagcg tcaactttca tagcttcctt 87600

caatctaatt tgatgctcac acggtgcgaa ttccactcta acatcccttt tccatgcctc 87660

aggttcatcg atctctataa tatctagttt tttgcgtttc acaaacacag gctcgtctct 87720

cgcgatgaga tctgtatagt aactatgtaa atgataacta gatagaaaga tgtagctata 87780

tagatgacga tcctttaaga gaggtataat aactttaccc caatcagata gactgttgtt 87840

atggtcttcg gaaaaagaat ttttataaat ttttccagta ttttccaaat atacgtactt 87900

aacatctaaa aaatccttaa tgataatagg aatggataat ccgtctattt tataaagaaa 87960

tacatatcgc acattatact tttttttgga aatgggaata ccgatgtgtc tacataaata 88020

tgcaaagtct aaatattttt tagagaatct taattggtcc aaattctttt ccaagtacgg 88080

taatagattt ttcatattga acggtatctt cttaatctct ggttctagtt ccgcattaaa 88140

tgatgaaact aagtcactat ttttataact aacgattaca tcacctctaa catcatcatt 88200

taccagaata ctgatcttct tttgtcgtaa atacatgtct aatgtgttaa aaaaaagatc 88260

atacaagtta tacgtcattt catctgtggt attcttgtca ttgaaggata aactcgtact 88320

aatctcttct ttaacagcct gttcaaattt atatcctata tacgaaaaaa tagcaaccag 88380

tgtttgatca tccgcgtcaa tattctgttc tatcgtagtg tataacaatc gtatatcttc 88440

ttctgtgata gtcgatacgt tataaaggtt gataacgaaa atatttttat ttcgtgaaat 88500

aaagtcatcg taggattttg gacttatatt cgcgtctagt agatatgctt ttatttttgg 88560

aatgatctca attagaatag tctctttaga gtccatttaa agttacaaac aactaggaaa 88620

ttggtttatg atgtataatt tttttagttt ttatagattc tttattctat acttaaaaaa 88680

tgaaaataaa tacaaaggtt cttgagggtt gtgttaaatt gaaagcgaga aataatcata 88740

aattatttca ttatcgcgat atccgttaag tttgtatcgt aatggcgtgg tcaattacga 88800

ataaagcgga tactagtagc ttcacaaaga tggctgaaat cagagctcat ctaaaaaata 88860

gcgctgaaaa taaagataaa aacgaggata ttttcccgga agatgtaata attccatcta 88920

ctaagcccaa aaccaaacga gccactactc ctcgtaaacc agcggctact aaaagatcaa 88980

ccaaaaagga ggaagtggaa gaagaagtag ttatagagga atatcatcaa acaactgaaa 89040

aaaattctcc atctcctgga gtcagcgaca ttgtagaaag cgtggccgct gtagagctcg 89100

atgatagcga cggggatgat gaacctatgg tacaagttga agctggtaaa gtaaatcata 89160

gtgctagaag cgatctttct gacctaaagg tggctaccga caatatcgtt aaagatctta 89220

agaaaattat tactagaatc tctgcagtat cgacggttct agaggatgtt caagcagctg 89280

gtatctctag acaatttact tctatgacta aagctattac aacactatct gatctagtca 89340

ccgagggaaa atctaaagtt gttcgtaaaa aagttaaaac ttgtaagaag taaatgcgtg 89400

cactttttta taaagatggt aaactcttta ccgataataa ttttttaaat cctgtatcag 89460

acgataatcc agcgtatgag gttttgcaac atgttaaaat tcctactcat ttaacagatg 89520

tagtagtata tgaacaaacg tgggaggagg cgttaactag attaattttt gtgggaagcg 89580

attcaaaagg acgtagacaa tacttttacg gaaaaatgca tgtacagaat cgcaacgcta 89640

aaagagatcg tatttttgtt agagtatata acgttatgaa acgaattaat tgttttataa 89700

acaaaaatat aaagaaatcg tccacagatt ccaattatca gttggcggtt tttatgttaa 89760

tggaaactat gttttttatt agatttggta aaatgaaata tcttaaggag aatgaaacag 89820

tagggttatt aacactaaaa aataaacaca tagaaataag tcccgatgaa atagttatca 89880

agtttgtagg aaaggacaaa gtttcacatg aatttgttgt tcataagtct aatagactat 89940

ataaaccgct attgaaactg acggatgatt ctagtcccga agaatttctg ttcaacaaac 90000

taagtgaacg aaaggtatac gaatgtatca aacagtttgg tattagaatc aaggatctcc 90060

gaacgtatgg agtcaattat acgtttttat ataatttttg gacaaatgta aagtccatat 90120

ctcctcttcc atcaccaaaa aagttaatag cgttaactat caaacaaact gctgaagtgg 90180

taggtcatac tccatcaatt tcaaaaagag cttacatggc aacgactatt ttagaaatgg 90240

taaaggataa aaatttttta gatgtagtat ctaaaactac gttcgatgaa ttcctatcta 90300

tagtcgtaga tcacgttaaa tcatctacgg atggatgata tagatcttta cacaaataat 90360

tacaagaccg ataaatggaa atggataagc gtatgaaatc tctcgcaatg accgctttct 90420

ttggggagct aagcacatta gatattatgg cattgataat gtctatattt aaacgccatc 90480

caaacaatac cattttttca gtggataagg atggtcagtt tatgattgat ttcgaatacg 90540

ataattataa ggcttctcaa tatttggatc tgaccctcac tccgatattt ggagatgaat 90600

gcaagactca cgcatcgagt atagccgaac aattggcgtg tgcggatatt attaaagagg 90660

atattagcga atacatcaaa actactcccc gtcttaaacg atttataaaa aaataccgca 90720

atagatcaga tactcgcatc agtcgagata cagaaaagct taaaatagct ctagctaaag 90780

gcatagatta cgaatatata aaagacgctt gttaataagt aaatgaaaaa aaactagtcg 90840

tttataataa aacacaatat ggatgccaac atagtatcat cttctactat tgcaacgtat 90900

atagacgctt tagcgaagaa tgcttcagaa ttagaacaga ggtctaccgc atacgaaata 90960

aataatgaat tggaactagt atttattaag ccgccattaa ttactttgac aaatgtagtg 91020

aatatctcta cgattcagga atcgtttatt cgatttaccg ttactaataa ggaaggtgtt 91080

aaaattagaa ctaagattcc attatctaag gtacatggtc tagatgtaaa aaatgtacag 91140

ttagtagatg ctatagataa catagtttgg gaaaagaaat cattagtgac ggaaaatcgt 91200

cttcacaaag aatgcttgtt gagactatcg acagaggaac gtcatatatt tttggattac 91260

aagaaatatg gatcctctat ccgactagaa ttagtcaatc ttattcaagc aaaaacaaaa 91320

aactttacga tagactttaa gctaaaatat tttctaggat ccggtgccca atctaaaagt 91380

tctttgttgc acgctattaa tcatccaaag tcaaggccta atacatctct ggaaatagaa 91440

ttcacaccta gagacaatga aaaagttcca tatgatgaac taataaagga attgacgact 91500

ctatcacgtc atatatttat ggcttctcca gagaatgtaa ttctttctcc gcctattaac 91560

gcacctataa agacttttat gttgcctaaa caagatatag taggtctgga tctggaaaat 91620

ctatatgccg taactaagac tgacggcatt cctataacta tcagagttac atcaaacggg 91680

ttgtattgtt attttacaca tcttggttat attattagat atcctgttaa gagaataata 91740

gattccgaag tagtagtctt tggtgaggca gttaaggata agaactggac cgtatatctc 91800

attaagctaa tagagcctgt gaatgcaatc aatgatagac tagaagaaag taagtatgtt 91860

gaatctaaac tagtggatat ttgtgatcgg atagtattca agtcaaagaa atatgaaggt 91920

ccgtttacta caactagtga agtcgtcgat atgttatcta catatttacc aaagcaacca 91980

gaaggtgtta ttctgttcta ttcaaaggga cctaaatcta acattgattt taaaattaaa 92040

aaggaaaata ctatagacca aactgcaaat gtagtattta ggtacatgtc cagtgaacca 92100

attatctttg gagaatcgtc tatctttgta gagtataaga aatttagcaa cgataaaggc 92160

tttcctaaag aatatggttc tggtaagatt gtgttatata acggcgttaa ttatctaaat 92220

aatatctatt gtttggaata tattaataca cataatgaag tgggtattaa gtccgtggtt 92280

gtacctatta agtttatagc agaattctta gttaatggag aaatacttaa acctagaatt 92340

gataaaacca tgaaatatat taactcagaa gattattatg gaaatcaaca taatatcata 92400

gttgaacatt taagagatca aagcatcaaa ataggagata tctttaacga ggataaacta 92460

tcggatgtgg gacatcaata cgccaataat gataaattta gattaaatcc agaagttagt 92520

tattttacga ataaacgaac tagaggaccg ttgggaattt tatcaaacta cgtcaagact 92580

cttcttattt ctatgtattg ttccaaaaca tttttagacg attccaacaa acgaaaggta 92640

ttggcgattg attttggaaa cggtgctgac ctggaaaaat acttttatgg agagattgcg 92700

ttattggtag cgacggatcc ggatgctgat gctatagcta gaggaaatga aagatacaac 92760

aaattaaact ctggaattaa aaccaagtac tacaaatttg actacattca ggaaactatt 92820

cgatccgata catttgtctc tagtgtcaga gaagtattct attttggaaa gtttaatatc 92880

atcgactggc agtttgctat ccattattct tttcatccga gacattatgc taccgtcatg 92940

aataacttat ccgaactaac tgcttctgga ggcaaggtat taatcactac catggacgga 93000

gacaaattat caaaattaac agataaaaag acttttataa ttcataagaa tttacctagt 93060

agcgaaaact atatgtctgt agaaaaaata gctgatgata gaatagtggt atataatcca 93120

tcaacaatgt ctactccaat gactgaatac attatcaaaa agaacgatat agtcagagtg 93180

tttaacgaat acggatttgt tcttgtagat aacgttgatt tcgctacaat tatagaacga 93240

agtaaaaagt ttattaatgg cgcatctaca atggaagata gaccgtctac aaaaaacttt 93300

ttcgaactaa atagaggagc cattaaatgt gaaggtttag atgtcgaaga cttacttagt 93360

tactatgttg tttatgtctt ttctaagcgg taaataataa tatggtatgg gttctgatat 93420

ccccgttcta aatgcattaa ataattccaa tagagcgatt tttgttccta taggaccttc 93480

caactgtgga tactctgtat tgttaataga tatattaata cttttgtcgg gtaacagagg 93540

ttctacgtct tctaaaaata aaagtttgat aacatctggc ctgttcataa ataaaaactt 93600

ggcgattcta tatatactct tattatcaaa tctagccatt gtcttataga tgtgagctac 93660

tgtaggtgta ccatttgatt ttctttctaa tactatatat ttctctcgaa gaagttcttg 93720

cacatcatct gggaataaaa tactactgtt gagtaaatca gttatttttt ttatatcgat 93780

attgatggac atttttatag ttaaggataa taagtatccc aaagtagata acgacgataa 93840

cgaagtattt atacttttag gaaatcacaa tgactttatc agatcaaaat taacaaaatt 93900

aaaggagcat gtattttttt ctgaatatat tgtgactcca gataaatatg gatctttatg 93960

cgtcgaatta aatgggtcta gttttcagca cggcggtaga tatatagagg tggaggaatt 94020

tatagatgct ggaagacaag ttagatggtg ttctacatcc aatcatatat ctgaagatat 94080

acccgaagat atacacactg ataaatttgt catttatgat atatacactt ttgacgcttt 94140

caagaataaa cgattggtat tcgtacaggt acctccgtcg ttaggagatg atagctattt 94200

gactaatccg ttattgtctc cgtattatcg taattcagta gccagacaaa tggtcaatga 94260

tatgattttt aatcaagatt catttttaaa atatttatta gaacatctga ttagaagcca 94320

ctatagagtt tctaaacata taacaatagt tagatacaag gataccgaag aattaaatct 94380

aacgagaata tgttataata gagataagtt taaggcgttt gtattcgctt ggtttaacgg 94440

cgtttcggaa aatgaaaagg tactagatac gtataaaaag gtatctaatt tgatataatg 94500

aattcagtga ctgtatcaca cgcgccatat actattactt atcacgatga ttgggaacca 94560

gtaatgagtc aattggtaga gttttataac gaagtagcca gttggctgct acgagacgag 94620

acgtcgccta ttcctgataa gttctttata cagttgaaac aaccgcttag aaataaacga 94680

gtatgtgtgt gcggtataga tccgtatccg aaagatggaa ctggtgtacc gttcgaatca 94740

ccaaatttta caaaaaaatc aattaaggag atagcttcat ctatatctag attaaccgga 94800

gtaattgatt ataaaggtta taaccttaat ataatagacg gggttatacc ctggaattat 94860

tacttaagtt gtaaattagg agaaacaaaa agtcacgcga tctactggga taagatttcc 94920

aagttactgc tgcagcatat aactaaacac gttagtgttc tttattgttt gggtaaaaca 94980

gatttctcga atatacgggc caagttagaa tccccggtaa ctaccatagt cggatatcat 95040

ccagcggcta gagaccgcca attcgagaaa gatagatcat ttgaaattat caacgtttta 95100

ctggaattag acaacaaggc acctataaat tgggctcaag ggtttattta ttaatgcttt 95160

agtgaaattt taacttgtgt tctaaatgga tgcggctatt agaggtaatg atgttatctt 95220

tgttcttaag actataggtg tcccgtcagc gtgcagacaa aatgaagatc caagatttgt 95280

agaagcattt aaatgcgacg agttagaaag atatattgag aataatccag aatgtacact 95340

attcgaaagt cttagggatg aggaagcata ctctatagtc agaattttca tggatgtaga 95400

tttagacgcg tgtctagacg aaatagatta tttaacggct attcaagatt ttattatcga 95460

ggtgtcaaac tgtgtagcta gattcgcgtt tacagaatgc ggcgccattc atgaaaatgt 95520

aataaaatcc atgagatcta atttttcatt gactaagtct acaaatagag ataaaacaag 95580

ttttcatatt atctttttag acacgtatac cactatggat acattgatag ctatgaaacg 95640

aacactatta gaattaagta gatcatctga aaatccacta acaagatcga tagacactgc 95700

cgtatatagg agaaaaacaa ctcttcgggt tgtaggtact aggaaaaatc caaattgcga 95760

cactattcat gtaatgcaac caccgcatga taatatagaa gattacctat tcacttacgt 95820

ggatatgaac aacaatagtt attacttttc tctacaacaa cgattggagg atttagttcc 95880

tgataagtta tgggaaccag ggtttatttc attcgaagac gctataaaaa gagtttcaaa 95940

aatattcatt aattctataa taaactttaa tgatctcgat gaaaataatt ttacaacggt 96000

accactggtc atagattacg taacaccttg tgcattatgt aaaaaacgat cgcataaaca 96060

tccgcatcaa ctatcgttgg aaaatggtgc tattagaatt tacaaaactg gtaatccaca 96120

tagttgtaaa gttaaaattg ttccgttaga tggtaataaa ctgtttaata ttgcacaaag 96180

aattttagac actaactctg ttttattaac cgaacgagga gaccatatag tttggattaa 96240

taattcatgg aaatttaaca gcgaagaacc cttgataaca aaactaattt tgtcaataag 96300

acatcaacta cctaaggaat attcaagcga attactctgt ccaagaaaac gaaagactgt 96360

agaagctaac atacgagaca tgttagtaga ttcagtagag accgatacct atccggataa 96420

acttccgttt aaaaatggtg tattggacct ggtagacgga atgttttact ctggagatga 96480

tgctaaaaaa tatacgtgta ctgtatcaac cggatttaaa tttgacgata caaagttcgt 96540

cgaagacagt ccagaaatgg aagagttaat gaatatcatt aacgatatcc aaccattaac 96600

ggatgaaaat aagaaaaata gagagctata tgaaaaaaca ttatctagtt gtttatgtgg 96660

tgctaccaaa ggatgtttaa cattcttttt tggagaaact gcaactggaa agtcgacaac 96720

caaacgtttg ttaaagtctg ctatcggtga cctgtttgtt gagacgggtc aaacaatttt 96780

aacagatgta ttggataaag gacctaatcc atttatcgct aacatgcatt tgaaaagatc 96840

tgtattctgt agcgaactac ctgattttgc ctgtagtgga tcaaagaaaa ttagatctga 96900

caatattaaa aagttgacag aaccttgtgt cattggaaga ccgtgtttct ccaataaaat 96960

taataataga aaccatgcga caatcattat cgatactaat tacaaacctg tttttgatag 97020

gatagataac gcattaatga gaagaattgc cgtcgtgcga ttcagaacac acttttctca 97080

accttctggt agagaggctg ctgaaaataa tgacgcgtac gataaagtca aactattaga 97140

cgaggggtta gatggtaaaa tacaaaataa tagatataga ttcgcatttc tatacttgtt 97200

ggtgaaatgg tacagaaaat atcatgttcc tattatgaaa ctatatccta caccggaaga 97260

gattccggac tttgcattct atctcaaaat aggtactctg ttagtatcta gctctgtaaa 97320

gcatattcca ttaatgacgg acctctccaa aaagggatat atattgtacg ataatgtggt 97380

cactcttccg ttgactactt tccaacagaa aatatccaag tattttaatt ctagactatt 97440

tggacacgat atagagagct tcatcaatag acataagaaa tttgccaatg ttagtgatga 97500

atatctgcaa tatatattca tagaggatat ttcatctccg taaatatatg ctcatatatt 97560

tatagaagat atcacatatc taaatgaata ccggaatcat agatttattt gataatcatg 97620

ttgatagtat accaactata ttacctcatc agttagctac tctagattat ctagttagaa 97680

ctatcataga tgagaacaga agcgtgttat tgttccatat tatgggatca ggtaaaacaa 97740

taatcgcttt gttgttcgcc ttggtagctt ccagatttaa aaaggtttac attctagtgc 97800

ctaatatcaa cattttgaaa atttttaatt ataatatggg tgtagctatg aacttgttta 97860

atgacgaatt catagctgag aatatcttta ttcattccac aacaagtttt tattctctta 97920

attataacga taacgtcatt aattataacg gattatctcg ctacaataac tctattttta 97980

tcgttgatga ggcacataat atctttggga ataatactgg agaacttatg accgtgataa 98040

aaaataaaaa caagattcct tttctactat tgtctggatc tcccattact aacacaccta 98100

atactctggg tcatattata gatttaatgt ccgaagagac gatagatttt ggtgagatta 98160

ttagtcgtgg taagaaagta attcagacac ttcttaacga acgcggtgtg aatgtactta 98220

aggatttgct taaaggaaga atatcatatt acgaaatgcc tgataaagat ctaccaacga 98280

taagatatca cggacgtaag tttctagata ctagagtagt atattgtcac atgtctaaac 98340

ttcaagagag agattatatg attactagac gacagctatg ttatcatgaa atgtttgata 98400

aaaatatgta taacgtgtca atggcagtat tgggacaact taatctgatg aataatttag 98460

atactttatt tcaggaacag gataaggaat tgtacccaaa tctgaaaata aataatggcg 98520

tgttatacgg agaagaattg gtaacgttaa acattagttc caaatttaaa tactttatta 98580

atcggataca gacactcaac ggaaaacatt ttatatactt ttctaattct acatatggtg 98640

gattggtaat taaatatatc atgctcagta atggatattc tgaatataat ggttctcagg 98700

gaactaatcc acatatgata aacggcaaac caaaaacatt tgctatcgtt actagtaaaa 98760

tgaaatcgtc tttagaggat ctattagatg tgtataattc tcctgaaaac gatgatggca 98820

gtcaattgat gtttttgttt tcatcaaaca ttatgtccga atcctatact ctaaaagagg 98880

taaggcatat ttggtttatg actatcccag atactttttc tcaatacaac caaattcttg 98940

gacgatctat tagaaaattc tcttacgccg atatttctga accagttaat gtatatcttt 99000

tagccgccgt atattccgat ttcaatgacg aagtaacgtc attaaacgat tacacacagg 99060

atgaattgat taatgtttta ccatttgaca tcaaaaagct gttgtatcta aaatttaaga 99120

cgaaagaaac gaatagaata tactctattc ttcaagagat gtctgaaacg tattctcttc 99180

caccacatcc atcaattgta aaagttttat tgggagaatt ggtcagacaa tttttttata 99240

ataattctcg tattaagtat aacgactcca agttacttaa aatggttaca tcagttataa 99300

aaaataaaga agacgctagg aattacatag atgatattgt aaacggtcac ttctttgtat 99360

cgaataaagt atttgataaa tctcttttat acaaatacga aaacgatatt attacagtac 99420

cgtttagact ttcctacgaa ccatttgttt ggggagttaa ctttcgtaaa gaatataacg 99480

tggtatcttc tccataaaac tgatgaaata tataaagaaa taaatgtcga gctttgttac 99540

caatggatac cttccagtta cattggaacc acacgagctg acgttagaca taaaaactaa 99600

tattaggaat gccgtatata agacgtatct ccatagagaa attagtggta aaatggccaa 99660

gaaaatagaa attcgtgaag acgtggaatt acctctcggc gaaatagtta ataattctgt 99720

agttataaac gttccgtgtg taataaccta cgcgtattat cacgttgggg atatagtcag 99780

aggaacatta aacatcgaag atgaatcaaa tgtaactatt caatgtggag atttaatctg 99840

taaactaagt agagattcgg gtactgtatc atttagcgat tcaaagtact gcttttttcg 99900

aaatggtaat gcgtatgaca atggcagcga agtcactgcc gttctaatgg aggctcaaca 99960

aggtatcgaa tctagttttg tttttctcgc gaatatcgtc gactcataaa aaagagaata 100020

gcggtaagta taaacacgaa tactatggca ataattgcga atgttttatt ctcttcgata 100080

tatttttgat aatatgaaaa acatgtctct ctcaaatcgg acaaccatct cataaaatag 100140

ttctcgcgcg ctggagaggt agttgctgct cgtataatct ccccagaata atatacttgc 100200

gtgtcgtcgt tcaatttata cggatttcta tagttctctg ttatataatg cggttttcca 100260

tcatgattag acgacgacaa tagtgttctg aatttagata gttgatcaga atgaatgttt 100320

attggcgttg gaaaaattat ccatacagcg tctgcagagt ggttgatagt tgttcctaga 100380

tatgtaaaat aatccaactt actaggcagc aaattgtcta gataaaatac tgaatcaaac 100440

ggtgcagacg tattggcgga tctaatggaa tccaattgat taactatctt ttgaaaatat 100500

acatttttat gatccaatac ttgtaagaat atagaaataa tgataagtcc atcatcgtgt 100560

ttttttgcct cttcataaga actatatttt tttttattcc aatgaacaag attaatctct 100620

ccagagtatt tgtacacatc tatcaagtga ttggatccat aatcgtcttc ctttccccaa 100680

tatatatgta gtgatgataa cacatattca ttggggagaa accctccact tatatatcct 100740

cctttaaaat taatccttac tagttttcca gtgttctgga tagtggttgg tttcgactca 100800

ttataatgta tgtctaacgg cttcaatcgc gcgttagaaa ttgctttttt agtttctata 100860

ttaataggag atagttgttg cggcatagta aaaatgaaat gataactgtt taaaaatagc 100920

tcttagtatg ggaattacaa tggatgagga agtgatattt gaaactccta gagaattaat 100980

atctattaaa cgaataaaag atattccaag atcaaaagac acgcatgtgt ttgctgcgtg 101040

tataacaagt gacggatatc cgttaatagg agctagaaga acttcattcg cgttccaggc 101100

gatattatct caacaaaatt cagattctat ctttagagta tccactaaac tattacggtt 101160

tatgtactac aatgaactaa gagaaatctt tagacggttg agaaaaggtt ctatcaacaa 101220

tatcgatcct cactttgaag agttaatatt attgggtggt aaactagata aaaaggaatc 101280

tattaaagat tgtttaagaa gagaattaaa agaggaaagt gatgaacgta taacagtaaa 101340

agaatttgga aatgtaattc taaaacttac aacacgggat aaattattta ataaagtata 101400

tataagttat tgcatggcgt gttttattaa tcaatcgttg gaggatttat cgcatactag 101460

tatttacaat gtagaaatta gaaagattaa atcattaaat gattgtatta acgacgataa 101520

atacgaatat ctgtcttata tttataatat gctagttaat agtaaatgaa cttttacaga 101580

tctagtataa ttagtcagat tattaagtat aatagacgac tagctaagtc tattatttgc 101640

gaggatgact ctcaaattat tacactcacg gcattcgtta accaatgcct atggtgtcat 101700

aaacgagtat ccgtgtccgc tattttatta actactgata acaaaatatt agtatgtaac 101760

agacgagata gttttctcta ttctgaaata attagaacta gaaacatgtc tagaaagaaa 101820

cgattatttc tgaattattc caattatttg tccaaacagg aaagaagtat actatcgtca 101880

tttttttctc tagatccagc tactactgat aatgatagaa tagatgctat ttatccgggt 101940

ggcataccca aaaggggtga gaatgttcca gagtgtttat ccagggaaat taaagaagaa 102000

gttaatatag acaattcttt tgtattcata gacactcggt tttttattca tggcatcata 102060

gaagatacca ttattaataa attttttgag gtaatcttct ttgtcggaag aatatcttta 102120

acgagtgatc aaatcattga tacatttaaa agtaatcatg aaatcaagga tctaatattt 102180

ttagatccga attcaggtaa tggactccaa tacgaaattg caaaatatgc tctagatact 102240

gcaaaactca aatgttatgg ccatagagga tgttattacg aatcattaaa aaaattaact 102300

gaggatgatt gattagaaaa tataaattaa tttaccatcg tgtattttta taacgggatt 102360

gtccggcata tcatgtagat agttaccgtc tacatcgtat actcgaccat ctacgccttt 102420

aaatcctcta tttattgaca ttaatctatt agaattggaa taccaaatat tagtaccctc 102480

aattagttta ttggtaatat tttttttaga cgatagatcg atggctcttg aaaccaaggt 102540

tttccaaccg gactcattgt cgatcggtga gaagtctttt tcattagcat gaatccattc 102600

taatgatgta tgtttaaaca ctctaaacaa ttggacaaat tcttttgatt tgctttgaat 102660

gatttcaaat aggtcttcgt ctacagtagg cataccatta gataatctag ccattataaa 102720

gtgcacgttt acatatctac gttctggagg agtaagaacg tgactattga gacgaatggc 102780

tcttcctact atctgacgaa gagacgcctc gttccatgtc atatctaaaa tgaagatatc 102840

attaattgag aaaaaactaa taccctcgcc tccactagaa gagaatacgc atgttttaat 102900

gcattctccg ttagtgtttg attcttggtt aaactcagcc accgccttga ttctagtatc 102960

ttttgttcta gatgagaact ctatattaga gataccaaag actttgaaat atagtaataa 103020

gatttctatt cctgactgat taacaaatgg ttcaaagact agacatttac catgggatgc 103080

taatattccc aaacatacat ctataaattt gacgcttttc tcttttaatt cagtaaatag 103140

agagatatca gccgcactag catccccttt caatagttct ccctttttaa aggtatctaa 103200

tgcggattta gaaaactctc tatctcttaa tgaattttta aaatcattat atagtgttgc 103260

tatctcttgc gcgtattcgc ccggatcacg attttgtctt tcaggaaagc tatcgaacgt 103320

aaacgtagta gccatacgtc tcagaattct aaatgatgat atacctgttt ttatttcagc 103380

gagtttagcc ttttgataaa tttcttcttg ctttttcgac atattaacgt atcgcattaa 103440

tactgttttc ttagcgaatg atgcagaccc ttctacgtca tcaaaaatag aaaactcgtt 103500

attaactatg tacgaacata ggcctcctag tttggagact aattctttct catcaactag 103560

acgtttattc tcaaatagcg attggtgttg taaggatcct ggtcgtagta agttaaccaa 103620

catggtgaat tcttgcacac tattaacgat aggtgtagcc gataaacaaa tcatcttatg 103680

gttttttaat gcgatggtct tagataaaaa attatatact gaacgagtag gacggatctt 103740

accatcttct ttgattaatg atttagaaat gaagttatga cattcatcaa taatgacgca 103800

tattctactc ttggaattaa tagttttgat attagtaaaa aatttatttc taaaattttg 103860

atcatcgtaa ttaataaaaa tacaatcctt cgttatctct ggagcgtatc tgagtatagt 103920

gttcatccaa ggatcttcta tcaaagcctt tttcaccaat aagataatag cccaattcgt 103980

ataaatatcc ttaagatgtt tgagaatata tacagtagtc attgttttac cgacacccgt 104040

ttcatggaac aataaaagag aatgcatact gtctaatcct aagaaaactc ttgctacaaa 104100

atgttgataa tccttgaggc gtactacgtc cgaccccatc atttcaacgg gcatattagt 104160

agttctgcgc aatgcataat cgatataggc cgcgtgtgat ttactcattt atgagtgata 104220

agtaataact atgttttaaa aatcacagca gtagtttaac tagtcttctc tgatgtttgt 104280

tttcgatact ttttgaatca gaagtcatac tagaataaag caacgagtga acgtaataga 104340

gagcttcgta tactctattc gaaaactcta agaacttatt aatgaattcc gtatccactg 104400

gattgtttaa aatactaaat tgaacactgt tcacatcctt ccaagaagaa gacttagtga 104460

cggacttaac atgagacata aataaatcca aatttttttt acaaacatca ctagccacca 104520

taatggcgct atctttcaac cagctatcgc ttacgcattt tagcagtcta acatttttaa 104580

agagactaca atatattctc atagtatcga ttacacctct accgaataaa gttggaagtt 104640

taataataca atatttttcg tttacaaaat caaataatgg tcgaaacacg tcgaaggtta 104700

acatcttata atcgctaatg tatagattgt tttcagtgag atgattatta gatttaatag 104760

catctcgttc acgtttgaac agtttattgc gtgcgctgag gtcggcaact acggcgtccg 104820

ctttagtact cctcccataa tactttacgc tattaatctt taaaatttca tagactttat 104880

ctagatcgct ttctggtaac atgatatcat gtgtaaaaag ttttaacatg tcggtcggca 104940

ttctatttag atcattaact ctagaaatct gaagaaagta attagctccg tattccagac 105000

taggtaatgg gcttttacct agagacagat taagttctgg caatgtttca taaaatggaa 105060

gaaggacatg cgttccctcc cggatatttt ttacaatttc atccatttac aactctatag 105120

tttgttttca ttattattag ttattatctc ccataatctt ggtaatactt accccttgat 105180

cgtaagatac cttatacagg tcattacata caactaccaa ttgtttttgt acataataga 105240

ttggatggtt gacatccatg gtggaataaa ctactcgaac agatagttta tctttccccc 105300

tagatacatt agccgtaata gttgtcggcc taaagaatat ctttggtgta aagttaaaag 105360

ttagggttct tgttccatta ttgctttttg tcagtagttc attataaatt ctcgagatgg 105420

gtccgttctc tgaatataga acatcatttc caaatctaac ttctagtcta gaaataatat 105480

cggtcttatt cttaaaatct attcccttga tgaagggatc gttaatgaac aaatccttgg 105540

cctttgattc ggctgatcta ttatctccgt tatagacgtt acgttgacta gtccaaagac 105600

ttacaggaat agatgtatcg atgatgttga tactatgtga tatgtgagca aagattgttc 105660

tcttagtggc atcactatat gttccagtaa tggcggaaaa ctttttagaa atgttatata 105720

taaaagaatt ttttcgtgtt ccaaacatta gcagattagt atgaagataa acactcatat 105780

tatcaggaac attatcaatt tttacataca catcagcatc ttgaatagaa acgataccat 105840

cttctggaac ctcaacaatc tcggcagact ccggataacc agtcggtggg ccatcactaa 105900

caataactag atcatccaac aatctactca catatgcatc tatataatct ttttcatctt 105960

gtgagtaccc tggatacgaa ataaatttat tatccgtatt tccataataa ggtttagtat 106020

aaacagagag cgatgttgcc gcatgaactt cagttacagt cgccgttggt tggtttattt 106080

gacctattac tctcctaggt ttctctataa acgatggttt aatttgtaca ttcttaacca 106140

tatatccaat aaagctcaat tcaggaacat aaacaaattc tttgttgaac gtttcaaagt 106200

cgaacgaaga gtcacgaata acgatatcgg atactggatt gaaggttacc gttacggtaa 106260

tttttgaatc ggatagttta agactgctga atgtatcttc cacatcaaac ggagttttaa 106320

tataaacgta tactgtagat ggttctttaa tagtgtcatt aggagttagg ccaatagaaa 106380

tatcattaag ttcactagaa tatccagagt gtttcaaagc aattgtatta ttgatacaat 106440

tattatataa ttcttcgccc tcaatttccc aaataacacc gttacacgaa gagatagata 106500

cgtgattaat acatttatat ccaacatatg gtacgtaacc gaatcttccc atacctttaa 106560

cttctggaag ttccaaactc agaaccaaat gattaagcgc agtaatatac tgatccctaa 106620

tttcgaagct agcgatagcc tgattgtctg gaccatcgtt tgtcataact ccggatagag 106680

aaatatattg cggcatatat aaagttggaa tttgactatc gactgcgaag acattagacc 106740

gtttaataga gtcatcccca ccgatcaaag aattaatgat agtattattc attttctatt 106800

taaaatggaa aaagcttaca ataaactccg tagagaaata tctataattt gtgagttttc 106860

cttaaagtaa cagcttccgt aaacgccgtc tttatctctt agtaagttta ttgtatttat 106920

aaccttttcc ttatcttcat agaatactaa aggcaacaaa gaaatttttg gttcttctct 106980

aagagctacg tgagacttaa ccatagacgc caacgaatcc ctacatattt tagaacagaa 107040

atacccaact tcaccaccct tgaatgtctc aatactaata ggtttaaaaa ccaaatcttg 107100

attacaaaac caacacttat caattacact atttgtctta atagacacat ctgccataga 107160

tttataatac tttggtagta tacaagcgag tgcttcttct ttagcgggct taaagactgc 107220

tttaggtgct gaaataacca catctggaag gcttactcgc ttagccattt aattacggaa 107280

ctattttttt atacttctaa tgagcaagta gaaaacctct catctacaaa aacatactcg 107340

tgtccataat cctctaccat agttacacgt tttttagatc tcatatgtgc taaaaagttt 107400

tcccatacta attggttact attatttttc gtataatttt taacagtttg aggttttaga 107460

tttttagtta cagaagtgat atcgaatatt ttatccaaaa agaatgaata attaattgtc 107520

ttagaaggag tgttttcttg gcaaaagaat accaagtgct taaatatttc tactacttca 107580

ttaatctttt ctgtactcag attcagtttc tcatctttta cttgattgat tatttcaaag 107640

actaacttat aatccttttt atttattctc tcgttagcct taagaaaact agatacaaaa 107700

tttgcatcta catcatccgt ggatatttga tttttttcca tgatatccaa gagttccgag 107760

ataatttctc cagaacattg atgagacaat aatctccgca atacatttct caaatgaata 107820

agtttattag acacatggaa gtttgacttt ttttgtacct ttgtacattt ttgaaatacc 107880

gactcgcaaa aaatacaata ttcatatcct tgttcagata ctataccgtt gtgtctacaa 107940

ccgctacata atcgtagatt catgttaaca ctctacgtat ctcgtcgtcc aatattttat 108000

ataaaaacat tttatttcta gacgttgcca gaaaatcctg taatattttt agttttttgg 108060

gctgtgaata aagtatcgcc ctaatattgt taccgtcttc cgccaatata gtagttaaat 108120

tatccgcaca tgcaaaagaa caccgcttag gcggattcag tacaatgtta tatttttcgt 108180

accaactcat ttaaatatca taatctaaaa tagttctgta atatgtctag cgctaatata 108240

ttgatcataa tcctgtgcat aaattaagat acaacaatgt ctcgaaatca tcgacatggc 108300

ttcttccata gttagaagat cgtcgtcaaa gttagcaacg tgattcatca acatttgctg 108360

ttttgaggca gcaaatactg aaccgtcgcc attcaaccat tcataaaaac catcgtctga 108420

atccattgat aatttcttgt actggttttt gagagctcgc atcaatctag catttctagc 108480

tcccggattg aaaacagaaa gaggatcgta catccagggt ccattttctg taaatagaat 108540

cgtataatgt cccttcaaga agatatcaga cgatccacaa tcaaagaatt ggtctccgag 108600

tttgtaacaa actgcggact ttaacctata catgataccg tttagcatga tttctggtga 108660

tacgtcaatc ggagtatcat ctattagaga tctaaagccg gtgtaacatt ctccaccaaa 108720

catattctta ttctgacgtc gttctacata aaacatcatt gctccattaa cgataacagg 108780

ggaatgaaca gcactaccca tcacattagt tcccaatgga tcaatgtgtg taactccaga 108840

acatcttcca tatcctatgt taggaggagc gaacaccact cttccactat tgccatcgaa 108900

tgccatagaa taaatatcct tggaattgat agaaatcgga ctgtcggatg ttgtgatcat 108960

cttcatagga ttaacaacta tgtatggtgc cgcctgaagt ttcatatcgt aactgatgcc 109020

gtttataggt ctagccacag aaaccaacgt aggtctaaat ccaactatag acaaaataga 109080

agccaatatc tgttcctcat ctgtcataac ttgagagcat ccagtatgaa taatcttcat 109140

tagatgggga tctaccgcat catcatcgtt acaataaaaa attcccattc taatgttcat 109200

aattgctttt ctaatcatgg tatgcatgtt tgctctctga atctctgtgg aaattagatc 109260

tgatacacct gtaatcacta tcggattatc ctccgtaaga cgattaacca acaacatata 109320

attataagac tttacttttc taaattcata aagttgctgg attaggctat aggtgtctcc 109380

atgtacatac gcgttctcga gcgcaggaag tttaataccg aatagtgcca tcagaatagg 109440

atgaatatag taattagttt ctggttttct ataaataaaa gacaaatctt gtgaactaga 109500

catatcggta aaatgcatgg attggaatcg tgtagtcgac agaagaatat gatgattaga 109560

tggagagtat attttatcta actctttgag ttggtcaccg attctaggac tagctcgaga 109620

atgaataagt actaaaggat gagtacattt cacagaaaca ctagcattgt tcaatgtgct 109680

ctttacatgg gtaaggagtt gaaatagctc gtttctattt gttctgacaa tatttagttt 109740

attcataatg ttaagcatat cctgaatagt aaagttagat gtgtcatact tgttagtagt 109800

tagatattta gcaattgcat tcccatcatt tctcaatctc gtactccaat catgtgtaga 109860

tgctacttcg tcgatggaaa ccatacaatc ctttttgata ggctgttgag attgattatt 109920

tcctgcacgt ttaggtttgg tacgttgatt tctagcccct gcagatataa agtcatcgtc 109980

tacaattttg gataatgaat tgcatacact acaagacaaa gatttatcag aagtgtgaat 110040

atgatcttca tctaccaaag aaagagtttg attagtataa ctagatttta gtcctgcgtt 110100

agatgttaaa aaaacatcgc tattgaccac ggcttccatt atttatattc gtagttttta 110160

ctcgaaagcg tgattttaat atccaatctt attacttttg gaatcgttca aaacctttga 110220

ctagttgtag aatttgatct attgccctac gcgtatactc ccttgcatca tatacgttcg 110280

tcaccagatc gtttgtttcg gcctgaagtt ggtgcatatc tttttcaaca ctcgacatga 110340

gatccttaag ggccatatcg tctagatttt gttgagatgc tgctcctgga tttggatttt 110400

gttgtgctgt tgtacatact gtaccaccag taggtgtagg agtacataca gtggccacaa 110460

taggaggttg aggaggtgta accgttggag tagtacaaga aatacttcca tccgattgtt 110520

gtgtacatgt agttgttggt aacgtctgag aaggttgggt agatggcggt gtcgtcgtct 110580

tttgatcttt attaaattta gagataatat cctgaacagc attgctcggc gtcaacgctg 110640

gaaggagtga actcgccggc gcatcagtat ctgcagacag ccaatcaaaa agattagaca 110700

tatcagatga tgtattagtt tgttgtcgtg gttttggtgt aggagcagta ctactaggta 110760

gaagaatagg agccgatgta ggtgtcggaa ccggaaccgg ctgtggagtt atatgaatag 110820

ttggttgtag cggttggata ggctgtctgc tggcggccat catattatct ctagctagtt 110880

gttctcgcaa ctgtctttga taatacgact cttgagactt tagtcctatt tcaatcgctt 110940

catccttttt cgtatccgga tccttttttt cagaataata gattgacgac tttggtgtag 111000

aggattctgc cagcccctgt gagaacttgt taaagaagtc catttaaggc tttaaaattg 111060

aattgcgatt ataagattaa atggcagaca cagacgatat tatcgactat gaatccgatg 111120

atctcactga atacgaggat gatgaagaag aggaagaaga tggagagtca ctagaaacta 111180

gtgatataga tcccaaatct tcttataaga ttgtagaatc agcatccact catatagaag 111240

atgcgcattc caatcttaaa catataggga atcatatatc tgctcttaaa cgacgctata 111300

ctagacgtat aagtctattt gaaatagcgg gtataatagc agaaagctat aacttgcttc 111360

aacgaggaag attacctcta gtttcagaat tttctgacga aacgatgaag caaaatatgc 111420

tacatgtaat tatacaagag atagaggagg gttcttgtcc tatagtcatc gaaaagaacg 111480

gagaattgtt gtcggtaaac gattttgaca aagatggtct aaaattccat ctagactata 111540

ttatcaaaat ttggaaactt caaaaacgat attagaattt atacgaatat cgttctctaa 111600

atgtcacaat caagtctcgc atgttcagca atttattgtc gtactttata tcgtgttcat 111660

taacgatatc ttgcaaaata gtaatgattc tatcttcctt cgatagatat tcttcagaga 111720

ttattgtctt atattctttc ttgttatccg atatgaattt gataagactt tgaacattat 111780

taatacccgt ctgtttaatt ttttctacag atattttagt tttggcagat tctatcgtat 111840

ctgtcaatag acatccaaca tcgacattcg acgtcaattg tctataaatc aacgtataaa 111900

ttttagaaat aacattagcg aattgttgtg cattgatgtc gttattctga aacagtatga 111960

ttttaggtag cattttctta acaaagagaa cgtatttatt gttactcagt tgaacagatg 112020

atatatccag attactaacg catctgattc cgtataccaa actttcagaa gaaatggtgt 112080

acaattgttt gtattcattc aatgtctcct tttcagaaat tagtttagag tcgaatactg 112140

caataatttt caagagatag ttttcatcag ataagatttt atttagtgta gatatgataa 112200

aactattgtt ttgttggaga acttgatacg ccgcgttctc tgtagtcgac gctctcaaat 112260

gggaaacgat ctccattatt tttttggaat cggatactat atcttcggta tcttgacgca 112320

gtctagtata catagagtta agagagatta gagtttgtac attaagcaac atgtctctaa 112380

atgtggctac aaacttttcc tttttcacat catctagttt attatatacc gatttcacaa 112440

cggcaccaga tttaaggaac cagaatgaaa aactctgata actacaatat ttcatcatag 112500

ttacgatttt atcatcttct atagttggtg taatagcgca tacctttttc tccaagactg 112560

gaaccaacgt cataaaaatg tttaaatcaa aatccatatc aacatctgat gcgctaagac 112620

cagtctcgcg ttcaagatta tctttactaa tggtgacgaa ctcatcgtat agaactctaa 112680

gtttgtccat tatttattta cagatttagt tgtttaattt atttgtgctc ttccagagtt 112740

gggatagtat ttttctaacg tcggtattat attattagga tctacgttca tatgtatcat 112800

aatattaatc atccacgttt tgataaatct atctttagct tctgaaataa cgtatttaaa 112860

caaaggagaa aaatatttag ctacggcatc agacgcaata acattttttg taaatgtaac 112920

gtatttagac gacagatctt cgttaaaaag ttttccatct atgtagaatc catcggttgt 112980

taacaccatt cccgcgtcag attgaatagg agtttgaata gtttgttttg gaaatagatc 113040

cttcaataac ttatagttgg gtgggaaaaa atcgatttta tcactagact ctttcttttt 113100

tactatcatt acctcatgaa ctatttcttg aatgagtata tgtattttct ttcctatatc 113160

ggacgcgttc attggaaaat ataccatgtc gttaactata agaatatttt tatcctcgtt 113220

tacaaactga ataatatcag atgtagttcg taaacgaact atatcatcac cagcacaaca 113280

tctaactata tgatatccac tagtttcctt tagccgttta ttatcttgtt ccatattagc 113340

agtcattcca tcatttaaga aggcgtcaaa aataataggg agaaatgaca ttttggattc 113400

tgttacgact ttaccaaaat taaggatata cggacttact atctttttct caacgtcaat 113460

ttgatgaaca cacgatgaaa atgtgcttct atgagattga tcatgtagaa aacaacaagg 113520

gatacaatat ttccgcatat catgaaatat attaagaaat cccaccttat tatatttccc 113580

caaaggatcc atgcacgtaa acattatgcc gttatcatta ataaagactt ctttctcatc 113640

ggatctgtaa aagttgttac tgattttttt cattccagga tctagataat taataatgat 113700

gggttttcta ttcttattct ttgtattttg gcatatccta gaccagtaaa cagtttccac 113760

tttggtaaaa tcagcagact tttgaacgct attaaacatg gcattaatgg caataactaa 113820

aaatgtaaaa tatttttcta tgttaggaat atggtttttc actttaatag atatatggtt 113880

tttggccaaa atgatagata tttttttatc cgaggatagt aaaatattat tagtcgccgt 113940

ctctataaaa atgaagctag tctcgatatc caattttatt ctagaattga taggagtcgc 114000

caaatgtacc ttatacgtta tatctccctt gatgcgttcc atttgtgtat ctatatcgga 114060

cacaagatct gtaaatagtt ttacgttatt aatcatcacg gtatcgccgt cgctagataa 114120

cgctaatgta ccatccaagt cccaaatgga gagatttaac tgttcatcgt ttagaataaa 114180

atgattaccg gtcatattaa taaagtgttc atcgtatcta gataacaacg acttataatt 114240

aatgtccaag tcttgaactc gctgaatgat cttttttaac ccagttagtt ttagattggt 114300

acgaaatata ttgttaaact ttgattctat agtaatgtcc aaatctagtt gtggaaatac 114360

ttccatcaac attgtttcaa acttgataat attattatct acatcttcgt acgatccaaa 114420

ttccggaata gatgtatcgc acgctctggc cacccagata accaaaaagt cacacgctcc 114480

aggatataca ttgtataaaa agctatcgtt ttttagtagg gtttttttct gcgtgtatac 114540

gaagggatta aaaatagtat tatcaacgta actatattcc aaattattct tatgagaata 114600

gataataata tcgtccttaa tatctaacaa atttcctaaa tatcccttta attgagtcat 114660

tcgaagcgtc aatagaatat gtctcttaac tatttccggc tgttgtatat ttaaatgact 114720

tcgtaaaaaa taatatatgg gcgacttctc atctatgtaa tcatatggag tgagatatag 114780

ggctcgttct acctcctgcc ccttacccac ctgtaatacc aattgcggac ttactatata 114840

tcgcatattt atatcgtggg gtaaagtgaa aatctactac cgatgatgta agtcttacaa 114900

tgttcgaacc agtaccagat cttaatttgg aggcctccgt agaactaggg gaggtaaata 114960

tagatcaaac aacacctatg ataaaggaga atagcggttt tatatcccgc agtagacgtc 115020

tattcgccca tagatctaag gatgatgaga gaaaactagc actacgattc tttttacaaa 115080

gactttattt tttagatcat agagagattc attatttgtt cagatgcgtt gacgctgtaa 115140

aagacgtcac tattaccaaa aaaaataaca ttatcgtggc gccttatata gcacttttaa 115200

ctatcgcatc aaaaggatgc aaacttacag aaacaatgat tgaagcattc tttccagaac 115260

tatataatga acatagtaag aaatttaaat tcaactctca agtatccatc atccaagaaa 115320

aactcggata ccagtttgga aactatcacg tttatgattt tgaaccgtat tactctacag 115380

tagctctggc tattcgagat gaacattcat ctggcatttt taatatccgt caagagagtt 115440

atctggtaag ttcattatct gaaataacat atagatttta tctaattaat ctaaaatctg 115500

atcttgttca atggagtgct agtacgggcg ctgtaattaa tcaaatggta aatactgtat 115560

tgattacagt gtatgaaaag ttacaactgg tcatagaaaa tgattcacaa tttacatgtt 115620

cattggctgt ggaatcaaaa cttccaataa aattacttaa agatagaaat gaattattta 115680

caaaattcat taacgagtta aaaaagacca gttcattcaa gataagcaaa cgcgataagg 115740

atacgctact aaaatatttt acttaggact ggagttagaa tttatagacg actcatttcg 115800

tttatcatta ttactaccat cattattagt attcttcttg ttatcttgtt cagaaatata 115860

cagcaatgct atgcctaata ctaaatacat tatcatgctt gcaatggctc taacaacgac 115920

gaaccaaaat gaatttggtc gtagcttttg ttcacaaaaa tacataaaga aatgtctaca 115980

taaatctatg gcgccattgg ctacttgaaa tagcgccagt cctcctacag attttaatat 116040

agctgtataa catgacattt attcatcatc aaaagagaca gagtcaccat ctgtcatatt 116100

tagatttttt ttcatgtgtt caaagtatcc tctactcatt tcattataat agtttatcat 116160

acttagaatt ttaggacgga tcaatgagta agacttgact agatcgtcag tagtaatttg 116220

tgcatcgtct attctgcatc cgcttcgtcg aataatgtat agcatcgctt tgagattctc 116280

catagctatc aagtctttat acaatgacat ggaaatatct gtgaatactt tatacttctc 116340

caacatcgat gccttaacat catcgcctac tttagcattg aaaatacgtt ctattgtgta 116400

gatggatgta acaagatttt taaacaacaa tgccatctta cacgatgatt gcctcaagtc 116460

tccaatcgtt tgtttagaac gattagctac agagtccaat gcttggctga ctagcatatt 116520

attatcttta gaaattgtat tcttcaatga ggcgtttatc atatctgtga tttcgttagt 116580

catattacag tctgactggg ttgtaatgtt atccaacata tcacctatgg atacggtaca 116640

cgtaccagca tttgtaataa tcctatctaa gatgttgtat ggcattgcgc agaaaatatc 116700

ttctcctgta atatctccac tctcgataaa tctactcaga ttattcttaa atgccttatt 116760

ctctggagaa aagatatcag tgtccatcat ttcattaata gtatacgcag aaaagatacc 116820

acgagtatca attctatcca agatacttat cggttccgag tcacagataa tggtttcctc 116880

tccttcggga gatcctgcat agaaatatct aggacaatag tttctatact gtctgtaact 116940

ctgataatct ctaaagtcac taactgatac catgaaattg agaagatcaa acgctgaagt 117000

aattaatttt tctgcctcgt ttttactaca actagttttc atcaatgtag tgacgatgta 117060

ttgtttagtt acttttggtc taatactgat gatagagata ttattgcttc ccataatgga 117120

tcttctagta gtcaccttaa agcccattga tgcgaatagc agatagataa agtcttggta 117180

tgactccttt ctaatatagt acggactacc tttgtcaccc aactttatac ccacataagc 117240

cataacaacc tctttaatag ccgtttcatg aggtttatca gccatgagcc tgagtagttg 117300

gaagaatctc atgaatcccg tctcagaaag tcctatatgc atgatagatt tatctttcct 117360

gggaaactct cgtatagtca tagatgaaat actcttcaaa gtttctgaaa taagattagt 117420

aacagtctta cctccgacta ctctgggtaa caaacaaact ctaataggtg ttttctctgc 117480

ggagataata tcagaaagga tagagcaata agtagtatta ttgtgattat aaagaccgaa 117540

tacataacag gtagaattta taaacatcat gtcctgaagg tttttagact tgtattcctc 117600

gtaatccata ccgtcccaaa acatggattt ggtaactttg atagccgtag atctttgttc 117660

cttcgccaac aggttaaaga aattaataaa gaatttgttg tttctattta tgtccacaaa 117720

ttgcacgttt ggaagcgcca cggttacatt cactgcagca ttttgaggat cgcgagtatg 117780

aagtacgatg ttattgttta ctggtatatc tggaaagaaa tctaccagtc taggaataag 117840

agattgatat cgcatagaaa tagtaaagtt tataatctca tcatcgaaga gcattttgtt 117900

accattgtaa taaatatcca ctctgtcata tgtataaatg aagtactgtt caaacatgat 117960

gagatgttta tatgttggca tagtagtgag atcgacgttt ggtaatggca atgtattaag 118020

attaactcca taatgtctag cagcatctgc gatgttataa gcgtcgtcaa agcggggtcg 118080

atcttgtatt gttatatatt gtctaacacc tataagatta tcaaaatctt gtctgcttaa 118140

tacaccgtta acaatttttg ccttgaattc ttttattggt gcattaataa catccttata 118200

gaggatgtta aacaaataag tgttatcaaa gttaagatct ggatatttct tttctgctag 118260

aacatccatt gagtcggagc catctggttt aatataacca ccgataaatc tagctctgta 118320

ttctgtatcc gtcaatctaa tattaagaag gtgttgagtg aaaggtggaa gatcgtaaaa 118380

gctgtgagta ttaatgatag gattagtttc cgaactaatg ttaattgggg tattaataat 118440

atctatattt ccagcgttaa gtgtaacatt aaacagtttt aattcacgtg aagtagtatc 118500

aattaaataa ttaatgccca atttggatat agcagcctga agctcatctt gtttagttac 118560

ggatcctaat gagttattaa gcaatatatc gaacggatga acgaaggttg ttttgagttt 118620

gtcgcatact ttgtaatcta gacatagatg cggaagaacg gtagaaacta tacgaaataa 118680

atattcagag tcctctaatt gatcaagagt aactattgac ttaataggca tcatttattt 118740

agtattaaat gacgaccgta ccagtgacgg atatacaaaa cgatttaatt acagagtttt 118800

cagaagataa ttatccatct aacaaaaatt atgaaataac tcttcgtcaa atgtctattc 118860

taactcacgt taacaacgtg gtagatagag aacataatgc cgccgtagtg tcatctccag 118920

aggaaatatc ctcacaactt aatgaagatc tatttccaga tgatgattca ccggccacta 118980

ttatcgaacg agtacaacct catactacta ttattgacga tactccacct cctacgtttc 119040

gtagagagtt attaatatcg gaacaacgtc aacaacgaga aaaaagattt aatattacag 119100

tatcgaaaaa tgctgaagca ataatggaat ctagatctat gataacttct atgccaacac 119160

aaacaccatc cttgggagta gtttatgata aagataaaag aattcagatg ttagaggatg 119220

aagtggttaa tcttagaaat caacgatcta atacaaaatc atctgataat ttagataatt 119280

ttaccaaaat actatttggt aagactccgt ataaatcaac agaagttaat aagcgtatag 119340

ccatcgttaa ttatgcaaat ttgaacgggt ctcccttatc agtcgaggac ttggatgttt 119400

gttcagagga tgaaatagat agaatctata aaacgattaa acaatatcac gaaagtagaa 119460

aacgaaaaat tatcgtcact aacgtgatta ttattgtcat aaatattatc gagcaagcat 119520

tgctaaaact cggatttgaa gaaatcaaag gactgagtac cgatatcact tcagaaatta 119580

tcgatgtgga gatcggagat gactgcgatg ctgtagcatc aaaactagga atcggtaaca 119640

gtccggttct taatattgta ttgtttatac tcaagatatt cgttaaacga attaaaatta 119700

tttaatttaa tacattccca tatccagaca acaatcgtct ggattaatct gttcctgtcg 119760

tctcataccg gacgacatat taatcttttt attagtgggc atctttttag atggtttctt 119820

tttcccagca ttaactgagt cgatacctag aagatcgtga ttgatctctc cgaccattcc 119880

acgaacttct aattggccgt ctctgacggt accataaact attttaccag cattagtaac 119940

agcttggaca atctgaccat ccatcgcatt gtacgatgta gtagtaactg ttgttctacg 120000

tttaggagca ccagaagtat ttttggagcc cttggaggct gatgtagaag aagacgagga 120060

ttttgatttt ggtttacatg taatacattt tgaactcttt gattttgtat cacatgcgcc 120120

ggcagtcaca tctgtttgag aattaagatt attgttgcct cctttgacgg ctgcatctcc 120180

accgatttgc gctagtagat ttttaagctg tggtgtaatc ttattaactg tttcgatata 120240

atcatcgtaa ctgcttctaa cggctaaatt ttttttatcc gccatttaga agctaaaaat 120300

atttttattt atgcagaaga tttaactaga ttatacaatg aactaatatg atccttttcc 120360

agattattta caaacttggt attttttggt tctggaggag gcgaatttaa attcggactt 120420

ggattcagat tttgtaagtt cttgatctta ttatacatcg agtataggat ggcgacagta 120480

actgctacac aaataccgat caaaagaaga ataccaatca tttattgaca ataacttcac 120540

tattgatcaa gtatgcaata tatcatcttt tcactaaata agtagtaata atgattcaac 120600

aatgtcgaga tatatggacg ataataattt agttcatgga aatatcgcta tgattggtgt 120660

gaatgactcc gctaactctg tggggtgcgc agtgctttcc ccacatagaa taaattagca 120720

ttccgactgt gataataata ccaagtataa acgccataat actcaatact ttccatgtac 120780

gagtgggact ggtagactta ctaaagtcaa taaaggcgaa gatacacgaa agaatcaaaa 120840

gaatgattcc agcgattagc acgccggaaa aataatttcc aatcataagc atcatgtcca 120900

tttaactaat aaaaatttta aatcgccgaa tgaacaaagt ggaatataaa ccatataaaa 120960

acaatagttt gtactgcaaa aataatatct atttttgttt tcgaagatat ggtaaaatta 121020

aatagtagta cacagcatgt tataactaac agcagcaacg gctcgtaatt acttatcatt 121080

tactagacga aaaggtggtg ggatattttc ttgctcaaat aatacgaata tatcacccat 121140

ccattttatg cgatgtttat atactctaat ctttaataga tctatagacg acgggtttac 121200

caacaatata gattttatcg attcatctaa tttaaaccct tccttaaacg tgaatgatct 121260

attatctggc ataacgatga ctctacctga tgaatcggac aatgtactgg gccatgtaga 121320

ataaattatc aacgaattat cgtctacgaa catttatatc atttgtttta attttaggac 121380

gcgaataaat ggatataaaa tagaaaataa cagatattac aaccagtgtt atggccgcgc 121440

ccaaccaggt aggcagtttt attttatctt ttactacagg ttctcctgga tgtacgtcac 121500

caacggcgga cgtagttcta gtacaattag acgtaagttc cgcttgggaa ttttttaacg 121560

ctaaagagtt aacgttaatc gtgcacccaa cgtatttaca tctagttctt tgaacatctt 121620

gattataata taaccatttt ctatctctag attcgtcggt gcactcatgt aaccaacata 121680

ccctaggtcc taaatattta tctccggaat tagattttgg ataattcgcg caccaacaat 121740

ttctatttcc tttatgatcg ttacaaaaga cgtataatgc cgtatcccca aaagtaaaat 121800

aatcaggacg aataattcta ataaactcag aacaatatct cgcatccata tgtttggagc 121860

aaatatcgga ataagtagac atagccggtt tccgttttgc acgtaaccat tctaaacaat 121920

tggggtttcc aggatcgttt ctacaaaatc cagtcatgaa atcgtcacaa tgttctgtct 121980

tgtaattatt attaaatatt tttggacagt gtttggtatt tgtcttagaa caacattttg 122040

ctacgctatc actatcgccc aggagataat ccttttttat aaaatgacat cgttgcccgg 122100

atgctatata atcagtagcg tgttttaaat ccttaatata ttcaggagtt acctcgttct 122160

gataatagat taatgatcca ggacgaaatt tgaaagaact acatggttct ccatgaatta 122220

atacatattg tttagcaaat tcaggaacta taaaactact acaatgatct atcgacatac 122280

catctatcaa acaaaacttg ggtttaattt ctcccggaga tgtttcataa tagtacgtat 122340

aactttcttc tgcaaactta acagctctat tatattcagg ataattaaaa cctaattcca 122400

tatatttgtc tcgtatatct gctattcctg gtgctatttt gattctatta agagtaacag 122460

ctgcccccat tcttaataat cgtcagtatt taaactgtta aatgttggta tatcaacatc 122520

taccttattt cccgcagtat aaggtttgtt gcaggtatac tgttcaggaa tggttacatt 122580

tatacttctt ctatagtcct gtctttcgat gttcatcaca tatgcaaaga acagaataaa 122640

caaaataatg taagaaataa tattaaatat ctgtgaattc gtaaatacat tgattgccat 122700

aataattaca gcagctacaa tacacacaat agacattccc acagtgttgc cattacctcc 122760

acgatacatt tgagttacta agcaataggt aataactaag ctagtaagag gcaatagaaa 122820

agatgagata aatatcatca atatagagat tagaggaggg ctatatagag ccaagacgaa 122880

caaaatcaaa ccgagtaacg ttctaacatc attatttttg aagattccca aataatcatt 122940

cattcctcca taatcgtttt gcatcatacc tccatcttta ggcataaacg attgctgctg 123000

ttcctctgta aataaatctt tatcaagcac tccagcaccc gcagagaagt cgtcaagcat 123060

attgtaatat cttaaataac tcatttatat attaaaaaat gtcactatta aagatggagt 123120

ataatcttta tgccgaacta aaaaaaatga cttgtggtca acccctaagt ctttttaacg 123180

aagacgggga tttcgtagaa gttgaaccgg gatcatcctt taagtttctg atacctaagg 123240

gattttacgc ctctccttcc gtaaagacga gtctagtatt cgagacatta acaacgaccg 123300

ataataaaat cactagtatc aatccaacaa atgcgccaaa gttatatcct cttcaacgca 123360

aagtcgtatc tgaagtagtt tctaatatga ggaaaatgat cgaatcaaaa cgtcctctat 123420

acattactct tcacttggcg tgtggatttg gtaagactat taccacgtgt tatcttatgg 123480

ctacacacgg tagaaaaacc gtcatttgcg tacccaataa aatgttaata catcaatgga 123540

agacacaggt agaggcagtc ggattggaac ataagatatc catagatgga gtaagtagtc 123600

tattaaagga actaaagact caaagtccgg atgtattaat agtagtcagt agacatctga 123660

caaacgatgc cttttgtaaa tatatcaata agcattatga tttgttcatc ttggatgaat 123720

cacatacgta taatctgatg aacaatacag cagttacaag atttttagcg tattatcctc 123780

cgatgatgtg ttatttttta actgctacac ctagaccatc taacagaatt tattgtaaca 123840

gtattattaa tattgccaag ttatccgatc taaaaaaaac tatctatgcg gtagatagtt 123900

tttttgagcc atattccaca gacaatatta gacatatgat aaaacgatta gatggaccat 123960

ctaataaata tcatatatat actgagaagt tattatctgt agacgagcct agaaatcaac 124020

ttattcttga taccctggta gaagaattca agtcaggaac tattaatcgc attttagtta 124080

ttactaaact acgtgaacat atggtattct tctacaaacg attattagat cttttcggac 124140

cagaggttgt atttatagga gacgcccaaa atagacgtac tccagatatg gtcaaatcaa 124200

tcaaggaact aaatagattt atattcgtat ccaccttatt ttattccggt actggtttag 124260

atattcctag tttggattcg ttgttcattt gctcggcagt aatcaacaat atgcaaatag 124320

agcaattact agggagggta tgtcgagaaa cagaactatt agataggacg gtatatgtat 124380

ttcctaacac atccatcaaa gaaataaagt acatgatagg aaatttcatg caacgaatta 124440

ttagtctgtc tgtagataaa ctaggattta aacaaaaaag ttatcggaaa catcaagaat 124500

ccgatcccac ttctgtatgt acaacatcct ccagagaaga acgtgtatta aatagaatat 124560

ttaactcgca aaatcgttaa gaagtttaag cgacgatccg catgctgcgc aggccagtgt 124620

attacccctc atagtattaa tataatccaa tgatactttt gtgatgtcgg aaatcttaac 124680

caatttagac tgacaggcag aacacgtcat gcaatcatca tcgtcatcga taactgtagt 124740

cttgggcttc tttttgcggc tcttcattcc ggaacgcaca ttggtgctat ccatttaggt 124800

agtaaaaaat aagtcagaat atgccctata gcacgatcgt gcaaaacctg gtatatcgtc 124860

tctatcttta tcacaatata gtgtatcgac atctttatta ttattgacct cgtttatctt 124920

ggaacatgga atgggaacat ttttgttatc aacggccatc tttgccttaa ttccagatgt 124980

tgtaaaatta taactaaaca gtctatcatc gacacaaatg aaattcttgt ttagacgttt 125040

gtagtttacg tatgcggctc gttcgcgtct cattttttca gatattgcag gtactataat 125100

attaaaaata agaatgaaat aacataggat taaaaataaa gttatcatga cttctagcgc 125160

tgatttaact aacttaaaag aattacttag tctgtacaaa agtttgagat tttcagattc 125220

tgcggctata gaaaagtata attctttggt agaatgggga acatctactt actggaaaat 125280

aggcgtgcaa aaggtagcta atgtcgagac gtcaatatct gattattatg atgaggtaaa 125340

aaataaaccg tttaatattg atccgggcta ttacattttc ttaccggtat attttgggag 125400

cgtctttatt tattcgaagg gtaaaaatat ggtagaactt ggatctggaa actcttttca 125460

aataccagat gatatgcgaa gtgcgtgtaa caaagtatta gacagcgata acggaataga 125520

ctttctgaga tttgttttgt taaacaatag atggataatg gaagatgcta tatcaaaata 125580

tcagtctcca gttaatatat ttaaactagc tagtgagtac ggattaaaca tacccaaata 125640

tttagaaatt gaaatagagg aagacacatt atttgacgac gagttatact ctattataga 125700

acgctctttc gatgataaat ttccaaaaat atccatatcg tatattaagt tgggagaact 125760

taggcggcaa gttgtagact ttttcaaatt ctcgttcatg tatattgagt ccatcaaggt 125820

agatcgtata ggagataata tttttattcc tagcgttata acaaaatcag gaaaaaagat 125880

attagtaaaa gatgtagacc atttaatacg atccaaggtt agagaacata catttgtaaa 125940

agtaaaaaag aaaaacacat tttccatttt atacgactat gatggaaacg gaacagaaac 126000

tagaggagaa gtaataaaac gaattataga cactatagga cgagactatt atgttaacgg 126060

aaagtatttc tctaaggttg gtagtgcagg cttaaagcaa ttgactaata aattagatat 126120

taatgagtgc gcaactgtcg atgagttagt tgatgagatt aataaatccg gaactgtaaa 126180

acgaaaaata aaaaaccaat cagcatttga tttaagcaga gaatgtttgg gatatccaga 126240

agcggatttt ataacgttag ttaataacat gcggttcaaa atagaaaatt gtaaggttgt 126300

aaatttcaat attgaaaata ctaattgttt aaataacccg agtattgaaa ctatatatgg 126360

aaactttaac cagttcgtct caatctttaa tatcgtcacc gatgtcaaaa aaagattatt 126420

cgagtgaaat aatatgcgcc tttgatatag gtgcaaaaaa tcctgccaga actgttttag 126480

aagtcaagga taactccgtt agggtattgg atatatcaaa attagactgg agttctgatt 126540

gggaaaggcg catagctaaa gatttgtcac aatatgaata cactacagtt cttctagaac 126600

gtcagcctag aaggtcgccg tatgttaaat ttatctattt tattaaaggc tttttatatc 126660

atacatcggc tgccaaagtt atttgcgtct cgcctgtcat gtctggtaat tcatatagag 126720

atcgaaaaaa gagatcggtc gaagcatttc ttgattggat ggacacattc ggattgcgag 126780

actccgttcc ggatagacgc aaattagacg atgtagcgga tagtttcaat ttggctatga 126840

gatacgtatt agataaatgg aatactaatt atacacctta taataggtgt aaatctagaa 126900

attacataaa aaaaatgtaa taacgttagt aacgccatta tggataatct atttaccttt 126960

ctacatgaaa tagaagatag atatgccaga actattttta actttcatct aataagttgc 127020

gatgaaatag gagatatata tggtcttatg aaagaacgca tttcctcaga ggatatgttt 127080

gataatatag tgtataataa agatatacat cctgccatta agaaactagt gtattgcgac 127140

atccaactta ctaaacacat tattaatcag aatacgtatc cggtatttaa cgattcttca 127200

caagtgaaat gttgtcatta tttcgacata aactcagata atagcaatat tagctctcgt 127260

acagtagaga tatttgagag ggaaaagtca tctcttgtat catatattaa aactaccaat 127320

aagaagagaa aggtcaatta cggcgaaata aagaaaactg ttcatggagg cactaatgca 127380

aattactttt ccggtaaaaa gtctgacgag tatctgagta ctacagttag atccaacatt 127440

aatcaacctt ggatcaaaac catctctaag aggatgagag ttgatatcat taatcactct 127500

atagtaacgc gtggaaaaag ctctatatta caaactatag aaattatttt tactaataga 127560

acatgtgtga aaatattcaa ggattctact atgcacatta ttctatccaa ggacaaggat 127620

gaaaaggggt gtatacacat gattgacaaa ttattctatg tctattataa tttatttctg 127680

ttgttcgagg atatcatcca aaacgagtac tttaaagaag tagctaatgt tgtaaaccac 127740

gtactcacgg ctacggcatt agatgagaaa ttattcctaa ttaagaaaat ggctgaacac 127800

gatgtttatg gagttagcaa tttcaaaata gggatgttta acctgacatt tattaagtcg 127860

ttggatcata ccgttttccc ctctctgtta gatgaggata gcaaaataaa gttttttaag 127920

gggaaaaagc tcaatattgt agcattacga tctctggagg attgtataaa ttacgtgact 127980

aaatccgaga atatgataga aatgatgaag gaaagatcga ctattttaaa tagcatagat 128040

atagaaacgg aatcggtaga tcgtctaaaa gaattgcttc taaaatgaaa aaaaacactg 128100

attcagaaat ggatcaacga ctcggatata agtttttggt gcctgatcct aaagccggag 128160

ttttttatag accgttacat ttccaatatg tatcgtattc taattttata ttgcatcgat 128220

tgcatgaaat cttgaccgtc aagcggccac tcttatcgtt taagaataat acagaacgaa 128280

ttatgataga aattagcaat gttaaagtga ctcctccaga ttactcacct ataatcgcga 128340

gtattaaagg taagagttat gacgcattag ccacgttcac tgtaaatatc tttaaagagg 128400

taatgaccaa agagggtata tccatcacta aaataagtag ttatgaggga aaagattctc 128460

atttgataaa aattccgcta ctaataggat acgggaataa aaatccactt gatacagcca 128520

agtatcttgt tcctaatgtc ataggtggag tctttatcaa taaacaatct gtcgaaaaag 128580

taggaattaa tctagtagaa aagattacaa catggccaaa atttagggtt gttaagccaa 128640

actcattcac tttctcgttt tcctccgtat cccctcctaa tgtattaccg acaagatatc 128700

gccattacaa gatatctctg gatatatcac aattggaagc gttgaatata tcatcgacaa 128760

agacatttat aacggtcaat attgttttgc tgtctcaata tttatctaga gtgagtctag 128820

aattcattag acgtagttta tcatacgata tgcctccaga agttgtctat ctagtaaacg 128880

cgataataga tagtgctaaa cgaattactg aatctattac tgactttaat attgatacat 128940

acattaatga cctggtggaa gctgaacaca ttaaacaaaa atctcagtta acgattaacg 129000

agttcaaata tgaaatgctg cataactttt tacctcatat gaactataca cccgatcaac 129060

taaagggatt ttatatgata tctttactaa gaaagtttct ctactgtatc ttccacactt 129120

ctagatatcc agatagagat tcgatggttt gtcatcgcat cctaacgtac ggcaaatatt 129180

ttgagacgtt ggcacatgat gaattagaga attacatagg caacatccga aacgatatca 129240

tgaacaatca caagaacaga ggcacttacg cggtaaacat tcatgtacta acaactcccg 129300

gacttaatca cgcgttttct agcttattga gtggaaagtt caaaaagtca gacggtagtt 129360

atcgaacaca tcctcactat tcatggatgc agaatatttc tattcctagg agtgttggat 129420

tttatccgga tcaagtaaag atttcaaaga tgttttctgt cagaaaatac catccaagtc 129480

aatatcttta cttttgttca tcagacgttc cggaaagagg tcctcaggta ggtttagtat 129540

ctcaattgtc tgtcttgagt tccattacaa atatactaac gtctgagtat ttggatttgg 129600

aaaagaaaat ttgtgagtat atcagatcat attataaaga tgatataagt tactttgaaa 129660

caggatttcc aatcactata gaaaatgctc tagtcgcatc tcttaatcca aatatgatat 129720

gtgattttgt aactgacttt agacgtagaa aacggatggg attcttcggt aacttggagg 129780

taggtattac tttagttagg gatcacatga atgaaattcg cattaatatt ggagcgggaa 129840

gattagtcag accattcttg gttgtggata acggagagct catgatggat gtgtgtccgg 129900

agttagaaag cagattagac gacatgacat tctctgacat tcagaaagag tttccgcatg 129960

tcatcgaaat ggtagatata gaacaattta cttttagtaa cgtatgtgaa tcggttcaaa 130020

aatttagaat gatgtcaaag gatgaaagaa agcaatacga tttatgtgac tttcctgccg 130080

aatttagaga tggatatgtg gcatcttcat tagtgggaat caatcacaat tctggaccca 130140

gagctattct tggatgtgct caagctaaac aagctatctc ttgtctgagt tcggatatac 130200

gaaataaaat agacaatgga attcatttga tgtatccaga gaggccaatc gtgattagta 130260

aggctttaga aacttcaaag attgcggcta attgcttcgg ccaacatgtt actatagcat 130320

taatgtcgta caaaggtatc aatcaagagg atggaattat catcaaaaaa caatttattc 130380

agagaggcgg tctcgatata gttaccgcaa agaaacatca agtagaaatt ccattggaaa 130440

actttaataa caaagaaaga gataggtcta acgcctattc aaaattagaa agtaatggat 130500

tagttagact gaatgctttc ttggaatccg gagacgctat ggcacgaaat atctcatcaa 130560

gaactcttga agatgatttt gctagagata atcagattag cttcgatgtt tccgagaaat 130620

ataccgatat gtacaaatct cgcgttgaac gagtacaagt agaacttact gacaaagtta 130680

aggtacgagt attaaccatg aaagaaagaa gacccattct aggagacaaa tttaccacta 130740

gaacgagtca aaagggaaca gtcgcgtatg tcgcggatga aacggaactt ccatacgacg 130800

aaaatggtat cacgccagat gtcattatta attctacatc catcttctct agaaaaacta 130860

tatctatgtt gatagaagtt attttaacag ccgcatattc tgctaagccg tacaacaata 130920

agggagaaaa ccgacctgtc tgttttccta gtagtaacga aacatccatc gatacatata 130980

tgcaattcgc taaacaatgt tatgagcatt caaatccgaa attgtctgat gaagaattat 131040

cggataaaat cttttgtgaa aagattctct atgatcctga aacggataag ccttatgcat 131100

ccaaagtatt ttttggacca atttattact tgcgtctgag acatttaact caggacaagg 131160

caaccgttag atgtagaggt aaaaagacga agctcattag acaggcgaat gagggacgaa 131220

aacgtggagg aggtatcaag ttcggagaaa tggagagaga ctgtttaata gcgcatggcg 131280

cagccaatac tattacagaa gttttgaaag attcggaaga agattatcaa gatgtgtatg 131340

tttgtgaaaa ttgtggagac atagcagcac aaatcaaggg tattaataca tgtcttagat 131400

gttcaaaact taatctctct cctctcttaa caaaaattga taccacgcac gtatctaaag 131460

tatttcttac tcaaatgaac gccagaggcg taaaagtcaa attagatttc gaacgaagac 131520

ctccttcgtt ttataaacca ttagataaag ttgatctcaa gccgtctttt ctggtgtaat 131580

attctagttt ggtagtagat acatatcaat atcatcaaat tcgagatccg aattataaaa 131640

tgggcgtgga ttgttaacta tagaatcgga cgtctgatat tcgaaaatct gtggagtttc 131700

aggttttggt ggaggtgtaa ctgctacttg ggatactgaa gtctgatatt cagaaagctg 131760

tggatgttct ggttcggcat ccaccgatgg tgtcacatca ctaatcggtt cggtaacgtc 131820

tgtggatgga ggtgctactt ctacagaacc tgtagcctca gttgtcaacg gagatacatt 131880

tttaatgcga gaaaatgtat aatttggtaa tggtttctca tgtggatctg aagaagaggt 131940

aagatatcta ctagaaagat accgatcacg ttctagttct cttttgtaga acttaacttt 132000

ttctttctcc gcatctagtt gatattccaa cctcttcacg ttactacgtt cagattccaa 132060

ttcacgttcg catgggttac ctccgcagtt tttacgagcg atttcacgtt cagccttcat 132120

gcgtctctcc ctctctctat cgagtttatc agagcagtct ttctgaaggc gatcgaactc 132180

cataaatttc tccaacgctt tgattgtttc catagatttc cgaacttcag cttctaggac 132240

ggcgattctt tttctttcga attcacagct ggatgtacaa ccgtttccat taccgccatc 132300

tctaagtttc ttttctagat cggcaacatt tcatccccat gccttttaca ttcctcgagt 132360

ctactgtcgt cgaaatatcg ttccagctcc ttttcgacat caataacttt agcacgttgt 132420

ctctcaagct ctcttttgta gttatctgat tccctggcac gtttaagatc ttcatgcaat 132480

tgagtcagct cttaacttcc tctcttgctt cttcgtcata gtacgcgcaa tcactgtgag 132540

atccattgtt accacgtcta cactcggcga gctcgcgttt aagagattca atttcccgtt 132600

tgtattggtc catgtttcca ttgctaccac cattagattt acaggctgct agttgtcgtt 132660

cgagatcaga aatacgggtt ttcttggaat tgatttcgtc gatgtacttg gcatcgaaac 132720

acttattaag ttctttttcc aattctacga ttttatttct ttcgcgagtc aattccctcc 132780

tgtagtaact atctgttttg tcagattcac gctctctacg tagactttct tgcaagttac 132840

taatttgttc cctagcacgt ccgagtttag ttttatatgc tgaatagagt tctgattcat 132900

cctttgagca gatctctagc gatcgtttaa gattcctgat tctagtcttt agcctattta 132960

cctcctcaga agatgttccg ttaccgttgc gtttacactc gttaagctgt ctatcaagat 133020

ccatgattct atctctaaga cgttgcatct ctctttccat atcagcattg ctttcattat 133080

tacgtctgca gtcactcaac tgtctttcaa tatctgagat tctatctcta agacgtcgca 133140

tctctctctg tttcagcatt ggtttcatta ttacgtctac agtcgttcaa ctgtctttca 133200

agatctgata ttctagattg gagtctgcta atctctgtag cattttcacg gcattcactc 133260

agttgtcttt caagatctga aattttagat tggagtctgc taatctctgt aagatttcct 133320

cctccgctct cgatgcagtt ggtcaactta ttctctagtt ctctaatacg cgaacgcagt 133380

gcatcaactt cttgcgtgtc ttcctggttg cgtgtacatt catcgagtct agattcgaga 133440

tctctaacgc gtcgtcgttc ttcctcaagt tctctgcgta ctacagaaag cgtgtcccta 133500

tcttgttgat atttagcaat ttctgattct agagtactga ttttgcttac gtagttacta 133560

atagttgtct tggccttatc aagatcctcc ttgtatttgt cgcattcctt gatatcccta 133620

cgaagtctgg acagttccca ttcgacatta cgacgtttat cgatttcagc tcggagatcg 133680

tcatcgcgtt gttttagcca catacgactg agttcaagtt ctcgttgaca agatccatct 133740

acttttccat tcctaatagt atccagttcc ttttctagtt ctgaacgcat ttctcgttcc 133800

ctatcaagcg attctctcaa ttctcggata gtcttcttat caatttctaa taaatctgaa 133860

ccatcatctg tcccattttg aatatccctg tgttctttga tctcttttgt aagtcggtcg 133920

attctttcgg ttttataaac agaatccctt tccaaagtcc taatcttact gagtttatca 133980

ctaagttctg cattcaattc ggtgagtttt ctcttggctt cttccaactc tgttttaaac 134040

tctccactat ttccgcattc ttcctcgcat ttatctaacc attcaattag tttattaata 134100

actagttggt aatcagcgat tcctatagcc gttcttgtaa ttgtgggaac ataattagga 134160

tcttctaatg gattgtatgg cttgatagca tcatctttat cattattagg gggatggaca 134220

accttaattg gttggtcctc atctcctcca gtagcgtgtg gttcttcaat accagtgtta 134280

gtaataggct taggcaaatg cttgtcgtac gcgggcactt cctcatccat caagtattta 134340

taatcgggtt ctacttcaga atattctttt ctaagagacg cgacttcggg agttagtaga 134400

agaactctgt ttctgtatct atcaacgctg gaatcaatac tcaagttaag gatagcgaat 134460

acctcatcgt catcatccgt atcttctgaa acaccatcat atgacatttc atgaagtcta 134520

acgtattgat aaatagaatc agatttagta ttaaacagat ccttaacctt tttagtaaac 134580

gcatatgtat attttagatc tccagatttc ataatatgat cacatgcctt aaatgtcagt 134640

gcttccatga tataatctgg aacactaatg ggtgacgaaa aagatacagc accatatgct 134700

acgttgataa ataaatctga accactaagt agataatgat taatgttaag gaaaagaaaa 134760

tattcagtgt ataggtatgt cttggcgtca tatcttgtac taaacacgct aaacagtttg 134820

ttaatgtgat caatttccaa tagattaatt agagcagcgg gaataccaac aaacatatta 134880

ccacatccgt attttctatg aatatcacat atcatgttaa aaaatcttaa tagaagagcg 134940

aatatctcgt ctgacttaat gagacgtagt tcagcagcaa cataagtcat aactgtaaat 135000

agaacatact ttcctgtagt gttgattcta gactccacat caacaccatt attaaaaata 135060

gttttatata catctttaat ctgctctccg ttaatcgtcg aacgttctag tatacggaaa 135120

cactttgatt tcttatctgt agttaatgac ttagtgatat cacgaagaat attacgaatt 135180

acatttcttg tttttcttga gagacctgat tcagaactca actcatcgtt ccatagtttt 135240

tctacctcag tggcgaaatc tttggagtgc ttggtacatt tttcaataag gttcgtgacc 135300

tccatttatt ataaaaaatt tattcaaaac ttaactacaa tcgggtaatt ataagatcgt 135360

aaatctccca tgtggcggaa tactaccatc tatcgcatgt ggatggacag taggtaatgg 135420

ccatgggaac agtaatgatt gcatatttat ctttcttgct agtattactg catattgtcc 135480

caatgtttcg atgtgatgtt ctaacctatc aactgccgct gtatcacaac aatagtgtcc 135540

gatgaaatta agattatgat ccaatgtgtt taatatatga ttatcaagtc ttatacgatc 135600

cgcgtctttt ttgacaggat caggttcttc tacaggaaga agtttcggcc tcttatgata 135660

ttcatgtctg ggaaacggtg gtctagggtg aggctccggt atcggagtgg gttttggatt 135720

ataatcatca tcgtctatga catcatcatc atcttcgact tcgatattta ttttgctatc 135780

ttgatgatgt cctgtatcag ttgcattttc agcactcgac tgaatattag cgcattcatt 135840

gtctattatt accatatttc taaacccaaa atgtatgtgt tgaacatcag tactatcgtt 135900

gatgagtctt atagcatgaa ttcgcttatc gttatcgggt ttatcttctg tcaccttagc 135960

aattcctttt ttattaaact ctacataatc atatccattt ctattgtttg ttctaatata 136020

aacgagtata gcatcattgc taaatttttc aatagtatcg aaaacagaat atcctaaacc 136080

atataatata tattcaggga cactcaaact aaatgtccag gattctccta aatacgtaaa 136140

ctttaatagt gcgaaatcat tcaaaaatct accacttata gatagatagt acataaatgc 136200

gtatagtagt ctacctatct ctttattatg aaaaccggca ttacgatcat atatgtcgtg 136260

atatacctgt gatccgttta cgttaaacca taaatacatg ggtgatccta taaacatgaa 136320

tttatttcta attctcagag ctatagttaa ttgaccgtgt aatatttgct tacatgcata 136380

cttgatacgc tcattaataa aatttttatc attgctcgtt atctcagaat cgtatatata 136440

aggagtacca tcgtgattct taccagatat tatacaaaat actatatata aaatatattg 136500

accaacgtta gtaatcatat aaatgtttaa cgttttaaat tttgtattca atgatccatt 136560

atcatacgct agcatggtct tatgatattc attctttaaa atataatatt gtgttagcca 136620

ttgcattggg gctcctaatg gagatttttt attctcatcc attttaggat aggctttcat 136680

aaagtcccta ataacttcgt gaataatgtt tctatgtttt ctactgatgc atgtatttgc 136740

ttcgattttt ttatcccatg tttcatctat catagattta aacgcagtaa tgctcgcaac 136800

attaacatct tgaaccgttg gtacaattcc gttccataaa tttataatgt tcgccattta 136860

tataactcat tttttgaata tacttttaat taacaaaaga gttaagttac tcatatgggc 136920

gccgtccagt ctgaacatca atctttttag ccagagatat catagccgct cttagagttt 136980

cagcgtgatt ttccaaccta aatagaactt catcgttgcg tttacaacac ttttctattt 137040

gttcaaactt tgttgttaca ttagtaatct ttttttccaa attagttagc cgttgtttga 137100

gagtttcctc attgtcgtct tcatcggctt taacaattgc ttcgcgttta gcctctggct 137160

ttttagcagc ctttgtagaa aaaaattcag ttgctggaat tgcaagatcg tcatctccgg 137220

ggaaaagagt tccgtccatt taaagtacag attttagaaa ctgacactct gcgttattta 137280

tatttggtac aacacatgga ttataaatat cgatgttaat aacatcagaa aatgtaaagt 137340

ctatacattg ttgcatcgtg ttaaattttc taatggatct agtattattg ggtccaactt 137400

ctgcctgaaa tccaaatatg gaagcggata caaaaccgtt tcctggataa accacacatc 137460

tccacttttg ctttacatca gaaattgtgt cgttgacatc ttgaactctc ctatctaatg 137520

ccggtgttcc acctatagat tttgaatatt cgaatgctgc atgagtagca ttaaattcct 137580

taatattgcc ataattttca tatattgagt aaccctggat aaaaagtaaa cacaccgcag 137640

ccgtcgctac cacaataaaa aaaattgata gagagttcat ttataatcta ttagaagctg 137700

acaaaatttt tttacacgca tcagacaatg ctttaataaa tagttcaaca tctacttttg 137760

tcatatcgaa ccgatggtat gattctaacc tagaattaca tccgaaaaag ttgactatgt 137820

tcatagtcat taagtcatta acaaacaaca ttccagactc tggattataa gacgatactg 137880

tttcgtcaca attacctacc ttaatcatgt gattatgaat attggctatt agagcacctt 137940

ctaagaaatc tataatatct ttgaaacacg atttaaaatc aaaccacgaa tatacttcta 138000

cgaagaaagt tagtttaccc ataggagaaa taactataaa tggagatcta aatacaaaat 138060

ccggatctat gatagtttta acattattat attctctatt aaatacctcc acatctaaaa 138120

atgttaattt tgaaactatg tcttcgttta ttaccgtacc tgaactaaac gctataagct 138180

ctattgtttg agaactcttt aaacgatatt cttgaaatac atgtaacaaa gtttccttta 138240

actcggtcgg tttatctacc atagttacag aatttgtatc cttatctata atataataat 138300

caaaatcgta taaagttata taattatcgc gttcagattg ggatcttttc aaatagacta 138360

aaaaccccat ttctctagta agtatcttat gtatatgttt gtaaaatatc ttcatggtgg 138420

gaatatgctc taccgcagtt agccattcct cattgacagc ggtagatgta ttagacaaaa 138480

ctattccaat gtttaacaag ggccatttta cgagattatt aaatccttgt ttgataaatg 138540

tagccaatga gggttcgagt tcaacgacga ttgaattctc ttcccgcgga tgctgcatga 138600

tgaacgacgg gatgttgttc gattgatttg gaattctttt tcgacttttt gtttatatta 138660

aatattttaa aatttatagc ggatagcaat tcatgtacca cggataatgt agacgcgtat 138720

tgcgcatcga tatctttatt attagataaa tttatcaata aatgtgagaa gtttgcctcg 138780

ttaaggtctt ccatttaaat attatataaa catttgtgtt tgtatcttat tcgtctttta 138840

tggaatagtt ttttactagt aaagctgcaa ttacacactt tgtccgtaaa acataaatat 138900

aaacaccagc ttttatcaat cgttccaaaa agtcgacggc ggacattttt aacatggcat 138960

ctattttaaa tacacttagg tttttggaaa aaacatcatt ttataattgt aacgattcaa 139020

taactaaaga aaagattaag attaaacata agggaatgtc atttgtattt tataagccaa 139080

agcattctac cgttgttaaa tacttgtctg gaggaggtat atatcatgat gatttggttg 139140

tattggggaa ggtaacaatt aatgatctaa agatgatgct attttacatg gatttatcat 139200

atcatggagt gacaagtagt ggagcaattt acaaattggg atcgtctatc gatagacttt 139260

ctctaaatag gactattgtt acaaaagtta ataattatga tgatacattt tttgacgacg 139320

atgattgatc gctattgcac aattttgttt ttttactttc taatatagcg tttagattct 139380

ttttcatgtg cgaatattga tttactaaaa tatcgatgtt taacttttgt tctatgacgt 139440

ccttatcagc ggtatcggta catatacgta attcaccttc acaaaatacg gagtcttcga 139500

taataatagc caatcgatta ttggatctag cggtctgtat catattcaac atgtttaata 139560

tatcctttcg tttccccttt acaggcatcg atcgtagcat attttccgcg tctgagatgg 139620

aaatgttaaa actacaaaaa tgcgtaatgt tagcccgtcc taatattggt acgtgtctat 139680

aagtttggca tagtagaata atagacgtgt ttaaatgcct tccaaagttt aagaattcta 139740

ttagagtatt gcattttgat agtttatcgc ctacatcatc aaaaataagt aaaaagtgtg 139800

ctgatttttt atgattttgt gcgacagcaa tacatttttc tatgttactt ttagttcgta 139860

tcagattata ttctagagat tcctgactac taacgaaatt aatatgattt ggccaaatgt 139920

atccatcata atctggatta taaacgggtg taaacaagaa tatatgttta tattttttaa 139980

ctagtgtaga aaacagagat agtaaataga tagtttttcc agatccagat cctcccgtta 140040

aaaccattct aaacggcatt tttaataaat tttctcttga aaattgtttt tcttggaaac 140100

aattcataat tatatttaca gttactaaat taatttgata ataaatcaaa atatggaaaa 140160

ctaaggtcgt tagtagggag gagaacaaag aaggcacatc gtgacataaa taacatttat 140220

tatcatgatg acaccagaaa acgacgaaga gcagacatct gtgttctccg ctactgttta 140280

cagagacaaa attcagggaa agaataaacg caaacgcgtg attggtctat gtattagaat 140340

atctatggtt atttcactac tatctatgat taccatgtcc gcgtttctca tagtgcgcct 140400

aaatcaatgc atgtctgcta acgaggctgc tattactgac gccgctgttg ccgttgctgc 140460

tgcatcatct actcatagaa aggttgcgtc tagcactacg caatatgatc acaaagaaag 140520

ctgtaatggt ttatattacc agggttcttg ttatatatta cattcagact accagttatt 140580

ctcggatgct aaagcaaatt gcactgcgga atcatcaaca ctacccaata aatccgatgt 140640

cttgactacc tggctcattg attatgttaa ggatacatgg ggatctgatg gtaatccaat 140700

tacaaaaact acatccgatt atcaagattc tgatgtatca caagaagtta gaaagtattt 140760

ttgtgttaaa acaatgaact aatatttatt tttgtacatt aataaatgaa atcgcttaat 140820

agacaaactg taagtaggtt taagaagttg tcggtgccgg ccgctataat gatgatactc 140880

tcaaccatta ttagtggcat aggaacattt ctgcattaca aagaagaact gatgcctagt 140940

gcttgcgcca atggatggat acaatacgat aaacattgtt atttagatac taacattaaa 141000

atgtctacag ataatgcggt ttatcagtgt cgtaaattac gagccagatt gcctagaccg 141060

gatactagac atctgagagt attgtttagt attttttata aagattattg ggtaagttta 141120

aaaaagacca atgataaatg gttagatatt aataatgata aagatataga tattagtaaa 141180

ttaacaaatt ttaaacaact aaacagtacg acggatgctg aagcgtgtta tatatacaag 141240

tctggaaaac tggttaaaac agtatgtaaa agtactcaat ctgtactatg tgttaaaaaa 141300

ttctacaagt gacaacaaaa aatgaattaa taataagtcg ttaacgtacg ccgccatgga 141360

cgccgcgttt gttattactc caatgggtgt gttgactata acagatacat tgtatgatga 141420

tctcgatatc tcaatcatgg actttatagg accatacatt ataggtaaca taaaaactgt 141480

ccaaatagat gtacgggata taaaatattc cgacatgcaa aaatgctact ttagctataa 141540

gggtaaaata gttcctcagg attctaatga tttggctaga ttcaacattt atagcatttg 141600

tgccgcatac agatcaaaaa ataccatcat catagcatgc gactatgata tcatgttaga 141660

tatagaagat aaacatcagc cattttatct attcccatct attgatgttt ttaacgctac 141720

aatcatagaa gcgtataacc tgtatacagc tggagattat catctaatca tcaatccttc 141780

agataatctg aaaatgaaat tgtcgtttaa ttcttcattc tgcatatcag acggcaatgg 141840

atggatcata attgatggga aatgcaatag taatttttta tcataaaagt tgtaaagtaa 141900

ataataaaac aataaatatt gaactagtag tacgtatatt gagcaatcag aaatgatgct 141960

ggtacctctt atcacggtga ccgtagttgc gggaacaata ttagtatgtt atatattata 142020

tatttgtagg aaaaagatac gtactgtcta taatgacaat aaaattatca tgacaaaatt 142080

aaaaaagata aagagttcta attccagcaa atctagtaaa tcaactgata gcgaatcaga 142140

ctgggaggat cactgtagtg ctatggaaca aaacaatgac gtagataata tttctaggaa 142200

tgagatattg gacgatgata gcttcgctgg tagtttaata tgggataacg aatccaatgt 142260

tatggcgcct agcacagaac acatttacga tagtgttgct ggaagcacgc tgctaataaa 142320

taatgatcgt aatgaacaga ctatttatca gaacactaca gtagtactta atgaagatac 142380

caaacagaat cctaactatt catccaatcc tttcgtaaat tataataaaa ccagtatttg 142440

tagcaagtca aatccgttca ttacagaact caacaataaa tttagtgaga ataatccgtt 142500

tagacgagca catagcgatg attatcttaa taagcaagaa caagatcatg aacacgatga 142560

tatagaatca ttggtgtgat tagtttcctt tttataaaat tgaagtaata tttagtatta 142620

ttgctgccgt cacgttgtac aaatggagat attccctgta ttcggcattt ctaaaattag 142680

caattttatt gctaataatg actgtagata ttatatagat acagaacatc aaaaaattat 142740

atctgatgag atcaatagac agatggatga aacggtactt cttaccaaca tcttaagcgt 142800

agaagttgta aatgacaatg agatgtacca tcttattcct catagattat cgacgattat 142860

actctgtatt agttctgtcg gaggatgtgt tatctctata gataatgacg tcaatggcaa 142920

aaatattcta acctttccca ttgatcatgc tgtaatcata tccccactga gtaaatgtgt 142980

cgtagttagc aagggtccta caaccatatt ggttgttaaa gcggatatac ctagcaaacg 143040

attggtaaca tcgtttacaa acgacatact gtatgtaaac aatctatcac tgattaatta 143100

tttgccgttg tctgtattca ttattagacg agttaccgac tatttggata gacacatatg 143160

cgatcagata tttgcgaata ataagtggta ttccattata accatcgaca ataagcagtt 143220

tcctattcca tcaaactgta taggtatgtc ctctgccaag tacataaatt ctagcatcga 143280

gcaagatact ttaatacatg tttgtaacct cgagcatcca ttcgacttag tatacaaaaa 143340

aatgcagtcg tacaattctg tacctatcaa ggaacaaata ttgtacggta gaattgataa 143400

tataaatatg agcattagta tttctgtgga ttaatagatt tctagtatgg ggatcattaa 143460

tcatctctaa tctctaaata cctcataaaa cgaaaaaaaa gctattatca aatactgtac 143520

ggaatggatt cattctcttc tctttttatg aaactctgtt gtatatctac tgataaaact 143580

ggaagcaaaa aatctgataa aaagaataag aataagatca aggattatta taaaataaca 143640

atagttcctg gttcctcttc cacgtctact agctcgtggt attatacaca tgcctagtaa 143700

tagtctcttt gcgttgacgg aaagcagact agaaataaca ggctaaaatg ttcagacacc 143760

ataatagttc ccaacccaga taataacaga gtaccatcaa cacattcctt taaactcaat 143820

cccaaaccca aaaccgttaa aatgtatccg gccaattgat agtagataat gaggtgtaca 143880

gcgcatgata atttacacag taaccaaaat gaaaatactt tagtaattat aagaaatata 143940

gatggtaacg tcatcatcaa caatccaata atatgccgga gagtaaacat tgacggataa 144000

aacaaaaatg ctccgcataa ctctatcatg gcaataacac aaccaaatac ttgtaagatt 144060

cctaaattag tagaaaatac aacggatatc gatgtataag tgatctcgag aaataataag 144120

aataaagtaa tgcccgtaaa gataaacatc aacattgttt ggtaatcatt aaaccaatta 144180

gtatgaagtt gaactaattt cacagtagat tttattccag tattatcccc gcatgtataa 144240

gtacctggta agatatcttt atattccata atcaatgaga catcactatc tgataacgaa 144300

tgaagtctag cactagtatg ccatttactt aatattgtcg tcttggaagt tttattataa 144360

gttaaaatat catggttatc caatttccat ctaatatact ttgtcggatt atctatagta 144420

cacggaataa tgatggtatc attacatgct gtatactcta tggtctttgt agttgttata 144480

acaaccaacg tatagaggta tatcaacgat attctaactc ttgacatttt ttatttattt 144540

aaaatgatac ctttgttatt tattttattc tattttgcta acggtattga atggcataag 144600

tttgaaacga gtgaagaaat aatttctact tacttattag acgacgtatt atacacgggt 144660

gttaatgggg cggtatacac attttcaaat aataaactaa acaaaactgg tttaactaat 144720

aataattata taacaacatc tataaaagta gaggatgcgg aaccaataac ggaaatccca 144780

aatgttggaa aatagacggt tcagacgacc caaaacatag aggtagagga tacgctcctt 144840

atcaaaatag caaagtaacg ataatcagtc acaacggatg tgtactatct gacataaaca 144900

tatcaaaaga aggaattaaa cgatggagaa gatttgacgg accatgtggt tatgatttat 144960

acacggcgga taacgtaatt ccaaaagatg gtttacgagg agcattcgtc gataaagatg 145020

gtacttatga caaagtttac attcttttca ctgatactat cggctcaaag agaattgtca 145080

aaattccgta tatagcacaa atgtgcctaa acgacgaagg tggtccatca tcattgtcta 145140

gtcatagatg gtcgacgttt ctcaaagtcg aattagaatg tgatatcgac ggaagaagtt 145200

atagacaaat tattcattct agaactataa aaacagataa tgatacgata ctatatgtat 145260

tcttcgatag tccttattcc aagtccgcat tatgtaccta ttctatgaat accattaaac 145320

aatctttttc tacgtcaaaa ttggaaggat atacaaagca attgccgtct ccagctcctg 145380

gtatatgttt accagctgga aaagttgttc cacataccac gtttgaagtc atagaaaaat 145440

ataatgtact agatgatatt ataaagcctt tatctaacca acctatcttc gaaggaccgt 145500

ctggtgttaa atggttcgat ataaaggaga aggaaaatga acatcgggaa tatagaatat 145560

acttcataaa agaaaattct atatattcgt tcgatacaaa atctaaacaa actcgtagct 145620

cgcaagtcga tgcgcgacta ttttcagtaa tggtaacttc gaaaccgtta tttatagcag 145680

atatagggat aggagtagga atgccacaaa tgaaaaaaat acttaaaatg taatcttaat 145740

cgagtacacc gcacgacaat gaacaaacat aagacagatt atgctggtta tgcttgctgc 145800

gtaatatgcg gtctaattgt tggaattatt tttacagcga cactattaaa agttgtagaa 145860

cgtaaattag ttcatacacc atcaatagat aaaacgataa aagatgcata tattagagaa 145920

gattgtccta ctgactggat aagctataat aataaatgta tccatttatc tactgatcga 145980

aaaaacctgg gaggaaggac gtaatgcatg caaagctcta aatccaaatt cggatctaat 146040

taagatagag actccaaacg agttaagttt tttaagaagc cttagacgag gctattgggt 146100

aggagaatcc gaaatattaa accagacaac cccatataat tttatagcta aaaatgccac 146160

gaagaatgga actaaaaaac ggaaatatat ttgtagtaca acgaatactc ccaaactgca 146220

ttcgtgttac actatataac aattacacta catttttatc ataacactac ttcggttaga 146280

tgttttagaa aaaaataaat atcgccgtac cgttcttgtt tttataaaaa taacaattaa 146340

caattatcaa attttttctt taatatttta cgtggttgac cattcttggt ggtaaaataa 146400

tctcttagtg ttggaatgga atgctgttta atgtttccgc actcatcgta tattttgacg 146460

tatgcagtca catcgtttac gcaatagtca gactgtagtt ctatcatgct tcctacatca 146520

gaaggaggaa cagttttaaa gtctcttggt tttaatctat tgccattagt tttcatgaaa 146580

tcctttgttt tatccacttc acattttaaa taaatgtcca ctatacattc ttctgttaat 146640

tttactagat cgtcatgggt catagaattt ataggttccg tagtccatgg atccaaacta 146700

gcaaacttcg cgtatacggt atcgcgatta gtgtatacac caactgtatg aaaattaaga 146760

aaacagttta ataaatcaac agaaatattt aatcctccgt ttgatacaga tgcgccatat 146820

ttatggattt cggattcaca cgttgtttgt ctgaggtgtt cgtctagtgt tgcttctacg 146880

taaacttcga ttcccatata ttctttattg tcagaatcgc ataccgattt atcatcatac 146940

actgtttgaa aactaaatgg tatacacatc aaaataataa ataataacga gtacattctg 147000

caatattgtt atcgtaattg gaaaattagt gttcgagtga gtcggattat gtgagtactg 147060

gattgtatat tttattttat attttgtaat aagaataaaa tgctaatgtc aagtttattc 147120

caatagatgt cttattaaaa aacatatata ataaataaca atggctgaat ggcataaaat 147180

tatcgaggat atctcaaaaa ataataagtt cgaggatgcc gccatcgttg attacaagac 147240

tacaaagaat gttctagctg ctattcctaa cagaacattt gccaagatta atccgggtga 147300

aattattcct ctcatcacta atcgtaatat tctaaaacct cttattggtc agaaatattg 147360

tattgtatat actaactctc taatggatga gaacacgtat gctatggagt tgcttactgg 147420

gtacgcccct gtatctccga tcgttatagc gagaactcat accgcactta tatttttgat 147480

gggtaagcca acaacatcca gacgtgatgt gtatagaacg tgtagagatc acgctacccg 147540

tgtacgcgca actggtaatt aaaataaaaa gtaatattca tatgtagtgt caattttaaa 147600

tgatgatgat gaaatggata atatccatat tgacgatgtc aataatgccg gtattggcat 147660

acagctcatc gatttttaga tttcattcag aggatgtgga attatgttat gggcatttgt 147720

attttgatag gatctataat gtagtaaata taaaatataa tccgcatatt ccatatagat 147780

ataattttat taatcgcacg ttaaccgtag atgaactaga cgataatgtc ttttttacac 147840

atggttattt tttaaaacac aaatatggtt cacttaatcc tagtttgatt gtctcattat 147900

caggaaactt aaaatataat gatatacaat gctcagtaaa tgtatcgtgt ctcattaaaa 147960

atttggcaac gagtacatct actatattaa catctaaaca taagacttat tctctacatc 148020

ggtccacgtg tattactata ataggatacg attctattat atggtataaa gatataaatg 148080

acaagtataa tgacatctat gattttactg caatatgtat gctaatagcg tctacattga 148140

tagtgaccat atacgtgttt aaaaaaataa aaatgaactc ttaattatgc tatgctatta 148200

gaaatggata aaatcaaaat tacggttgat tcaaaaattg gtaatgttgt taccatatcg 148260

tataacttgg aaaagataac tattgatgtt acacctaaaa agaaaaaaga aaaggatgta 148320

ttattagcgc aatcagttgc tgtcgaagag gcaaaagatg tcaaggtaga agaaaaaaat 148380

attatcgata ttgaagatga cgatgatatg gatgtagaaa gcgcataata cgatctataa 148440

aaataagtat ataataaata ctttttattt acggtactct tgtagtggtg ataccctact 148500

caattatttt tttaaaaaaa tacttattct gattcttcta gccatttccg tgttcgttcg 148560

aatgccacat cgacgttaaa gataggggag tagttgaaat ctagttctgc attgttggta 148620

cgcacctcaa atgtagtgtt ggatatcttc aacgtatagt tgttgagtag tgatggtttt 148680

ctaaatagaa ttctcttcat atcattcttg cacgcgtaca tttttagcat ccatcttgga 148740

attctagatc cttgttctat tcccaatggt ttcatcaata gaagattaaa catatcgtac 148800

gaacacgatg gagagtaatc gtagcaaaag taagcatttc ctttaatctt agatcccgga 148860

tactggatat attttgcagc caacacgtgc atccatgcag catttcctac atatacccgg 148920

ctatgcaccg cgtcatcatc gactgtacga tacataatgt taccgtgttg cttacattgc 148980

tcgtaaaaga ctttcgtcaa tttgtctcct tctccgtaaa ttccagtggg tcttaggcaa 149040

caagtataca attttgctcc attcatgatt acggaattat tggctttcat aaccagttgc 149100

tcggccatac gtttactttt tgcgtataca tgtcctggtg atatatcata aagggtatgc 149160

tcatggccga tgaatggatc accgtgttta ttgggtccta ttgcttccat gctactagta 149220

tagatcaaat acttgattcc taggtccaca caagctgcca atatagtctg tgttccataa 149280

tagtttactt tcatgatttc attatcggtg tattttccaa atacatccac tagagcagcc 149340

gtatgaataa tcagatttac cccatctagc gcttctctca ccttatcaaa gtcgtttata 149400

tcacattgta tatagtttat aaccttaact ttcgaggtta ttggttgtgg atcttctaca 149460

atatctatga ctctgatttc ttgaacatca tctgcactaa ttaacagttt tactatatac 149520

ctgcctagaa atccggcacc accagtaacc gcgtacacgg ccattgctgc cactcataat 149580

atcagactac ttattctatt ttactaaata atggctgttt gtataataga ccacgataat 149640

atcagaggag ttatttactt tgaaccagtc catggaaaag ataaagtttt aggatcagtt 149700

attggattaa aatccggaac gtatagtttg ataattcatc gttacggaga tattagtcaa 149760

ggatgtgatt ccataggcag tccagaaata tttatcggta acatctttgt aaacagatat 149820

ggtgtagcat atgtttattt agatacagat gtaaatatat ttacaattat tggaaaggcg 149880

ttatctattt caaaaaatga tcagagatta gcgtgtggag ttattggtat ttcttacata 149940

aatgaaaaga taatacattt tcttacaatt aacgagaatg gcgtttgata tatcagttaa 150000

tgcgtctaaa acaataaatg cattagttta cttttctact cagcaaaata aattagtcat 150060

acgtaatgaa gttaatgata cacactacac tgtcgaattt gatagggaca aagtagttga 150120

cacgtttatt tcatataata gacataatga caccatagag ataagagggg tgcttccaga 150180

ggaaactaat attggttgcg cggttaatac gccggttagt atgacttact tgtataataa 150240

gtatagtttt aaactgattt tagcagaata tataagacac agaaatacta tatccggcaa 150300

tatttattcg gcattgatga cactagatga tttggctatt aaacagtatg gagacattga 150360

tctattattt aatgagaaac ttaaagtaga ctccgattcg ggactatttg actttgtcaa 150420

ctttgtaaag gatatgatat gttgtgattc tagaatagta gtagctctat ctagtctagt 150480

atctaaacat tgggaattga caaataaaaa gtataggtgt atggcattag ccgaacatat 150540

atctgatagt attccaatat ctgagctatc tagactacga tacaatctat gtaagtatct 150600

acgcggacac actgagagca tagaggatga atttgattat tttgaagacg atgattcgtc 150660

tacatgttct gccgtaaccg acagggaaac ggatgtataa ttttttttat agcgtgaagg 150720

atatgataaa aaatataatt gttgtattta tcccattcca atcaccttat atgattctgt 150780

aaaaaaatta tactgtaaca caataaagga gtcttataga tgtatagagg tcagatactg 150840

gtttgataaa ctgtttattc cacataagta tgtttgactt tatggttaga cccgcatact 150900

ttaacaaatc actgaaaatt ggagttaggt attgacctct cagaatcagt tgccgttctg 150960

gaacattaaa tgtatttttt atgatatact ccaacgcatt tatgtgggca tacaacaagt 151020

cattactaat ggagtattcc aagagtttta gttgtctagt atttaacaag agaagagatt 151080

tcaacagact gtttatgaac tcgaacgccg cctcattgtc gcttatattg atgatgtcga 151140

attctcccaa tatcatcact gatgagtagc tcatcttgtt atcgggatcc aagttttcta 151200

aagatgtcat taaaccctcg atcatgaatg gatttatcat catcgttttt atgttggaca 151260

tgagcttagt ccgtttgtcc acatctatag acgacgattt ctgaattatt tcatatatcc 151320

ctctctttaa ctccaggaac ttgtcaggat ggtctacttt aatatgttct cgtctaagag 151380

atgaaaatct ttggatggtt gcacgcgact tttctttaaa ggatgacgtt gcccaagatc 151440

ctctcttaaa tgaatccatc ttatccttgg acaagatgga cagtctattt tccttagatg 151500

gtttaatatt tttgttaccc atgatctata aaggtagacc taatcgtctc ggatgaccat 151560

atatttattt tcagttttat tatacgcata aattgtaaaa aatatgttag gtttacaaaa 151620

atgtctcgtg gggcattaat cgtttttgaa ggattggaca aatctggaaa aacaacacaa 151680

tgtatgaaca tcatggaatc tataccggca aacacgataa aatatcttaa ctttcctcag 151740

agatccactg tcactggaaa gatgatagat gactatctaa ctcgtaaaaa aacctataat 151800

gatcatatag ttaatctatt attttgtgca aatagatggg agtttgcatc ttttatacaa 151860

gaacaactag aacagggaat tactttaata gttgatagat acgcattttc tggagtagcg 151920

tatgccgccg ctaaaggcgc gtcaatgact ctcagtaaga gttatgaatc tggattgcct 151980

aaacccgact tagttatatt cttggaatct ggtagcaaag aaattaatag aaacgtcggc 152040

gaggaaattt atgaagatgt tacattccaa caaaaggtat tacaagaata taaaaaaatg 152100

attgaagaag gagatattca ttggcaaatt atttcttctg aattcgagga agatgtaaag 152160

aaggagttga ttaagaatat agttatagag gctatacaca cggttactgg accagtgggg 152220

caactgtgga tgtaatagtg aaattacatt ttttataaat agatgttagt acagtgttat 152280

aaatggatga agcatattac tctggcaact tggaatcagt actcggatac gtgtccgata 152340

tgcataccga actcgcatca atatctcaat tagttattgc caagatagaa actatagata 152400

atgatatatt aaacaaggac attgtaaatt ttatcatgtg tagatcaaac ttggataatc 152460

catttatctc tttcctagat actgtatata ctattataga tcaagagatc tatcagaccg 152520

aattgattaa ttcattagac gacaatgaaa ttatcgattg tatagttaac aagtttatga 152580

gcttttataa ggataaccta gaaaatatag tagatgctat cattactcta aaatatataa 152640

tgaataatcc agattttaaa actacgtatg ccgaagtact cggttccaga atagccgata 152700

tagatattaa acaagtgata cgtaagaata tactacaatt gtctaatgat atccgcgaac 152760

gatatttgtg aaaaatatta aaaaaaaata ctttttttat taaatgacgt cgcttcgcga 152820

atttagaaaa ttatgctgtg atatatatca cgcatcagga tataaagaaa aatctaaatt 152880

aattagagac tttataacag atagggatga taaatatttg atcattaagc tattgcttcc 152940

cggattagac gatagaattt ataacatgaa cgataaacaa attataaaat tatatagtat 153000

aatatttaaa caatctcagg aagatatgct acaagattta ggatacggat atataggaga 153060

cactattagg actttcttca aagagaacac agaaatccgt ccacgagata aaagcatttt 153120

aactttagaa gaagtggata gttttttaac tacgttatca tccgtaacta aagaatcgca 153180

tcaaataaaa ttattgactg atgtagcatc tgtttgtaca tgtaatgatt taaaatgtgt 153240

agtcatgctt attgataaag atctaaaaat taaagcgggc cctcggtacg tacttaacgc 153300

tattagtcct catgcctatg atgtgtttag aaaatctaat aacttgaaag agataataga 153360

aaatgcatct aaacaaaatc tagactctat atctatttct gttatgactc caattaatcc 153420

catgttagcg gaatcgtgtg attctgtcaa taaggcgttt aaaaaatttc catcaggaat 153480

gtttgcggaa gtcaaatacg atggtgaaag agtacaagtt cataaaaata ataacgagtt 153540

tgccttcttt agtagaaaca tgaaaccagt actctctcat aaagtggatt atctcaaaga 153600

atacataccg aaagcattta aaaaagctac gtctatcgta ttggattctg aaattgttct 153660

tgtagacgaa cataatgtac cgctaccgtt tggaagttta ggaatacaca aaaagaaaga 153720

atataaaaac tctaacatgt gtttgttcgt gtttgactgt ttgtactttg atggattcga 153780

tatgacggac attccattgt acgaacgaag atcttttctc aaagatgtta tggttgaaat 153840

acccaataga atagtattct cagagttgac gaatattagt aacgagtctc agttaactga 153900

cgtattggat gatgcactaa cgagaaaatt agaaggattg gtcttaaaag atattaatgg 153960

agtatacgaa ccgggaaaga gaagatggtt aaaaataaag cgagactatt tgaacgaggg 154020

ttccatggca gattctgccg atttagtagt actaggtgcc tactatggta aaggagcaaa 154080

gggtggtatc atggcagtct ttctaatggg ttgttacgac gatgaatccg gtaaatggaa 154140

gacggttacc aagtgttcag gacacgatga taatacgtta agggagttgc aagaccaatt 154200

aaagatgatt aaaattaaca aggatcccaa aaaaattcca gagtggttag tagttaataa 154260

aatctatatt cccgattttg tagtagagga tccgaaacaa tctcagatat gggaaatttc 154320

aggagcagag tttacatctt ccaagtccca taccgcaaat ggaatatcca ttagatttcc 154380

tagatttact aggataagag aggataaaac gtggaaagaa tctactcatc taaacgattt 154440

agtaaacttg actaaatctt aatagttaca tacaaactga aaattaaaat aacaccattt 154500

agttggtggt cgccatggat ggtgttattg tatactgtct aaacgcgtta gtaaaacatg 154560

gcgaggaaat aaatcatata aaaaatgatt tcatgattaa accatgttgt gaaagagttt 154620

gtgaaaaagt caagaacgtt cacattggcg gacaatctaa aaacaataca gtgattgcag 154680

atttgccata tatggataat gcggtatccg atgtatgcaa ttcactgtat aaaaagaatg 154740

tatcaagaat atccagattt gctaatttga taaagataga tgacgatgac aagactccta 154800

ctggtgtata taattatttt aaacctaaag atgttattcc tgttatcata tctataggaa 154860

aggataaaga tgtctgtgaa ctattaatct catcagacat atcgtgtgca tgcgtggagt 154920

taaattcata tcacgtagcc attcttccca tgaatgtttc cttttttacc aaaggaaatg 154980

cctcgttgat tattctcctg tttgatttct ctatcgatgc agcacctctc ttaagaagtg 155040

taaccgataa taatgttatt atatctagac accagcgtct acatgacgag cttccgagtt 155100

ccaattggtt caagttttac ataagtataa agtccgacta ttgttctata ttatatatgg 155160

ttgttgatgg atctgtgatg catgcgatag ctgataatag aactcacgca attattagca 155220

aaaatatatt agacaatact acaattaacg atgagtgtag atgctgttat tttgaaccac 155280

agattaggat tcttgataga gatgagatgc tcaatggatc atcgtgtgat atgaacagac 155340

attgtattat gatgaattta cctgatgtag gcgaatttgg atctagtatg ttggggaaat 155400

atgaacctga catgattaag attgctcttt cggtggctgg taatttaata agaaatcgag 155460

actacattcc cgggagacga ggctatagct actacgttta cggtatagcc tctagataat 155520

ttttttaagc acgaaataaa aaacataatt ttaaaccaat ctatttcata ctattttgtg 155580

tgatcaccat ggacataaag atagatatta gtatttctgg tgataaattt acggtgacta 155640

ctaggaggga aaatgaagaa agaaaaaaat atctacctct ccaaaaagaa aaaactactg 155700

atgttatcaa acctgattat cttgagtacg atgacttgtt agatagagat gagatgttta 155760

ctattctaga ggaatatttt atgtacagag gtctattagg cctcagaata aaatatggac 155820

gactctttaa cgaaattaaa aaattcgaca atgatgcgga agaacaattc ggtactatag 155880

aagaactcaa gcagaaactt agattaaatt ctgaagaggg agcagataac tttatagatt 155940

atataaaggt acaaaaacag gatatcgtca aacttactgt atacgattgc atatctatga 156000

taggattgtg tgcatgcgtg gtagatgttt ggagaaatga gaaactgttt tctagatgga 156060

aatattgttt acgagcgatt aaactgttta ttaatgatca catgcttgat aagataaaat 156120

ctatactgca gaatagacta gtatatgtgg aaatgtcata gaaagttaat gagagcaaaa 156180

atatataagg ttgtattcca tatttgttat tttttctgta atagttaaaa aaatacattc 156240

gatggtctat ctatcagatt attatgtgtt ataaggtact ttttctcata ataaactaga 156300

gtatgagtaa gatagtgttt ttcaaaacat ataaatctaa aattgatgga tgagatatac 156360

agctattaat ttcgaaaata tataaatcta aaattgatgg ataagatata cagctattaa 156420

tttcgaaaat atattttaat ctgataactt taaacatgga tttttgatgg tggtttaacg 156480

ttttaaaaaa agattttgtt attgtagtat atgataatat taaaagatgg atataaagaa 156540

tttgctgact gcatgtacta ttttttacat tactacattg gctacggcag atatacctac 156600

tccgccacca acgggtcatg tgacaaggga gaatatcttg ataagaggca taatcaatgt 156660

tgtaatcggt gtccacctgg agaatttgcc aaggttagat gtaatggtaa cgataacaca 156720

aaatgtgaac gctgcccacc tcatacatat accacaatcc ccaattattc taatggatgt 156780

catcaatgta gaaaatgccc aaccggatca tttgataagg taaagtgtac cggaacacag 156840

aacagtaaat gttcgtgtct tcctggttgg tattgcgcta ctgattcttc acagactgaa 156900

gattgttgaa attgtgtacc aaaaaggaga tgtccatgcg gatactttgg tggaatagat 156960

gaacaaggaa atcctatttg taaatcgtgc tgtattggtg aatattgcaa ctacctacgt 157020

aattatagac ttgatccatt ttctccatgc aaactatcta aatgtaatta attatgattt 157080

tgatgataat gttaccatac attatatcgc tacttggtta gtgtattatt cagtatgaag 157140

acctattaat aattacttat cttttgacga tcttgttata attataatat aaaaacttat 157200

ggcatagtaa ctcataattg ctgacgcgat aaattcgtaa taatctgttt tgttcaaatt 157260

tttataagga atctacaggc ataaaaataa aaatataatt tataatatac tcttacagcg 157320

cgccatcatg aatagcagca gtaaattaat tgctgttatt aatggattta gaaatagtgg 157380

acgattttgt gatattaata tagttattaa tgatgaaagg ataaacgctc acagactcat 157440

cctatctgga gcctccgaat atttttccat tctgttttcc aataatttta tcgattctaa 157500

tgaatacgaa gttaatctaa gtcatttaga ttatcaaagt gttaacgatt tgatcgatta 157560

catttatggg atacctttga gcctaactaa cgataacgtg aaatatattc tttcaaccgc 157620

tgatttttta caaattggat ctgccattac tgagtgcgaa aaatacatac ttaaaaatct 157680

ttgttctaga aactgtatcg atttctacat atacgctgat aaatataata acaagaaaat 157740

agaatcagcg tcgtttaaca caatattacg aaatattttg agactcatca acgatgaaaa 157800

ctttaaatac ttaacagagg aatcaatgat aaaaatttta agcgatgata tgttaaatat 157860

aaaaaatgag gattttgcac cactaattct cattaaatgg ttagagagta ctcaacaatc 157920

atgcaccgtc gagttactta gatgcctcag aatatcattg ctttccccac aagttataaa 157980

atcactttat agtcatcaac tggttagttc aatctacgaa tgtataacat tcttaaacaa 158040

tatagcattc ttggatgaat catttcctag ataccatagc atcgagttga tatctatcgg 158100

tataagtaat tcgcatgata agatttccat aaactgctac aatcataaaa aaaatacatg 158160

ggaaatgata tcttcacgta gatataggtg tagtttcgca gtggccgtcc tggataatat 158220

tatctatatg atgggtggat atgatcagtc cccgtataga agttcaaagg ttatagcgta 158280

caatacatgt acaaattctt ggatatatga tataccagag ctaaaatatc ctcgttctaa 158340

ttgtggggga ctggctgatg acgaatacat ttattgtata ggcggcatac gcgatcagga 158400

ttcatcgttg acatctagta ttgatagatg gaagccatca aaaccatatt ggcagaagta 158460

tgctaaaatg cgcgaaccaa aatgtgatat gggggttgcg atgttaaacg gattaatata 158520

tgtcatgggt ggaatcgtta aaggtgacac gtgtaccgac gcactagaga gtttatcaga 158580

agatggatgg atgaagcatc aacgtcttcc aataaaaatg tccaatatgt cgacgattgt 158640

tcatgatggc aagatttata tatctggagg ttacaacaat agtagtgtag ttaatgtaat 158700

atcgaatcta gtccttagct ataatccgat atatgatgaa tggaccaaat tatcatcatt 158760

aaacattcct agaattaatc ccgctctatg gtcagcgcat aataaattat atgtaggagg 158820

aggaatatct gatgatgttc gaactaatac atctgaaaca tacgataaag aaaaagattg 158880

ttggacattg gataatggtc acgtgttacc acgcaattat ataatgtata aatgcgaacc 158940

gattaaacat aaatatccat tggaaaaaac acagtacacg aatgattttc taaagtattt 159000

ggaaagtttt ataggtagtt gatagaacaa aatacataat tttgtaaaaa taaatcactt 159060

tttatactaa tatgacacga ttaccaatac ttttgttact aatatcatta gtatacgcta 159120

caccttttcc tcagacatct aaaaaaatag gtgatgatgc aactctatca tgtaatcgaa 159180

ataatacaaa tgactacgtt gttatgagtg cttggtataa ggagcccaat tccattattc 159240

ttttagctgc taaaagcgac gtcttgtatt ttgataatta taccaaggat aaaatatctt 159300

acgactctcc atacgatgat ctagttacaa ctatcacaat taaatcattg actgctagag 159360

atgccggtac ttatgtatgt gcattcttta tgacatcaac tacaaatgac actgataaag 159420

tagattatga agaatactcc acagagttga ttgtaaatac agatagtgaa tcgactatag 159480

acataatact atctggatct acacattcac cagaaactag ttctgagaaa ccagaggata 159540

tagataattt taattgctcg tcggtattcg aaatcgcgac tccggaacca attactgata 159600

atgtagaaga tcatacagac accgtcacat acactagtga tagcattaat acagtaagtg 159660

catcatctgg agaatccaca acagacgaga ctccggaacc aattactgat aaagaagaag 159720

atcatacagt cacagacact gtctcataca ctacagtaag tacatcatct ggaattgtca 159780

ctactaaatc aaccaccgat gatgcggatc tttatgatac gtacaatgat aatgatacag 159840

taccaccaac tactgtaggc ggtagtacaa cctctattag caattataaa accaaggact 159900

ttgtagaaat atttggtatt accgcattaa ttatattgtc ggccgtggca atattctgta 159960

ttacatatta tatatataat aaacgttcac gtaaatacaa aacagagaac aaagtctaga 160020

tttttgactt acataaatgt ctgggatagt aaaatctatc atattgagcg gaccatctgg 160080

ttcaggaaag acagccatag ccaaaagact atgggaatat atttggattt gtggtgtccc 160140

ataccactag atttcctcgt cctatggaac gagaaggtgt cgattaccat tacgttaaca 160200

gagaggccat ctggaaggga atagccgccg gaaactttct agaacatact gagtttttag 160260

gaaatattta cggaacttct aaaactgctg tgaatacagc ggctattaat aatcgtattt 160320

gtgtgatgga tctaaacatc gatggcgtta gaagtcttaa aaatacgtac ctaatgcctt 160380

actcggtgta tataagacct acctctctta aaatggttga gaccaagctt cgttgtagaa 160440

acactgaagc ggatgatgag attcatcgtc gtgtgatgtt ggcaaaaact gacatggatg 160500

aggcaggtga agccggtcta ttcgacacta ttatcattga agatgatgtg aatttagcat 160560

atagtaagtt aattcagata ctacaggacc gtattagaat gtattttaac actaattaga 160620

gacttaagac ttaaaacttg ataattaata atataactcg tttttatatg tggctatttc 160680

aacgtctaat gtattagtta aatattaaaa cttaccacgt aaaacttaaa atttaaaatg 160740

atatttcatt gacagataga tcacacatta tgaactttca aggacttgtg ttaactgaca 160800

attgcaaaaa tcaatgggtc gttggaccat taataggaaa aggtggattc ggtagtattt 160860

atactactaa tgacaataat tatgtagtaa aaatagagcc caaagctaac ggatcattat 160920

ttaccgaaca ggcattttat actagagtac ttaaaccatc cgttatcgaa gaatggaaaa 160980

aatctcacaa tataaagcac gtaggtctta tcacgtgcaa ggcatttggt ctatacaaat 161040

ccattaatgt ggaatatcga ttcttggtaa ttaatagatt aggtgcagat ctagatgcgg 161100

tgatcagagc caataataat agattaccaa aaaggtcggt gatgttgatc ggaatcgaaa 161160

tcttaaatac catacaattt atgcacgagc aaggatattc tcacggagat attaaagcga 161220

gtaatatagt cttggatcaa atagataaga ataaattata tctagtggat tacggattgg 161280

tttctaaatt catgtctaat ggcgaacatg ttccatttat aagaaatcca aataaaatgg 161340

ataacggtac tctagaattt acacctatag attcgcataa aggatacgtt gtatctagac 161400

gtggagatct agaaacactt ggatattgta tgattagatg gttgggaggt atcttgccat 161460

ggactaagat atctgaaaca aagaattgtg cattagtaag tgccacaaaa cagaaatatg 161520

ttaacaatac tgcgactttg ttaatgacca gtttgcaata tgcacctaga gaattgctgc 161580

aatatattac catggtaaac tctttgacat attttgagga acccaattac gacgagtttc 161640

ggcacatatt aatgcagggt gtatattatt aagtgtggtg tttggtcgat gtaaaatttt 161700

tgtcgataaa aattaaaaaa taacttaatt tattattgat ctcgtgtgta caaccgaaat 161760

catggcgatg ttttacgcac acgctctcgg tgggtacgac gagaatcttc atgcctttcc 161820

tggaatatca tcgactgttg ccaatgatgt caggaaatat tctgttgtgt cagtttataa 161880

taacaagtat gacattgtaa aagacaaata tatgtggtgt tacagtcagg tgaacaagag 161940

atatattgga gcactgctgc ctatgtttga gtgcaatgaa tatctacaaa ttggagatcc 162000

gatccatgat caagaaggaa atcaaatctc tatcatcaca tatcgccaca aaaactacta 162060

tgctctaagc ggaatcgggt acgagagtct agacttgtgt ttggaaggag tagggattca 162120

tcatcacgta cttgaaacag gaaacgctgt atatggaaaa gttcaacatg attattctac 162180

tatcaaagag aaggccaaag aaatgaatgc actcagttca ggacctatca tcgattacca 162240

cgtctggata ggagattgta tctgtcaagt tactgctgtg gacgtacatg gaaaggaaat 162300

tatgagaatg agattcaaaa agggtgcggt gctacagatc ccaaatctgg taaaagttaa 162360

acttggggag aatgatacag aaaatctttc ttctactata tcggcggcac catcgaggta 162420

accacctctc aagaagaccg cgtgaataat gtactcatga aacgtttgga aactatacgc 162480

catatgtggt ctgttgtata tgatcatttt gatattgtga atggtaaaga atgctgttat 162540

gtgcatacgc attcatctaa tcaaaatcct ataccgagta ctgtaaaaac aaatttgtac 162600

atgaagacta tgggatcatg cattcaaatg gattccatgg aagctctaga gtatcttagc 162660

gaactgaagg aatcaggtgg atggagtccc agaccagaaa tgcaggaatt tgaatatcca 162720

gatggagtgg aagacactga atcaattgag agattggtag aggagttctt caatagatca 162780

gaacttcagg ctggtaaatt agtcaaattt ggtaattcta ttaattgtta aacatacatc 162840

tgtttcagct aagcaactaa gaacacgtat acggcagcag cttcctttta tactctcatc 162900

ttttaccaac acaaagggtg gatatttgtt cattggagtt gataataata cacacaaagt 162960

atttggattc acggtgggtt acgactacct cagactgata gagaatgata tagaaaagca 163020

tatcaaaaga ctttgtgttg tgcatttctg tgagaagaaa gaggacatca agtacacgtg 163080

tcgattcatc aaggtatata aacctgggga tgaggctacc tcgacatacg tgtgcgctat 163140

caaagtggaa agatgctgtt gtgctgtgtt tgcagattgg ccagaatcat ggtatatgga 163200

tactaatggt atcaagaagt attctccaga tgaatgggtg tcacatataa aattttaatt 163260

aatgtaacta tagagaacaa ataataggtt gtaatatcat atagacaata actaacaatt 163320

aattagtaac tgttatctct tttttaacta accaactaac tatataccta ttaatacatc 163380

gtaattatag ttcttaacat ctattaatca ttgattcgct tctttaattt tttataaact 163440

aacattgtta attgaaaagg gataacatgt tacagaatat aaattatata tggatttttt 163500

taaaaaggaa atacttgact ggagtgtata tttatctctt cattatatag cacgcgtgtg 163560

ttccaattct tccacatccc atataataca ggattataat ctcgttcgaa catacgagaa 163620

agtggataaa acaatagttg attttttatc taggttgcca aatttattcc atattttaga 163680

atatggggaa aatattctac atatttattc tatggatgat gctaatacga atattataat 163740

tttttttcta gatagagtat taaatattaa taagaacggg tcatttatac acaatctcag 163800

gttatcatca tccattaata taaaagaata tgtatatcaa ttagttaata atgatcatcc 163860

agataatagg ataagactaa tgcttgaaaa tggacgtaga acaagacatt ttttgtccta 163920

tatatcagat acagttaata tctatatatg tattttaata aatcatggat tttatataga 163980

tgcagaagac agttacggtt gtacattatt acatagatgt atatatcact ataagaaatc 164040

agaatcagaa tcatacaatg aattaattaa gatattgtta aataatggat ccgatgtaga 164100

taaaaaagat acgtacggaa acacaccttt tatcctatta tgtaaacacg atatcaacaa 164160

cgtggaattg tttgagatat gtttagagaa tgctaatata gactctgtag actttaatag 164220

atatacacct cttcattatg tctcatgtcg taataaatat gattttgtaa agttattaat 164280

ttctaaagga gcaaatgtta atgcgcgtaa taaattcgga actactccat tttattgtgg 164340

aattatacac ggtatctcgc ttataaaact atatttggaa tcagacacag agttagaaat 164400

agataatgaa catatagttc gtcatttaat aatttttgat gctgttgaat ctttagatta 164460

tctattatcc agaggagtta ttgatattaa ctatcgtact atatacaacg aaacatctat 164520

ttacgacgct gtcagttata atgcgtataa tacgttggtc tatctattaa acagaaatgg 164580

tgattttgag acgattacta ctagtggatg tacatgtatt tcggaagcag tcgcaaacaa 164640

caacaaaata ataatggaag tactattgtc taaacgacca tctttgaaaa ttatgataca 164700

gtctatgata gcaattacta aaaataaaca acataatgca gatttattga aaatgtgtat 164760

aaaatatact gcgtgtatga ccgattatga tactcttata gatgtacagt cgctacagca 164820

atataaatgg tatattttaa aatgtttcga tgaaatagat atcatgaaga gatgttatat 164880

aaaaaataaa actgtattcc aattagtttt ttgtatcaaa gacattaata ctttaatgag 164940

atatggtaaa catccttctt tcgtgaagtg cactagtctc gacgtatacg gaagtcgtgt 165000

acgtaatatc atagcatcta ttagatatcg tcagagatta attagtctat tatccaagaa 165060

gctggatgcg ggagataaat ggtcgtgttt tcctaacgaa ataaaatata aaatattgga 165120

aaactttaac gataacgaac tatccacata tctaaaaatc ttataaacac tattaaaata 165180

taaaatctaa gtaggataaa atcacactac atcattgttt ccttttagtg ctcgacagtg 165240

tatactattt ttaacactca taaataaaaa tgaaaacgat ttccgttgtt acgttgttat 165300

gcgtactacc tgctgttgtt tattcaacat gtactgtacc cactatgaat aacgctaaat 165360

taacgtctac cgaaacatcg tttaatgata aacagaaagt tacatttaca tgtgatcagg 165420

gatatcattc tttggatcca aatgctgtct gcgaaacaga taaatggaaa tacgaaaatc 165480

catgcaagaa aatgtgcaca gtttctgatt atgtctctga attatatgat aagccattat 165540

acgaagtgaa ttccaccatg acactaagtt gcaacggcga aacaaaatat tttcgttgcg 165600

aagaaaaaaa tggaaatact tcttggaatg atactgttac gtgtcctaat gcggaatgtc 165660

aacctcttca attagaacac ggatcgtgtc aaccagttaa agaaaaatac tcatttgggg 165720

aatatatgac tatcaactgt gatgttggat atgaggttat tggtgcttcg tacataagtt 165780

gtacagctaa ttcttggaat gttattccat catgtcaaca aaaatgtgat ataccgtctc 165840

tatctaatgg attaatttcc ggatctacat tttctatcgg tggcgttata catcttagtt 165900

gtaaaagtgg ttttatacta acgggatctc catcatccac atgtatcgac ggtaaatgga 165960

atcccatact cccaacatgt gtacgatcta acgaaaaatt tgatccagtg gatgatggtc 166020

ccgacgatga gacagatttg agcaaactct cgaaagacgt tgtacaatat gaacaagaaa 166080

tagaatcgtt agaagcaact tatcatataa tcatagtggc gttaacaatt atgggcgtca 166140

tatttttaat ctccgttata gtattagttt gttcctgtga caaaaataat gaccaatata 166200

agttccataa attgctaccg taaatataaa tccgttaaaa taattaataa tttaataaca 166260

aacaagtatc aaaagattaa agacttatag ctagaatcaa ttgagatgtc ttcttcagtg 166320

gatgttgata tctacgatgc cgttagagca tttttactca ggcactatta taacaagaga 166380

tttattgtgt atggaagaag taacgccata ttacataata tatacaggct atttacaaga 166440

tgcgccgtta taccgttcga tgatatagta cgtactatgc caaatgaatc acgtgttaaa 166500

caatgggtga tggatacact taatggtata atgatgaatg aacgcgatgt ttctgtaagc 166560

gttggcaccg gaatactatt catggaaatg tttttcgatt acaataaaaa tagtatcaac 166620

aatcaactaa tgtatgatat aattaatagc gtatctataa ttctagctaa tgagagatat 166680

agaagcgctt ttaacgacga tggtatatac atccgtagaa atatgattaa caagttgtac 166740

ggatacgcat ctctaactac tattggcacg atcgctggag gtgtttgtta ttatctgttg 166800

atgcatctag ttagtttgta taaataatta tttcaatata ctagttaaaa ttttaagatt 166860

ttaaatgtat aaaaaactaa taacgttttt atttgtaata ggtgcattag catcctattc 166920

gaataatgag tacactccgt ttaataaact gagtgtaaaa ctctatatag atggagtaga 166980

taatatagaa aattcatata ctgatgataa taatgaattg gtgttaaatt ttaaagagta 167040

cacaatttct attattacag agtcatgcga cgtcggattt gattccatag atatagatgt 167100

tataaacgac tataaaatta ttgatatgta taccattgac tcgtctacta ttcaacgcag 167160

aggtcacacg tgtagaatat ctaccaaatt atcatgccat tatgataagt acccttatat 167220

tcacaaatat gatggtgatg agcaacaata ttctattact gcagagggaa aatgctataa 167280

aggaataaaa tatgaaataa gtatgatcaa cgatgatact ctattgagaa aacatactct 167340

taaaattgga tctacttata tatttgatcg tcatggacat agtaatacat attattcaaa 167400

atatgatttt taaaaattta aaatatatta tcacttcagt gacagtagtc aaataacaaa 167460

caacaccatg agatatatta taattctcgc agttttgttc attaatagta tacacgctaa 167520

aataactagt tataagtttg aatccgtcaa ttttgattcc aaaattgaat ggactgggga 167580

tggtctatac aatatatccc ttaaaaatta tggcatcaag acgtggcaaa caatgtatac 167640

aaatgtacca gaaggaacat acgacatatc cgcatttcca aagaatgatt tcgtatcttt 167700

ctgggttaaa tttgaacaag gcgattataa agtggaagag tattgtacgg gactatgcgt 167760

cgaagtaaaa attggaccac cgactgtaac attgactgaa tacgacgacc atatcaattt 167820

gtacatcgag catccgtatg ctactagagg tagcaaaaag attcctattt acaaacgcgg 167880

tgacatgtgt gatatctact tgttgtatac ggctaacttc acattcggag attctaaaga 167940

accagtacca tatgatatcg atgactacga ttgcacgtct acaggttgca gcatagactt 168000

tgtcacaaca gaaaaagtgt gcgtgacagc acagggagcc acagaagggt ttctcgaaaa 168060

aattactcca tggagttcga aagtatgtct gacacctaaa aagagtgtat atacatgcgc 168120

aattagatcc aaagaagatg ttcccaattt caaggacaaa atggccagag ttatcaagag 168180

aaaatttaat aaacagtctc aatcttattt aactaaattt ctcggtagca catcaaatga 168240

tgttaccact tttcttagca tgcttaactt gactaaatat tcataactaa tttttattaa 168300

tgatacaaaa acgaaataaa actgcatatt atacactggt taacgccctt ataggctcta 168360

accattttca agatgaggtc cctgattata gtccttctgt tcccctctat catctactcc 168420

atgtctatta gacgatgtga gaagactgaa gaggaaacat ggggattgaa aatagggttg 168480

tgtataattg ccaaagattt ctatcccgaa agaactgatt gcagtgttca tctcccaact 168540

gcaagtgaag gattgataac tgaaggcaat ggattcaggg atatacgaaa caccgataaa 168600

ttataaaaaa agcaatgtgt ccgctgtttc cgttaataat actattttcg taactggcgg 168660

attattcata aataactcta atagcacgat cgtggttaac aatatggaaa aacttgacat 168720

ttataaagac aaacaatggt cgattataga aatgcctatg gctagggtat atcacggcat 168780

cgactcgaca tttggaatgt tatattttgc cggaggtcta tccgttaccg aacaatatgg 168840

taatttagag aaaaacaacg agatatcttg ttacaatcct agaacgaata agtggtttga 168900

tatttcatat actatttata agatatccat atcatcattg tgtaaactaa ataacgtctt 168960

ctatgtattt agtaaggaca ttggatatgt ggaaaagtat gatggtgcat ggaagttagt 169020

acatgatcgt ctccccgcta taaaggcatt atcaacttct ccttattgat tgaaaatgaa 169080

aatataaata gtttttatgt atagcagtat taccctatag ttttattgct tactactaac 169140

atggatacag atgttacaaa tgtagaagat atcataaatg aaatagatag agagaaagaa 169200

gaaatactaa aaaatgtaga aattgaaaat aataaaaaca ttaacaagaa tcatccaagt 169260

ggatatatta gagaagcact cgttattaat acaagtagta atagtgattc cattgataaa 169320

gaagttatag aatgtatcag tcacgatgta ggaatataga tcatatctac taatttttat 169380

aatcgataca aaacataaaa aacaactcgt tattacatag caggcatgga atccttcaag 169440

tattgttttg ataacgatgg caagaaatgg attatcggaa atactttata ttctggtaat 169500

tcaatactat ataaggtcag aaaaaatttc actagttcgt tctacaatta cgtaatgaaa 169560

atagatcaca aatcacacaa gccattgttg tctgaaatac gattctatat atctgtattg 169620

gatcctttga ctatcgacaa ctggacacgg gaacgtggta taaagtattt ggctattcca 169680

gatctgtatg gaattggaga aaccgatgat tatatgttct tcgttataaa gaattcggga 169740

agagtattcg ccccaaagga tactgaatca gtcttcgaag catgcgtcac tatgataaac 169800

acgttagagt ttatacactc tcgaggattt acccatggaa aaatagaacc gaggaatata 169860

ctgattagaa ataaacgtct ttcactaatt gactattcta gaactaacaa actatacaag 169920

agtggaaact cacatataga ttacaacgag gacatgataa cttcaggaaa tatcaattat 169980

atgtgtgtag acaatcatct tggagcaaca gtttcaaaac gaggagattt agaaatgttg 170040

ggatattgca tgatagaatg gttcggtggc aaacttccat ggaaaaacga aagtagtata 170100

aaagtaataa aacaaaaaaa agaatataaa aaatttatag ctactttctt tgaggactgt 170160

tttcctgaag gaaatgaacc tctggaatta gttagatata tagaattagt atacacgtta 170220

gattattctc aaactcctaa ttatgacaga ctacgtaaac tgtttataca agattgaaat 170280

tatattcttt ttttatagag tgtggtagtg ttacggatat ctaatattaa tattagacta 170340

tctctatcgc gctacacgac caatatcgat tactatggat atcttcaggg aaatcgcatc 170400

ttctatgaaa ggagagaatg tattcatttc tccagcgtca atctcgtcag tattgacaat 170460

actgtattat ggagctaatg gatccactgc tgaacagcta tcaaaatatg tagaaacgga 170520

ggagaacacg gataaggtta gcgctcagaa tatctcattc aaatccatga ataaagtata 170580

tgggcgatat tctgccgtgt ttaaagattc ctttttgaga aaaattggcg ataagtttca 170640

aactgttgac ttcactgatt gtcgcactat agatgcaatc aacaagtgtg tagatatctt 170700

tactgagggg aaaatcaatc cactattgga tgaaccattg tctcctgata cctgtctcct 170760

agcaattagt gccgtatact ttaaagcaaa atggttgatg ccattcgaaa aggaatttac 170820

cagtgattat cccttttacg tatctccgac ggaaatggta gatgtaagta tgatgtctat 170880

gtacggcaag gcatttaatc acgcatctgt aaaggaatca ttcggcaact tttcaatcat 170940

agaactgcca tatgttggag atactagtat gatggtcatt cttccagaca agattgatgg 171000

attagaatcc atagaacaaa atctaacaga tacaaatttt aagaaatggt gtaactctct 171060

ggaagctacg tttatcgatg ttcacattcc caagtttaag gtaacaggtt cgtataatct 171120

tgtggatact ctagtaaagt caggactgac agaggtgttc ggttcaactg gagattatag 171180

caatatgtgt aattcagatg tgagtgtcga cgctatgatt cacaaaacgt atatagatgt 171240

caatgaagag tatacagaag cagctgcagc aacttgtgca ctggtgtcag actgtgcatc 171300

aacaattaca aatgagttct gtgtagatca tccgttcatc tatgtgatta ggcatgttga 171360

tggaaaaatt cttttcgttg gtagatattg ctctccgaca actaattgtt aaccattttt 171420

tttaaaaaaa tagaaaaaac atgtggtatt agtgcaggtc gttgttcttc caattgcaat 171480

tggtaagatg acggccaact ttagtaccca cgtcttttca ccacagcact gtggatgtga 171540

cagactgacc agtattgatg acgtcagaca atgtttgact gaatatattt attggtcgtc 171600

ctatgcatac cgcaacaggc aatgcgctgg acagttgtat tccacactcc tctcttttag 171660

agatgatgcg gaatcagtgt tcatcgacat tcgcgagctg gtaaaaaata tgccgtggga 171720

tgatgtcaaa gattgtacag aaatcatccg ttgttatata ccggatgagc aaaaaaccat 171780

cagagagatt tcggccatca tcggactttg tgcatatgct gctacttact ggggaggtga 171840

agaccatccc actagtaaca gtctgaacgc attgtttgtg atgcttgaga tgctcaatta 171900

cgtggattat aacatcatat tccggcgtat gaattgatga gttgtacatc ttgacatttt 171960

ctttcttctc ttctcccttt cttctcttct cccttcctcc ctcttctccc tttcccagaa 172020

acaaactttt ttacccacta taaaataaaa tgagtatact acctattata tttcttccta 172080

tattttttta ttcttcattc gttcagactt ttaacgcgcc tgaatgtatc gacaaagggc 172140

aatattttgc atcattcatg gagttagaaa acgagccagt aatcttacca tgtcctcaaa 172200

taaatacgct atcatccgga tataatatat tagatatttt atgggaaaaa cgaggagcgg 172260

ataatgatag aattataccg atagataatg gtagcaatat gctaattctg aacccgacac 172320

aatcagactc tggtatttat atatgcatta ccacgaacga aacctactgt gacatgatgt 172380

cgttaaattt gacaatcgtg tctgtctcag aatcaaatat agatcttatc tcgtatccac 172440

aaatagtaaa tgagagatct actggcgaaa tggtatgtcc caatattaat gcatttattg 172500

ctagtaacgt aaacgcagat attatatgga gcggacatcg acgccttaga aataagagac 172560

ttaaacaacg gacacctgga attattacca tagaagatgt tagaaaaaat gatgctggtt 172620

attatacatg tgttttagaa tatatataca gaggtaaaac atataacgta accagaattg 172680

taaaattaga ggtacgggat aaaataatac cttctactat gcaattacca gatggcattg 172740

taacttcaat aggtagtaat ttgactattg cgtgtagagt atcgttgaga cctcccacaa 172800

cggatgcaga cgtcttttgg ataagtaatg gtatgtatta cgaagaagat gatggggacg 172860

gagacggtag aataagtgta gcaaataaaa tctatatgac cgataagaga cgtgttatta 172920

catcccggtt aaacattaat cctgtcaagg aagaagatgc tacaacgttt acgtgtatgg 172980

cgtttactat tcctagcatc agcaaaacag ttactgttag tataacgtga atgtatgttg 173040

ttacatttcc atgtcaattg agtttataag aatttttata cattatcttc caacaaacaa 173100

ttgacgaacg tattgctatg attaactccc acgatactat gcatattatt aatcattaac 173160

ttgcagacta tacctagtgc tattttgaca tactcatgtt cttgtgtaat tgcggtatct 173220

atattattaa agtacgtaaa tctagctata gttttattat ttaattttag ataatatacc 173280

gtctccttat ttttaaaaat tgccacatcc tttattaaat catgaatggg aatttctatg 173340

tcatcgttag tatattgtga acaacaagag cagatatcta taggaaaggg tggaatgcga 173400

tacattgatc tatgtagttt taaaacacac gcgaactttg aagaatttat ataaatcatt 173460

ccatcgatac atccttctat gttgacatgt atatatccag gaattctttt attaatgtca 173520

ggaaatgtat aaactaaaac attgcccgaa agcggtgcct ctatctgcgt tatatccgtt 173580

cttaacttac aaaatgtaac caataccttt gcatgacttg ttttgttcgg caacgttagt 173640

ttaaacttga cgaatggatt aattacaata gcatgatccg cgcatctatt aagttttttt 173700

actttaacgc ccttgtatgt ttttacagag actttatcta aatttctagt acttgtatgt 173760

gttataaata taacgggata tagaactgaa tcacctacct tagataccca attacatttt 173820

atcagatcca gataataaac aaattttgtc gccctaacta attctatatt gttatatatt 173880

ttacaattgg ttatgatatc atgtaataac ttggagtcta acgcgcatcg tcgtacgttt 173940

atacaattgt gatttagtgt agtatatcta cacatgtatt tttccgcact atagtattct 174000

ggactagtga taaaactatc gttatatctg tcttcaatga actcatcgag atattgctct 174060

ctgtcatatt catacacctg cataaacttt ctagacatct tacaatccgt gttattttag 174120

gatcatattt acatatttac gggtatatca aagatgttag attagttaat gggaatcgtc 174180

tataataatg aatattaaac aattatatga ggacttttac cacaaagcat cataaaaatg 174240

agtcgtcgtc tgatttatgt tttaaatatc aaccgcaaat caactcataa aatacaagag 174300

aatgaaatat atacatattt tagtcattgc aatatagacc atacttctac agaacttgat 174360

tttgtagtta aaaactatga tctaaacaga cgacaacatg taactgggta tactgcacta 174420

cactgctatt tgtataataa ttactttaca aacgatgtac tgaagatatt attaaatcat 174480

gacgtaaatg taacgatgaa aaccagtagc ggacgtatgc ctgtttatat attgcttact 174540

agatgttgca atatttcaca tgatgtagtg atagatatga tagacaaaga taaaaaccac 174600

ttattacata gagactattc caacctatta ctagagtata taaaatctcg ttacatgtta 174660

ttaaaggaag aggatatcga tgagaacata gtatccactt tattagataa gggaatcgat 174720

cctaacttta aacaagacgg atatacagcg ttacattatt attatttgtg tctcgcacac 174780

gtttataaac caggtgagtg tagaaaaccg ataacgataa aaaaggccaa gcgaattatt 174840

tctttgttta tacaacatgg agctaatcta aacgcgttag ataattgtgg taatacacca 174900

ttccatttgt atcttagtat tgaaatgtgt aataatattc atatgactaa aatgctgttg 174960

acttttaatc cgaatttcaa aatatgtaat aatcatggat taacgcctat actatgttat 175020

ataacttccg actacataca acacgatatt cttgttatgt taatacatca ctatgaaaca 175080

aatgttggag aaatgccgat agatgagcgt cgtatgatcg tattcgagtt tatcaaaaca 175140

tattctacac gtccggcaga ttcgataact tatttgatga ataggtttaa aaatataaat 175200

atttataccc gctatgaagg aaagacatta ttacacgtag catgtgaata taataataca 175260

cacgtaatag attatcttat acgtatcaac ggagatataa atgcgttaac cgacaataac 175320

aaacacgcta cacaactcat tatagataac aaagaaaatt ccccgtatac catcgattgt 175380

ttactgtata tacttagata tattgtagat aagaatgtga taagatcgtt ggtggatcaa 175440

cttccatctc tacctatctt cgatataaaa tcatttgaga aattcatatc ctactgtata 175500

cttttagatg acacatttta cgataggcac gttaagaatc gcgattctaa aacgtatcga 175560

tacgcatttt caaaatacat gtcgtttgat aaatacgatg gtataataac taaatgtcac 175620

gacgaaacaa tgttactcaa actgtccact gttctagaca ctacactata tgcagtttta 175680

agatgccata attcgaaaaa gttaagaaga tacctcaacg agttaaaaaa atataataac 175740

gataagtcct ttaaaatata ttctaatatt atgaatgaga gataccttaa tgtatattat 175800

aaagatatgt acgtgtcaaa ggtatatgat aaactatttc ctgttttcac agataaaaat 175860

tgtctactaa cattactacc ttcagaaatt atatacgaaa tattatacat gctgacaatt 175920

aacgatcttt ataatatatc gtatccacct accaaagtat agttgtattt ttctcatgcg 175980

atgtgtgtaa aaaaactgat attatataaa tattttagtg ccgtataata aagatgacga 176040

tgaaaatgat ggtacatata tatttcgtat cattattgtt attgctattc cacagttacg 176100

ccatagacat cgaaaatgaa atcacagaat tcttcaataa aatgagagat actctaccag 176160

ctaaagactc taaatggttg aatccagcat gtatgttcgg aggcacaatg aatgatatag 176220

ccgctctagg agagccattc agcgcaaagt gtcctcctat tgaagacagt cttttatcgc 176280

acagatataa agactatgtg gttaaatggg agaggctaga aaagaataga cggcgacagg 176340

tttctaataa acgtgttaaa catggtgatt tatggatagc caactataca tctaaattca 176400

gtaaccgtag gtatttgtgt accgtaacta caaagaatgg tgactgtgtt cagggtatag 176460

ttagatctca tattaaaaaa cctccttcat gcattccaaa aacatatgaa ctaggtactc 176520

atgataagta tggcatagac ttatactgtg gaattcttta cgcaaaacat tataataata 176580

taacttggta taaagataat aaggaaatta atatcgacga cattaagtat tcacaaacgg 176640

gaaagaaatt aattattcat aatccagagt tagaagatag tggaagatac aactgttacg 176700

ttcattacga cgacgttaga atcaagaatg atatcgtagt atcaagatgt aaaatactta 176760

cggttatacc gtcgcaagac cacaggttta aactaatact agatccaaaa atcaacgtaa 176820

cgataggaga acctgccaat ataacatgca ctgctgtgtc aacgtcatta ttgattgacg 176880

atgtactgat tgaatgggaa aatccatccg gatggcttat aggattcgat tttgatgtat 176940

actctgtttt aactagtaga ggcggtatta ccgaggcgac cttgtacttt gaaaatgtta 177000

ctgaagaata tataggtaat acatataaat gtcgtggaca caactattat tttgaaaaaa 177060

cccttacaac tacagtagta ttggagtaaa tacacaatgc atttttatat acattactga 177120

ataattatta ttattattta tatcgtattt gtgctataac gcgactatct aggtatttgt 177180

atctcactga tagagaacat ataaatatag actctattaa acagttgtgt aaaatatcaa 177240

atcctaatag atgtggatgt acggctttac atgagtactt ttataattat agatcagtca 177300

acggaaaata caagtataga tacaacggtt actatcaata ttatttatct agcgattatg 177360

aaaattataa tgaatattat tatgatgatt atgatagaac tggtatgaac agtgagagtg 177420

ataatatatc aatcaaaaca gaatatgaat tctatgatga aacacaagat caaagtacac 177480

aactagtagg ttacgacatt aaactcaaaa ccaatgagga tgattttatg gctatgatag 177540

atcagtgggt gtccatgatt atatagatga atcaattaat aaagtagtat atggaagaga 177600

gtctcacgta agatggcggg atatatggca agaacataat gatggcgtat acagtatagg 177660

aaaggagtgc atagataata tatacgaaga caaccatacc gtagacgaat tctacaagat 177720

agacagcgta tcagatgtag atgacgcgga acacatatct ccgataacta atgatgtatc 177780

tacacaaaca tgggaaaaga aatcagagtt agatagatac atggaaatgt atcctcgtca 177840

tagatatagt aagcattctg tctttaaggg attttctgac aaagttagaa aaaatgattt 177900

agacatgaat gtggtaaaag aattactttc taacggtgca tctctaacaa ttaaggatag 177960

cagtaataag gatccaataa ccgtttattt tcgaagaacg ataatgaatt tagaaatgat 178020

tgatattatt aacaaacata caactattga tgaacgaaag tatatagtac actcctatct 178080

aaaaaattat aaaaatttcg attatccatt tttcaggaag ttagttttga ctaataaaca 178140

ttgtctcaac aattattata atataagcga cagcaaatat ggaacaccgc tacatatatt 178200

ggcgtctaat aaaaaattaa taactcctaa ttacatgaag ttattagtgt ataacggaaa 178260

tgatataaac gcacgaggtg aagatacaca aatgcgaact ccattacaca aatatttgtg 178320

taaatttgta tatcataata ttgaatatgg tatccgatac tataatgaaa agattataga 178380

cgcatttata gagttaggag ccgatctaac tattccaaat aacgatggaa tgataccagt 178440

agtttactgt atacactcaa atgcagaata tggttataac aatattacta acataaagat 178500

aatacgtaaa ctacttaatc ttagtagacg tgcgtcacat aatctattta gagatcgagt 178560

catgcacgat tatataagta atacatatat tgatcttgag tgtttagata ttattagatc 178620

gttggatgga ttcgatatca atggttactt tgaaggacgt acaccacttc attgcgctat 178680

acaacataac ttcactcaga ttgctaagta cttattagat cgaggagctg atatagtcgt 178740

acccaacaca ttgattatac atcagtacat acagtaaata gcatagatat ggaggaggat 178800

acaaatattt caaataaagt tataaggtac aacactgtca ataatatatg gaagacatta 178860

cctaacttct ggactggaac tataaatcca ggcgtggtct cgcataaaga tgatatatat 178920

gttgtatgcg acatcaaaga tgaaaaaaat gttaagactt gtatatttag atataacacg 178980

aatacgtata acggatggga attggttacg acgacagaaa gcagattatc agctctgcat 179040

actattcttc atgacaatac cataatgatg ttacattgtt atgaatcgta tatgttacaa 179100

gatacattta atgtgtacac tcgcgaatgg aatcatatgt gtcatcaaca ttcgaatagt 179160

tatatcatgt acaatatact acccatctac taaatataat agaataaaat aaatgagtat 179220

gatcatttta gataacgatt gattttatca ttaccgcttc attcttatat tctttgctta 179280

cggaacctat atttagaaac atctactaac gattttttat gcttgcatta ttaatggtat 179340

gtaatatgat tgattgtgta cgcaatacca atttgttaag tatgaatacg gggtacaaac 179400

ataaactgaa atttaacatt atttatttat gatatatatc gttatcgtta ttgtttggtc 179460

tataccatgg atatctttaa agaactaatc ttaaaacacc ctgatgaaaa tgttttgatt 179520

tctccagttt ctattttatc tactttatct attctaaatc atggagcagc tggttctaca 179580

gctgaacaac tatcaaaata tatagagaat atgaatgaga atacacccga tgataagaag 179640

gatgacaata atgacatgga cgtagatatt ccgtattgtg cgacactagc taccgcaaat 179700

aaaatatacg gtagcgatag tatcgagttc cacgcctcct tcctacaaaa aataaaagac 179760

gattttcaaa ctgtaaactt taataatgct aaccaaacaa aggaactaat caacgaatgg 179820

gttaagacga tgacaaatgg taaaattaat tccttattga ctagtccgct atccattaat 179880

actcgtatga cagttgttag cgccgtccat tttaaagcaa tgtggaaata tccattttct 179940

aaacatctta catatacaga caagttttat atttctaaga atatagttac cagtgttgat 180000

atgatggtgg gtaccgagaa taacttgcaa tatgtacata ttaatgaatt attcggagga 180060

ttctctatta tcgatattcc atacgaggga aactctagta tggtaattat actaccggac 180120

gacatagaag gtatatataa catagaaaaa aatataacag atgaaaaatt taaaaaatgg 180180

tgtggtatgt tatctactaa aagtatagac ttgtatatgc caaagtttaa agtggaaatg 180240

acagaaccgt ataatctggt accgatttta gaaaatttag gacttactaa tatattcgga 180300

tattatgcag attttagcaa gatgtgtaat gaaactatca ctgtagaaaa atttctacat 180360

acgacgttta tagatgttaa tgaggagtat acagaagcat cggccgttac aggagtattt 180420

atgactaact tttcgatggt atatcgtacg aaggtctaca taaaccatcc attcatgtac 180480

atgattaaag acaacacagg acgtatactt tttataggga aatactgcta tccgcaataa 180540

atataaacaa atagactttt atcacgttta tctatgtcta aatattacaa atagtaatag 180600

tataaactaa agctgataat acttaaaaaa ataataatat catttacaat taatagtata 180660

aactaaaaat taaacaaatc gttattataa gtaatatcaa aatgatgata tacggattaa 180720

tagcgtgtct tatattcgtg acttcatcca tcgctagtcc actttatatt cccgttattc 180780

cacccattac ggaagataaa tcgttcaata gtgtagaggt attagtttcc ttgtttagag 180840

atgaccaaaa agactatacg gtaacttctc agttcaataa ctacactatc gataccaaag 180900

actggactat cggcgtacta tccacacctg atggtttgga tataccattg actaatataa 180960

cttattggtc acggtttact ataggtcgtg cattgttcaa atcagagtct gaggatattt 181020

tccaaaagaa aatgagtatt ctaggtgttt ctatagaatg taagaagtcg tcgacattac 181080

ttactttttt gaccgtgcgt aaaatgactc gagtatttaa taaatttcca gatatggctt 181140

attatcgagg agactgttta aaagccgttt atgtaacaat gacttataaa aatactaaaa 181200

ctggagagac tgattacacg tacctctcta atggggggtt gcctgcatac tatcgtaatg 181260

gggtcgatgg ttgattattg attagtatat tccttattca cacaaaaaga acatttttat 181320

aaacatgaaa ccactgtcta aatgtaatta tgatcttgat ttatagatga agatcagcct 181380

ttagaggatt ttaaccagta tgtttaatat gaaaaaaata aacataacat attttgagat 181440

taagcgctat tgtgcttaat tattttgctc tataaactga atatatagcc acaattattg 181500

acgggcttgt ttatgaccgg caatcatgaa tttacagaaa ttatctctgg ctatatatct 181560

tactgcgaca tgttcgtggt gttatgaaac atgcataaga aaaactgcgt tgtatcatga 181620

cattcaattg gagcatgtag aagacaataa agatagtgta gcgtcgctac cgtacaagta 181680

gtcaatcaaa gagaacgtag tagattgttg gctacattta attggacaga tatagctgag 181740

ggtgttagaa atgagttcat taaaatatgt gatatcaacg gaacatattt atataattat 181800

actattgctg ttagtataat tattgattcc acggaagaac taccaacagt tactccaatt 181860

acaacaacat atgaaccttc tacatataat tatactatcg atgatagcac tgttattact 181920

actgaagaac tacaagtgac tcctcatatg gatctccatc gatgatacat gtattaaaat 181980

actttccgaa taagtctttt aaatattgta ttaattatga aaaactatgc tatgcgagta 182040

tgatgcaaag atgtttaatg atacgatact agattttatc tctagcgaga gatgtcgtta 182100

gaatcattta tcataactac gtttaataat aattcatcaa cgaatatcga taacatgtgt 182160

catttatacg ttaaagtctg tccgtcttct ctattgttta gactgtttgt agaatgctgt 182220

gatataaaca aactagtaga aggtacgact ccgttacact gttatctaat gaatgaagga 182280

tttgaatcat ctgttttaaa aaacctatta aaggagtatg tcatgaatac gtttaatgtt 182340

catgacatcc attacacaaa tatttaactc atgatgaagt tgagaatgat atgctttctg 182400

atagtataga tagctttagc taatataaaa atatattaat ccactatata ttctagactt 182460

gatttaaaac cgataaacta ctactacgta ctgtataagt tgttaaaaaa aggagcagac 182520

cctaattatg tagatgatag aggtaatact tttcttcatt acttctgcat ctatatgtcc 182580

acttatgaga aaacgtcatt taataagatg catcgtgaaa agaaatttat taaagagttg 182640

gtaaaatatg aaaccgaaag taaataatat aggaaataca cctctacata actacgtatc 182700

tcaatatgat atcactctca ttcctcatcc acaacccatt aaaaaaatgg aaattaaagc 182760

cctctattag cataaacggc tacaggtcta cctttacaat ggcctctcct tgtgcccagt 182820

tcagaccctg tcattgccac gctactaagg actccctgaa taccgtggcc gacgtcagac 182880

attgtctgac tgaatacatc ctgtgggttt ctcatagatg gacccataga gaaagcgcag 182940

ggtctctcta caggcttctc atctctttca gaactgatgc aacggagctc tttggtggtg 183000

agttgaagga ttcacttccg tgggacaata tcgacaattg cgtggagatc attaaatgtt 183060

tcatcagaaa tgactccatg aaaaccgccg aagaacttcg tgcaatcatt ggactttgta 183120

ctcaatcagc tatcgtctct ggaagagtct tcaacgataa gtatatcgac atactactta 183180

tgctgcgaaa gattctgaac gagaacgact atctcaccct cttggatcat atccgcactg 183240

ctaaatacta aatctccttc atgctctctc actacacttt ttatcatctt atgaggaatg 183300

attgccttca tcatttttcg tgaaatagga ataattagca ccagaatagc tatggattgc 183360

acatgtattc tatgtcgtct actggatgaa gatgtgacgt acaaaaaaat aaaactagaa 183420

attgaaacgt gtcacaactt atcaaaacat atagatagac gaggaaacaa tgcgctacat 183480

tgttacgtct tcaataaatg cgatacagac attaagattg ttcgactgtt actctctcgc 183540

ggagtcgaga gactttgtag aaacaacgaa ggattaactc cgctaggagc atacagtaag 183600

catagatacg taaaatctca aattgtgcat ctactgatat ccagctattc gaattcctct 183660

aacgaactca agtcgaatat aaatgatttc gatctgtatt cgtatatgtc ttcggataat 183720

atcgacttac gtctgctaaa atacctaatt gtggataaac ggatacgtcc gtccaagaat 183780

acgaattatg caatcaatgg tctcggattg gtggatatat acgtaacgac gcctaatccg 183840

agaccagaag tattgctatg gcttcttaaa tcagaatgtt acagcaccgg ttacgtattt 183900

cgtacctgta tgtacgacag tgatatgtgt aagaactctc ttcattacta tatatcgtct 183960

catagagaat ctcaatctct atccaaggat gtaattaaat gtttgatcaa taacaatgtt 184020

tccatccatg gcagagacga aggaggatct ttacccatcc aatactactg gtcttgctca 184080

accatagata tagagattgt taaattatta ataaaggatg tggacacgtg tagagtatac 184140

gacgtcagcc ctatattaga ggcggattat ctaaacaagc gatttagagt aaccccatat 184200

aatgtagaca tggaaatcgt taatcttctt attgagagac gtcatactct tgtcgacgta 184260

atgcgtagta ttacttctta cgattccaga gactataacc actacatcat cgataacatt 184320

ctaaagagat ttagacaaca ggatgaatcc atcgtacaag ccatgttgat aaactactta 184380

cattacggcg atatggtcgt tcgatgcatg ttagataacg gacaacaact atcctctgca 184440

cgactacttt gttaataata atctcgtcga tgtaaacgtc gtaaggttta tcgtggaaaa 184500

taatggacac atggctgtaa atcacgtatc gaacaatggc cgtctatgta tgtacggtct 184560

gatattatcg agatttaata attgcgggta tcactgttat gaaaccatac taatagatgt 184620

atttgatata ctaagcaagt acatggataa tatagatatg atcgataatg agaataaaac 184680

tctactatat tacgcggtcg atgtcaataa tatacaattt gcaaagcggt tattggaata 184740

tggagcgagt gttacaacat cacgctcgat aatcaatacg gccatccaga aaagtagtta 184800

cagaagagaa aacaaaacga ggatagttga tttattactt agctaccatc ccactctaga 184860

gactatgatt gacgcattta atagagatat acgctatcta tatcctgaac cattattcgc 184920

ctgtatcaga tacgccttaa tcctagatga tgattttcct tctaaagtaa gtatgatatc 184980

tccggtcgtc ataaggaact aaagcgctat agagtagaca ttaatagaat gaagaatgcc 185040

tacatatcag gcgtctccat gtttgatata ttatttaaac gaagcaaacg ccacagattg 185100

agatacgcaa agaatccgac atcaaatggt acaaaaaaga actaacgtcc atcattacag 185160

aaactgtaaa gaacaatgag aggatcgact ccatagtgga caacattaat acagacgata 185220

acttgatttc gaaattaccc atggagatac tttattactc cattaaataa tttatcatgg 185280

agcgataatg tcctgtttca tttgtttcca tgacatatta caaaatcgat tccgtccaag 185340

atgataaaaa catttaccgg catcataaac acggagttta ttttatatgt ctcgcataaa 185400

cattactaaa aaaatatatt gttctgtttt tctttcacat ctttaattat gaaaaagtaa 185460

atcattatga gatggacgag attgtacgca tcgttcgcga cagtatgtgg tacataccta 185520

acgtatttat ggacgacggt aagaatgaag gtcacgtttc tgtcaacaat gtttgtcata 185580

tgtattttac gttctttgat gtggatacat cgtctcatct gtttaagcta gttattaaac 185640

actgcgatct gaataaacga ggtaactctc cattacattg ctatacgatg aatacacgat 185700

ttaatccatc tgtattaaag atattgttac accacggcat gcgtaacttt gatagcaagg 185760

atgaaaaagg acatattcct ctacaccact atctgattca ttcactatca atcgataaca 185820

agatctttga tatactaacg gacaccattg atgactttag taaatcatcc gatctattgc 185880

tgtgttatct tagatataaa ttcaatggga gcttaaacta ttacgttctg tacaaaggat 185940

ccgaccctaa ttgcgtcgac gaggatggac tcacttctct tcattactac tgtaaacaca 186000

tatccacgtt ctacaaaagc aattattaca agttaagtca cactaagatg cgagccgaga 186060

agcgattcat ctacgcgata atagattatg gagcaaacat taacgcggtt acacacttac 186120

cttcaacagt ataccaaaca tagtcctcgt gtggtgtatg ctcttttatc tcgaggagcc 186180

gatacgagga tacgtaataa tcttgattgt acacccatca tggaacgatt gtgcaacagg 186240

tcatattctc ataatgttac tcaattggca cgaacaaaag gaagaaggac aacatctact 186300

ttatctattc ataaaacata atcaaggata cactctcaat atactacggt atctactaga 186360

taggttcgac attcagaaag acgaatacta taataccgcc tttcaaaatt gtaacaacaa 186420

tgttgcctca tacatcggat acgacatcaa ccttccgact aaagacggta ttcgacttgg 186480

tgtttgaaaa cagaaacatc atatacaagg cggatgttgt gaatgacatc atccaccaca 186540

gactgaaagt atctctacct atgattaaat cgttgttcta caagatgtct ctccctacga 186600

cgattactac gtaaaaaaga tactagccta ctgcctatta agggacgagt cattcgcgga 186660

actacatagt aaattctgtt taaacgagga ctataaaagt gtatttatga aaaatatatc 186720

attcgataag atagattcca tcatcgtgac ataagtcgcc ttaaagagat tcgaatctcc 186780

gacaccgacc tgtatacggt atcacagcta tcttaaagcc atacattcag acagtcacat 186840

ttcatttccc atgtacgacg atctcaaacc cgtacccaga aataccttta actatatcga 186900

tgtggaaatt aatctgtatc ccgtcaacga cacatcgtgt actcggacga ccactaccgg 186960

tctcagcgaa tccatctcaa cgtcggaact aactattact atgaatcata aagactgtaa 187020

tcccgtcttt cgtgatggat acttctccgt tcttaataag gtagcaactt caggattctt 187080

tacaggagaa aggtgtgcac tctgaatttc gagattaaat gcaataacaa agattcttcc 187140

tccaaacagt taacgaaagc aaagaatgat actatcatgc cgcattcgga gacagtaact 187200

ctagcgtcga catctatata ctatatagta ataccaatac tcaagactac gaaactgata 187260

caatctctta tcatgtgggt aatgtagcca tatgcccggt agttgcgata tacataaact 187320

gatcactaat tccaaaccca cccgcttttt atagtaagtt tttcacccat aaatacaata 187380

attaatttct cgtaaaagta gaaaatatat tctaatttat tgcacggtaa ggaagtagaa 187440

tcataaagaa cagtactcaa tcaatagcaa tcatgaaaca atatatcgta ctggcatgca 187500

tgtgcctgcc agtcttcagc aatcatcctc atcgtgtacg gaagaagaaa acaaacatca 187560

tatgggaatc gatgttatta tcaaagtcac aaagcaagac caaacaccga ccgatgataa 187620

gatttgccaa tccgtaacgg aaattacaga gtccgagtca gatccagatc ccgaggtgga 187680

atcagtcgag gatgtagatc ctcctaccac ttattactcc atcatcggtg gaggtctgag 187740

aatgaacttt ggattcacca aatgtcctca gattaaatcc atctcagaat ccgctgatgg 187800

aaagactgtg aggtgtctat cgacatcaga tgtagcgaag aagagaaaga cagcgacatc 187860

aagacccatc cagtactcgg gtctaacatc tctcataaga aagtgagtta cgaagatatc 187920

atcggttcaa cgatcgtcga tacaaaatgt gtcaagaatc tagagtttag cgttcgtatc 187980

ggagacatgt gcaaggaatc atctgaactt gaggtcaagt atgtcgacgg atcggcatct 188040

gaaggtgcaa ccgatgatac ttcactcatc gattcaacaa aactcaaagc gtgtgtctga 188100

atcgataact ctattcatct gaaattggat gagtagggtt aatcgaacga ttcaggcaca 188160

ccacgaatta aaaaagtgta ccggacacta tattccggtt tgcaaaacaa aaagttacct 188220

ctcgcgactt cttctttttc tgtctcaata gtgtgatacg attatgacac tattcctatt 188280

cctatttcct ttcagggtat cacaaaaata ttaaacctct ttctgatggt ctcataaaaa 188340

aagttttaca aaaatatttt tttattctct ttctctcttt gatggtctca taaaaaaagt 188400

tttacaaaaa tatttttatt ctctttctct ctttgatggt ctcataaaaa aagttttaca 188460

aaaatatttt tattctcttt ctctctttga tggtctcata aaaaaagttt tacaaaaata 188520

tttttattct ctttctctct ttgatggtct cataaaaaaa gttttacaaa aatattttta 188580

ttctctttct ctctttgatg gtctcataaa aaaagtttta caaaaatatt tttattctct 188640

ttctctcttt gatggtctca taaaaaatat taaacctctt tctgatggtg tcactaaaat 188700

atttttattc tcattctcat tttctctttc tctcttcaat ggagtcataa aatattttta 188760

ttctctttct ctcttcgatg gtctcacaaa aatattaaac ctctttctga tggtgtcact 188820

aaaatatttt tattctcatt ctcattttct ctttctctct tcaatggagt cataaaatat 188880

ttttattctc tttctctctt cgatggtctc acaaaaatat taaacctctt tctgatggag 188940

tcgtaaaaaa gttttatctc tttctctctt cgatggtctc actaaaatat tttttattct 189000

ctttctgatg catcaactat ttcttaaaca ataacgtcca acaacatata ctcgtcgagc 189060

ttatcaacat cccctatgcc catctaggtt accagacaat tgtatatcat aaaataatgt 189120

ttataattta cacgttaaaa tcatataata aaacgtagat cgtataatat tttttggtat 189180

ataaatgatc tagtaaaatc catgtagggg atactgctca cattttttct ttggtacaaa 189240

atttcacaca agtttttata cagacaaatt cttgtccata tattttaaaa cattgacttt 189300

tgtactaaga aaaatatcta gactaactat ctctttctct ttctctcttc gatggtctca 189360

caaaaatatt aaacctcttt ctgatggagt cgtaaaaaag ttttatctct ttctc 189415

<210> 2

<211> 138203

<212> ДНК

<213> Искуственная последовательность

<220>

<223> Синтетический полинуклеотид

<400> 2

ccggcgaagc cgcggatccg ctgttccggc gaaggcagga cagacatttt ttccagccca 60

taaattaaaa agaatcaaca gaaaattatc atgatgataa aaacttttag gattgtattt 120

agttgaacgt ttcgtcaata aatcaacctc aaattttttc acatgtaatt tcttgttctt 180

tttaatttat gggctggaaa aaatgtctgt cctgccttcg ccggaacagc ggatccgcgg 240

cttcgccggg gcggcggccg gctcccgcgg cggctgagcc gcgctgccgc gagaacgcgg 300

accaggagtt cctgcgggag gagctacggc agaggctgga actgctgaat gctttcgagg 360

acgggcgtcc gcgggaacgc gactccgcgg aggcggcacc ccgcagccgc gagacctcgc 420

tctggagtca gggagtcagg gagtcgggag tcagggagtc gggagtcagg gagtcgggag 480

tcagggagtc gggagtcagg gagtcgggag tcagggagtc gggagtcagg gagtcgggag 540

tcagggagtc gggagtcagg gagtcgggag tcagggagtc gggagtcagg gagtcgggag 600

tcagggagtc gggagtcagg gagtcgggag tcagggagtc gggagtcagg gagtcgggag 660

tcagggagtc gggagtcagg gagtcgggag tcagggaaac agaagtcaag tagtcgggta 720

gacaggagtc aggtggtcgg gtgaccgcgc cgtccgagtc ccgcaaaaag tttttagact 780

ctgagagagg ccgacctgcc tccaacggtt ccgcggaaaa gtttttataa aaagttttcg 840

ggagaggccg actgccttcc aacggttcct cctctcgcgt gccgcgggcg gccgctctcc 900

cgcgacggtc ccgccaacgc gtttacaaag ttttaaaagt tttcgagaga ggccgacctg 960

tcttccaacg gttgcgcgaa aaggttctgc ggaggtttgg aagagccgcc cgccctccga 1020

catcctccga aaagttttcg caaaaagttt ttaaaggttt cgcgaggagt tttcgaggga 1080

ggcgacctgc ctccgaggtt ccgcgtaaac gtttttacaa agcgtcggag gtgggggcga 1140

cctgcccttc ctctcctccg aaaagctctt gagagtgtgg gagaggcggc cggccttcgc 1200

ggtcgcgcga aaaggttctg cgggagttcg cgggagctga cccgccctcc gcgcccctcc 1260

gaaaagtttt tgcacgaagt cttttggcgt tctcgagagg acgcctaccc cgacggtaac 1320

gcggaacgtc tcgggaggtc ggcctctccg ctcccgcggt cgcgggcggc ggcccgtctc 1380

cggaggttcc gcgaaaagtt ttataaaaag ttttgaggga ggtaccgacc tcctaaagtt 1440

ttacagagag ttctcgcaaa agttttggga ggtcgacctg acctcctaaa gttatcgaag 1500

agttctcgcg aagagttctc gcaaagagtt tgagaggccg acctgcctcc aacggttccg 1560

cggaaaagtt ttataagagt tttgagagag gtcgacctac cttccaacgg ttccgcggaa 1620

aagttttata agagttttga gagaggtcga cctactctcc gaggttccgc ggaaagtttt 1680

ataaaaagtt tttacaaagt ttttgaggga ggtcgacacc ctccggatcc tccgcctcgc 1740

gtgccgcggg cggcctccaa gagttttacg gaacgttctg gagaggagag gccgacctcc 1800

caaagatttt gcggaacgtt ttggagagga ggactggcct cgaaaagatt ttacaaagag 1860

tttggaggga ggactggcct ccaacggttc cgcgaaaaag ttttgcaaga gtttggagag 1920

aggtcgacca ccctccgagg ttccgcgaaa gtgtttgcgg agagtccgag agaggcagac 1980

actgcctgcg aaaagttttc gcggacggtt gagcgggtca ccgacctccg acagtttaca 2040

aacgttttac ggagagttag agaggcagca gaccgacctc cgaacagttt agttttacaa 2100

agttttggag ggtgaactgt catcgggaaa gttttacgaa gagttttggg agaggccgac 2160

ggttagccga gcgagcgcgc gagcgagttt acgttctctc gctcgtgtgc gcgttaactc 2220

gcactggttc cctctctaac tcggagtggg cgagcgagtg gttgactcgt cctccgctct 2280

cactctgagt ggtgataact gttaaccatt aactcgtcct ccactctctc actctctcac 2340

tctgagtgag gattgacttg ttaactcgtc ctccactctc tcgctctctc gctctgagtg 2400

agtgaggatt aactgttcaa ctcgtcaact cgtcctctgc ctctcatcca agactgagtg 2460

ggtagttgac tgctcttgtt ctcttactcc gaggggtgat tgagttagca acagctactc 2520

gttctcttgt tctctcacac cgagtgagcg agtgagcaac gttacttgtt ctctcacacc 2580

gagtgagcga gtgagcaacg gttaactcgt tctctcgttc tctcgttcta ttattccgag 2640

gagtggcgag tgaggtaacg gttactgtta cttgttctct gttcccttcc tcggtgagcg 2700

gtgcgtcaac ttgttctcgt gagtgagtac ggtcacttgt tctctcgttc tctacctcga 2760

ggagtgagtc aacttgttct cgtgagtgag ttgaccgtaa ccgttccctt acctcaagtg 2820

agtggcggtc gcttgttctc gtgagtgggt taaccgcgtt cccttaccgg agtgagcggg 2880

cgggcgataa aaataatcaa ttgactgatt cgctcgtgag cgagcgaagg gcggcggaca 2940

agggcgcggg atgctggtct aatctactaa ggccgattac aaaaacggat gggagaccgg 3000

gagggagagg gtcacagctc cgagcggtgc atccgcgcca gctggcggcg ccactcggcc 3060

gcgggccgcg cggccgccca ggccgcgttg tagccgcccg ccaccgcgac gcaggtcagc 3120

tcgaactccg gcccgagcgc gcgcacgtcg tagatgtgca cggtcgcgac gttcagcagc 3180

agcgcgccct tgcgcagcga ggcgaaggtc gcgtgcatgc cggcggcgag cgggtacacc 3240

ggcgagagcg tcccgccgcc gtgcgcgacc accgccatgt gccgcccgtc gccgccgacg 3300

gtcaggcagg tcaccgaggc ggagccgttc gcgcggacgg ggcccgcctc cacgagggcg 3360

gccggcagcg gcggcgccgc ggggcggaag agcccgccga ggaggaagcc cagcgccacc 3420

agcgcgagcg cgccgagcag cctgcgcggc gaggggtgca tgcttgttgg ctgcggtgtt 3480

ggcgtctggc gggtggaagg cgggtgtggg gtgtccgcgg ctgcggcggg agggtctcga 3540

ctgctaggcg gtcctttttc actttgctcc gtggcgcctg gtccggggca agggctgcgg 3600

cgggcgcccg ggcgggcggg ccgctacccc gccgcgcggc ccgcggccgc cagcgccgcg 3660

gccagccgcc gccaccgcgg gcccgccgcg cgcagcagcc ccgccgccga gcgccccgcg 3720

ccgccgcggg cgcgcgccga ggccgcggcc ccgcgccgcg ccagcagcag cggcagccgc 3780

gcgtccagcg ggccgccgcg gcgcagcgcc gcgcgcagca gcgccgccag cggcagccgc 3840

cccgccgcgt ccgggcccgc cgcgcgcgcg cccgccgcca gcagcgcgcg caccagcgcc 3900

ggcgaggggc gccgcgcgcg gaccaggtgc tccacgagca gggtggtgag caaggattct 3960

cgagaagtag gagtcatgtg tgacgacaag gagagacgtt atattaggcg cgtcctactt 4020

cactttgaag atggtgtaaa gtgttaaaac ttgaacaccg ttcactccac cactgccgtt 4080

accgtgtcct gccccaaaag caaccacagt gctttttcca ccacctgttc caaatccgtt 4140

ccaaaagctc ccatccattg ttgttagaac tttcagatgt ttctctaggt tgtttagttc 4200

cactgcaagt ttcgaccatt atcgttactg gacatgctgt tggtaatgag tttaataacc 4260

aatcataaaa atagttataa tttgttataa agctaataaa gtagcaaaca ctttaatgtt 4320

atattttgcc taaccctccg ttaacaccac cattaacacc accacttaag cttttactac 4380

caccactacc acctccaaca cacattcttt tctctaaagg tccccaaatt ccacctcctg 4440

aacttggacg ttttacagca cctccgggtg tacttgcgta ccctttagaa gttccactgt 4500

gactgtagat atgatactgt ccttctccag gcatgattaa agtgtgttgt aattagtgtt 4560

atctacgcaa ctgtgcgaga ctctcgaata aaaagaagct acattttaca attttgatta 4620

gctgatgtac cacgctgtat cgcggccacc acaagcaccc gatccagtag aaccaaatcc 4680

agagtcgccg cggtcagtgt tgtccaagca gttaacctct tgaactgctg ggcacgatat 4740

gcgttcgcat attagctgag ctatcctgtc tcccttctta acctcaaagt cactgtttcc 4800

aaagttaaac agcaccactc cgacgttgcc tcggtagtct tcgtcgatca cgccagcgcc 4860

cacgtcgata aagtgtttga ctgcaaggcc agaacgtggt gctatgcgtc cgtagcaacc 4920

agaagggggc tttatcagaa ggtcagtaaa tactacgcga ctgcaatgcg aagggatgac 4980

acagtcgtat gcactacata ggtctaatcc tgcggcacca ggagatcctc tggctggtat 5040

agtggcgttt tggctgaggc gaacaacctg aagagtttcc gtgtggcaga actccatggc 5100

tagggtggcg agcggccgat cgactacggg gtgtacaatt tacactttct ccagaaaaat 5160

caggggcggg tcagcatggc gcggcgcaag tccagcagcg agtcgtacga caggaagcac 5220

aggatggagg tcacgatctc cggcggcagg gcgcacgggc acatgaggcc ggcgatctgc 5280

tcggccagcg agacgcgcag ccgcatcatg cagatcttgc cgaagagcgc cgtcccgtag 5340

atggggaact cggccgcgcg ctccaaaaag gcgttctgca cgaagagcgc cttcgcgtcg 5400

tccgacgcgc gcagcacgtc caacagcgtc gcgtccgtgt ggcagcgcac cgcgcgcatg 5460

cttgcgatct cctgctcgca cgcgcggatc acggtcgcgt agtccgccag cgcgcgctcc 5520

gccagcatgc gcgcgccctc gccgcgcagc gccagctcct gcacgcacag cagcgcggcc 5580

tccgagcgtc ggaacacgtg gccccattgc tcggatgtga tcagcgcgcg cgcgagcagc 5640

tccgtcggcg gccggcgcgc gagcacggcc gccgtcgcgc gcacgttgtt gcggcgcagc 5700

atctccgaaa ccgcgcatag gcccgaggcc gacatgtgct cgagctccgc gcccatgcgc 5760

accagccggc agcaggcgcc gtggctgaac accgccgcgc ggtgcagcgc ggtctgcagg 5820

ttgttgttgc gcaggttcag gtccagcccg cgctcgagca cgaagtccac gacgccgcgc 5880

tcgcagctcc cgtaggtcgc catgtagtgc agcatggtgt tcccacacgc gtctacggcg 5940

gccgggtcca cgcctaggcc cgtgagcgtg cgcaccatgc cctcggagat cttggccgtg 6000

cgcgcgaggt ggtgcagcgt tgtgcgcccg tacgcgtcca cgacgcacgc gtccgcgccc 6060

gcgcgcagca tcatgtccac gagcgcggcg gagacgccgc cggagcacag cagcgccgcc 6120

agcggcgtca agccgttgca gtcgcaggcg tttgggttcg cgccgcgctc gagcagcagc 6180

cgcagcacgt cctcgcggat ccactggttc ttggcgtaca cgtgcagcgg cgttacgccg 6240

taggtgttgc cctcgttcac gcgcgcgccc gcgtccagca gcagccgcgc gacctcgagc 6300

tcggcgccgt cggggccgca gaaagccagg aaggaggaga gcacgctgtc gcagacaacg 6360

acgctggcgt cgcagaccac gtccgcgccc gcctccagca tgagcgcgac cacctccggc 6420

cgcacgccgt cgtactgcac gtaggcgtgc agcggcgtgc ggccgcagga gtccttggct 6480

ttcacgtccg caccggcctc cagcagcacg cgcacgatct ccgcgcactg ctcgtgccgc 6540

gcgaagtgca cgcagaggtg cagcggcgtg cgcccgtgct cgccgcggaa gttcacgtct 6600

gcgtcggtgg ctacgagcgc gcggaccgtt tcgaggtcca cctgcccgga ctccaggtag 6660

cggaagagca ggtccgcgtg cgggaccacg acggactccc gcgagagcat ggcggcgttt 6720

acaaatattg aaatcttttt tcactcatct ttatgggcgc tgaacgcgca ataagggtga 6780

gagtaaaaaa cttctacaaa aagcgtacaa aaggtacaaa aggtaaaaaa ggcggggcgg 6840

ggacgggctg gggtgctgcg agctgaattg gcctctacac agggacgccc tcgccggagc 6900

cggtgagccg gtagccggcg ccggcgatca tggtcaagcg ctgcacgagc tcgttgcgct 6960

tgacgccggc ctctgaaacg cacaccatgt ggtggatgta ccgctcgatg cactcgcagc 7020

gcgggagagt ggagtcaaga tcggatgcga gttgcagaat gtcatcccag agctcggaga 7080

acttgctgta cagttctcgg aggtctctct ccattcgagc cgtaagagag tcaggatgcg 7140

gtgttccttc gggagtctga gcgaacaccg cgaacaggct ggttatgccg tgttctagaa 7200

tagagtggtt ccgcgttaat gccgcagaca agggtcgtcg tccgcgcaac gactggcggc 7260

agagcgctgt ttgtgccgca ccgcccattc ctctggcgat cgcatccacc gacgcagtga 7320

tcatctgcgc gccgacgtca ttgtagcgcg cgttaaactc agtaatcatg attacgagat 7380

tgcagatttc atagtagcac ttttccaagt cgacgcgcag tttcacgatc tggttgacaa 7440

tcttgcacgc ctttcgccgc gtctccgcca cgttggcgac tcggacttgc gcttcctggt 7500

cgatggacgg cggaaacact tcaaacccaa ggtcgcacag ttcagcggtg gggactagcg 7560

tcacgatgat gtactccgca tcgccaccca cttgcggcag gaagaacacc gaccgcgcgg 7620

cgggaacgac cagaacgtcg ccttcctgca tgttggtttt tagaaactta gtgttgttca 7680

cggagatgcc ggccatgccc tcgtttttga cacatattat ggtgacgtac gcggcgaccg 7740

tgggggccat gtggtggcgc atgtaccact cgtcgtgctt gagtttcaga ccgtgagatt 7800

cgccaacctc gaagtgcatg ttggcgtctc tgacgtagcg cgagaactcg ctgcgacaga 7860

ttcgcgcggg cgcccggtgg aacgtcgact cgaagagact gatggctgtc cattcgccca 7920

catgagtgac caccgaagaa gtgttttcga tccgagtctc gaacaccgag tccacgagca 7980

ccggacagtt ggttccgggc accgtcagca ccaagggccg cgcctccacg ggggcgacgg 8040

acgaagccac ggagtcggtg tccccgtacc cgtagtcgtc gtcggagtcg ccgcctccgt 8100

cggccccgtc gcgcggcctc cgcagcggca tgcagccggc ggtgggaacg cactggtttc 8160

ggccacggcc gaagcggcca aacagtctcg ccagggctga catccttgga cggccacacc 8220

aaaaccaaaa aaacatattt tatcagttat ttgtcgattt tcaccggctc accgagggca 8280

ggacctcctg gatcccggac acccccgcca ggcagcgggc cgcgcgctcg cgcacccaaa 8340

agcggtcgta gccgtgccgg agcacgaagg ccgccgtggc gtggcagtcc acgcgctcga 8400

tgaagccgtg gacggcgcgg cgcgcgtagc tcgccgcgaa ggcgcggacc accgccgagc 8460

agcgccccga gggcgagtcg tccgtctcca gcgccagcgg catgctcgcg atgcgcgaca 8520

tcaggttgga ggtctgcggg atgttgagct cgcgcgtggc ggtcatctgc gcctcgagcc 8580

cggccttgag cacctcgtcg cagcggcccc actccagcgc gcagaccacg cggatctcgt 8640

accccttgag ccgcagcgcg gtctcgatgt ccacggaggt gagcaccgcg ctgaagcgca 8700

ggcgctcttc gtccgcgggg tcgaagagca cggggatctt aacctccgcg ctgcgcgtga 8760

cctcgcagag cgcgatcgcg agcagcccgc gcgtgagctt gctcaccatg cgcggcttgc 8820

ccacggggta cagctggctc gcgacctcgc gcagcgggta cgccagtcgg aagcagcgcg 8880

cgtccgcggg caccgggctc gcgcccgtct cctcgaggaa gagcgcggcc tcaaccatgt 8940

tcagcgcgga gaagtgcacc gggcaggcgg cgcagccgcg cgcggcgttc gcgagcacca 9000

tctcgcgcag cccgcggaag gccgccatgt cgcaggaggg gaagatgcgc gcgagcgcgg 9060

cctggtgcgc gagcgccgcg tccgagagcg cctgcgcggc cgcggcggcg gcctcctcgg 9120

cggcggccgc gctctcgtcc gcggagacca cgtcttcggg cacgtccacg cagacgccgc 9180

cccagaactc gcagtactcg gagaagagcg tcgcgggcgc aaagcgcgcg aggtccacga 9240

aggcgacgcg gttgccgagc ctggagagca gcgtgttctc cgagatgcgc gtccagccct 9300

tgccggcgag ctccatgacc tgccgcgtgt cgaagaggga gctgtagaag ccgtacacgg 9360

tgatgttttc cttgcacgtc gtcagccaca tgaggaagtc gcgcaccacc agcttcgcgc 9420

agtctccgga gaacacgggg ccggcgttcg tcgcgatgga gttcaggcgc acggtgccgt 9480

cactgccgaa gcggtacacg aaccaggcgg ccacgctgtt gccagagggc gtgtgaacgt 9540

gtggctgcgc ccaggagtcg gcgctcgcgg cggtgcgcac gtcgtgcgag agcacctcgg 9600

tgtcggggcg cgagtaggtg ctggggtctt tgatccagat ggcgtagctg cccacgcagc 9660

acacgttcat gaggtcgagc agcgtctgcc ggcgcagcgg cgtgccgagc cggcgcacgg 9720

cgtcgtgcga gaccatgcgc aggtcgtaga ggcccacgtc cgagagccac tggttgagct 9780

cgtccatgga cagggcgtcg cgggggggcg ggctgtcttc gaaggcggcg cggagctcgg 9840

gctccgtctc cgcgcgctgc cgcaggatgt ccaggaaggg gctggaggag tcggggatgt 9900

agcagtcggg gtcgtgcctg gacactatag cgaaccgctg cgtcgcgggc ggcggggcta 9960

gcgcgtcggc gcgtgcgtcg atgaaggtgc acgatatacg cacggacttg agcgagggga 10020

ggacgactgc ggcggcgcgc gcgccctccg cgtcgaagat catcgtcttt ccgtccctcg 10080

cctttgcgag cgcgtattct ccaggcacga ggtccgtcgg cggcggctcg tcccaggcct 10140

gccggtcagg gacgccgccg cacacctttc cccagaaccc cagcatcctc caaaatacct 10200

ataaggacgg ccaatagcgg ggcttgcggg cgttcggacc ttccgcgctt taattttaat 10260

ttattggctt gcagaactcc gagcgccagt cccgctcgaa gaccgcggac aggtccttga 10320

cgatgtcgcc cttctcggcg ttcacgctca cgaaggcgtg gtagcggtag tgcgtgccgt 10380

cgaggttggc gaccgtgagg tgcgcgaagg tgtcgtccac gatgagcagc ttagtgttgt 10440

tcgcggcgtc gtcccggccg ggtaccacga acttgcgcac ggacatgtcc acgctgccga 10500

cgccaaagtc gtcgaggctg cgcgcggccg agaccgaaag cgggtccgcg ttcttccact 10560

cggtaatgat cacgcgcacg cgcacgccgc ggttgatggc cgcgcgcagc agcgcgtcaa 10620

tgatctgcgg ccagtactcc acggcgctgg cgtgcttgat caccggcacc atcgagagca 10680

gcgagaggtc gatgctgttc ttggcgttct cgatgcggtg cagcacgagg tcctcgtcga 10740

gcgtgcggta gaagcctagg aagcgctccg gcgagtccga gaagaatacg ccgcccccgg 10800

agtggtcgag gtggaagttc gtggccgtgg gcgtgacgat ggcgcagcag agccgcgtga 10860

acggcacctt cggctccacg atcatggagt agaaggtgtt gtagcggttc atgaggtccc 10920

aggccaggtg cttgttggtg gagtagagcc cgaggttctt gatggtggac acggacccgc 10980

ccgtgagcga ggcgcttccc acgtaccagt gcccggcgtc cgagagccag aagctgccga 11040

gaaggttgcc gacgccctcc ttggtggaca ccttgacctt gtagtagttg acgcccgcct 11100

cgcgcagctc gtccgcgtcc ttgtccttgc tctgcacgtc cacgagcagc gtgacgtcta 11160

cgccctcctt ggcgagcgtg cagagcttgt ccttgacgtc gacgccctcc ttggtggagc 11220

tcaggttgca gcagaagctg cagatgtaca agaacttctt cgcggactcg gcgatagcgg 11280

tgaagcagtc gagggtgctc atgttgccct gcgccaaaga cgccacctct gcgggcagcg 11340

tctccacgac gcggcagtcg gcgcccaggg ggatggagga gaacggccac atttatttat 11400

ctcacaaaaa taatagggct tcagggaaag tcttttagca ggcgggcgag ttcttcgagt 11460

tcgcttagga gttcttccat ttcttcggaa gtcagcaact ggagctcgga cttgatttga 11520

atatcttcga ggaaaccgtc tagcatgttc gccatgtctt ccggggagca ctgcgccaca 11580

tcttcgggga caggatcggg tgtgggcatt aggtctccgc ttacttgaac gtcgtccatc 11640

atcctgtcga tgaggtcttc gacttctaga cggggtccgt agatcagcat atttggtgat 11700

ggaggtagtt taaggtgcga gagttagtgt tatacgaccg ccaacgtgtg tttatcgcgc 11760

gtacattttc aataattaac aaactcccct tcctgcgcct gctcgagaag cagctcgtcc 11820

agctcctcct gtcggcgcgc ggccacgcgt ctttccgcga agagtaccat cagctccagc 11880

cccacgccgc acagacccag gacgccgaac accaccgccg ccgagatcga cagacccagc 11940

agcaccgaca tcctcacgcg ggcatccggc tatttaatcg ttctggaaac gtattaatat 12000

gggcgtcgtc atgtgcgggt gtctgtttgt gtgggcgggc tggatcgcgc gccgcgtgcg 12060

cggcctctgc gcggcgctgc gccagagggt gtcgcgcgac aagggctacg tggccgtcat 12120

ccagacctgc gacgacgact acttcacaga ggaggagttc gacgacggca agcaggtggt 12180

cgcgctcctg cgcgacgtct cgcgcgtggt tgccgcgccc gcgggcgtga cggaataagt 12240

taggataagg agtcgagggg agaaaaacag cggtcacact ataaactcgc gcgaggccga 12300

ttttgacgtg ctcatgtctg gaagctccgc tttctgcagc gcggagcggc acacgaagca 12360

cacttccgtg ttggtgggag ttatgcagtg gacgtggtag ccgtgcccgc acaccatgac 12420

ttggaacgga cacgcgccgg gacaggccgc gtttatgcat ccttccggcg agcgcttgtt 12480

gcagatgtag cacacgtctg agcacgccag cgtgcaggac acggccagct tccactgctt 12540

aaccttaacg ggcatggcta gttgaacacg accatgggcg agtcgcgagc ctcgagtcgg 12600

gggttcaggg caaaccgttt cacgccgtca acggttcttc tctttgcaat tttctctctg 12660

cacaggctcg tcagcgtcat ctcggccagg cgcgcgtcgt tgcctaggtg ccgcgcggcg 12720

tcctcgaccg tcacgcccgt cttgccggcc tcgtccatga gcacaatgca taccaggtgc 12780

gcgctagagc atatgacctc ctgctcgcgc ccgccggcag cggggatggt tagctccgcg 12840

cgcccgaagg ccgccagcgg cgccacgtcg taggcagtgt ctgctcgggc gagcgccgac 12900

tccacggcac cgcggagcga ctccggcggc gtcagcgcgg ccagcggcac cggcgtgggc 12960

acggtgtaca cgttcacggg catgagcacc atctccgggt cgtggtggcc gctctcttcg 13020

ccgtcgtgct ccatgggctg cggcggcggc agcagcggga gcagcagccg tccggacatg 13080

agccggcgca caaggtcgtt gagcgcggac gaggccatcg gcgggtacag ctccatggcc 13140

agcttcagcg ataggtgctt ctcgaggttg acgccggtgt agacgctctt cacgatgcgc 13200

gcgaaggcca cgcgcgcgaa ggccgccagc tcctcgcgcg gcaggcgctc gatgtaggag 13260

agcagcatgt cggtgtcgca cggcggcgcc gcgaccaccg cgccgtagag cgccttgccc 13320

gagagctttt ccagcgccct tgcgtgcagg ccgtgggtct tgagcacgtc cacgtagttc 13380

acgtacaggc agagcgcgcg atcgaggttg ctctccgcga cgtgcgtctc gatgcactcc 13440

acgatgagcg ggcccatgcg gtccttgatg aggtctatga gcccgccgta ggcgactcgc 13500

gcgctcatga ggcacgtgcg gcagtacgcc atcaggccct cgaggtccgc ggctatcacg 13560

tcctcgacca cgttcgccac gacgcgctgc cagagccgca ccttgctcac gttctggtgc 13620

cgcaccatgt ccacgagctc gtcgtacgag ccgccgggct cgtgcgcgcg atcgacgatg 13680

cacctcgcca tggtgcggct ctggcgcatg agctcgttcg tgaagcgcac gcacgcgtcc 13740

tcggagaaga gcgcgctcag gcaggagtag cagcggtccg cgacgaggtg cgggaagcgg 13800

cactccacga cgccgcggcc gatccgcagc acgcactcgc cgtacatctc gtccatggcc 13860

tcgcgcagac agtcgtccag cacgtccgcg ttgtgcgccc actggatcac gcagaggtag 13920

ggctcgatgt tctcgcgcgc gttttccacc tcctgcacca tgtactcgag cacggtcatg 13980

tcctcgtgga tgtcggtgcc cagcatgcgc ccgggcggca gccagctctt gcgcgcgatc 14040

gcctctcgca ggcacgccac cgccgtgaag gtgttgacgc ggagcttggt cagcagccgc 14100

cgcagtcggg agatgtgtgc cacggagagg tccatctcca tggcctgggc gatgaggcgc 14160

gtgagttcct cctccatggc ggcggctccg cgggcagata tacgcgaaca acggtaagcc 14220

gtgctatttc atttttggac aaaaagctag tcgtcgacgc gcatgttgtc gaggttccgg 14280

cacagcgaga gcacgtcgtc gcgcgcgcgc ctccggcgca gttgattgtt cgcgcgccgc 14340

gcgtccgcga gcgcctgtct gtacatcgcg gagtccgcgt acccgtgcag cggcgagcgc 14400

cgagcgccgg gcctcgggct cgcgcggcgc gggagcggcg ttggcgcgcg cctcgagcgc 14460

cgcgcgaagt gcgcctgcat ggccagcagg caaccgaacg gcaccatgta tcggtccatg 14520

aggcactggc tggccgcgga cggctcgcgc gggtgcatca cgccgccgcc cacgtcctcc 14580

atgacgtcgc gcagcacgca gcgcagcatg gtctccatgc cgtccacggg cttgaaccgc 14640

accggggagg cgtcgacgta gaagccgtcg gccacgaagt agagcgcgtc cagcccgccg 14700

agtttctcgc cgagaccgac gaagagctcg tccacgtgcc agtccaccac cgaggccttg 14760

aagagcacca cgtgccggat gtcgtgcgag cgcgcgagct cccaggtgtc ctcgccgatg 14820

ttgctggcgt cgatgcggcc tgtcatgcgc acgctcacgc acggcgtcat cccgttcttg 14880

tagcagaact ggcgcgcgag ctcctcctgg cgtacgatgt cgaccatgct ctccatgaag 14940

gaggtggaga gcagcatcgc gccgcgcgcg gcgcgggtcg cgttttcgtc cacctccact 15000

tccatcccgc cgccgatcct aatcatctat cgtatttaaa ttttcggcgg agcagacacg 15060

cggctgctcg ctgcgcgatc gcttcagccg cggcggcgtc acgcacgcgt tgcggcggcc 15120

ggcacgcacg gacgaccgcc ggggctcttc gctgagcgag cgccgcggcc gcgtgacgcg 15180

acagtcgcag gtgggttgcc gggagtcgct cgcgcgcctt cttcgcattt cgccggaacg 15240

ccgcgtttat gtaggggatt atattttcaa cgtaactaaa tggacggggg cgtgcacaaa 15300

cggcctttca tcgtgaacgt ggatggcatg ggcaaggtgc tcgtgctccg gtacttgcgg 15360

atgtgcgagg tgcccgaggc caagtgcgag ggctcgcgcg cgtcctgcgt gctcaagatg 15420

gaccctcccc gctcacccag ctgcgagcgc aggccgtctc tcccgccgtc ccccccatgc 15480

cccatgcgca cgcctcccgg gtcgccgctc caggctccct tgatgcgcac gcagatgctc 15540

caggggctgt tcgacgctgc caaaaacaac ggcgagcaga tgtgccgccg ccagtaacct 15600

aggctgcgca gtacgaaagt tagtgcgtga tcacgttttt tgcaatgtcg atcacgccgt 15660

gcgtgcccgt cttgcgctcg cgctccacca cgctagtcac gggccgcgcg tccgagacta 15720

gcgaccccag catcgagcgc acggcgccct ccgcggcggg gtggcgcgtc agcagcagga 15780

acatcacgat gtgcgcggag acgccgcgcc ggctcagatc gtgcacggcg tcgccgtcca 15840

tgagcacggt gttcgagaag tacgtgaaca gagtgttgtc tcgcaccagg aaggccgagt 15900

tcgagacgct ctcgaagtcc acgatctcgt cgtcctgcac gcccatgtcc aacagcgtct 15960

gcacgagcgc gggctcgtcc aggaacacca ctgcgcgcgc gaacccgcag tccagcgcgc 16020

gcgcgtccgc ctccaacacg cgcgaggcgc cgccctccgg cggcaggaag gcgcagggca 16080

gcggcgtgcg tccgtccgcc ggcgcctccc cgagctcctc gagcgcgaag gccagcagcg 16140

tctccatgcg cgcgcgcgcc ttgtcgaagt tgtccgcgag gtcgcggatg cggtctgtct 16200

gcgagaacat cttcagcatc gccatgagct gcacgaaggg gtgcagcacg tatatgttgt 16260

ccacgagcag cgtgggcagc gcgcgcagcg tggcctgccg cacgttgaag ctgtccagga 16320

tgtgcccgcc ctcctcgtcc tgcagcacca cgtagttctt caggtagggc acgcgcagca 16380

gcacggtctg ccgccccgtg acgaagtata tcaggaaggc gaggttgatc aggaacgggc 16440

gcgcgttcgt ctgcaccatg tcgatgtcgc cgtactctat ctcggggttc agcaggtgca 16500

gggcgtacga gccgtagcac acgcaccgct tgttgtgtcg gcgcaggtgc tccttcacga 16560

gccgcttgac cacctccacc aggtccgagt gcttgtgccg cgccatcggc gcggcctcct 16620

cgggcggcgg cagcactgcg tacgagttga gcgcgcggct ggcgagcgcg cgcgcgcggg 16680

gcgcgtccac gcgccgcacc gccgcgttga ttgcaggcgt cggcgtcgtg agagagccca 16740

gcgtgcgcgt gaactcgctc acgatcacgc tctgcagctc cagcaccgtc aggatctggc 16800

ccagcttctc caggcgccgc tgcctcgaga agtactcctc gatgcgcgcg gcgatctcct 16860

tctcggagcc gcctagcttc ttgaagaagc gacgacgact ctttacaaca agagagagaa 16920

aaagcttcct atcgaagttg aggacgcggg tcatgttgcg gcgctgcgcg cgcaggagca 16980

cgcagcgctc catggagggg cgcgagccga ggtactcttc gatcacgggt ggagccatga 17040

cagctatttt ctgaacccgc gattattgta cagcgcaagc cgcgcgcaga cctgctggca 17100

cagcagcgtc gtgtttcgca tgcacacgcg cgaggactcg atcgtgcgcg cgtccggtgc 17160

ccaggcgcgc agctccatca gttcctgctc gacgaagtcc acgggctcca cgaagcgctc 17220

tgcgcagagt ccgtccgtga acgcgttgac gatctgccgc acgagcacta ccacgtccac 17280

ctgctccacg aggcgcacgc ccatggcgac gtgcacgaag aggcagcgga agagcgcgtc 17340

catggccatc tggtggtccg agcagggccc gaccgcggtc ttgcagccca gcgcgaagcg 17400

cccgatgccg cggtactgca ccatctccga gggcgagaag gagagccgct ccatcttgag 17460

cacgggcggc gggcccgccg gcagtccgcg cgcgaggtcc agcaccggcg tccacccggg 17520

cgtgaacatg tccgggatca ggaagagccc gtagctggcc atgcgcgcga tgtcgaaggc 17580

gtggtccacg accttgttca cggcgctgtc cgcgcggttt acgcgcagcg cctgcaggat 17640

cacgtttccg gaagcgtgcc gcgtgatcgc gaggtccgcg gtcgcgtacc cgcgcaggcc 17700

cggcaccgcg tacgcggtca gacacacggc caggcgcgcg ctgtgctccg aggagaagat 17760

ctcctgctcg tagccctcct cgggctcctc gcactcgcga gggcgccgca cgtcctcgac 17820

cgagcgcagc cgcatctctc cctccgacac cagacagcca agcgactccc tcaccgccgg 17880

cgcgagcacc tccgtggcgc agagcgcgtc gtgcacgcgc ttgagtgtgt tcggcttcag 17940

cgcgtagccg aagagcagcc gcgtcatccg cgagcccgag aacgcgaagc ggcgcacgta 18000

ctcctccgcg agctcggggc ggtcgttgat ccacgaggta gagaagacgt ggtcggaggc 18060

gaaggggtct gcaccaaccg cgagcagtgt ggacagaggt acggtgtcga ggaagtccac 18120

gacgtcgggg aagttctggc gcacgcaggc ctcggcgacg cgtctggtgt gcacgcacat 18180

gtcggtgacg ggcacccggt ggccggactc cacgacggac acgcagacgt cctcggtgac 18240

ggcgtccacg ggcatggtcc gcagcagctt gccgagcacg tcgccgaacc cgccctcgag 18300

cgccttgcgc cacacgaacc ccgcgtcgaa cttcccgggg aagtccgcga tcaccgaaag 18360

ctccgcgtgc gagaggttgt ccacgttgag gtaggtggcg gcgtccacga agatgggccc 18420

gaaggcgccg gtgtcggaga cgcggtctct gaggtagtcc ctggcgtagt ggaggtactc 18480

ccgcacctgg ccggcgcgga tgcgctcgag cgcgaaggcc ttcatggtct cggagcagag 18540

cacggagtgc cgcagcccgt ccagtgtgcg ccgcacgtcg tagacgccgc gcatctgcgc 18600

gagcatctcg acggcgtccg ccggcgtcgc cgccgcgagc cccgggttca ctggaggtat 18660

cctgtgttct gcgagcatgc gcttgaggaa acagaggtcc agcggccgcg tggtgtacag 18720

cgcggaggcc atctcggggc gcgtctcgac gatgtcctcg atcatctcgt ccgtgaatgc 18780

cgcgttgatg ttgtgcacgc tgcgcgcgtt cacgtgcagg aggatgtcgc ccacgttgtc 18840

ggggaatcgc tcctcgatga gccggacgtc gtcctccgtg atgttcatgt agggaataca 18900

gcggcagagc agcgcgtagt ccgcgaactg cgcgatgtag ggcgtgtgga actcgatgtg 18960

tctggcgaag agcgcgccgc agcgccgccg cgagagctct tcgagcaggt cctcgggcgt 19020

gacgtgctgc gggcggaaga ggtgcaggtg cgtggggtgc tcggcggcca cgcgcgcgta 19080

cagccgccgc gggaggtgtc tggggtgcac gccggcgagc acgagatcca tggcctctga 19140

ggtagacagt gcggcgaacg cgcgctcggt gccgcccgcg gcgacagcgg cgccgacaaa 19200

tctcttgagc agctgcagca tcgcgtgttt gggctttcgc ggaaggcgct tattttaatg 19260

ttattggcgg tggccggtgc gagataaaaa ttagaactga tgccgcagtt gttgatgata 19320

tgatgattgc gctggccggc gcgagataaa aattagaagc tgatgccgca gttgttgatg 19380

aggatggtga gtgcgctgga gcaagcggtg tggcgcgcta gcttcttgct ggccccgtcg 19440

gccacggcaa cgacctttcc ggatatcgtg atggtgcagg tgaagcgcgg acagtgatcc 19500

tctccgccag cacgcgtctc gcagaactcc agaggtctgt gtgtcatcat gcagaactcg 19560

ttgaccgcgc tgaccgggtt aagacttttg aggcgtatca cggcagactg agtcatgatg 19620

tcgatgtcgc cgccgaaaag cgtatcgcac ccagcctcgg tctccatggg ctcggtgtcg 19680

gagttttcgt cctcctcggt gggcgcggag ggcgcgcact ctacgaacca gcggggcggg 19740

tttccgtcct cacagcaaac ctcgtccgag tccagcaggc ggtacagctg gcggtttgcc 19800

tcgtgtttgg atatgccgag ctccttcgcg atttgcttgg ccggcagctt gtcgtcggat 19860

tttctgagaa gctcgaggat cagagacgcg cactcgcagg ccattgtggc gatttacggg 19920

gcgtgcgttt ttttaggatt ttggcttgcc tttcttttcg cagaacttgg gaggattgaa 19980

actcttttgg caatttttgc aggcgtactt gatcaagggc ggctcgtccg ccgagcgcgt 20040

ctggatcatc atcggcatgg tgttcttgct ctggcacgag gggcagggca ggttgaactt 20100

ctcgtcgagc acgttgaagt acccgctgta gtcgtggtcc ggcacctcct cgatgtcgta 20160

gggcacgcgc gcggccacgc acttgaccgc gaagagcagg taccgcagcg cgtcgtgctc 20220

cgcgccgctg gtcgcgcgga tctgcgcgca caggtccgcg tagtcctcgt tcgcgtccac 20280

ctccaggctg cgcttgttct tgtacgagag ccggttcttg gcgtccttcg agtactcgat 20340

gccgatgttg tgcgcggggt caaagttggt ctcgtcggtg ttcgaggtct tggtgttcac 20400

gatgttcttc agcgcgaagc gctgcgcgca gtccagcgcc catcgcgcga tgcgcgcggc 20460

ctccgccgcg tcggtgtgct tcgccgcgag gtcgcgcagc cggtcttcgt ccatcgcccg 20520

attttaggtt gggtatatta tctcaattcc gctcttccgc gggccgcggg cgcgcgcccg 20580

cggcaaatta ggcgttacaa atggacttcg tgcggcggaa gtacatgata cacgccatcg 20640

accgcaacct cgacttcatg aaggccgagg tccagcagaa ggtctccatc ttctccctcg 20700

ggcacgtgct cgcgctccac tacctggtca ccgcctttcc gcaggcggtc atcaccaagg 20760

acgtgctcgc gagcacaaac ttcttcgtgt tcgtgcacat gtcgcagcgg cacgaggtct 20820

tcgacgccgt gctcaaggcg gccttcgacg cgcctcagct ctttgtgcgg gcgctctcgc 20880

ggcacttcga ggccttcgtt gccgccatcc gggcctaccg cgcgacctgc gcggagctgc 20940

tggccgacgc gcgcttcatg gaggtggctg cgcgcgcggc cgagctcgcg gaggtcattg 21000

gcgtgaacca cgacatcgcc gcgaacccgc tcttcgcgga cggcgagccc gtgcgcgacg 21060

cggagctcat tttcgcaaag accttccgca agaccgagtt ccgcgccgtc aagcgcctcg 21120

ccgtgctgcg gctgctggtc tgggccttcc tcgtgaagaa ggaccttggc ggcgagtacg 21180

cggacaacga ccgccaggac ctgtttacgc tgctgcagaa ggccgcgggg cccgtgcgcc 21240

acagcgcgct cacagagagc atccgcgagt acctcttccc cggagacagg cccagccact 21300

gggtctggct gaacgcgcgc gtggccgacg acgcagaggt gtaccgcgac cggcccgcgc 21360

gcacgctcta cgagcgcgtg ctcagctacg cgtactcaga ggtcaagcag gggcgcgtga 21420

acgccaacac gctcaagctc gtgtaccggc tcgaggacga ccccgacatc aagggtctgc 21480

tgctgcagct catctacgac gtgcccgcgg acatcgtcgg cgtcgtggac tccgcgaacg 21540

aggagtggcg gagctacttc gtgagtctgt accgcgagaa cttcgtcgac ggacgcacct 21600

tcacctcgga cgcgcgcttc cgcgacgacc tcttccgcgt ggtcgccgcc gtcgatcccg 21660

acttcttcga gcccgagcgc atccgcgagg ccttcagcgc agacgcgcgg ctgcgagagc 21720

gcttcacgga catggacctc aacaacgcct tcatgtcgca cctcatctac gactccgtgg 21780

accccgacgt cgccgccgcc gagcgcgggc tcgcactgcg cgtgcacaac gaggactccg 21840

actacttcat ccgggagtac aacacctacc tcttcctcag cgagaaggac ccgctggtgc 21900

tggaccgcgg ggcgctcacg cggctctcgg acgtccccgc cgagcgcttc cgcgacctct 21960

tcagcgacag tgtgctgcgg tacttcctgg acgcgaagct gggcacgctc gggctggtgc 22020

tcgaggacta ccgcgaggac gtggtcgccg ccatgcttcg gcacctgcgc cgcgtcgagg 22080

acgtgtcttc cttcgtgacg tacgccgcgc gcaagaaccc cgcctgcgtt cccggcgtcg 22140

tgcgcgcggt cgtgagcaac ttcaaccccg cggtggtcgc ggccatgcgc cccttcctgc 22200

gcgagcacat gacgcgcgtg gacgcgctgc tggacggaat gccgcacctc tcggaggccg 22260

accgtcggta catccgccgc gtggtgctgc agggccgcgc ctgattcgcc gtcaataaat 22320

cgcgatggtg gacagcggca cgcacgacgt ggactccgcc gcgcaggagc gcacgcccaa 22380

ccagcagacc ttcttcacca aggggctcag tccgctgatg cgccacacct acatctacaa 22440

caactacgcc tacggctgga ttcccgagac cgcgctctgg agcagccgtc tgggcgacta 22500

ccgcgtcacg gacttctacc cgatctcgct gggcatgctc aagaagttcg agttcatgtt 22560

ctcgctgctg gcggaccccg gcggcgcctg ccccgcgtac gagcccaagc tcaacaccga 22620

gttcctgaac cgcggctcct tctcgggacg gtacgtgaac cccttccacc gcttcgcggc 22680

gctgcccgag cgcgagtaca tatccttcct gctgctgagc tcggtgccca tcttcaacat 22740

cctcttctgg tttaagggcg agaccttcga cactgccaag cacagcctgc tcggcgccgt 22800

gtacaccacg cccgagcggc acatcgagct cgcgcggtac ctgcggcgca cgggcgacta 22860

caagccgctg ttcagccgcc tgggcaacga cgacacctac tcgaagccct tctctgggtt 22920

cacgcgcatc agcaacccca cgcccatcgg gcggctgccg ccctcggact tcgagacgct 22980

ggccaacctg agcaccattc tctactacac gcgctacgac ccggtgctct gtttcctggt 23040

cttctacgtg ccggggctct ccgcgaccac gaagatcacg cccggcgtgg agttcctcat 23100

ggagaagctc tcgctcgcgc ccgagaacgt ggtgctgctg tagcctcaaa cataaaatat 23160

aggcgccttt gatcgcactg cttcagttca gacagagcta agatggcttc ctacatcagc 23220

ggcgctagcg ccagcgcgaa caccgcccag ggcggcgatt ctcagtaccc acagtactat 23280

tatcacacac gcacctccca aggcgacatc cgcgacgaaa gcgaaggttg cttccacacc 23340

acggacgacg agcacttgga tctgtccgac gactacctcg gcgatggcgc accacactgc 23400

ggacacagcc acaaccacag tcgcagagat ggagatcggc accgccagcg cgcaccgcgg 23460

ctctatgagg acccggtgcc cgcgaacatc atggtgccca cgctcagtct agagcagctg 23520

ctggaggaaa cctcggtcgc ggggggcctt ctcggcggca ggacagagag ggacgtggaa 23580

cagctcctgg aggagttctc cgcactctgt cccggggacc agatcaccgc gctgcgctgc 23640

atggcggcct ccttttaccg cgacgcgctg ttcgcgccgt acgcctgcat gcacctcatc 23700

gccagtcgga tgcgcgtgca ctacgcgcgc gaggtcgtgc acgtggccga ggacctcgcg 23760

gacgcgatgt ctgcgaacag cggcgtctgc ttccggcggt accgaaagcg cgtgctagag 23820

gacatgctcg cggaggagat gggcgtgtac aattacctcg cgcgcgccaa cgcggacatc 23880

tgcgaggaca acctgctatc ggccgtggag acgctgctgc ggcgcttccg tcggatgggc 23940

tgctaccgct ctctgtgcat gctcaagatc ctcgcgctgc agcacgagga cctggccggc 24000

ttcatccgcc gcagcataag aaaaacctgc aacttggcac acgcgcgcac gcacacggtt 24060

tacgtgtagt taccctgtaa agacgggctt gctcccgaac aagcgctcga agaagagcgt 24120

gcacatagcc ttattgtcca gcaagttgac tatctctgta cacagcctct tgaagtacac 24180

ctcgtacatg atccgctcgt ttttatccag tctgaaggtc ttgtcgacca cgcgctcgta 24240

ggacttcacg ttcgcgatcc ggcgccgcca ggggccctcc tcgcacacgt acgcgaagaa 24300

gtagcgctcg ccgatctcga tggcctccgc gttcgccgcg ttgtaccgcg tcactagcgc 24360

cacgttgggg ttgtcggggg acttgaagtt cttgtggtgc gttcggctca gcaggaacca 24420

gtccagcggc atgctgcgcg cctcgaactc gaaggtgagc tcgtcctcca gcgagcgcag 24480

gatctccacg cccacgttcc cggagccctc ctccgccagc gcgcggcaga gcatgtcctt 24540

gtacttgcgg atcatgagct tgtggaaggg cgccacgtcg cggcgcgtct cgctggtgcc 24600

cttgctcacg cgctcgctgc cgccgccgtc gctcaccgca aacttgatcg tggtgtactt 24660

cttcttggac tgcatgatca ggttgcagta caccgcttcg aactccacct tgaagttcgc 24720

gaagagcacg tgctcgttga tcacgcgctc cagacagcgc cccacgcgcc gcgagaacgc 24780

gatgtcggag gcgcccacct ccaggaacac ggagtcggtg tcgccgtaca cgctgcggaa 24840

gcccacgcgc tccgtgcgct cgccggccac cgccgcgtcg atctctagct ccgcggcgcg 24900

gcccgcgaag gcctcgtcgc gcagcagcgg gttgtccggc gccgccgcca gcgacagccg 24960

cgtgccgcac accgacgcgc cgtctagcgt gcgctccagg tacgcgatca tggtgcgccc 25020

gatggccgtg cagctcttgg ccgaggcgta cgagaagagc gcgctgttgc ggaagcccat 25080

gagcccgtac acggagttgg ccgtgatctt gtacgtgtac tgcatcgagt tgtagatctc 25140

gcggtccacc gcggtctccg cggccttcat cagcttcttg tacttggcgc gcgcgtccag 25200

gaaggagcgc agcagcatcg ggatgatgcc cttggcctcg cggtcgaaga tggccacctc 25260

ggcgacgagc tccggcgagc gcggctcgca gggcaccgcg atgtaccgcg gcgccgggaa 25320

catccgccgg acgtccacgg ccgcgacctc cgcgtcgagc cggttgtccg agacgaccac 25380

gccgacaagc gtctccggcg acaggttcgc gtagatgcac acgttcgggt acaggctgtt 25440

gtagtcgaag atgagcacgt gcttgttgtg catcttctgc ttgggcgcca tcacgcggcc 25500

gccctcgtag aagaacttgg acttcgtgtc cgcgcgcacc atcaccgtgc ggttctccag 25560

cagcagcttc atcagcgggc ccttgatgca ggtgctcgcg cggtactcga agaccacgct 25620

ctgcggcagc aggtacgtgg acgcggcggc cgcgatcttg gtctccacgc cgtagtgcga 25680

ccagaggtag aggcagaggc aggcgtcgtg caggcagtac cgcgccatgt ccagacacac 25740

gtccagcgag tagttcgcgt acatgtccgc gaggctgacg tcgtccttgc cgaaggccag 25800

cgtgacgcgg tcgccgggcg cgcgcgccgc ggggtccgcg aggtccacgg tgaagccgtc 25860

ctcgtcgacg cgtttgtgca gcacgcggca cacgcgctcg tccacggtca cgtagttgcc 25920

ggtgctgagc acgcgagcga acacggccgc gttcccgtcg gcgtcggtgc tgcggtcgcc 25980

gcgaaagcgg accgcgtccg gccgcgcgtc ctccacgacc gcggtgcagt ggaaggcgtt 26040

cttggatatg gcgtccagct tgtaggagtc cagcttctcg gtgcgctgga tgaaggcgta 26100

caggtcgaag tagatggtcc cgttgttgtt gttgatgtgg aaggtggtgc tcgagacgcc 26160

gccgacgccc ttgtggctgg acttcgtgcg ctcgtacacg cagaagttga ctgtctcggt 26220

cccgtccggc agccggaagc ggatgtgctc gcccgtgagc agcgacagcc gcgagtccag 26280

gtaccgcagg tcgaagttgt ggccgttgaa ggtgaccacg aagtccagcg gcatctcgag 26340

caggcgcttg gccacgcgca gcagcgtcac ctcgggacac agcgtgacct ccgcgtcgaa 26400

cttcacgtcc gccgggtcca ggcagaccgg gatctcgcgc cgtgccgcct cctcgaggtc 26460

cgcgtcggag agcatatcgg agttcgtaag cgtgaatcgc cgctccgcgc cgtccttgtc 26520

caccacgcag aagctgatgt gcgagacggc gttcttgaag acggaaggaa actttttctc 26580

gaagtggcac tctatgtcga ggaagagccc cgagcgcgtc acgttgaagc gcgggatctt 26640

ctccgcgaag cacgcgccgg ggtcgtcgca gtggaagcag ttgctcccca ggtcgcgcag 26700

cagcgcgggg tccacgcggt agcacccgtc agggtcgatg tcgtgcgcca cgaagaacca 26760

ggacacgttc agaaagtcgg acatgaagac ctctggcggc gcgagcttgc gctcgctggc 26820

caccagacac agctctatct ccgagcgctg gcgctccgga atcttcgccg agcgcgctac 26880

gatctcgtcg atgctgacca cggacatggg cccgagcgcg cgcgtccacg ccagcggctg 26940

ggcgatgtcg gccaccgcgt ccgcgcgcac cacgtagtaa aagtgctgca cgaagcgcag 27000

gtacacgacg gcgttgtcgg cgcggcgcgc cttgaggaag aggaaccggc tgtcattgcc 27060

gcggttctcg aaccagttca aacatttcag ctccatttca aagagcataa taacatttca 27120

tttaaatgga gcctcgcttc tggggccgcg ccatgtgggc ggtgatcttc atcgtgctgc 27180

ggcgcttcga ggagcaccgc gacctcgagc gctgcaagcg gcagctgtac gtgatctgct 27240

ccacgctgcc ctgcatcgcg tgccgacgac acgccaccgc cgccatcgag aaaaacaacg 27300

tcctctccag cgaggacccc aactacgtgc tcttcttctt catcaagctc ttcaacaacc 27360

tcgccttcga cgacagatac aagatcgacc ccgcgaaggt gcgcccgctc gtctagagca 27420

tgccctcgta cgcgcgcgag ttgtccgagt acacggtcac cgcgatgccc tcgcgcggcg 27480

tcacgtgcac gtgcatggag tccgtgatca cgaagcccac gcccgtgacc ggctcctcgc 27540

ccgcgtcgtc cgtgaagagc agcccgtggt tgaagaggta gaactcgttc tctgcgagcg 27600

aaagccgccc gcggtcgcag aggtagtaga agatgtcgta gtcgcgcacg gccagcgtga 27660

acgtggactc gctcaccacg atgtacttgt ccagctcctc cagcacggac gcggccgcgc 27720

ggcgcgcggt ggcgcggcac tgcgtcgggc actcgcacgt gtctgcagag tacaggatgc 27780

gcgttcgccc cgaggcggtc tcgagaaaaa cgttaatcgc ctccatcgcc cagaagcgac 27840

tcgaggatcg cgagcaccgt gcgcagcacg agcccgatgg tgcagaaggg aacctctccc 27900

gactccgagc actcgcggat ctccgtctcc acgcggtcgt gcacttttat ggagggagcc 27960

gtcgttccag tggcctccat cgcgacggac accaccttgg ccacgaactc gcggatcttg 28020

ctcatgcgcc ggagcacggt cacgcggaag aagacggccg cgagcaggta ctcggccacg 28080

cagctcacgg cgatgagcgc ctgcgcgtgc ctggtgttga gcacgtgcgc gtcgggcacg 28140

aagtccgaga tcttcaggtg cgagagccgc acgagcgcgt tggtgtcctt gacgccgtcg 28200

caggaaatgt tcgcgaagat gagcttctcg tagtcgagcg cctcgaccac gcgctgcgcg 28260

tccatgtgcc gctcgcccga gagcgcgcgg ctcaaagggc cccagcacac cgagcccgcg 28320

aagcaggggt ccaccacgcc gtgcatcgcc agcagcgtca cgtcggccac cgccgcgagg 28380

atggccgcgt cgtcgagctc gttcgcgggc gtcgcgcccg tcagggacgc gctgcgcagc 28440

gcggacccgc ccggcgccgc gtgccgcgcg cagaactcgc acccgcagcc cggcggcagc 28500

ggcggcttcg agagcagact tatgagcccg cccacgtgcc cgtgctcggt gatcagaagc 28560

gccaggatgc tgtcggtgct gccctctatg gcggctgtgg ccgcgctaga aggctctccc 28620

gtgacctgcc atccgcagac aaccttgagc atcttgcgct tgagctcgtt gggcgcctcc 28680

gaggccagca tcgtgcgcgg gaacgtcgcg ttgaggcgga agtcctgcag cagcttttcg 28740

agcgtcgcgg tcttggcgtg ccgccctttg cgccactcct cccccaggtg ccacatgagc 28800

tcctcggccg tgtccagcgt cggcgagacg cgggccttgg gcacgcgcgc cgcgctgcgc 28860

atcagcggct ccgaggcgcg gaagctgccg cgcgcgtgca ggcgcatgga cgcagacgag 28920

gaccgcatcg agggtctctg gtggaagctc gtcatcgtga agcgccgcgt gagcggacct 28980

acctcgtcgc gcgactcgtc gaagtccggg tcagggtccg tcgtgtcggt ctcggcgctg 29040

tgcgtgctgg gcgcgctgct gcgggcgctg cgcgtgctgc gcgtgctgcg ggtgctctgc 29100

gtgctgaagc tgcgcgagca ggagtccgcc gtgtccgctt cctcgtagtg gaagtccacg 29160

tgctcctccg gcagccggcg cgagcgcgac ttggagatgc cgaccatctt gtccgcgccg 29220

accgggcgca cgcagagcgc catcgcgccc tcgcgcaccg cctgcgcgaa ctcgcggctg 29280

gcaaccatgc tggggttgag gaacttgatg atgttgaagt atggccactc gcagacgagc 29340

cgcgcgcagg tcgcgacgtc gtcgacgctt ctgagggccc tgttcagcgg ggggatgttg 29400

ctgccgtcgg ccagtgcgac gaggtcctcg ggggagatct cgagcttggg aatcatctcg 29460

ttcacgagcg cggggtcgat ggcgtggcag acggtctcta cctcggtgcg cgagagcttg 29520

agctgcgcgc aggccgccca cggcgcgcac gtgagcgcga acaccgcgga gactcggccc 29580

ttgccgacca tcgccacaac ctcgggctcg tagaccaggc cggccttgag cagagcctcg 29640

agcacctcta tgtcgtcggc ggcgagcagc gcgcgcctgt ggaagcacac cgcgggcatc 29700

atcttcttgc agatgccgcg ggtgctcttg agggccgtga taaggtcggg gagcctgacg 29760

tgctgcggct ggaagaacat gacgttggcg gggctcgcgg ccaccgcctc gtcgtacacc 29820

gacatcggca ggtcgccgtg gagcccgcac ggcagcaggc tcagcagctg cgcgcgcgag 29880

agcttctcgg cgcagaagtt cttcttggcc agggcggccg ccgcgtcgcg ggccttcttg 29940

gggtataaca acatggcggg ctttaaacac gaaacaaaaa tccgggttgt aacatttcaa 30000

ttttgcatgt tctgggcctc ctcgcagagt ttctccaggc cgccggccac gatggcgtcg 30060

acgaagaggt cggcctcggt gaagcggtgg ttgccgcgca ccgccaccag cgcgttctcg 30120

gtgaccacca ccgacagctg ctgcgcagcc gtgcgcaggt cgaagtgtcg gcacgcgagc 30180

ccgtggccca gagtctggtc cagcgccgcg agcacctcct ccaggctctc ctcgcggtgg 30240

ttgtagaacc acatcagcac gaagtaggcc acgtaggtgt agaggtagtg cgcgaccgcg 30300

cgggcgcgca ccagcggctg gttgcagcgc gcgaaggcca ttccgctggc gatgaggtcg 30360

tcgtccagcg tggcgtagtc gccccagttg agcgcgctga actgcacgct gtagaccgcg 30420

cgcacgaacc cggactcgag gatgtcgatc tgcgacggcg cgccccaggt caccagccgg 30480

tacacgatgc cgcgctgcat cagccgcatg aggtcgccgc cgacctcgcg caggcggtgc 30540

gtcagcgagg cgaaggccag cttccgctgc gtgtactgca ggcccacggc cacgcacccg 30600

tccgactcca ccagcacgag cttgtggtcc gtgcagccgt cgctgcgcag gccgccctcg 30660

cgcgccatca tgtcggtgac gaacatgtac ttgcgcgcgc gcggcccgac caggatgcgc 30720

ttcttgcctt ccatgcgcag caccacgtcc tctagcagcc gcgtgctgtc cacgcgctcc 30780

acctgcgggt ggatggtggg ctggtagttg tacagcagcc gcggggacca gttgtaggcg 30840

aacgcgaaga ggtgcgtgtc caggagagag atggggaaga cgccgccttc ggtggcgcgc 30900

cggaggatgg cgagcttggt ctccgcgggc agcaggctcc cggtcaccgc gccgaagaac 30960

atggggtggt tgcggaactt gagcgcgtac gcgctcagca cctcctctcg cgagaatatc 31020

gagtccgcgg ggttggagct cgcgggcagg agcacgtcct ccacgctcag cacctcgtcg 31080

atgaagggca gcaccatgtc cacgttggag gcggtgaacc actccatgtc cacggcgttg 31140

cgctccacga tcacccggat cgtctcctcg gatatgttct cggcgaaggc gctctgcagc 31200

tcgatcaggt tctcggtggc gtcgatgctg agcccgaggc gcatgccctg ttgcagcacg 31260

tcgttgatgg ggttcacgta catggccacc gccatgcacc cggccggctg cacgcgccag 31320

aggttggagt acgcggacac gtccgtgatg cgcagcgtct ccagcacgtt gtacatcgcc 31380

gcgcgcattt ccagcgtgtc cacgtacacc tccgcgtgct cgaagatgat gtcgagctcg 31440

aacgcggaca gcggcagact cacgtagatc tggcaggcgt caaagagttc ctgcgcgtac 31500

tcagagaagc acgcgtacgc gatcacgccc gcgcggttga cgatgtagtc cgccttgaac 31560

atcttcgtga ggtaggcgta cagcgaccgg caggccacgt gcggccttag ctcgtcgagc 31620

acggcgtcca gcacctcgcg gtgctgcagc acggaggggt gcaggaactg cgtgaagtcc 31680

accgcggtct catccatgaa gtcggggatg gtctcgacca ccaagcggtg gttccgcacc 31740

gcgcggaagc cggtgttcat cggcgcgatg ctgtgctggt cgtggacctc cagcaggatc 31800

tcgtagccga tctctcggca gctcagcgcc gcgcgcgcct ccgtcacgct cgcgttccgg 31860

aagaactgcc gcaggtgctc gtccgtgcgg cagagcgtga cggattgggg gatgcgggaa 31920

aggtcgcaaa gagggctgtg gacggagatg cgccgcagcg cgtggtctac gaactcaaaa 31980

ccgcgcctcg acatcgtgaa gtcgcggagg gcgtacatgt tgtaggaaca gaggcggaag 32040

aggcagtcta tgtctagcat gttggaaacg cagtacgcgt gtctgtggag gtgcgggagc 32100

atggcgggca cgacctcggt cgtgttctgg agcatggtgc atacgaggtc gggcgctgtg 32160

aggtcggggg tgacgatgag gatgcaggag ctggagaact tgctgagctc ggaggccagc 32220

cggtgaaggt tgtagtcgtg gcgctggctg aagttgctgt ttatcgtgcc cgtgaagccc 32280

atgagcgccg ccagcgtcag gtcctcgcgc tcgatggccc agatgtctag gccggaggct 32340

atcatgcagc gcaccagcgc ggcggcgcgg tcgctcgtgg ggtagctcat ggtgctgtcg 32400

gtcgtgcgaa tcagcatggg ataatgcttc atttttacgg tcgggggttg cggactgtgg 32460

ggcgcacagg gcctgcgggc ggctcgtgcc ggtccgcggc gttcgccgaa cgcaggaacg 32520

ggcccatgcg cgcccaggcc atccacagcc ccgccgtcag cgccagcagc cagacgaata 32580

ccacgatcat cttttatgta gctggaactc gcgctcactc cccgccgcac ggcgacgggg 32640

agagcccaga gccgagctcc atgcgcgtgc tctgcacggt gagcgactcc acgagcttgg 32700

acacgttcat gcgcgtgttg tcgggcacca ggtgcgcgag gcgcgcgtac acgtcatcgt 32760

gcatgcgctt gctgcagcgg tccaggctcg cggagagcgc ggagactagc gcggtgtgct 32820

tcgcgtacac gaagtcgccg agacacacgg tctcgagccc gagcacgtcg gcgctctccg 32880

cgtccttgag cgccacgaat atcttctgct cctcgcgcgt catcgagcgc atgaggtagt 32940

cgtgcagccg cgagcgcgag atgagcccct gagagatctg cgggctgcgc atgaagcgcc 33000

ggcgcatcgc gcacagcagc tcctcgtcga cgacgtacat gctgtccttg atggagctct 33060

tctcgtcgat cacgagcaga ccgtcgttgg cgaccacgtt gatgaaatcg tccacgtgcc 33120

gcgcgtctat gtcgtagcgc gtgccgccgc actcgatgtg cgagggcggc gacttgagcc 33180

ggttcgcgag cgccttcacg tcggagacgt cgatgtacag cgaggactcg cgcgggacgc 33240

agccgaggat gcgcgtctcg agcggcgtga ggatgagcac gcgctcggcg ccgtcgacga 33300

gcttgccgtc gtcgggggaa aagaagttgt tctccacgat gctcgagacg aggctggcga 33360

gcacgccgtc gcggtaggcg ccgagcgcaa actcctgcac aaagggcgcg tgcagcaagt 33420

ccacgggaat gcgcatctcc acgcggcgcg cgaccgactt cttcttctgc aggtgccgcc 33480

ggtccaccat ctcgtccacg atgtccgata tgcgggagca gaggtacgcc ttgaggacgt 33540

tggcgtttac cttgttgaag atgagccgtt cgtcctccat ttaagctgct cagacgagct 33600

ttaaatagtg gaaacacagc agcacgccga tcgccgccgc tatcaggccg attagaaaaa 33660

cggtggtcca ggggacgccc ttgggcctat cgcacgccgg cttttcggtc attacggtgc 33720

gcacgatgtt taggaactcc tcgaagtcct cgtccgagtt ggagaggaag gagccgaaga 33780

cgccggtgta cagtttgtcc atttactact agatattaaa cggcgcttcc aactcctcgt 33840

cctcgaagcc cgcgccaggc tcgacgacgc ccaggccgcg cacgtcctgc tcctcgttga 33900

acgtggtctg agtctcgctc atgcgcacac acgtctgctc gccctcgaga ccgagcacgg 33960

tcagcgagca ctcgcgcggc atggtgatct tcttaaccgc gaaggtgact ttgccctcgc 34020

cgcccgagcg gtagaacacc accggcgcca ggatgagcgt cgccatctgc gcgtcgcggg 34080

ttgcgaggtt ttctatctct cgcgtcagcg gacatatctg cggctgggtg tcgtcgtcgc 34140

tggtgaactc caggagagcg ccggtcaggc ggttgagata cagacatccg gacttaaagg 34200

tgttgtcgat ggccgtttcg gtgttgaagt tgcgcagcga cggcggaacg cgagcgccgg 34260

ttttgatgtt gtcgtatatg ttctccagca gctggtagag cagcggactg gcgctcacgg 34320

gcttgaggcg accgaagtac ccgctgtcgt tctgccgctg catgtcggtc ttcttgctcg 34380

ggtagatctt aaactcgccc ttcacgacga tgagcggcga gacgagcttg gatgctagac 34440

tttcgacgag acacacgttg atgttggagc agctcgggta ctgcgacgga gttagagtca 34500

cggcctcgat gaccttggtt tggctcgacg agagcgactt agcgaagttg atcgcgtcgg 34560

tgcacgacat cgcctggttc tcgccgaacc gcctggcgga cgctgcatcc tcctgctgag 34620

gagcgcggtt agacgcgacg gtggttttgg atacagcgcg tttcattatt gcggcgattt 34680

taaagtacgt gtatactttc agttttgtcg ccgagcgttc agcgcctgca tgcagaggaa 34740

gtacaggatg atggtgcacg ggatcgtggt cagcagcgat acgaagtcca tcactgtgag 34800

gacgcgcagc gccccgcgcg agcggatgcc cagcgagggc gcgccgcggc gcgcgatggt 34860

ggccccgttc gtcaccacta ccagcagcat taggatggtc gcgcccacgg cgacgcccag 34920

gtcccgcgac tccatttata gtacagtata gagcgaccgc gtcacgaact ctcggctggc 34980

caacacgcgt ccgtcgggcg ggtgtccgcc ggccttcccg cggaactccg ggacctcgaa 35040

gctggacttc gtcacgcggt acgtgtactt gccgcgccag accaggtttt ccttctggaa 35100

gacgccgtcc atggtcacgc ccgccatgaa ggcgtccttg acgatgacca gcaccgcgtc 35160

tagcttgcgc ccgttgatgt gcgtgacgaa gtccgtgccg ctgcggctcg cgcagcggat 35220

gtccacgccc gagggcaggt ccaccacgaa cacgaagcgc ttcggcgcgt agagcaccag 35280

gtccgaggac ggcgacgccg aaggcgccga ggggaactgc cggtggtcaa aagggtgcac 35340

cacgcccacg atggacgtga cgcggtcgtc cgggaactgc gtcgcggcgc cgccgccgcg 35400

gtgccgcgtg accgtgcttc tgcccacgtc gtcgcagacc acgtgcagct ccgacacgat 35460

cggcagcagc gtggccagca tgcggtcggt ctctgtgcgc gtcgcgcagc ggtacgcgat 35520

cccgcagtgc gcgtcctgcg tgcgcccgaa gaagagcacc agcacgctcg cgtcctggtc 35580

gaagggacac acggccatca cgcccaccgg cggcggcccg tggcctgcgt acgcggagga 35640

gaactcctgc acctcgacca cggcgtcctc gcgcgcctcg ccgggcacca tcgccgccgc 35700

cggccgcagc gcccgcacgg tctgcttaac cgcacgcgcg gcggaggccg cgctcggcgc 35760

gactacgcgc acggccgcgt gcgcgcccgg cggcggcgcg gttccggcca tccagcccac 35820

cggcgagaag aacacgtcgc agacgtgcac gcccgcggcc tgcagcgcgc gcgcgagcgc 35880

gcgcacggcc tcccactcct cgcgaaaggc gctcgcgacc gcgagcgcct tcagcaccgt 35940

gtccacggag ttgacgggct tctggaagag gttctcgttg ttgtagatga actcggggag 36000

ctccacgggc actgtgaaca gcctaatctc gtgcgcgccg ctgggcgtga gccgcgtcgc 36060

gggcttgcgc acgccggcgc cgatctgctt gaagaagtgg ttcatggcgc cgccggcttc 36120

tcgggctccg gcgggagcag actatttatt cgggaggtta tcctttccga aagcacctgc 36180

acggacttcc gcgtccagcg ctccatcttc atgtactcct tcatgccgtc gctgagcacc 36240

tcgacggcct ccagcttggg cgctgtcggg tcgaagagga tgctcttgag cagcgtcatc 36300

ttcttgtccg cgaggaagcg gaagtaagtg tagatgcagc gcagcgcgcg gaagttctcc 36360

gggtgcttga tggtgcacag gatcatgaag atgcaggtga acatgccgca ctcggactcc 36420

atgagctggt tgacctcgag gttgatgcag ccgcgccgcg ccttgaagtt gtccacgaag 36480

aagcgcatga gcacgtccac gtcgcagttg cggttgtcca ggtccgcggt ctcggcgttc 36540

acgttgaagc cgtccgagaa ggagtagaag tagaagtact tgcaggggtg gaactccgag 36600

gggctgttgc cgccggagtc gtagaaggac acgagccgcg agacggtgtc gaagatgcag 36660

cacttccagt ggaacatgta gcagaagccg aacatcacgt agcgccgccc ggcgcgctcg 36720

atcttgtcct tgagcgtgag gctgaccatg ttgcagcgga agcggtccgc cttttcgtgg 36780

atggccgcgc cgttgaggaa gttcaggttg aactggccca ggtacgcgac ctcggtgccg 36840

aacgcgaagg gcgccaccag actctggatg ctcacgttgc tcatccaggc gctgcggtcg 36900

ggctttatgg cgatgggcac taccttggtg ttcacgcccg tgctgacgcc cgcgcgcgcg 36960

aggtcgtcca cgttcagcgg catctgcgag aagtccacgg cctcggacac cttctcgcgc 37020

aacgagggct tgaagaagaa gcccagcggg accttccact ccagcgcgat cgcctcgcgg 37080

aagccgtagc gacccttgag gctggccagc aacgcggtct tctgcgcgac ctcgtccttc 37140

tcggtgtccg gcggcgcggc gtcgatgagc ccgcgcttcg cgaagtccag cagcgccgcc 37200

agcgggatgc acgagacgcg accggccgtc gcggattcgt cgaagcgccg caccacgtac 37260

ccgttgcagt tggtcttgaa gttggacacg tccaggtgcg cgctgagccc caccaccgag 37320

tagatgtggc acagaaggtt ggtgaacccc agctccggga ttttgctcac cactaaatcc 37380

gtgtacttgt ccatttatca tggagaatca tctgccggac atgctgatgt ttcccaactg 37440

cgtttctgtg tttccctttg agtactcgct ggaggacgtg ttccgcctcc ccgaggagcg 37500

acggcgcgcg ttcgccatgg ccgtgttccc gctctccaag caccgctgga ggggcgcgcg 37560

gctccagcgc gacgagcgaa gcgtgtggct cagcgtcgag gaggaccgcg ggcgcgcgct 37620

ggacgagcgg aactgctcct ggctctcgga cgtggccgcg cgcatggtcg acgacgaggg 37680

ccgcgcggtc acgcccgagg cgtacgcctt catgcgcgcc gcgcccggcg cgcgcgtcgc 37740

cgagctcgcc gcggacgcgg gcgtgctagc gggccttgtc gccggcggca acgcgctgcg 37800

cgtcttctcc tcggagtcca cgcaggcgcg cgagggctgg aaggcgcgca gcgtgggcgt 37860

gctcggcaac gcggcgccgc tggcgcccgt gccgctggca tcgctgcgtc cggaagtgca 37920

gcgcgagctc ttcgccgcct ggatcggccg ccgccccgtg gtgctcacgg gcggcacggg 37980

cgtggggaag acctcgcagg ttcccaagct gctgatgtgg ttcaactacc tcttcggcgg 38040

cttcgagcgc ctggacgccg tccgcgagtt cgcggagcgc ccgctcgtgc tctcgctgcc 38100

gcgcgtcacg ctggtgcgcg cgcacaccgc gacctacctc gcctcgctgg gcttcggctc 38160

ggccgacggc tccccggtct cgccgcggta cggcgccatc ccggacgccg agcggaacac 38220

ggccccgcgc gcctacgggc tcgtggtggc cactcaccgg ctcacactga ctgccatccg 38280

ccgctacgac acggtcgtag tggacgagat ccacgagcac gaccagatgg gcgacatcgt 38340

ggtcgcggtc gcgcggaaac tgggctcgaa catgcgatcg ctggtgctta tgacggccac 38400

gctcgaggac gaccgcgcgc gcctggagga gttcctggac cggcccgcct ttgtgcacat 38460

agagggcgac acgctcttcc ccatccgcga ggtctacgtg aagaacacgc aacagccgcc 38520

gctctcgcgc aagtacgcgg aggcggagct gcagaacgtg gcgcaggcgc tgggcacctt 38580

cgtccccgag cagggaaagt gcggcatcct cttcgtagcc acggtggcgc agtgcgcgct 38640

cttcgcggag accatcgagg ccaagcaccc cgggctgctg gtgcgcgtgg tgcacggaaa 38700

ggtgccctcc gtggccgcgg tgctcgagga ggtatacgcc gcggaccggc ccgcggtgct 38760

ggtttccacg ccgtacctgg agtccagcgt gaccgtgcgc accgccacgc acgtctacga 38820

cactgggcgc gtgtacgtgc ccgagccctt cggcggccgc gagaccttcg tctccaagtc 38880

catgtacacg cagcgcaagg gccgcgtggg ccgcgtggcg cccggcacct acgtgcgctt 38940

cttcgacacg cggctcgcgc tgccgctgaa gcgcatcgac tccgagttcc tgcacccgta 39000

cgtgctttac gcgcgcatct tcgggctaac gctgcccgac gacctgctcg tgcagcccag 39060

cgacctcgcg ctgctgcgcc gcaccgagga gtacgtcgac ggcttcggca tcagcctctc 39120

gcgctggacg cagctgctgg accggcacta catgcacatg gtcgagtacg cgaaggtgta 39180

cgtgcgcggc gggcgcctcg ccgccgcgct ggacgccttc gagcgcaccg gcgtgatgac 39240

gcacgaggcc accgaggcca tccgcgccgt ggacatgctc gcggccgtcc taaacgtgcg 39300

caagtccaag gaccgctacc gcgcggagtg caaggtgctc ttcgggccct tcgcgggcaa 39360

aaagttcgtg gtcgccgggc ggcgtccgcc cggctcgcac gtgctcatgg tcacagaccg 39420

cgtcttcatc gaggccgagc ccccattctg aggaccacct tcttggagac gcccgagaag 39480

tcgtcggcga cgccgcggcg cgccaccaca aggcagtacg aggtcacgtg cgggcagcgc 39540

gcgatgcagc ggaaggcttc ctcctgcgac agcgagaagg cgaacacgta gaaggtgtgc 39600

ggggacttca gcggcgtgtg gtccatcgag tagatgacac cgagcttctt catgcgccac 39660

ataagcgcgt tgatgtggtc ggcgcgcagc gcgcggccct tgagcacgcc gcagacgaag 39720

ctcgagcagg ccacgacgtc gtagcgcgtg ttcctgccga agaccaggtg cggcgcgccg 39780

gcggcgcgcc gcgcggccgc gcgattctcc acgatgtcct ctatggagcg ctcgctcgca 39840

aagaagtcca ggaacatgta ctggtaggcc acggccgggc gcgacttgct gaacttcatg 39900

aaggcgtccg agtccatgat ggcgtccatg tcctcagcgg cgagccggtg ctgcagccgg 39960

atgccctcga aggtgtggaa gagccgcgcg tccgcgtgca tggacagcgc gagagtgacg 40020

aagttgagaa ggtccgcgtc gccaaagcgc acgagcacgt taccgggcgt gcgcgtcttg 40080

cgcatgagcc gcgcgggcgc gccgtcgttg tggctgcggc ggcgcatttt gtcgccgggg 40140

gactcgggcg gcaggtcgat catgaccagc cggtgccgct gcgcgtcctc ggcgttgaag 40200

atcgaggacg tgaagcccgg gtacagcacc acgcagtcgc gctccgagat ggcgtgcagc 40260

acgtcgcgct tgagcccggc caccagccgc tccgcgttct cgacgaagta gttctcgtag 40320

tccaggatgt cgtgcgccat ccaggggaag ttcaggtacg cgttcatggc gtagtcctcg 40380

gcgtcgaagc agatgcgcgt gtctggcgtc gccgcgatcg gaaggtcctt gatgccgcgg 40440

agcagcccgt cgtagtcgga ctcgtccacg aaggagagca ccacaaagag gtcctcgccc 40500

acggtttcgt agtcgaagag gtggtaaagc tctcttagcg ccagcacggc gagcgcgttg 40560

tccagcgagg cgtgcacgcg cgccaggatg ctgtagaagg gcgtggccat catcacggcc 40620

ttgccgccct cgcaggcaac ggcgcgcggg aaaatgacct ccggcgtgcg cggcagccgc 40680

ccgaacgtcg cgttcagcag cgcgaccgtg gccgcgtcgc tctggcgcag gaacactacc 40740

accgaggggc ccgagatgct gagcatgcgc tcgcgcatgc gcgctggcag gtccggcgtg 40800

gtcacgaggt ccgcgaagcg gccgccgttg tagaggtcgc cgccgccgag gaaggtgagc 40860

acgtcgaagc agtgcagcac ctcgttgcgg aagtagtact cgttctcgag ctccttggcg 40920

tacgcgcgta tgtccacgtt ctcgaagttt gttcgcagac cgccgccgtc gaagaaccag 40980

gacgcgagct cgcggacggc gtccgcgggc ctgttgcggc ggctcttgca ccagaagctc 41040

atgtagttgc gcgaggtgga ggcgttcgcc aggaagaagc ggtggtcgaa ggagatgagc 41100

acatgctcga gcaggtgcgc gagccccagg accgcgccca cgtcgcgccc aaaaccgaag 41160

tttgatatcc ccaggtagac gtcccgtttc atagacggcc tcaggaacac cctgacgccg 41220

ttttccaaca ctatcattct ccggtattta cttacccaaa agtagtatgg ggagaagtgt 41280

ttgaacgtcc cctcgccttt ttaaatcaaa agtagacttc tcgcgcccgt gcgccaccgt 41340

cacgcgcgcg cggcgcgagt ccataccggc gatcaccgcg ctgctctgcg gtgcgtccgg 41400

ccgcgggaag agcacggtct cggagatccc gtccagctgc gcgtcggtgc gctgccgcca 41460

cgcgtgcgcg tccgcgagct cgcgcacggc cagctgcatc ttgttcgtcg gcaggaacgt 41520

gaacacgtac gccgccgcca ggaaggctgc gaagagcacg aactcaaccg cccatgacat 41580

ttagggagct gattttgttc cacgcggcga cgcacgtcgt gacgggcgac cccgaggcgc 41640

cgcggcgcgc ggcctcgctg tgccgcggct tcggcgtgga cttccgcgcg attcacgcgg 41700

agttcgcgcg gcggtacccg cgcaccgcgg ccgccgtgga gcgcgcgcag ccgctgcccg 41760

aagtcgatgc cgcctttccg ccggacgcgc gccggcaagt cgtgcggctg cgcctcgagg 41820

ctgcggcgct ggtcgtcaag gagtcgcgtg cgctatcggc ctccatgcgc ggcgtggcgg 41880

tggtcgacgg ctgctgcgtg cgcgtgtgcc gcgccaacga cgagctgcta gagttcctcg 41940

cgcggcgcta cgaccccgcg gtctaccgct acgcggaggt gccctcgccg agcgtgcgcc 42000

cgggctcgaa agtcttcgcg tgcgcgggcc gcagcgtcac ctttgcggcc gcgcaccgga 42060

gccgcatcac ggccaaccgc ccgctgcgcg tggtcgtgac cgaggcctgt gtggacggcg 42120

tgctcgcgcg cggcgccgcg gaggtcttcg accgcggctc cggcgtgctg ccccgcgcgc 42180

tgcgcgagat cttctaccgc ctcgacgagg acggctgtcc cacgggccag acgccaggct 42240

tcgcggacag tatggcgtcg cgcagctgat ctatgtccac ctttttctcg tcgatctgcg 42300

ccacgaccac gaaactgcga atgtccacag cggccatggt cttggccacc gggtcgtact 42360

tgaggagcag cacgtactcg ttgccgaagt gctcggtgac ctcggtgatg agccggtaca 42420

cgcccatgcc gagcacgttc accgcaccgt ccttggcgaa gagcgagagg atgttcacgc 42480

acttcagctc catctcgccc tcgaggcgcg cgagcatgcg ccgggtgacc tcgcatactg 42540

aacaaagagg cttacctagt aagataagcg ttagcttagc cgcggtcggt gacgcgtcgg 42600

aggccattta tggggatcaa aaacttaaag gcgttgctgc tcagccacgg cgcgctgacc 42660

ccgcacgagc cgggcggcga cgagcgcttc cctgccgtgt tcgtggacgg cttcagcgtc 42720

atgatgacca tggcgtactc gtgcgcggac gaagacgagt tccgcgcggc cgtcgaggag 42780

cgcgtgcagc actggatgag cgtgtccgag agcgggcgga tcgtggtctt cctcgaccgc 42840

ggcgagattc cgatcaagca gccgctgcgc gaccagcgcc gcaaagccac gcgcgaccgc 42900

gccgcgcgcc accgcgagtt catcgccgcc gcggaggcag acgcggcggc agaggccgtt 42960

ggcgcccgcg aggacaaaca ggaggacgag cacgcggagt tcgccgagga gatccgcgct 43020

gagaagcagc taaagctgca gcgcatccgc ttccagctca gcatcgccaa ccacgaggtc 43080

gttaagtcgc tgatagagtc cacgctcgcg cgcgctggcg atgccgtgga gatcgtcttc 43140

tgcgacggcg tcgacgcgga gatggtcatg tgcgcgcgcg gacgcgccga ggccgagcgt 43200

cgcgggcgct ggccgctgct cgtgaccacg gaccaggacg cgcttttgtt cacgtccacc 43260

gatcgcgacg agaagatagt gagcaccgtc tccgcctgct acgcgttcag gcccaccgag 43320

acgaccgagt acctgtgcaa acttgcggcg ctggccaacg gctgcgactt cttccccggg 43380

ctcggcggca tatgcgtgag tgtggagtcg ctgcgccgcg ccacgctttt cccggaattc 43440

tccgtgcgca acgccgccgt gagtctgtgc acgcggccca tgcggctgtc cacgcaggac 43500

gcgctggagc cagaggccgc cgccgaggtc gtggaattca tcaggcggta cgccgccggc 43560

gacgagcgca tctaccgcga ggtgccgccc ggcgcgtgct gcggacgcgc gtttgtgcgc 43620

ggagcgctcg cggccgagtg ggccgacgcg ctgccggcgg ccacgggtct gagcgtggtc 43680

gcggacatga tcgcgtgtct gcccgcgcgg cgggaccccg cgcccgagga ggtagagcgg 43740

ctgctggcgc tggaggcgcg cgcgcgaggc gcgcgcgtca cggatgcgat gctcgcgcag 43800

actgcgcagc tgctgggtta cggcgcgagt gcgggcgccg acggcgcctc cgccttcgcg 43860

gtctcgggcg ccaagggcct gatgtgtcgc ctgcgcggca cggccatgtt cttcaacgcg 43920

gagtacgtgg aaattgaaag cgaacccaga ctgttaaagc tgcggtagca tggtgttccc 43980

gatcgtgtgc tcaacgtgcg gccgcgacct gtcgcacgag cggtttctgc tcatcgtgcg 44040

acagcggccg ctaaaggttg ttttgcggac ggtgcgcaac gtctgctgcc gtataaagtt 44100

gtctacacaa atagagccgc accggaacct gacggtgctg cccatgctcg acataagctg 44160

atttttcttt tccgctcgta tgcgcgagtt cggactcgcg gcgcgcatgg cccgcgccat 44220

cgaggacgtg tgtccgcgcg gcgcggtgat attcgtatcc agcgccgcgt ccatgaccga 44280

ctgcctgaac ccgtcggtgt tcaagcacgc ggcgatatac gcggggcgcg tggaccgcgc 44340

gccgctgccg ccgccctcgc cggtcccggc ggaggccgtg acggagccct gtgcgataga 44400

cgccatagcg ccttacggcg cgcgcgtggt cctgctctcg gagctgctgc ggagctgcgt 44460

ggccgttcag gcctaccgcc tggcagtccc cggcgccctc gcgctcatga acctcgcggc 44520

cgacgcggcc ttcgagctcg tgggcacgcc ctacggcttt aacagcgacc gaacgtactg 44580

cttcaagctc gttgccgact gctttgctag cgtgggcgtg acaacgaaga ccaggcgcat 44640

catgggtcgc gacgtcgtgc tcagccagga cttcctggag agcggcatgt ggaccaaggt 44700

gctggactcc gccgcggagc cgccgtggct ggtctagaac agcggcggcg cgcgggtccc 44760

gagcacgggc cgcgccacct gcagccgctg ctgcagcgcg cggcactgcg cctcggcgtc 44820

ggccgtctcg gcggggtcga cgggcgtcgg agttgcggag gtggtcctga acggctgcgt 44880

gttcaccgag acgcggatgc gctccttgca ggagcgctgc tcgatgcagt tggccagcat 44940

cttcatcacg tgcaggtact ccagcaacac gaacttttcg agggtgatgc cgtcgaaggg 45000

cgacgacccc accacgccca gcgggctgga caccgcgccg tcgagcacct cgccgcggga 45060

ctccttgcgc gcgcgctcga gcaggtcctc tgtccgagcc accacactgc cgaagtcggc 45120

ggccgcgggg gcgggaacag gcgcagcagc gctgtccgcg tccgccggca tctcctcgat 45180

cttgagaccg gccgcgaact ccgaggccgc gtgcacgggc gaggcgccgc gccgcaccat 45240

gaagtcgcac agacgcgata gcgcggagga gcgcaccggc atgtcgagca ggcgctcggc 45300

ctccatctcg gcgaccgagt cggcgcacgc gtccggcgcg cccgcccgca cgagctcgtc 45360

gcagcacccc gcctccttca tgagcgcggg catgagcttg tactgcgcca tgttcaccag 45420

cccgtacttg agctcgagca ggtccgcgag ctcggaggcc atgggtcggt ttttggtgta 45480

gatgacgcgc tccacggcct ccgccatgtc cacggcctgc atgagctcgc cgacgagcac 45540

gctggccacg agcgtggcca gcgtgacgcg cacggtgggc acgcagaccg cgaagaagga 45600

ggtggagtgg gtgaagcgca tgagcgcgcc gtgcagacgc gcgaggtccg cgctgttgcc 45660

cgcgtgcacg aagcgccggc gcagccgcgc cagcgcctcc acaaggtcct ctcgcgtggt 45720

cacgcgcacg ttcgcgatgc acaggtcgtg gatcgcgttg gcgatctgcg cgcggcgctg 45780

cggcgagctg ccgggcagca gccgcgcctt ggcctcgacg tcgacggtgc tcgagagaca 45840

gccgcaggcg gcgccgcgga cgacgaactt caacaacgac tcgaacacgc gcgcgcccgc 45900

gcggggcgct tgcttggacg actccattta ctttaaataa tttacgagat caaaataaaa 45960

tgactctgcg catcaaactc gagaagctca agcagatcgt aacttacttc tcggagttca 46020

gcgaggaggt ctcggtgaac gtggacgtcg gcgatggcct catgtacata ttcgcggcgc 46080

tgggcgggtc cgtgaacatc tggaccatcg tgccgctcag cgcgagcgtg gtatacgacg 46140

gcgatgtcag ccgcgtgttc aacctgcccg tgctcaaggt gaaggcctgt ctgtgcagct 46200

tccaccccga ctcggtggtg agcctggagc ccgacctcga ggacaacgtg gtgcggctct 46260

cgagccacca cgtggtcagc gtggactgcg acaacgagcc cgtggcgcac cgcacgaaca 46320

ccgccatctg cctgggcatt aaccagcgca agtcctacgt gttcaacttc cggcgctacg 46380

aggagaagtg ctgcggccgc accatcgtca acctggacct gctgctgggg ttcatcaagt 46440

gcatccacca gtaccagtac atcacggtct gcttccgcga caagaagatg gtgctgcaca 46500

cgcccgggaa ggtggacaac ttcttccgcg agtactccat gaccgagtgg gcgcccgacc 46560

tcgagcgctt ctcgttcaag atccccatct cctccgtgaa caaactccgc ggcttcaaga 46620

agcgcgtggt catgttcgag tcgcgcgtgg tcatggacgc cgacgacaac atcatcggca 46680

tgctcttcac cgaccgcgtg ggcatgtacc gcgtgaacgt gttcatgtcc tttcaggacc 46740

ggtctctttc atgcgactaa atactcatgg gcgggtcggt gagcctgccc tcgcgggacc 46800

tgccgccgcc ggtgcgcacg ccggagatga acatcgtgcc cgagcgcgac ctcgcggaca 46860

cgatggcgcg cctctccacc gcagacccgc cgcagccgct gggcgtcggc gacgacgcgc 46920

gcatggccgt gctgaagacg accttccccg agttcgcgat atcgcggccc gcgacgggca 46980

tgctcgccgc gcagcgaatc aggtacgacg gcgacccgcg cgtctgctgc ggcgggttcg 47040

ggatctcgca ttactgggag aagggggcgc gccgatcgaa cgtcgcgttc gagggcgcgg 47100

cgctgcgcac ctgcgacccc acgcgcttcg acgcgggcgc gtgcgacgcg ctgctcttcc 47160

gcgagtgcgc cgccggcggc gtcgacgcgg acttctgcgc gcactggatc aacgcggccg 47220

tgacgcggcg cacggaccga cagtcgcgcg cgcggctgaa cgacatgttc gtgcgcgatt 47280

gccaaaacga cgccgcccgg cctcactgcg tggcctggat ccgcgcgatg cgaagcgcgc 47340

gcgcgacggc ggacgacggt ctaatagacg ccgtgctctc ggtgcagagt cccgagttca 47400

agggcaagca catgcgctgc agctacccct cgccggccac tctcgccatg gccgcgaacg 47460

tggacgagcc gcgcgagtgc tgggaccccg agtgcgtggc cgggaacgtg gacttcatgc 47520

taagcgataa ctacacgaac ctgggcttgt gtcggctctc gcgctgctcc atcggcgtca 47580

cacacctgcg gattgacgcg cgttcgcggc tgcgcatgcg gtgcgccggc gcgcttgccg 47640

ggctcacgaa ggcgcccgtg aaccagactg tcgtcgtcgg cgacaacctc gcgcgcgcct 47700

tcgagccgcg cgtggaaacg ctcagcgtgt tggcgctgtg cgtggtgtat ctgctaattg 47760

tctggctcta aatgggggcc gccgccagca ttcagaccac cgtgaccacc gtcagcgagc 47820

gcatccgcaa cgagctcgag cagagcgcga gcgctagcgc gaccgccgac tgcgacgtca 47880

ccatcgggag tctgattatc cgcaagaacc taggatgcag cgtttccgtc cggaacatgt 47940

gctcggccaa cgccggcgcg cagctggacg ccgtcatgaa ggccgtgagc agcaccttca 48000

acgacctctc gtcggaccag aaggcctacg tgcccgggct gctcacggcc gcgctcaaca 48060

tccagaccac ggtgaacacc gccgtcaagg acttcgagac gtacatgaag cagacctgca 48120

cggcggacgc ggtcgttcac aacaaaatca agatccaaaa catcgtcatg gaagagtgcg 48180

cctctctgcc agggagtccg gccacgcacc tggatttcgt gaacaccggc acggccgtgg 48240

gcaactgcgg cgtgaaggcc gtgatggacg tgctcgcgaa ggccagcacc accgtgcgca 48300

acgaccagga ggccggcaag ggctaccaga ccatcatcat cgcgatcgtg gtcgccatcc 48360

tggcggccat cttcgcctgg tacgcgcggc acatgctatt catgtccacc tccgacaaaa 48420

tcaagctcga gctcgccaag aagcccgtgg tgcactggac cacctacctg gacaccttct 48480

ttacggaatt tccgccgtcc gtctagatac gcgcaacatt gaaacattat atccacctct 48540

caaacggcgg tatggtccga cgcgtcctcc tcgagcgcgt ggacggcatc gtcgagcact 48600

cgcgcgcaga ccgacgctac ttggaggcca ttcagcgaca cctcgagggg tctacgcccg 48660

ggctgcggca gatgtggcgc ttcctctacg acctgctgct gacggtgttc gtcgtcatgt 48720

acatcgtctt ccgcctaatc gtgcgcaacc ccggcatctg cgccatcctc gcgctcgcgg 48780

ccgcggtgta ctacctgttt ttgtgtctct ttagcatgga ctgatggcga tcacagacag 48840

accatcgccc gcgcgcgcgt gaccagctcc ggcgccgcga agacgtcctg caccgggaag 48900

tcgtcgatct cgaacacgga gccgtccgcg gaccagatca cgcgcacgtt gtcgctcacc 48960

gagacctcgg tcagcgtcac gcccagcaca accgcgtcgt tggtgctcac cagcaccagc 49020

gcgccgggct ccgcgcgccg gtgcagcggc ggccccgaga ctgagcgccg ctgcacgcgg 49080

aacatgtccg cgaactgctt cgagagcaag tccaggtggt tgcggatgat ccactcgaag 49140

aagtacgcgc aaccgccgcc gccgcacagg aagcgcgaac ccgcgggcat cagcagccgc 49200

acaacgtcca tgtagcaggc ctgcggcagg ctcgcgcggt acagccgcgt cttcggcgag 49260

agcaccacca ggctggaggt gctcatctgg aagaccagct ggctaacgga gacggtgagc 49320

gtgcacgcgg gcacggaaac cacgtccagg cagatgtcgt ccagaaagat gctccgctgg 49380

tagaggtggt acaggatggc cacgatctga aaggccgtgg cgtcgctgat ggcgcagggg 49440

cggtcggcgc agcgcatctg cgcgcaggac cagcccccga aggactcgaa gcagacggtg 49500

agcatgcccg tgctcggaca gtgtggcgag cgccgacaca ccggaaagcc cacggccttg 49560

cggcagcgca ccatggtcga gagctctatc cagcagcctg cctcctcctc gcccatgccc 49620

atggctaccg gcgtgaaggc cgtgacgtcg tcgcagatgc gccgctccag aaaccccacg 49680

cccgaggagg ggtgcgcggc cggcggcgag gtgatgcgcg ccgggacgcg gctcggagcg 49740

ggctcgggag gcgagctgcg ctcgacccgg gcagtcgccg ccggccgcga tgccctgcgc 49800

gcgggcgcgc gctcgcgcaa cttgtttgac ttgctggcct cgtcgctagc gtcatcgaag 49860

cggtcgttcc tgtcgccgcg gacgtccgcc tcgtcgcccg tcggctgcgc ggcgggcgac 49920

gtgccgtccc gcgtacggcc cgcgttcggc gcgaatgtca cgcgccggtg cacgtacggc 49980

tccgtagagc ccgtgggggc gccgcgcccg cgcccgcggc ggaaggcctg ccgggacgcg 50040

ccgaagcggg cgaactcccc cttcgcccgg cccctttttt cttccatgat atttatcaca 50100

aaaaaaactt ctctaaatga ccaatctgct ttcgttggtc gacccggagg acctggcctt 50160

ctgcgccggg ttcccgtcct tcgacgagac catgctcgtg atcgcggggg cgcgagtgcg 50220

cttcccacgc tcgctgctct cgctcttcaa cgtggtgccg cgcaccatga cgcgctacga 50280

aaccgagctc gtgggcaccg agatggtggt gggcgccgtg ttcaccaccg cgtacaacgt 50340

ccgccgcaac ctaggcctcg gcgaggagcc cgtgaccatg cgcgacatcg agaagtactt 50400

cctggactcc gagaacgagg tgctcacgct catcgtgcac aacaccgact tttccgccat 50460

gagcggcgtg cgccggcgcg gcggccggcg catcgccaac cccgtcatct tccgcagcgg 50520

gtccacgccg ctgctcatcg tgatggagtc gcgcaagaag accaacatct accgcgagcg 50580

caccgcggag caggccaacg cctcctacag ggaggtcggc tcctcgctcg cgctggtcac 50640

tcggtacgcg ggtctgcagc tggttgacgt gcacacgccc agctccgtgc taacggtctc 50700

cgccgtctac ggcttcaccg aggacaaggg gctcaagaag ctgggctccg acaaggagct 50760

cgcggactac cagtccacgc cgctcaccga ccccatccgg ctcagcgact tctccaatat 50820

attcgacggc gtcaagaaga gcatccagct cacgaacgtg cccgtgccct ccaccggcgc 50880

cgaggccgcg ccgtaggctt tcatgcgcga taaatcggat ggcggcgccg acgacgcccg 50940

cggtgcacct cacgccggtg ttcgtggagc ctacgatcgc gcactcgctg ctgcgcgcag 51000

agtcctacct cgcgatcgcg gtccttgagc tcgtgctcgc gctcgcgctc gcgctcgtct 51060

tcttccgcga cgagctaggc tcgctattcc gctgcgcgcc gcgagcgcct tcgccgctgg 51120

acgcgtacct gcaggcgagc ctcgtctgcg acggcgacgc gctgctgatc gagctgcccg 51180

agggccgggt gccggcgctc gcgctggacg ggcggcccgt cgcgttcccg gggtgcgaga 51240

gccttttgta ccgcataaat ggaccacgaa aagtacgtct tgtcgatgtt cttggaggaa 51300

gataactcct tcttctcgtt cgtcgccgcg ctgtccgatg acgaggcgct cggcgccgtg 51360

cagtccgctg ccgccctcct ggacttcctg ctctccgtgg tggtccgcgg caaggagaag 51420

ctcgccgccg cggggcacca ctacgactcc atcgcggacg gacgcgcgcg cgccgcgttc 51480

gagttccgag acctgcgcga gctggcgcag ctcttcgacc ggcggccctg cggcgtccag 51540

gaccgcgtgc gtgtgcgcga cgggcccgcg cgcgccttcg tggacgcggc actggggctc 51600

atgcgcgagc gaggcttcga cggcacgcag gccgcggagc gcgcgcgcta catcgcgccg 51660

aacgatctgc ccgcgctggg ggcaatatcg gccacgctct cgccgggtct ataacgtaaa 51720

aaatattagt aaaattctga aggtccgtgt gtttcgcggg cggccaacaa accagtcgct 51780

taaatggagg gggtggaaat ggacaagccg ctcctctact tcgacgagat cgcgggcgcg 51840

cgcgactacg acgcggcctt cgcggagaag cacgagccgc ccaagatccc cggccgcgga 51900

cagatgaagc tgctggtctg cgagctcgtg tttctcaacc ggctgcacct gcacggcatg 51960

ctcgacggca gcgtcatcgt gtacgtgggc tccgcgcccg gacggcacat ctgctgcctg 52020

cactcgcact tccaggagct cggcgtctcg cttaagtggg tgctcattga cgggcgcaag 52080

cacgacccct gtctctcggg gctgcggaac gtgaccacgg tgacgcgatt cgcggacgag 52140

gcctacctcc gcgagctgcg cggcgagctg cggcgcgcca agatcgtgct catttcggac 52200

atccgctcca accgcgtgga cacagagccc accaccgcgg acctgctgcg cgactacgcg 52260

ctccagaaca ccatggtgag cgtgctcaag cccgtggcct ccagcctgaa gtggcgctgc 52320

cccttcccgg actcctggga gaaggacttc tacgtgccct gcggcaagga gatgctgcag 52380

ccgttcgcgc cgccgttctc cgcggagatg cggctgctca ccgtgtactc ggagacgcgc 52440

ccgaagctgc gtctgatcac gctcagcgac gcggtcaact atgaaaagag gatgttctac 52500

ctcaatagcg tggtccgcca gcgcgtaatt ctgaactttg actatcccaa ccaggagtac 52560

gacttctttc acatgttctg tctgctctcg tcggtggtgt gctcgtgcga atttaaatcg 52620

cccaaagaga aggtgctgag cctgcagaac cgcttcttcc gcttcctgcg catcccgccc 52680

tccatcacgc tcgggctgcg ccggcacgat gaaccgccac aacacgcggt acctggccaa 52740

gatcctctgc ctaaaggccg cggtaagaag cgaccccttc gcggtggtaa gtagggacac 52800

cgtgcgcatg tacgacatcg aggtcgagta cggcgacctc gtgacggtgg tcaccgtcac 52860

gcacaaactc gagaccagcc gcaccgtctt ccaggtcttc aacgagacct ctgtcgcgta 52920

ctcgccgctg ccggacgact acggcgagcc catcgtgctc accacgtaca tgcagcgcga 52980

gcacaccaag ttcccgctct ccatgctcta catcgacgtg gtcgcctcgg acatgttccc 53040

cacgtttaag cgccccaccg aggaggaggc cgcggtggtc gcggccatgc agcgcgtggg 53100

cgggcgccgc gagcccgtgc tcaagctccc gcgcatgctg gacaccgagc tcgtgtgcaa 53160

gatactgcac ctgcccgagc acccgctgcg cgtggtgcgc ttcctgcgcc gaaacatgtt 53220

cacgggcgtg gaggtcgccg accgctcggt gtccgtggtc ctcgactgac gaagggcagc 53280

acggtcagcg aggccgccgc caccaagcac agcggcagcc acgcgcgcgg gtccgccacg 53340

ggcacgaaga cgtgctggtt caggtacttc gcctggaagc gctccgcggt ggagtccacc 53400

ttggacccgc aggcgttggt gaggcgcacg accgcgtccg cgacgcgcac gtccccgagc 53460

gatatcacgc agtcagagac gttgcacccg gcgatgtttt tcttcagcgc gcgcggcagc 53520

agcgcgtccg cgcgcttgca gggcgcgtac cagcagtagt agggcaggcg cgtgtcgcgg 53580

ccggtgtcga ccacggcctg gctgggcttg aggcacgcgc agcgctcgtc gtccgggtgc 53640

gcgtcgcaga aggcgtaaat ctcctcgtcg ggcgcgtccg gcccgggcgc ggtcggcggc 53700

gccgcgcgac ggcggaagaa catctctgaa aaaatacttc gaccagaaaa cgaccaccga 53760

tcttatttca aagataaaaa tactattaat acgcactcgg agaatcatgt cggtggtggc 53820

gcgcgtgtcg tacagcctgt actcgcagag cgagataagc gccacggacg tggtcatcag 53880

ccagttgaag aacgacgagg acctgggcac ggtgaaggac ccgcgcctgg gcgcctcgga 53940

cgggtccata tgccgcacct gcgggctcac ggagatggag tgtttcgggc actggggcaa 54000

ggtgcgcatc tacgagtcct acatcgtgcg ccccgagtac atccccgagg tggtgcggct 54060

gctcaaccac ctctgcgtgc gctgcgggct gctgcgctcg cgcgacccgt acacgacgga 54120

cttggccgcg ctcagcgtgc acgagatgcg caagatgaag gaccggatga tgtccaagaa 54180

gaaggcctgc tggaacagca agtgtctgca gccgtaccag aagatcgtct tctccaagaa 54240

gaagatctgc ttcgtgaaca aggtggacga gatacccgtc cccaacgcgc tcatctacca 54300

gaagctgacc tccatccacc gcaagttctg gccgctgctg gaggtgttcc aggaccccgc 54360

gaacctgttc tacaaggagt acatgcccgt cccgccgctg ctcatccggc cggcgatcag 54420

cttctggata gacaacatcc ccaaggagac caacgagctc acctacctgc tgggcatgat 54480

cgtgaagtac tgctccatga acgccgagga gcaggtcatc cagcgcgccg tgatcgagta 54540

cgacaacatc aagatcatct cctcgaactc gagcagcatc aacctctcct acatcatcgc 54600

gggcaagagc aacatgctgc gcagcttcgt ggtcgcgcgg cgcaaggacc agaccgcgcg 54660

ctcggtcatc gggcccgact ccgcgctctc ggtgtgcgag gtcggcatcc ccgactacat 54720

ccggaacacg ctcacgcaga aggtgttcgt gaactacctc accagcaagc gcgtgcgcgc 54780

gctgttcgag gaccgcgcgg tcaagttcta cttcaacaag cggctgcgcc agctcacgcg 54840

catcaaggag ggcaagttca tcaaggacaa gatccacctg ctgcccggcg actgggtgga 54900

gatccccatg tccgagggca cgaacgtgat attcggccgc cagccctcgc tgcaccgaca 54960

caacgtcata tcctcgaccg cgcgcgcctc gcccggctac accatcaaga tcccgcccgg 55020

gatcgcgaac tcgcagaacg cggacttcga cggcgacgag gagtgggccg tgctcgagca 55080

gaaccccaag tccgtgatcg agcagagcgt gctcatgtac ccggtgacta tcttcaagca 55140

cgacgcgcac ggcgcgccgg tgtacgggtc catccaggac gagatcgtgg ccgcgttctc 55200

gctgttccgg caccagaacc tctcgctgga cgaggtgctg aacctgctcg ggcgctacgg 55260

gcgagacttc gcgccggagc ctggccagaa gaccttctcg ggcgccgacg tcttccgatt 55320

catgataggc gcggacataa acttcaaggg cgtgctcgag aacgggcgcg tggtggcgcc 55380

gaacgtcgac agcgacctcg tggtggccat gcgcgcaacc tcgctagcgg ggctgatcgc 55440

ggactacgcc acgaacgtgg agggcgtgcg cttcgtggac atggcctcct acgtgtacaa 55500

gcggtacctg gccatctacg gcttcggcgt gaccttccgc gacctgcgcc cggacccgag 55560

tttggttcgc cggctgcacg cgctgaacac cgagaagata gagcagatca aggacgcgta 55620

ctcgcggtac ctgcaggacg tcgcggacgg gaagctggtg ccgatggcgc ccgcggacga 55680

ggccgacgcg ctggactcgc tgctggccaa cctgaccaac ctcaacgtgc gcgagatcaa 55740

cgagtacatg cgcgagacgc tggagcgcaa ccccgataac agcctgctaa agatggcgcg 55800

cgccgggtac aaggtcaacc ccacagagct catgtacctg ctgggcacct acgggcagca 55860

gcgcgtgaac ggcgccgtcg ccgagaccaa gatatacggg cgcgtgctcc cgtacgcgtt 55920

ccccgactcc gcggacccgg aggcgcgcgg ctacatcatc aactcgctca tgaacggtct 55980

ctccggctcg cagttctact tcgcgatgct ggtggcgcgc tcgcagtcca cggacatcgt 56040

ctgcgagacc tcgcgcacgg gcacgctcgc gcgcaaggtc atcaagaaga tggaggacac 56100

ggtcgtggac gggtacggac agatcgtgag cggctcggta ctgctcaagt acgcggccaa 56160

ctacgcgaag atcccggggt ccaccaccaa gcccgtggag ctgctcttcc cgcacgagag 56220

catgacctgg ttcctggaga taagcgcgct ctggacgaag atccggcacg ggttcgtgcg 56280

catgcaccgg cagcgcctgg ccaccaagat cctggcgccg ttcaacttcc tggtcttcgt 56340

gaaaccggcg ccctcggagg cggaggcgct ctccgcgcgg gacctgtacc acatgatcca 56400

gcgcgtgatg aacgacgtgc gcgagaagta cttcttctcg ctggcgaacg tggacttcat 56460

ggagtacgtc ttcctcacgc acctgaaccc ctcgcgcgtg cgcatcacgc gcgcgaccgc 56520

cgagctcatc ttccgcaagc tgtaccagaa gctgaacgcg ctgctcggcg gcggcacgcc 56580

cgtgggcatc atgtccgcgc aggtgctctg cgagaagttc acgcagcagg cgctctcgag 56640

cttccacacc accgagaaga gcggcgccgc gaaggtgaag ctgggcttca acgagttcag 56700

caacctcatc agcatgagcc gcaaccacac cgagatagtg gcgctgaccg cgccgagcgc 56760

ggacaagctg atgccgctga aggtaaactt cgagttcgtg tgtctgggcg agctcgtgcc 56820

cgagatcgag acccggccct cgggacggcc ctccgtgcac cgcgtggaca tcacggtgca 56880

ccgcctgcgc atcaagcgcg cgcacctgac cgaggtcctg gtggacacca tcatcgagcg 56940

cttcgtgtcc ttcaacgtgc tcgtgaagga gtggggcagc gacatgaccg tggagggcga 57000

ccgcgtcacg tacacgctgc tgctgcgctt cgtggagccg gagcagctca acttccacaa 57060

gttcatgctg gtgctgcccg gcgccgcgaa caagggcaag gtgagcaggt tcaagatccc 57120

gatcaccgag accacggtct acgacgactt cgacgccgcg cgcaaggcct accgcatgaa 57180

catcgagctc atgagtctga aggagctggg gatattcgac ctcgaggacg tgaacgtggt 57240

ccccggcatg tggaacacct tcgacatatt cggcatcgag gccgcgcgcg ggcacctctg 57300

cgagagcatg ctggacacct acggcacggg cttcgactac ctgtttccct cctgcgacct 57360

gctcgcgagc ctgctctgct ccgggtacga gcccgagtcc gtaaacaagt tcaagttctg 57420

gaacgcgagc gcgctgaaga aggccacctt cggcgacggc cgcgcgctgc tgaacgcggc 57480

gctgcacaac cgcaccgacg cggtcgcgga caacagcagc tgccacttct tcagcaagac 57540

gccctgcgtg ggcacgggct actacaagta cttcgtgaac gtggagatgt tcatgcgcat 57600

ggagcgcgag atccaggcgc gcgtggcggc gcgcaagatg gaggagatcg aggaggccgc 57660

cgaggaggag ttctaggcgc gacggcgcct tactttgcga ccgtgtcacg acgacacgac 57720

acggttagga cggcgagtcg cagacgaaca tttttatgag ctggtagcgg aagttggcgt 57780

tttccaggaa ggcgccgcgg aggtcccgga tctcgtagta ggttttgagg aagtacacga 57840

agcgcgcggg ctgcgtcata gtcgggttct ccgcaagccg cttgtgcatc acgtacccca 57900

tggcggcggc gccgctgcgg ttgacgccgg ccacgcagtg cacgagcgtg ggcttctgct 57960

cggcctcgag gcgcgccagc agcttcacga gcgcgggcat gatggaagcg atgttcgtcg 58020

tgtcgtcgtc tctcagcgga atgtggtacg ccgttatccc cgcgggcgtc gagtacttgg 58080

acatggtcat gttaaccaga cacttgaagt cgacgccgga gtccccccgc agcacggcgc 58140

gcgcgtcctc ggcgctgccc aagtacacgt ggtccgtgag ccgcgtcatg cccgagggca 58200

gggccagcgg cggccccgcg cgcgtgcacc gcagcaggag cctggcgtac cactcgctct 58260

tatcgcccat atttatttat atgatacaaa tggcagacgt cacaacactg acggccaacg 58320

gtctgaccct ggagttcgcg cgcgagcgcg ctctgcgcag tctgcgcgcc gcgcgcacct 58380

ccacgctggt gttcttcacg ctcacgctcg cggcctcgct gttcgtgctc tggctgcagc 58440

taaccgagtt tcccgtcttc gaggagctcg gcaagtacgc gcgcatcaag agcgcggtgc 58500

ggtcctggcg cccgctggtg gaggctaaga cagagatcga gtccgacctc ggccggcaga 58560

agaccgccga ccggcccgag ctcttcgagt tcaggtgcgt ggacttcggc aagttctacc 58620

tgccggtgag gtacagcccc acgaccttcc tgccgcaagc cgtgcgccgc ggcgcgggcg 58680

atggctggat ggtgcacaag gcggcggccg tggacctcgc cgcgcagcag ttctgcgagt 58740

ccgtgctgcg gcaccgcgcc aacaacgtca tcacatgcgg gtcagagatg atgcggctgg 58800

tgggctacag cggctacttc gaggacgacc actggtgcgc cgcgacgtcc ggcgtgctga 58860

cgtgaacgat cacacgatgg ccgtgaccag cagcccggcg atgaaccaca gcagccgcga 58920

gttcggcagc agcagcacga gcaccagcag gtacgccagg atgaagatgt cgaccacgtc 58980

cacgtcgaag agccccatga aggagaagag cggcgtggtg aggaagtaga tggcgccggg 59040

ccagaagcgc gccagccacg tggcgagcag cgaccacagg gagggcgcgc cgctgagccg 59100

cgtcttcacc tgtatgtagt actcggggta gaccacctgc tcggcgccgg agagcaccac 59160

gcgcgccaga gagagccgct tctccagcgt gaacacctcg gtgagcaggc cgctgcgcag 59220

ccctccctcc ttgatgatcg cgtcgtagag cttcttcatg ccgccgacgc tgatgatgta 59280

ggcgtctagc gagacgtcgt acccgccggg gtagaccatg agctcggggt cgccggtgcc 59340

ggggacgttg gtggccagcg cgccggtcat gtaggtctcc ttgagctgcg tcatgtacca 59400

gccgttcgcc ttcatcgcct cgatgagcgg cttcaccatc tcgggcttgc ggaaggtcat 59460

gtcgttgtcg accaccagga tgaagtcatc gtcggagtac ttggtgggga cagtgccggc 59520

cgatatgctc tcccagaggt tgaggtggtg cgctgcgcgg cgctgcatct ccttcggaca 59580

cgtggacttg cacatgtccg tgaagaagtg cgggtagtct ttggagtcca cgtctttcca 59640

ttccaccgcc ttgagcacgt ggtcgccctt ggggtgcggc gcgggaggag atggcttggg 59700

tgccggcgcg ggggccggtg cgggggctgg ggcaggagag ggagcaggcg cgggttgagg 59760

cttgggcggg tcgtcggcga ggcccaccag gtacggcagc gtggggaaca cctccttggt 59820

cccgcggcct tcggcaaccc cgattatgta ggccgtgatt tcgggtggat ccatttagtt 59880

attaaaatta atcatataca actcttttat ggcggctatg gattcggcta tccagtcctt 59940

gaccgagccc acgatgcccg ccaggaacag gaagaaggcg aactccaggt ccacgcggtt 60000

cagagagtcg ctgaagtaca cgaagacgtc gctgtccggg aagaagctgc gccggaacat 60060

gttgtacccg ttgaccttgt gcgcgacgtg ctccgcgctc agcagcgtct cgtcgaaggg 60120

gtacgggtcg ctgaagcgga acacgtacat ggccgggttt gcgtagtagt acttcatggt 60180

gtttgtgacg aagaggctcg ccagcgagat gatgattttt ttcttctcga tctcgatctt 60240

gatgtggtcc tcgaagcgct tcatgttgta ggcgttggtg tcgtgcacgc ggatgagcac 60300

gcgcgagtcc gacatgatgt cctggaactc cgcgcgcgcg tcggggctct cggcgggcgt 60360

ctccgcgggc cgcgccacct ccgcgcacac cgtcggccta gcgcgcggcg gcgtgcgcat 60420

gggccgcgcc cccacgcgct gcgaagcgaa aaactccacg gcgcgagcct cgcccgcgtc 60480

cgcgtacgac tccaccaggt agttgcggct gcgcgtggtg cggccgatgg tgttcagccg 60540

gtgcagctcc gcgaccagcc ggcggtagtg cgcctccagc tcctcgggca tgatggaggt 60600

gtacacctcg gtgagcagca tcacggtgtc gaagtcctcc ttgccgcaga cgcgcgtctt 60660

cacgaggaag tggtgcacag ccgtcgcgat agagagccgc agcgtggact cggtgacctc 60720

gacgctggcg tccttggtct tcttcgcgct ccgcgaggcc atgaacgaga cgaggaagtc 60780

cgcgctgctg ttgagcacga tgaccagcgc gacgatgaag ttgaggttca gcgtcttcgc 60840

ggactggaac agctcggtgg ccgacgcgtg cacgtcgagc aggttcgcgg agagccgcag 60900

gaagaacacg ccgcgcttga tctcggccgc gaagcgacgt tcgtactcct gccggcgcgc 60960

gttgatcgcg atgaggaagt tcaggatgag ccggttgatg ttgtacttca cggcccaggt 61020

ctgcgtcttc atgatggtgt cgaaggacat cacgatgttg aagatgaagc gctggctgtg 61080

cgagaagtag ctgtagggct cgctgaggaa gatggacttg ttggtcgcgg gcaccaccac 61140

gcccgcgcgc gcgccggacg cgtcggtgtt caggtccggg atgttcatgc cgcagatgcg 61200

gcagtaggcc atgccgtcct caaagtacac gaactcctcc acgaactcgt tgatcttggc 61260

gaagtagtcc acgtccacgc gcatcgcgac cgcgagccgg atctggtgct cgcagggcgg 61320

cgactcgaag cgcaccccct cgccccagcc cggcggctcg cgcacgacca gcgcggtgcg 61380

cgaggccggg cggaacttgg cgtcgcgcgc gttgagcagc gccgggaaga ggtcgcagag 61440

gtgccggctc gagaggaaca cgtacttgta cagcagccgg cgcgcgtccg cggccatggc 61500

gtccacgaag gcgcggcccc actccgcgac cgcgggctgc tcctccgcaa agttgttcgg 61560

gtagaccttg tccgtggccg cgaggaacac cttcttcacg tcgaggaagt cgcggatcac 61620

gatggggacg cgcgcgccgt cgagctcgta catgaacacg tagcgcaggt tgagcttgcg 61680

ccgcgagacc gggatgccga tgtgccgaca caggtacgcg aactcgaggt acttcttcga 61740

gaagcggatg cggtccaggt tcttggagac gtactgcagc atgttgcgca tgttgaaggg 61800

gatctcgcgc acggcgggct ccgcggcgtc gtcgaaggcg gtgcgcagat cgctggtgcg 61860

ctgtacgacc acggcttcgc cggtggcgtc gtcgtgcacc agcacgttaa cgcgccgctg 61920

ccggatgacc atgtcgaagg tgttgaagaa catctcgtac atgctgtgcc gagtgtcgtc 61980

cgcgatgcgc tcgcccaccg agaggctcgc ggtggcgtcg tcacgcacct gcttctcgaa 62040

cttgtacccg atgtaggaga atatcgagat cagcgtggcg tcgtcggcgt cggggttctg 62100

ctccatggtc gcgaagagca ggcggatgtc gtcctccgtg atcgcgtcca cgttgtacag 62160

gttgaccacg aagatggact tgttctcggc gatgaagtcc gtgtaggact tggtggccgt 62220

gttcgggtcg cgcatgtacg cgcggatctt cggcacgatg ctcgcgagga tggactccct 62280

ggaatccatt taaggacggc aagggcgcgc gagaccgtct caaaactgaa atcgtataaa 62340

ctcttaaaaa atcggtattg aaagtacgca ccaccaaata aagcgtcgag gtcgggcatg 62400

tcttcgtggc gactcaaaat gagcaagtgt tcaggttcca gcagcgtcca gactctcgag 62460

gatctgcgta atcgtcttcg ctccgaggcc ttgggcaacg attgccaaga gccccgcgac 62520

gacctcttcc ccagcggcga ggagtgtctg gacatcgacg ggccctgccc ttgcgatgag 62580

gcggagcagg agatcgacca ggagcagttg cccgtgcccg aaaccgtgcc cgaaccgccg 62640

gccaagactc ctaagcgccg accagtgaag aaggataagg cagataaggc agataaggac 62700

aagtcgacca gaggcgcaaa gaaaccgtgc ccttcggacg acaaggatga cgagctcaag 62760

agcaacgacg tcgacaacaa cgaagagtcc ggcgacacag acggcggcgc gagcgcccga 62820

agccccagcg acatcgacaa cgtggacgaa atggacgact ccgacctcat ggtggcgttc 62880

tccaccatcc tcgcagactt caaggacctt acccaacgag tgaaagctct ttcgtccgtg 62940

ctcacggacg tgcaggcggc cggcatacgc aggagcttct cgacgctcgg caaggctctg 63000

acggaggcgg cccacatcgc caacaccgga tctaagccag tcactgcgcc tcgcaagaag 63060

aaggccgccg cctgcaagaa gtaggcgcac taaatagcga ggctcggtat gcgggcgctg 63120

cacctgtcag acggcaaact tttttttgac aaggagctga cgcagccggt ccccgacgac 63180

aaccccgcgt acgctgtcct tgcgaagatc cggatcccac cgcacctctc ggatgtggtc 63240

gtgtacgagc aggacctcga gtctgcgcag cagggcctca tcttcgtcgg gcgcgacgcc 63300

aagggccgaa agcagtactt ctacgggcgc ggacacgtgg agcggcgcac ggccgtccgc 63360

aacgccgtgt tcgtgcgcgt gcaccgcgtc atgaacaaga taaacgcctt catcgacgac 63420

cacctcgcct ccggcagcga ggccgaggcg cagatggccg ccttcctgct catggagacg 63480

agcttcttca tccgcgtcgg caagacgcgc tacgagcgcg agagcggcac cgtgggcatg 63540

ctcacgctgc gcaacaagca cctcgccgag gccgagggcg gtgaggagat ccgcgtcgcc 63600

ttcgtgggca aggaccgagt cgcgcacgag tttgccgtgc gcgaggggca gcggctcttc 63660

gcggcgctgc gtcggctctg ggacccgggc gcgcccgaca ggctgctgtt cgaccggctg 63720

agcgagcgcc gcgtgtacac cttcatgcga cgcttcggca tccgcgtcaa ggacctgcgc 63780

acctacggcg tgaactacac cttcctgtac aacttctggt ccaacgtgcg ctcgctggag 63840

ccgcgtccct ccgtgaagtc gctcatctgc acctccgtgc ggcagaccgc cgagacggtg 63900

gggcacacgc cctcgatctc gcgcagcgcc tacatggcca ccgcggtgct cgagctcgtc 63960

agggacggcg cgttcctgga cagagtcgcc gccaccgaca cgctcgacga cttcgtggac 64020

atcgtcgtgg actatgtaaa taactctgag caggtaaatg gatgaggcgc tgcgcgtggc 64080

ggcgcgcgtc gtggacgggc tccggccgct ggacgtggcc gtgtgtctcg cgcagctgcg 64140

cggagccgcg cccgagcgcc gcttcccggc gctcgacgag tgctccggcg aggccttcct 64200

ggactttgag ttcgccggcg gggacgtggc gtcgcggtac ctctccgcgc acacgcgcga 64260

gctccgtgcg gcggagcggc gcgagcacat ggccgcgatc gcgcgctgcg tcaccgaggc 64320

cgacctggcg ctcgcagacc gcccccgggg caaggcgcgc gcggcgctgc gcgtgtgccg 64380

caaccgcgag aaagtcgcgc gcttggcgag gctgctgcgc gacgccgaga gcagcggcgc 64440

ggacttcgcc ttcatacgcg cggccgtggc gtagcaaaac gtaaaaacaa cacattccct 64500

aaatcgccat ggacgcgcca agtctcgact gcatgctcgc cgcactcgcg gcgaaggcgg 64560

cctcggtgga ccgaggcgct cccgaggacg aggtgcacca cgaagtggag ctcgtgctcg 64620

tggacccgcc gctgtccacc ctggccgcca cgctgcgcct ggcctcggag acggagtcct 64680

tcatcctctt cacggtgacc gcgctcgcca aggaggaggg caagctgcgc gcgcgcgtgc 64740

ccatgtcgcg cgtcgtcggc ctggacgtga agaacgtgca gctggtcaac gccatcgaca 64800

gcatcgtctg ggagcgcaag gcgctcgtgg aggagaccgc gctgcaggaa ggctgtctgc 64860

tgcgccactc caccgagcgg cggcacctct tcgtggacta caagaagtac ctctcggcca 64920

tccgcgtgga gctggtaaac cgcgtgcgcg tgcgctccaa agaagtcgtc gcggacttca 64980

agttcaagta ctttctgggg tccggcgcgc aggccaagag ctcgctgctg cacgcactca 65040

accaccccaa ggtgcggccc tcgcccacgc tggagttcga ggtcgtcccc gcgggcgagg 65100

ccgtggacga ggccgccgtg ctcgcggagc tgcgcgccgt ggcgaaggcg ctcttcatgg 65160

cgcccaccga cgccgtcttc ctggcgccgc cggccgagat gccggtgcgc acgctcatgc 65220

tgcagaagca ggagatcccc gcgctagacc tcgacggcct tttcgcggtc tccaagacgg 65280

acggcgtctc cgcgagcgtg tgcgtggacg aggacggcgt cttctgcgcg ttctcgcacc 65340

tcgcgtacac catccggtac ccgctcgcgc gcgaagtgca gggccggtac cggctctggt 65400

gcgaggccgt gcggcccgtg ggcgagcgcg tgtggtccat gttcgtgctg gtcgtggagg 65460

agcctgcggg cgatgaccgc gtcgcggccg tggccggcgc cgtggaggcg ctgcgcggcg 65520

tgtgtgcacg cgtcgagttc aaacctaagc gcgtggacgg gcccttctcg gcgacctccg 65580

agctggtgga gcacatcaag agcgcgctgc agacggagcc agagggcgtg gtgctcttct 65640

acgcgcgcgg agagaagtcc aagcgcgacc tcaaggtcaa gcgcgacaac acggtggacc 65700

agaccacgaa cgtgatgttc cggtacatgt ccagcgagcc catcgtcttc ggcgagggct 65760

ccaccttcct ggagttcaag cggtacagca acgaccgcgg gttccccaag gagtacggcg 65820

cggggcgcat cttcctgcgc gaggacgtgg tctaccacaa caacatctac tgcatcgagt 65880

tcacgaagac gcacctggag gtgggcctcc gcagcgtggt cgtgcccgtg aagttcatcg 65940

gcgagttctc gcaggagggg tacctgctgc ggccgcgcct ggccaaaacg gagtgctact 66000

tccgcaaccc ctcattctac gggaaccagc actcggtggt gctcgagcac actcgcgacc 66060

agctgctctc ggtgggggac gtgttcgacg agagccgcat ggccgccgtc gggcagacgc 66120

tggccaacga cgccttccgc ctgaacccgg acacgcccta cttcaccaac cgacgcacgc 66180

gcgggccgct gggcgtgctc tccaactacg tgaagacgct catgatatcg ctgtactgct 66240

cgaagacctt cctgaacaac gccgagcgac gcaaggtgct ggccgtggac ttcggcaacg 66300

gcgcggacct ggagaagtac ttcttcggcg agatcgcgtc catggtggcc acggacccgg 66360

acgcgcgcgc gatcgagcgc gccatggagc gctacaaccg cctcaacgcg gggctgaagt 66420

cgcgctacta caagtttaac tacatccagg agaccatccg atccgagacc tacgtggaga 66480

gcatccgcca ggtcatgtac ttcgggcgct tcaacatcgt ggactggcag atggccatcc 66540

actactcctt ccacccgcgg cacttcgcca cggtgatgcg caacctgcgc gagctcaccg 66600

cgcccggctg caaggtgctc atcaccacca tggacgggga cttcctgtcg acgctctccg 66660

agaagaccag cttcgtgatc aaccgcaacc tgcaggagag cgaaaacttc atgtcgatcg 66720

agcgcgtggc cgatgaccag gtcatggtct acgcgccctc gaccatggcg cagcccatga 66780

cggagtacat cgtgcgccgc gcggacatcg tcaagctctt cgcggacaac ggcttcgacc 66840

tcgtggacca cgcgaacttc gagaccgtga tccggcgcag ccgccgcttc gtcgagggcg 66900

tctcgcggct ggagacgcgg ccctccacca agaacttctt cgagctcaac cgcaacgcgc 66960

tcacggagat ggacagcacc gacgtggccg cgctgctaaa gatctacgtg ctgtacgtct 67020

tcagcaagcg gtaggcagaa ccagggcgtc gattccgcgc ccgcgccggc gcggaaggcg 67080

ttgaacagct ccgccagcca ggctgcggtc tcgcgcgcgt cgatcgggcc gccgtcgtcc 67140

ggcggcggct cgcgcgccgc gcgcaacacc agcgtctccg cgggcggcag aggctccaga 67200

gcctcgaaga ccgcgcggct cgggaacagc gcgcgcatca tgcgcgcgcg gtggccgaac 67260

accgccttga ccgcgcgcag tgccgagcgg ttgtccagcc gcagcgctcg gtcaaaacga 67320

tgcacgcgcg cgggcgcgcc gcggtggtcg cgctccacga gcacgtgccg ccacgccagc 67380

gccgcgccga cgcggtccag gctgggcgcg agcgccacca ggcttttcag cgcatgtaaa 67440

tctccgcgca tggccgacgg ctccatttac tactgcggag gaacgcacgt ggtcgcggcc 67500

gcgccgggcg ccgcgcttgt ggtgctggac gcgcccggtg cggcggcggc ggccgcgccc 67560

gcggggcagc gcgtcttctt cgccgagtac ggcctcgaga agcgggccgg cggcccgatc 67620

acggcgcggc tgcgccgctc cgggttccgc ggcgccgcga acgcctgggc ctccgtggcg 67680

gacttcgagg ccggcggccg tccctccgcg tggacgctgc gcgcggagga ggcttcgcgc 67740

gtgccgctgc cgacggacgc ggcgctggtc ctggcctggg gcgcgcgcga ggagccgctg 67800

cgggcgtgcg tgctggcgcg cgcggcagac gcggaggcgc cggtgggcgc cgcgctcaaa 67860

gaagccgcct tcgacgcgcg ggcgccggcg gccgcgctgt tcgcggcgct gggcgcgccc 67920

gcgctcgcgc ccccgctgcg ggcgcggcta gtggcgccgc cgggcgcgcc gccgcggacg 67980

cggctctgcg agaacccggc catgctgcgc gcgttcgcgg tgggctggtt cggcgcgcag 68040

ctgggcgagg cctccgaaaa tgaaaaggta tttgccgcct ttgataaggc gaggtcgtgt 68100

ttggacgacc gctgatggcg acgcccgcga acgcgcccgc gctgctcgtc gcggcgctgc 68160

gacaccgccc gtaccgcgtg gagtaccacc cggactggga gccggtcatc gagacgctgg 68220

tggacgagta cgacgcggtc gcgccctggc tgctgcgcga cgcgacgagc cccgagcccg 68280

agcgcttctt cgcgcagctg gcgaagccgc tggcggacaa gcgagtgtgc gtgtgcggca 68340

tcgacccgta cccgcgcggc ggcaccggcg tgcccttcca gtccccggac ttcagcaaga 68400

agaccatccg cgcgatcgcg agctcggtcg cgcgcacgac cggcacgcag ggctacgcga 68460

actacgacct ggacgcggtt ccgggcgtgc tgccctggaa ctactacctc tcctgccgcg 68520

agggcgagac caagagccac gcgatgtact gggagcgcat ctcgcggctg ctgctgcagc 68580

acgtggccaa gcacgtgagc gtgctctact gcatggggcg cacggacttc cagaacgtgc 68640

gcgcgcgcct ggacgtgccg gtgacgctgg tggtgggctt ccaccccgcg gcgcgcgacg 68700

ggcagttcgc gcgcgagcgg gccttcgagg tcatcaacgc cttattggag ctcaacggga 68760

agtctcaagt ggactgggcg cgaggatttt ctttttatag tgaaaattaa tccgtggtcc 68820

taaatggcgg cgcccatatg cgataactct cacgtgttcc tcctcaagcg cctgggcgtg 68880

ccgtcttcct gccggcgctc ggaggacccg cgcttcgtgg agatcctgac tcccttcgag 68940

ctctcaaact acatcgagcg gcacccggga tgctgcctct tcgagacgct gcgcgacgag 69000

gaggactgct ccgtcgtgcg cgtcttcgcg gacgtggaca tggacagcgt gctcgaggag 69060

gaggacttcg tcgcggcgct ggaggacctc atcgtggagc tcgcggcctt cttcgaccgc 69120

ttcgcgagcg gctcctgcgg caccgtgccc ggcgaggtca agcgcgccat gctcgcgaac 69180

ttctcggtca cgcgatccac ggccgagcac aagaccagct tccacctgat cttcacggag 69240

acgtacacca cgctggacac gctggtggcg gcgaagcgcc cgctgctgga cctgtgccgg 69300

cgctcggaca acgtgctgct gcgcgcgctg gacacggccg tgtaccgccg cggcgcgacg 69360

ctgcgcgtgg tgggcacgcg caagacgccg gagtcgagcg cggtccaccg catgcagtcg 69420

cccgacgacg acatcaagga ctacctgttc acgttcgtgg agctctcgga cgcgagcgtg 69480

tacttcgagc tcgcggagcg cgagcagcac acgctgagca ccgtctgctg ggagacctcc 69540

tacatcccct tcggcgacgc gatgcggcgc gtgtgccagg cggtggtcaa cgacatcgtg 69600

aacctccgcg acatcaccga ggacaacttc ctcgacacgc cgctggtcat cgactacgcg 69660

acgcgctgcg cgctgtgcaa gaagcccaag cacaagcacg cgcaccacat caccatgggc 69720

aacggctgcc tgcgcctggt caagggcggg aacgcgcaca gctgcaaggt caagatcatc 69780

cagctcgagg gcaaccggct cttcacggcc gcgcagatca tcatcgcgtc cgaggtcgtg 69840

aagctcaccg agcgcaacga ctacatcgtg tggctgaaca actcctggcg cttcagcgcg 69900

gaggagtcgc tcatcaccaa gctcatcctg gacgtgcggc actcgctgcc cgcggactac 69960

gccaacgaca tgctgtgtcc gcgcaagcgc aaggtcgtgg agaccaacat ccgcgacatg 70020

ctcgtggaca tctccgagac ggacacgcag tacgacaagc tgcccttcac gaacggcgtg 70080

ctggacctgg ccacgggcga gttcctcacc ggcgaccgcg cgaaggcctg cgtgtgcacg 70140

gtctccaccg ggtacgcctt ctcgcgcgag gagttcgcgg ccgcggcgga ctcggaggcc 70200

atgcgccggc tggtcggcgt catcgacgac atccagccgg acacgcccga gaacgccgat 70260

aaccgcgcgc tgtacgagcg cgccatgtcc agcgcgctct gcggcgccac gaagacggtc 70320

atcgtcttct tctacggcga caccatgacc ggcaagtcca cgagcaagcg tctgctcatg 70380

tccgcgctcg gcggactctt catcgagacc gggcagaccg tgctcacgga cgtgctcgac 70440

aagggcccga accccttcgt ggccaacatg cacctgcggc gcgcggtctt ctgcagcgag 70500

ctcccggact tcgcctgcaa caacgcgcgc aagctgcgct ccgacaactt caagaagctg 70560

accgagccct gcatcgtggg ccggccctgc ttctccaaca agatccacaa ccgcaaccac 70620

gccaccttca tcatcgacac caactaccgc ccggtcttcg accgcgtgga caacgcgctc 70680

atgcgccgcg tggcgctggt gcgcttccgc acgcacttct cctcgtcggc cactcgcgcg 70740

gccgccgcgc acaacgtcga gtacagcgcg gtcaaggaga tggacgagag cctggacacc 70800

aagatccagc gcaactactt ccgctacgcc ttcctgcgcc tgctcgtgca gtggttcggc 70860

aagtaccacg tcccgcaggt ctcgctggcg cccacgcccg acgcggtccc cgacttcgcc 70920

ttccaccgcc gcgtggccga gctggtggtg gccagcaacg acgcgcaccg ccgcgcgatg 70980

gagtcgctgt ccaagctggg gtacgtgctc gtgggcggca acgtggccat gcccgcggac 71040

gccttccggc agcggctggc cgcgcacttc aacgcgcgcg tgcacggcgg cgacatagac 71100

gccttcatgt tcaagcacaa gaaggtcgtc aacgtaacgg aggagtacgt ggagtacgta 71160

ttcatcgaag atgtcgagaa taaatagacg ggtatgaact cggacgtgat aaagctgttc 71220

gtcgggcacg acgagtccgt gcccggcatc ctgccgcacc agctcgcgac cgtggacttc 71280

ctgatacgcc gcgttctaga cgacaacgtc agcgtgcttc tcttccacat catgggctct 71340

gggaagaccg tcatcgcgct gctgttcgcg atggtggcct cgcgcaccaa gaaggtgtac 71400

atcctggtgc ccaacgtgaa cgtcatgaac atattcaact acagcatggt catggtcgct 71460

aacctgttca acgcgccctt cgtggccgag aacatattcg tgtactcgac gactagtttt 71520

tattcgctaa actgcaacga cggcgtcata aactacaacg gcctcggcaa gtacgagaac 71580

tcggtcttcg tggtcgacga ggcgcacaac atcttcggga acaacaccgg cgagctcatg 71640

atggtgatca agaacaagac gcgcgtgccc ttcctgctgc tctcggcctc gccgatcacg 71700

aacacgccgc tcacgctcag cagcatcatc agcctcatgt ccgagaagga cgtggacgtc 71760

ggcgacatcg tggtgcaggg caagaaggtg ttccagatcc tgctgaacga gcacggcgtg 71820

cgcgtgatcc gcgaggtgct caaggggcgc atctcctact acgagatgcc ggacacggac 71880

atgcccgagg tgctctacca cgggcgccgc ttcctggaca cgcgcgtggt ctactgccgc 71940

atgtcgcgcc ggcaggagga cgactacctc accgtgcgcc ggctctgcaa caacgagatg 72000

ttcgagaaga acatgaacaa cgtgtccatg gcggtgctgg gcccgctgaa cctggtgaac 72060

aacctggacg tgctcttcca ggcgcaggac aaggacctgt acccgaacct gcgcatcagc 72120

aacggcgtgc tctacgggaa cgagctcacc aagctggaca tcagctgcaa gttcaagttc 72180

ttcatctcga aggtgggcgc catgcgcggg aagcacttca tctacttctc caactcgacc 72240

tacggcagcc tggtcatccg caacgtgatg ctcagcaacg ggtactcgga gttcggcggc 72300

tcgcagagca acaatccgca caccacgccc gacgggcgcg ccaagacctt cgcgatcgtg 72360

accagcaaga tgaaggcctc gctggaggag ctgctcgagg tgtacaactc cgcggagaac 72420

aacgacggtg gcaagctcat gttcctcttc tcctcgaaca tcatgtccga gtcctacacg 72480

ctcaaggagg tgcggcacat ctggttcatg accatccccg acaccttctc gcagttcaac 72540

cagatcctgg gccgcgccgt gcgcaagttc tcctacgcgg acgtggccgc gcccgtgaac 72600

gtgtacctca tggcggcggt gtactcggac ttcgacgagg acatcgtctc gctggaggac 72660

tacagcgtgg aggacatcaa cgcgctgccc ttcgacgtga agaagctctt ctacctcaag 72720

ttcaaggcca aggaaaccaa ccgcgtgtac gccatcctgc aggagctctc ggacgcgtac 72780

tccgcgcgcc cgcacccgca gctcgtggac gtggtgctgg gggagatcgt gcgccagttc 72840

ttcgcacggc actgccgcgt gcccgccgag gacgccgcgc tcgtggccgc cgtcgaggcc 72900

gttctcggca cgcgcgaggc agcggccgag tacatccgcg cgatagtgga cggacacttc 72960

ttcgtgacca acaagacctt cgggaagtgc ctgctcttcc ggcacgagcg cgacatcgtg 73020

accgtgccct tcgagctcga gcacgacccc ttcgcgtggg cgatcaactt ccgcaaggag 73080

gtcagtgtgg tgaatatata acggcaaaca taaatagaaa gactgtcctt ttgcgcgatg 73140

tcgaccttcc ggcagacggt gtacctggcg gtgacgctgc agccgcacga gctcacgctc 73200

gacttccgcg gcaacgtcgc ggaggcggtc atgcgcgagt acctctacaa ggagaagggc 73260

gggctcatgg ccaccgacat cgaggtctgc ctcggaaacg agatgccgct ggggcgcatc 73320

gtgaacaacg cggttgtggt ctcggtgccc tgcaacgtga ccttcaagta ctaccgcgtc 73380

ggcgacaccg tgagcggcac gctcaacgtc gaggacgaga ccaacgtctt cgtggactgc 73440

ggagacctca tctgccagct cggcaagagc tcgggcggcg tgaccttcaa cgagtccaag 73500

tactgcctcg tgcgcaacgg agtcgtctac gagcacggca gccgggtctc ggctgtgctg 73560

cgcgaggcgc gctccggacg cgagtccgcg ttcgtgttct ccgcagtgct gctggacggc 73620

gtccccgccg aggagaagga cgagaagaag gacgagggcg agaaggccgc ggaggaggag 73680

acgcccgcga gccccgccgc caaaaactag cattattggg ccgcgcgaac cttcgataaa 73740

tgcgcacgta cacgtcgctg ctctcgaagc tgctcaagag caaccggcgg ctcgggagca 73800

cgcgcgtctt ccgcgacccg ctgcagcaca tcagcgcgac cgcctttgtg caccggcgca 73860

tcgaccggca ccggcgcgtc tccatctgcg ccgtgctcac caccaccgac gggctcgtgg 73920

tcgcgtgccg gcgccggtac tcctttttgt cctccgagct cgcggagacg cgctcgcccg 73980

cgcggcgcgt gctgctcgca accaagcacg cggacgctct cgcgcgcctc ggcgccgcgc 74040

gcccgcgcga cgacgtcatg tttccgggcg gcgccccgct gtccggggag tcgccgctgg 74100

cgtgcgtgct gcgcgaggtc gaggaggaga ccgggctgcg cggcgaccag gtcagcgtgg 74160

acgagcggct gttcgtgcac gccttcatcg acgacctggt ctcgggccgc gacttcgacg 74220

cgatcatctt cacgggcgca gtcgcgcttt cgagcgcgga ggtggcgaag cagttccggc 74280

ccaacgacga ggtcaagggg ctggtcttcc tgcaccccga ggacgcggag ggcgtgggcg 74340

tgatggcgcg gctggcggcg ttcgcgcgct gcgcggcgcg cctgcgctgc tggggcgcgg 74400

ccgtcacgcg atagaggcgg ggtccaccac gtacacgagg cgcccgccgc tcacgcgcac 74460

ggtgggcggg tcgcccagcg cggtcaggaa gttcccgtcg tcgtcgaaga ggcgcccgcc 74520

gcgctcgagg aagcccttgc gcaccgtgac cagcgccgtg gaggtggagt accacacgct 74580

ctgcccgtcc gcgagccgcg ccgcgcgcgc gggcccgcgc gcgtccgccg ggcgcgccac 74640

cagcgcggac cagccggagt cgtcctccag cggcgcgaag tccgtgaagg cctcgcgcac 74700

ccactccagc gagcagcgct tgagcacgcg gaagagctgc gtgaactgcc gggacttgtc 74760

gcggatgagg gccagcaggt cctcgtccac ggtggcggcg ccggagtcct ggcgcgcgac 74820

cacgaagtgc acgttcacgt agcggcggtc gggcggcgtc atctcgtggc tgttcaggcg 74880

caccgcgcgg cccacgatct ggcgcagcga ggcctcgttc caggtcatgt ccaggatgaa 74940

gatgtcgttg atggagagga agctgaggcc ctcggagccg ctcagcgaga acacacagac 75000

cttgatcttc tcgccgtcgg tgttgtcgca ggcgttgaag gcgtccacga gcttggcgcg 75060

cgtgtcgcgc gtgcgcgagg agaactccac gctggagacg ccgaaggcgc ggaagtagag 75120

cagcagcatc tcgatgccgg tcacgttgac gaagggctcg aagaccagac acttgcccgg 75180

cgaggccagg atgcgcaggc agacctcggt gtacttgcag ctgcgctcgc gcagctccgc 75240

gagcagcgag acgtccgcgg aggtcatgcg gtcgccgctg acgggcgcgc cgctgcggaa 75300

gagccgcatg gccgcctccg agaagacgcg gtccttgacg gcgcgcgcga agtccaggaa 75360

gagcgcggcc acggcctcgt cgtactcctg cttggagagc acggacttgt cgggcgcgtc 75420

ctcgaaggcg aaggtggccg cgatgcgccg gtacacgcgg aagaccgcgg cgccggactt 75480

gcgctccatg gcggccgcgc ggcggtaggc ctcggtctgc ttcgcggtca tgtccacgta 75540

catcatgcgc acgcgcttgc gcgcgaaggc ggcggagccg tcgacgtcgt cgaagatgga 75600

ggcctcgttg gtgactaagt acgagcacag gccgccgagc ttgtccacga ggtcctcggg 75660

gttcgcgagc gcgccgccgt tgaagagcgg cgtctgcccg accacgccgg ggcgcagcag 75720

gttcacggcc atggagaact ccttgacgct gttcaccacc ggcgtggccg tgaggcagag 75780

cagcttcccg cggcccatgg ggatgttctt cgcgaggtag ttgtacaccg tgcgcgcggg 75840

ccgctggcgc ccgtcctcct tggtcagcga catcgagatg aagttgtgga actcgtcgat 75900

gaccacgcag acgcggctgc tcgacgaggc ggtcttcatc agcgtgaaga agcggtggtg 75960

gaagcgcggg tcgtcgtagt tgatgaaggt gcacccgggc acggcctcgg gcgcgaagcg 76020

catcatcgtc gaggtccagg gctgctccac gagcgccttc ttcacgagca cgaccaccgt 76080

ccagtccgtg aagacgtcgc gcaggtgctt gagcacgtac accgcggtca cggtcttgcc 76140

cacgcccgtc tcgtggaaga gcagcagcga gtgcatgctg tccaggccca ggaacacgcg 76200

cgccacgaag agctggtagt ccttgaggcg cacggactcc tccacgccct gcatctcgga 76260

gggcatgtgc gcggtgcgcc gcagcgcgta gtcgatgtag gccgcgtgcg cgctggtcat 76320

ggcgacggtc ggcgctcctt ttacggggtc tgtcgtctat ctattgtcgg cgcgggtctg 76380

atttaggggc agtagttaca aaaacgtttc cgctgctcgg cgcggcgttt ggaggagcgg 76440

ttgcggccgc ggcggcgcag gcgcgcgcgg cgcgtcttcg tggtgcggtg gccgaaccag 76500

cgccggtgca tgaccgggtg cgagaccgcg gccgcgcgat ccgcgctcat gcaggttgcg 76560

taggtgcggc acatgctgcg cagcacgcgc cgcgtgcgcc gctccacggc gtcgagccgc 76620

ctcgcgacga tgggaaagag ccggcgccag ccgcgcacgg cgaagagcgg gcgctcgcag 76680

accgggcgcg cgagcgcgtg gtaggcgccc agcagccgcg ggtccagcga gcgcacgtag 76740

gtctccacga agccgttgcc gaagacgatg gcctgtgcgc atagcgggtt cgtcatctcc 76800

ctcttggagg cgatggcgtc gcccacgaag gcgcgcacgc cgcagtgccg cagcaccagg 76860

cgccgccgcg ggaagtgcag gtgcgggccg agcgccgcgc gggcggcggg gatgtgcagc 76920

cgcggagaaa aacgcgcgcg tccctccatg gcatctaagc gctccgtctg ttttcagtta 76980

tatcgccgcg ggcggctact gcagcagcag cttgagcttg cgctggctct cgttctcgat 77040

gctcttggac tcggaggtca tgctctcgta gagcagcgag tgcgtgacgt agagcgcctc 77100

gtacacgcgg ctggcgaagg ccacgaagcg gtccacgaac tcgctctcta cggggtcctt 77160

gagcacgcgg aagggcacgg ccagcgcgtc gcgccaggcg gcggccttgg tgcgctcgcg 77220

cacgtgcgtc acgaaggcgg cgatggccgc gcgccgcggc tcgctggcga ccatgacggc 77280

gctgtccttg agccagctgt cgctcacgca cttgaagagg cgcacggtgc cgaagaggct 77340

gcagtacacg cgcagcgcgt gcaccacgtc ggtgccgaag agcgtgggca gcttgagcac 77400

cacgaagcgc tcctgcgtga tctcgagcag cgggcgcatc accgcgaagg tgatcgcgtg 77460

gtagtcagcc acgtagaggt tgttctcggt gaggtggttg ttggagcgga tggcgccgcg 77520

ctccttgcgg tagagccggt tgcgcgcgct gaggtcgagc acgaccgcgt cggccctgcc 77580

gcgcgctctg gagcgcacgc tggtgatgcc gtgcgcctcg agcaccttct cgacgtcgcg 77640

ctcgtcgatc atgaggtcgt gcgtgtacag actcagcatc tccgtgggca tgcggttgat 77700

gtcgttcacg cgcgagcact gcaggaagta gttggtcccg taggccaggc tgggcaggtg 77760

cccgacgccg agctgcaggt ccagcgcggg cgtcgagtcg aaggtgggca gcgtcacgct 77820

gagcccctcg cggatgctgc ggcgcacggc ctccaccgcg tccatggccg atttattgga 77880

cgcacagtct gttttcattt cgcggctact gcgcagtcac cttctcggcc acgatccccg 77940

cgtcgtagct gagccggtac acctcgttgc acaccacgac catctgccgc ggcacgtaca 78000

tgagcgggtt gtgcgcctcc atgtgcgcgg tggtcacgcg caccgccagc ttgtccttgc 78060

ccctggagac gttggagttc agcgcggtgg gcgagaagaa ggtgctgggc gtaaagttga 78120

actgcagcgt gcgcacgccg ggcgtcttgc cgaggatctc gccgaagacg cgcgagactg 78180

cgctgttctc cgagtacagc acctcgttgc cgaagcgcac gtccatgcgc gcgatgacgt 78240

cgatcttgtt cttgaagtcc acgcccttga ggaaggggtc ggccacgaag aggtccttgg 78300

cgcgcgcctc cggcgagcgg ttgtcgccgt tgtacacgtt gcgctggcag gtccacacgc 78360

ccacgggcac ggaggcgtcg ccgatgttca cggagtggat ggcggtcgtg aagcggatgc 78420

gggaggtcgc gcggctgtag gcccccgtga tggcggagaa cttcttggac atgttgtaca 78480

cgacggagtt cttcctggtg gcgaacacta ggatgttcgt gtgcaggaac acgcgcatgc 78540

ccacgggcac gtcgtcgatg cgcacgaaga cgtcggtgtc ctggatggac acgacgcccg 78600

acgggggcac ctcgactatc tccgcggtct cggggaagcc ctcggggtag cagttcgaga 78660

cgatcaccat gtcctccagc aggcgctcca cgaaggccat cacgaagtcg ccctcggact 78720

gctggaagcc ggggtacgat atgaagcggt tgttggcgtc gctgagcacg ggcttcatgt 78780

acacggacag ggaggtgcac gcgtgcacgt ccgtgatcac cgcggtggtg tggttgatct 78840

gctccacgcg ccgccgcggc atctcgatga aggccgggcg cgggcacagg ttcttgacca 78900

tgtagccgat gaagctcagc tccatggagt aggggaactc cttggcgagc ttggcggcgt 78960

cgaaggtctc gtcgtagacc atgacgcagg cgacggggtt cagcgtgacc gtgaccgtga 79020

ccttgctgtc gctgagcttg agcgtgctga aggtcttgtc cgcgtcaaag ggcgtcttga 79080

tgtaggcgtg cacgcaggcg gcctccttga tgacgtcgtt gggcgagctc ccggtggaga 79140

ggtcgttgag ctcgcgcgag aagcccgaga gctccatcac gcgctcgttg tccaggcagg 79200

agtcgaacag ctcctcgccg gaggtctccc agatggtgtc cgcggcggag ttcacggcca 79260

cgtggcggat gagcttgtac gcgatgtagg gcacgtagca catcttgccc acgcccttta 79320

tctcgggcag gtccacgctc agcacgaagt tgttcatggc cgagatgtac ttgtcgcgga 79380

tctcgaaggt cacggtgacc gcgtcgctgg tggtgtccac cacgccctgc gtggtgatgt 79440

actgcggcat gtacaccgtg ggcgcgcggt ggtccgtggc gaacacgctg gcgcgccgca 79500

cggcgtcgtc gccgcccacc aggctcacca cggagttatt catttattcc ctgggaaaac 79560

cagttaaata aggctcttca gagccatgcg caccgtccgg ccgtcgggct ccaggtagca 79620

gcgcccgtag acgccctccg tggcgcgcgt ctcgttgatg agcgcgcgca cgcggtcggg 79680

gtccgcgtac atctccagcg gcagcagctc gatcttgggc tcctcgcgca gcgcgacgag 79740

gtgccggatg gagcccgcga aggagtcgcg gcacaaccgc gagcagaact cgcccacggc 79800

gccgccgtcg agcgtctcca cggccagcgc ggccgtgccc acgcgctgac ggcagaacca 79860

gcacgtgccg tccgcggcgc gcagcgccag ccgctccgcg gacaccgtgt tgaagtactt 79920

cggcagcacg tactcgatgc ggcacgccgc cggcggcgcg caggccgacg cccgcggcgc 79980

ggatatgtcc acccgcgaga gcgcgatgcg cttcatgggc ggcggtggct gctatttatg 80040

tcgcccgcgg cttttcaaag gtcgagcgag cacgccgcga agcgcgcggg cgagaacacg 80100

tactcgtggc cgaactccgg gatctgcgcg gcgcgcttgc gcgcgcgcat gtgcgcgagg 80160

aagttctccc aggtgagctg gttgctgttg ttcttcgcgt agttcttcac ggtctgcgga 80220

cgcaggttgc gcgtcacgcc cgtgacctcg aagatcttgt ccaggaagaa ggagtagttg 80280

atggttttgg tgggcgtgat ctcctggcag aagaagacca gctgcttgaa tatctcgatg 80340

acctcgttga tcttctcggt gctgaggtcc agcttctcgt ttttgacctg gttgatgatc 80400

tcgaagacca gcttgtagtc cttcttgttg atcatttcgc tgtccttgag gaagctggag 80460

acgtagttgg cgtccacgtc ctcgggccgg atctggtgcc ggtccatcat cgcgcgcagg 80520

tcgcggatga cctcctccga gcactgcttg gagagcagcc gccggagcac gttccgcagg 80580

tggatgagct tgttcgacac gtggaagttg gacctcttct gcacgcggat gcccatggga 80640

aacacggtct cgcagaacag gcagaactcg tagtccgcgt cggacacgag cccgttgcgg 80700

cggcagccgc cgcacatgcg caggttcatg cttgctccag ccccagcacg cgcaggatct 80760

cgcggtccag cactttagtg tccagcgtgc gggttctaca gaactggagg aagcccgcga 80820

gcgcgcgcgc gcgccctggc tgcgagagca gcagcatgcg cgcgttctcg gggtcctcgt 80880

tgatgacgcg cgtgaggttc agcgagcacc gcgtgcagcg ccgcggcggg tcgagctcga 80940

ccgagtacgc cgcgaaccag acgttgtcgc ccatgtatta tttattaaca cagaacgtcg 81000

cacatgttgc gcgaggacat gtacgggtcg tactcctgcc cgtagatgag gatggtgcag 81060

taccgcgaga tcatgagcat ggcctcctcc atggtgagca ggtcgtcctc gaacatggcc 81120

ttgtgctgca tgtgctggct ctgcttggcg gccatcgcgg ccgcgccgtc gccgcgcagc 81180

cactcgttca gacactggcc gtcgccgccg gcgccgctct cctgcgcgaa ggtgttgcgc 81240

atggcgcgca tgagcctggc ctccctggcc gagcggctga gcacggtcat ggggtcgtag 81300

agccaggggc ctgcgtccgt gaacaggatg gtgcagtacc cgttggcgaa ggcgtccgcg 81360

ccgctgcagt tgtcgatgcc gtcgccgacc ctgtagcaca ccgcggagac cagccggtac 81420

atgatgccgt tgagcatcat gtcctgcgac acctcgatgg gaatgtcgct gatcacgggc 81480

cgcatgttcg tgaagcagtc gcccgtgctg gccatgcccc cgcgccggtt caccaggaac 81540

accagcacgc cgttcgtgat cacgggcgcg cggtcgcgct cgtagaggta gccgctcgcc 81600

gcgcacacgg cggacgccac gtccgtgcgc gagaccgcgc ccatgttctg ggcgggcatg 81660

tacagcactc gcccggcctc cgcggtgcac gagaagggct gctccccgcc cacgtggatg 81720

ggcgccgtcg atgtcgtgat catcttgctg gagtccacca ccaggtaggg caccgtgtgc 81780

atggccatgt cgcccatgcc cccgatcccc gttccgaacg acggccgcga cacgctcacg 81840

agcgtcggct tgaacgagac tatggagaag atggaggcca agatctgctc ctcgtcggtc 81900

atgatggagg cgcacgaggg gtggatgatc ttcattaggg cgttgtcgat ggactcgtcg 81960

ctctcgcagt agaagacgcc catgcggagg ttcaggatgc accgccgcag gttggtgtgc 82020

agcaccgcgc gctggatctc catggacacg gagtcgccga cgccgggcat cacgatgggc 82080

gtttcctcgg tgagcttgtt caccagcagc tggtagttgt tgggtcgcac gcggctgttg 82140

tggtggagct gcgccaggag cgagaggctg tccccgttga cgaacgcgga ctcgatggcc 82200

ggcagcttta cgccgaacag cgccatggcg atggggtgca cgaagcccac ggagtcggac 82260

gacttgaacg agaagagcag gtcgcccgag gagctcatgt ctttgaagtg cacggactgg 82320

aactgcgtgg cggagagcaa gttctggtag ctggacatgc tctgcaggtc gtcgatctcc 82380

ttcatctgct tgtttacgcg ggtcgagttc ctcccgtaga tgatcaccag cgggtgcgtc 82440

tggctcacgg atagccccga gtccgtcatg gcggcgcgca cgctgttcag cagatcgaac 82500

agctccgacc ggtctctgtt ctggatcccg acctttgcca tcacagacat gagctcctgg 82560

atggtcatgt tcttgtggtc tcggcgcgtg gaccgcaggt agtcggcgat catctcgccc 82620

tccttacgga tcttcatctg ccagtcgtgc atggaggtca tgcggtccac aggcatgagc 82680

acgctgtcgg aggacgactg cgcggcgctg ccggactggc gcgagccagg gcgcgcggac 82740

gacgggcgcg cggagctgcc gcggctggag gaggacctgg acctccgcga ggatcttcgc 82800

tgcgaagagc tgcgcacggg ccgctgggcg cgcgccccgg cggaaaccat gtcctcgcgg 82860

tttatgctga ggagcgagct gcagaccgcg cacgacagcg actgctttgg aatgtggatg 82920

tggtcgcact ccagggacat gcccgcattg tcgtagcccg ggaccaagtc gaactttgca 82980

ttaaaaaaat ctgatgcgca cgcgggcgat tccatttata ccggaagttt ttatgaggtg 83040

ccggtattat ccacgcgatc tcgcagtgtg ctgggagact ctagcgtagc cacggacccc 83100

gtgagcagac gacgcaagtc gttgatggcc gactgcgtga cggacttcgc cgtctcgatg 83160

tcgcgcgtaa ggctgagcga ctcggcgttg aggtcgcgca cgctgtccgc gatgtcggcc 83220

agctcctttt tgatgaaatc cttatcatta tcggcgttga tgactttgtc cggcactcta 83280

gactctagaa ccggtgacgc ggcgggcgcc ttgatcgtcg ggcagctgga cgccgggtac 83340

tggggcggcg gcaatgattg ctgtaggaag atgggcttag cggcaggcgc cggttttgtc 83400

ggcaagggcg gcgccggcgg gcactgtcgt gtagacggcg ggcacgccgg cgcggggcac 83460

gccgccggtg gcggacatgt cggcgcagtt gcgggtggac acgcgggcgc gggcgccggc 83520

gcgggacacg tcgcggcagg agccgggcac gcgggagccg gagctggagc cgggcacggc 83580

gcggcaggag ccgggcacgt cgcggcaggc gcagggcacg cgggagccgg agccgggcac 83640

gccggcgcag gaggacatgc cggcgcagcg gcaggacaga ccaccgctgt cgcggagcac 83700

gcggcaaccg gcgtggagca cgcggcgggc attacgttca gaggcgtcga ctggaccttg 83760

gcaccgcggg gcagtagcga tggcgctagg ggcgactgtc cggtggttgg acgctgcatg 83820

caggcagtcg cagatttcag acgggactgg taatacctgc ccgcttcctt caccgtgtac 83880

ttgtcgacgg agtctacctc ctcatctgga ggacatggct gctccggtgc gggaacgact 83940

gtttgaggac acttggtgaa cagactggag ctggtctccg atagcaccag tttagacttg 84000

gccaagtcgg aggcaaacct tcttctgaga tccatttaag ccttcaaaat tgaacgtgta 84060

cgccgaccgc taaatggaag aatcggtggc cgtcgagtac gcggacgagg acgaagatga 84120

gattgaggag tacgaggagg aggacgatga cgaggaggaa gagtctgccg agggcgccgc 84180

cgcctcctcg gtcagcgacg tagcgctctc tgccgccgag aagctggtgg cctcggaggt 84240

cccggacgac gcggctgccg cggacaccaa cgtgcgtcaa cgcgtcaccg cgcgcgtgga 84300

ggagcttaag gcgcgctaca cacggcggat gagtctattt gagctcaccg gaattgtagc 84360

agagagtttc aatcttctgt gtcgcgggcg gctgccgctc gtggcggacg ccgcagaccc 84420

ggcgctcgac aacgagctaa aagtggtggt tcgggagctc gaggagggcg tctgccccat 84480

cgtcatcgag aaaaacggcg agttcctctc gccgggcgac ttcgaccccg agtgcctgcg 84540

ctaccacctg acgtacatga ccgacctctg gaagtcccag gggcgcatgt agccgcggct 84600

acgccgactc ggcggcctcc gcgatttttt cttttatcat gtccagcagc tcgcgcacca 84660

cgatggggcg gccgcagtac gtgatgccgt tttcggatat cacgctctgt gcgatgtcca 84720

ccagcgagcc ctcgcgctcc cagtactcgc gcgcgagcac ctccttgtac aacgcgcggt 84780

ggttggccac gtaccgcacc agcgtctgga tgttcttcac gcccacgctc ttgaggtcct 84840

gcggcgagaa cttctcgcgc agcgacacga agacgtcccg gacgagcttg ccgatctcca 84900

cgttggtctt gaactcgttg tacagcacca cgtagagctt gcacacgacc gtagcgaact 84960

tcgcgggctt gagatccttg ttctggaaga ccagcatgct gctcatcacc ttcttcatga 85020

aggccaggta cttcgcgcgg tcgccctcga cgctcacgct cccgacctcg aggtcggaca 85080

cgcagcggat tccgtgctcc gcgctctccg cggagacgcg cagcagctcc tggtactcct 85140

tgagcttctg cttgtccgtc atcagcgagt tgtcgaatac cgccaccagc ttgagcacgt 85200

agttctcgtc cgagaagacc ttgttcagac acttcaccag gaagctgtag tggctctgca 85260

ggatcttcat gaccgcgttg gcgccgctgg ctccgcggac gtgcgatatc atctccatga 85320

tcttcttaga gtcgtcgatg atctcctcgg tgtcgttgcg catgttgcgg tacattgcgt 85380

tcagcgagac cagcgtctgc gcggccagga gcacgtcgcg gaacacgcgc gcgaactcgc 85440

gcttctcctc cgcgtcggtg atgctgttgt acacggactt cgccaccgcg ttcgacttca 85500

ggaaccagaa ggagagcgcc tggtagttga agtgcttcat cagcgccagc acgtccgcct 85560

cgctcatttc cggcgcaatg gggcacaccg agctctcgag cacgggcacc atgctgacga 85620

gcgtgtccac gtccgtgtcg aagtccaggc agtccacgca gagcccggtg ccgcggctca 85680

ggtgatcgcg gctgatgtcg tagaagcgct cgtagcaggt gcggaggcgg tccatgtcgg 85740

ctgcgtttta gagagacaca cactcttgaa ttatggctgc gggtagaact cctgcagcag 85800

cgccggcgca cgcgcggagt ccggctccac tcccagcttc agcgcgcagt tcacggacca 85860

ggtcttcatg aagcggtcgg gcgcgtccgt gaccacgtgc cggaagagct tcgcgaagtg 85920

gcggctcacg gcgttgggca cggtcgcgtt gcgcacgaag gccgtgaagc gcgaggtcag 85980

cttcggcgcg aagcgcttgc cgtccacgaa gaagcccgag gtggtgagcg agagcccgtt 86040

ctcctcgcgc accacgcgtc gcgcggcctt gtgcggaaac atgctcgcga ggcgcccgct 86100

cgcgtcctgg tctaggtgga tggcgtccgt ggccgcgtcc ttgcggatgc gcaccacgtc 86160

gtgcacgatc tcctggatga ggatgcgcgt ggccgcggtc tccgccagcc gcatggggaa 86220

gtagaccatg tccccggaga tgagcacgtt cccgctagcg tttacgtagc tcactatctc 86280

ggacacggtg cgcagacgca cgatcgcgcc ttcgcagcag tgcaccacgt agtacccagc 86340

ggtggcgcgc aggcgcttgt tgtccgcctc gaagtccgcc tccaacccct cgttgaagta 86400

cttgtcgaat atgatgggca ggaaggatag ttttgactcg gtgaccacct ttccgaagtt 86460

gaggatgtac gggttcagcg cgctgcggtc gacctcttcg tcgtacacgc aggacttgaa 86520

ggtgtcggtg tgcgcctggc tgcgcaggaa gcagcacgga atgcagatgc gctgcaggcg 86580

gtggaagatg gagaggaagc ccacgctgtt gtagcgcccg tcggggtcca tgcacgaaaa 86640

catgacgccg tttccgttta cgaagacctc gcgcgtctcg gacttgaaga agttgttgct 86700

gaccttggcc atgttcgcgt ccagcgactg cacgatcacg ggcttgcggt tcttggtctt 86760

ggtgttctgg cagatgcgcg accagtacac ggtctccacc ttggtgaagt ccgaggactg 86820

cttcacgttg ttgaacatca cgctgatggc cacgatcaag aacgtgaagt acttctcgat 86880

gttcgggatg tagttcttta ccttcacgga cacgtgcgac ttcgcgagga tgatcgagat 86940

gcgcttgtcc gtggagagca ggatgttgtt ggtcgccgtc tccacgaaga tgaagctcgt 87000

ttccatgtcc agcttcatct tagacgtgat ggtcgtgttc agcgacacct tgtaggtgat 87060

gtcgcccttg acgcggtcca tctttacgtc catgctctcg atgagcttcg tgaacagact 87120

cacgtcgttc accgtgagcg tcttcccgtc gctcgagatg accaggtcgc cttccgggcc 87180

ccacaccgag aggttcagcg gctcgtccac cagcaggaag cgagtccccg tcatcgacac 87240

gaagaagtcg tccgtcttcg agagcaggat gtcgaagtcg cccacctccg ctcgcttgtc 87300

cggcgactgc tgcgcgatcg cgcggagccc ggactcgcgc aggttcgtgc ggaagatgtt 87360

gttgaacttg gtctccacgt tcatgtttag gtcgaggttc gcgaactcgc ggatgagccg 87420

ctcctcgaac ttgaggatgg agtcgttggg ctcctcgaag gagccgaact ccggcgcgga 87480

ggtgtccgcc gcgcgcgcca cccagaccac caggaagttg cacgcgtccg cgtacgcgtt 87540

gtagaggatg ccgtccgtgc ggatgagcgt tttcttttgc gtgggcgaga acgggttgaa 87600

gatggtgttg tccacgtagc tgtactccag gttgttcttg tgcgagtaca cgatgatctc 87660

gtcctgcagg cccagcaggc tccccaagta ccccttgagc tgccgcacgc gcatggtcag 87720

caagatgtgt ctgcgcacgt gctcggggtc cttctggatg tactgcttcg cgaagaagta 87780

gatcggcgag gcctcgtcca cggagtcgta cagcgatagg tacagcacgc gctcgatctc 87840

ctggtggcgc cccaccagca ccaccagctg cggcgcgacg gtgtagagca tgttcgcgcg 87900

ggcgtattta tagccggcgt taaactgaaa taaaatacgc gggtcgcgag gcagcgccat 87960

gttccagccg gtgcccgaca tggccgccga ggccgacatc gacctcggcg acgtcagcgt 88020

ggacgcgacg cgcgcgggcg cgcgcgagaa gaccgtcttc ttcgcgcgca acaagcgcat 88080

gtacccgcac cgcagcaagg acgaggagcg caagctgtcg ctgggcttct tcttgcagcg 88140

gctggacttc ctcacgtcgc gcgaggtcaa cctgcagttc cggtcgctgg acgcgctgcg 88200

caccgagaac gtcatgaaga agaacaacgt gctcgtggcg ccgtacatcc tcatcgcgac 88260

gctcgcgggg cgcggtttcc gcatgacgga gaccatggtc gagctctact tccccgagct 88320

gtaccgcgag accagcaagc gcttccgctt ctgcgcgcag ataaaggtca tccaggactt 88380

cctggggttc gcccacgaca gctaccacac ttacgacttc gagacgtact tcgcgttcgt 88440

ggcgctggtg ctgcgcggcg cggactctgc ggccgaggcc ttcgacgtcc gcgccgagag 88500

cgggcttgtg cgcagcctca ccgagatcac gtaccggctc tacgtgatgc agctgcgctc 88560

cgacgccgcg cagtggagcg tgagcaccgg cgccgtagtc tcgcaggcgg tgaacaccgt 88620

gctgtcggtc gtcggcgacc tcgctgcgcg cgcggaggcc gagcggctca cgcccgtgtg 88680

cgacctcgcg cgcgagaacc cgctctcgct cgaggacctg cgcaagtacg gcccgcggct 88740

gcgctcgctg ctcacgacca tggcgcgcgc gcgatccttc aagacgaacc ggcgggacaa 88800

ggacgcgctg tcccggttct gccgactgac ggcgggccct agcccgtctg cgtgccgcgc 88860

gtcgccatag gcgtcggcgc gcgctcgccg ccggaacact cggggtcgct gaacatgtag 88920

atgagcgcga cgcctagcag caggtacatg atcatgctga tcacggtttt gaacacgacg 88980

gcggcgaacg tgttggaccg cagtcggtgc tcgcagaagt gcatgaacag gtgccgcatg 89040

aggtcgatgg ccccgttggc cacctggaaa agggcgaggc cgccgatgga cttgatcacc 89100

gtcacgtagc acggccgcat tccgacgacg ctatttactc actgtcaaaa gaaacggcgc 89160

catccgaccg gaggttgagg ttgcgcttca tgttgttcca gtacatctca ccgatgctcg 89220

agtagtacgc cgtcagccgc gatatttttt ctcgcaccag ctcgtaggcc ttctgcatct 89280

ccgcaacgcc gatctccgcg tcgcccacgt accggccgct gcggcgcacg atcagcagca 89340

gcgccttcag gttctccagc gcgatcatgt ccatgtacag cgacttcgag agctgcacga 89400

agaggttgta ccgctccagg atgctgttct tcacctcgtc cgcgatcggg actccgaaga 89460

tgcgctccgt ggtgtacacg gactgcgtga gctgcttgaa gagcgcggag atgcagcagg 89520

tcgcgcgctt gacggcgtcg agctgcttct cggagcgcgc gctcgcgatg ctcagcgcgc 89580

tgttcacgac gttgctcgtg tcgcgcacgt agcgcgtctt cagcgcggcg ttgatggcat 89640

ccgcgatctc gttgctgctc acgctcgagt cgtccgagct gcccgagacc tcgtccagca 89700

gccccgagat cgtgatgtcg ggcgagccgc cgacggtcac cagacggtcg agcaggttgc 89760

agggcatgga catgaggatg ccctcgctcg agaggcagcc ctcgtcgatc atgctctgca 89820

ggttgcgctt gaaggccgtg ttttcgggca tgaacccgtc cacgctcatg agctcgtcga 89880

ccgtgctcgc ggaaaagatg cccctcacgt tgatgcggtc cagcatgccc atgtcctgcg 89940

agcacagcac caccgactgg tcggccgtct cggcggcgtc cttggcgccg ccgtagatga 90000

tgcgcggaaa ccgccagctc gccggaaaag agaaggaggg aaaccggcac tgcgcgctcg 90060

ggcctcggta gccctgcgcg tcgcgcacgt tggtggccgt gaccatgaac tgcagcaggt 90120

cgtgcgcgga cgccatgatc ttctccacct cctccttgct gcagcagacc ttgcccaggc 90180

tgcgcgcgat gttcgttttg ctcactgagg gcgagaccgt gacggcggtg tgtcggcggc 90240

tgccgagcgt gtacgcgctc acgctaacgc ggtaccccat ggcgccgaag agcagcttca 90300

cgaagtccag gtagctctcc ttattgatgt agtgcggcgc gcccttgtct tccatcctca 90360

gcccggcgta ggccatgagc acttccttca tcgccgtctc ggggtccgag ttgcacacca 90420

gccgcagcat ctggaagaac tgcatgaagg cgcgctgcga gagcccgatg tggtggttgg 90480

gctgcgtcga ccggcgcggg aactccctgg gcgtcatggc gttgatgccc gagagcgtct 90540

ccatcacgag cgcgcccacg gtcttctggc ccatgacgcg cgggtaaaag cacacgcgga 90600

ggggctcctt gccggccgcg agcgcgtccg agagcagcga gcagtacgtg acgttgtcgt 90660

ggtcgaagag cgcgaaggtg tagcagacgg agctcatgaa gagcgagtcg gcggtgctca 90720

tggacttgaa ctccgtgtac gcgattccgt cccagaacag gctctttccg ggcgcgatca 90780

gcggggacgc gcggtcggcg cgcatcagca tggagagcag cgtcacgtag taacggatgt 90840

tggcggaaat gtctacgaac tgcatgccgg gcgaggccac gcgcagggtc gcgcccgagg 90900

tagtgagcac ctccaggctg tccatgagcg tcacgctggg gtgcagctgc gcaaggcgcg 90960

ccagctggct ctggtagaag atggacacgg cgaggctggc cacgctgccg cgtgccatgc 91020

gcaggttttg cccgttgaag gtgagctggc gcagcgagaa cacggagtcg aagtactgga 91080

agaaggtgag caggtacttg agcggcatgg tcgtcagctc ggtatccacc tgcggcgtct 91140

gtgcgagcac gattccgttc ttggccgcgg cgtcggggat gtcgtacatg gcgtccattc 91200

tggcgcggga ggcgtcggtg agcagcgcgc gcacgttgag cagcatgagc aggtcccgcg 91260

ctagcatggt cccgtcgacc agccgggcgc gaaagccgat ctcggcgggg ccggcgatgt 91320

tggggtagat caggttcagc aggtacgtgt tgtcgaagct cagcgagggg aaggagatgg 91380

gagacttcgc cgggaggccg gtggggtagc gcacgtagcc gccgcagatg cgcgcgtgcg 91440

cctcaaagct ggtcacgcga gtcttcagca ggttgcgggt gaagggcggc acgtccttga 91500

aggactgcgt gcagatcacg gggttggcgg tgtcggtcag cttgaggttg gtgggcttaa 91560

gctccgcgaa gttggggccc agcagcacgg ggacgaggtg cgagttggcg gcgctgtcga 91620

gcaggaagtt gatgccgaac tgcttcacgg cgacctcggt ttcctcgtcg ctggcgagct 91680

tctccgcgtc ctcgaggaag agcgcgtcca gcgggtgcac gtacgtgcgg ttgacgtcgt 91740

agctgggctt gaagtccgaa cacagcgtgg ggagcacggt ggagacgagc tggaacatgt 91800

attccgcgcc ctccacatgg tgcaaggcca tgtgcacgtt tggggccgtc atttatttag 91860

tattaaatga cggccgtacc ggtaaccgat attcctggag actacgggcc gacgtccttt 91920

tcggaggaca actacccgct gaacaagcac tacgagctca ccaaaggcca gctctcgatc 91980

ctgcgcacgg tcaacgacaa gctgctcgcg cgcaccgtgc agcactcgga cggggagagc 92040

gatgagagcg aaagcgagga ggacgacatc tccagtccgc tgccgccgga cgaggaggag 92100

ccggactcgt gcgtggcccg ggtcatgccg cgggacgcgg acctggcggc gccaaaaaag 92160

gccgacggct acatcattgc cgccgagcag cagcgccagc agcgcataaa cattctggta 92220

tccgatcgag aggccgtcgt ggagcgggag ccggttcaga cgtcgttcgc gcgcgtctcg 92280

gctatcccga tccacgggga cggcgcgcgc cgcaccaccg cctccttctc cgcgaccacg 92340

ccgtcgctgg gcgccgtgtt cgacgacgcc aagcgcgtgc ggctgctgga ggaggaggtc 92400

aaggagctcc gcagaaagtg cgcgacctct caggataacg gaaacctgga gaacttcacc 92460

aaggtgctgt tcggcaaggc gccgcgcgcg agcgagctga acaagcgcgt ggtcatcgtg 92520

aactacgcca cgctgaacaa cgtgacgctg tccatggagg acctcgagaa gtgctccgac 92580

gaggaagtgg accgcatgta ctcggtcatc cggcgctaca acgagacgcg gaagaagaag 92640

atcctggtca cgaacgtggt catcatcggg atcaccgtgc tcgagcacgt gctggtgaag 92700

cttggcttct cggaggtgcg cgggctcagc gccgacctct cgtcggagct catcgacgtg 92760

gagatcggcg aggactgcga gcacatcgcg gagcgcctgg ggttcgggaa cagcccggtg 92820

ctaaacgtgg cgctcttcgt ggtaaagctg ttcgtgcgga agctgaacct gatctgatca 92880

acacatgccg ccgtcgaggt ccatggcgtt catgaggttg gaggcgcggc ggcgcgcgcc 92940

ggtggaagcg gtggaggcgc tcgaggtcgt ggagcaggga gtgttgctgg aggaggcgcg 93000

gcggcgggag ctagaagcgg aactcgaggt tccgctggtg gtgctgcggc gactcgtgcc 93060

gctcgtgccg ctcctgctag tgccagtgcc agtgccgctg cggcgtgaag taccggtgcc 93120

ggacctgccg ctggagcttt tcttgcggcc gccgttaacg ctgtcgatgc cgagcaggtc 93180

ctcgcacacc tcgccgacgg ttccctgcac gtccaacttg ccgttcttga caaccccgta 93240

cacgatcttg ccgcagttgg acacagcctg gatggtggtc tcgtcgctgt caaaggcgtt 93300

cattccgccg cacccgccgt cgttgtttct tcgagaaggc gcgccgctgc ggcgactcct 93360

ggtgctgccg ctggaccgag ttccggagga cctggagccc gtggaccggc tgccggtcga 93420

cctggtgccg gtagtgcgct ttctggacga agaggaggag gcgcttccgc ggcgggtgga 93480

cgaactagcc tccagcgcac cggcgccgcc cacacaatcc acgtcggcgg cggcgcctcc 93540

gcgaatgacc tgctcgttgt tgagctgcgt caggagagat cgcagctgcg gcgcgatctt 93600

ctgcaaggtg ctcacgtagt cgtcgtagct gctctgcggg cgctgcgcca ttttttcgga 93660

cgccatttat tacgcggaat atctacgacg acgcagcact gaatcggttt ctcgcgacgg 93720

gagattccgc ggtcggcgcc ggtgcggggt tgtcaccggg cgacgaggta accagcgcgt 93780

ggaaggcgcg cacctggtcg tccgtcatct tgtcctcgaa cgaggacgcg cccgggggga 93840

gcaggtcctt gttgcgcgga acggcgggcg ccgagacgca cgaccggcgg tacatcatga 93900

tgacgatgta gcacacgatc gagatgacga tcacggtcag cagcgcgtcg aggagcccca 93960

tttattacct gtatatgccc gcgtttaccg ggcggtgagc tcaatgtcgg tgttgtttag 94020

ccgggcgtac gggacgctgc cggagcactt cctgtacatg ctgaacacga acagcccgag 94080

cagcagcacg gcgcccacta tgaagcaggt tacgcacagc gcgcgccaca cgtagtcggt 94140

gacgttgttg gtgttcttgc tgaaatccac gaaggcgaag acgcaggcgg ccgtcagcag 94200

cagcacgccg catatcagca ctccggagta gtaagagctc aaggtctcga atatgtccat 94260

ttatctgagg agaaatttaa attactgaat ggacgaagtg gaatagaaac cacgagaaca 94320

cgacggactg cagcacgaag atggtgctca gcttcgtctt catgggcatg cagaagttcg 94380

cggccagcgc catacagaag atgaacacga gcaccgccgg gtcgtagtcg gacaccattt 94440

acactacgct aaaaggcata tctcggcgcg cgacgtccac gagcaccagc acgcggacgc 94500

ccgcgggcgc gccggcggcg accgcggcga gctgcccggc cgtggggttc accagcagca 94560

gtgcgcgcgc ggttcgcggg acggggtctt cgtaggccat ggtcggcgtg gacccgggac 94620

gcagcggccg cccctgtctg tcgaagaggc cctcgggaaa cgaggtgccc ggaacggcca 94680

cgacgacggt gtcgctatct agaaacattt atggtcttgg tttccacgga tcgcctcgag 94740

tagaccgcca cgaagtagaa gatgacgccc gccgcgagcg ccgccaccag gaagggcggc 94800

acggcgggca ggttcgcgga cgcgttgtcg cgcacgccgg ggtccgggtc tgcgtagccc 94860

gcgcccacgg ccttgccgca gtcggcgatc atgtgcgcgc gcgagttctg catgaccagg 94920

ctgtccacgt cgatgcggca gcccacgtag cggcaccgcg agcgctgctc gtcctggctg 94980

aagaagagcc acttgcggtc gcgcgactgg tccgtgcact cgtgcgcgcg acagacgcgc 95040

gggcccaggt acttcccgag cgtggtgccc gcgacacacg cgcactccgg cgcggcgcgg 95100

tgcgcgtcgc agtagcgccg cagcgcggag tcgccgaagg cgaaggaggc gggccgcgcc 95160

acgcgcacga actccgagca gaagcgcgcg tccatgtgct tggcgcagag cgccgcgtag 95220

gtgtccagcg ccgcgtagcg gcccgtgcgc agccaggcca tgcactcggg cgcgtcaggc 95280

tccaccgcgc agcggctggc cataacgccg tcgcagtgcg cggtcttgta cccgttcgcg 95340

aacacggacg ggcacccggg ctccggattt gtgcagcagc gcgccatggc ggcgtccgtg 95400

ggcggcgccg aggcgccgat ctcgaacgcg cacatggtgc cctggcgcag gtacggcttc 95460

gcgatctcgg gaacgtagtc tgcgcgcagc agcgagcccg ggcggaagaa gagcgagtcg 95520

cagggcgggc ctcgcacgag ccgcgcgcgg ctcgccagct ctggcgagag gaagcgcccg 95580

cactgcccgg ggtccatggt cggcagcaga cagaaccgcg gccgtacggt cttcagcttc 95640

gggtcggaga aggtttctga ttcttccgcg aaggcgaagg tgtccgtggc gctcgtgtgt 95700

gtgacgcgca gcgcgtactc gcctggcgtc ggcgtgtcga gcacctccac cttggatacg 95760

gtgtccccca tttgaagacg ctatttacgc cgctgcctac tcggcgaaga ataggtcctc 95820

cgacttggcg cccgcgtaca ccgggcaggc gggcgcggcg gagcgagtgc gcacgatacc 95880

gcggccagtg aggcggaagg cgtagatggc gaacagcagg ccgagcacga tgtacatgaa 95940

agtggtggcg cccacagacc cggtcacgtg cgtcacgatg atggtgacga tggacatgat 96000

cgtgcacacg atggccatgc cggtgttgtt ggccgcgtag gggtgcatga tctgcatggc 96060

cgcacagtat ccgatgacca ggcacggcag cgggaggata agtgaggcaa tacctatcat 96120

tactagagcg agcacggggg tggacgtcaa ggccaataca aaaatcacaa tacctgttag 96180

tatgcggata tcctcgtact ggaggacgct gtaaggcgcg atattccctc cgggcactgg 96240

cctggggtta gccgggacta ggggggagtc ggcagtgccg gggtccttgg ggagaaaggc 96300

attctgctcc tccgggctga agagctcggc gtcctgaacg ccgccggcgg tgaactcgtc 96360

gttatagtaa ctaaagtagc tttccattta tatgttgaaa aatgtttgga ggcgtacagg 96420

tggacgacaa actctacgcg tacctaaaaa aactcgccgg acgcgggcgg ccgctgtgtc 96480

tgttccgcga caacggcgag ttcgtcgaag tcttcgcggg gtccgcgttc cgctttgtgc 96540

tgcccgtggg cctcttcgcg gacctgcgcg tgcgcacgcg cggcgtggcc ttcccgaaac 96600

tgcgcgactc cgcgcgcatg cgcggcgtgc gggtggacgc gcacacgctg ccctcgctgt 96660

accccaacca gcgcatcgtg gtggacgagg tgctcgcggc ccgcgaccag ttgctggccg 96720

cgggccgcgc cgtgtacgtg acgctgcatc tggcttgcgg cttcgggaag acgctgaccg 96780

cgtgccacct catcgccacg cacggccgcc gcgcggtggt gtgcgtgccc aaccgcatgc 96840

tggtgccgca gtggcgcgcg gccgtggcgg agctgcgggt gcccttcgcg gtctcctgtg 96900

acggcgcggc ctcgctgctg cgctcgggcg agctcgaccg cgccatggtg gccatcgtgg 96960

tcagccggca cttcgccaac gacgacttct gccgcgcggt gagccggcag tttgacgtgc 97020

tcgtgctcga cgagtcgcac acatacaacc tcatgaacaa caccgcggtc tcgcgcttct 97080

tgaccaagta cccgccgccc atgtgcttct tcctgaccgc gacgccgcgc acggccaacc 97140

gcatctactg caaccgcgtg gtgaacgtgt ccgtggtcag ccgcctcacc aaggtagtgc 97200

gcgtggtgga cgccttcttc gagccgtaca ccacgcccaa gatccgcacg ctcgagcgca 97260

gcctcgaggg accccagaac aagtaccacg tcttcaccga gaagatcctc ggcgaggacg 97320

tgcaccgcaa caagctcatc gtggacaccg tggtcgcggc catggccgcg ggcgaggcgc 97380

ggcgcgtgct cgtgctcacc aagctgcgcg aacacatggt cgggctgcac gccgcgctct 97440

gcgagcgcct cggtgcggag acggtctttc tcggcgacgc caagaacagg aagacgcccg 97500

aggtcacgcg cgcactgcgc gacaaggacc gcttcgtgct cgtgtccacg gtcttcttct 97560

cgggcacggg cctggacctg cccaacctgg acgcgctcgc ggtggccgcg gccgtgctca 97620

accgcatggt catggagcag atgatcggac gcgtgtgtcg cgagtcgcac gccaacacgc 97680

gcacgctgtt cgtgttcccg gactcctccg tgcgcgcgat ccgcgacacc gtgtctgcgt 97740

ttgcgcagcg gctcgtggcg ctggcggtgg acgggctggg cttcgtccgc gagcgcgccg 97800

ccgccggcgc gaagaacgag ccggcgctgt acagcgccat cagcgggcga gatctcgcag 97860

cggtgtaagc gcggacccgc acgccgcgca cgagagcgtg ctggagcagg cgagtcccag 97920

cgacagtgtg gacagcctgt ccacgtcctt gatgctcacc agccgcgagt tgcacgacga 97980

gcacacgggg tcgctactat catcgaccac cgtggtgacg cggcggcgtc tgcgcttttt 98040

gtttccagcg gcgacatcga ccacgcctcc cttagagccc cccttcgccc ccgccttagc 98100

tttcaccgcg ctcatctttt atttatcata aaaacacgtc tgcgtacgcg ttcgcgcaca 98160

cgtcccgcaa atccgcgcgc gcgccgcagc gcgtgaagcg cgcggcgtcc gcctccgcga 98220

tccgcgcgca cggcagcggc gcgcccttct cgtccgccat cacgcgcgca gagatcccgg 98280

tggcccccag cgcgtacgac accaccacgt cgccgacgca gcggtacacg ttgccggagc 98340

cggcgaggcg gtcgaacgcg gcgccctcct ggcgcagctt gtcgaatatg cgaggaacga 98400

ggatgttaaa aatgagaacg aaatagcaga tcagcaaaaa cagcgagatc atgacctccg 98460

agagcgattt atataccttg aaagagctaa tacgacttcg ggactcgctg cacctcgcca 98520

ccggcgccgc cgtcgagcgc tacaacgcgc tcgtggagtg ggccgcgcgc acgtactgga 98580

cggtcgcggt gctgccctcc gcgccgtgcg cctccatcga gaagtactac tgcgtgtgca 98640

aacccgactg cgcgctcgag cccggcgagt actccgtgag ccggctgcac ttcggactca 98700

cgcacgcctg ggtgcgcggc gccgccttca actcggccag cggcgccgag gtcgagccgc 98760

cagaggaggt gcgtagggcc tgcgaggcgc tcgacgccgc cttcgcggac ctcaccttcg 98820

tgcgcttctc ggtcttcggc cgcgagtgga cggtcgacga cgccgtcaca gaccactcct 98880

cgcgcgacga ggtgctcgcc gcgtgcgccg cctccggcgt gcgcgtcgcg cgcacgctgc 98940

gtgtgcgcgt gcgggcggga gagtccttcg cgcgcgcaga cttcgacgcg gtgcacgccg 99000

cgctgcgcgc ggagggcgac gtcgctcgcg gcaccgcggt ctgtctcgcg ctgcgcgggt 99060

catcgcgccg ctggatagcg gaccgcgcgc ctcgatgctt catgcgcgtg cgccgcgtgg 99120

agctcgagcc cgtggacgcg cggcaccact gcccggtgct gatctccgcg cgcggcgacc 99180

gggtgctctg ccgcggcgtg gggcacctcg cggacgcgcg cgcgcgcgag ggcgtcttcg 99240

tggccgtgcg caggtacccg gagtgtctgg tgctctgcga cgaggcggcc gccggcgcgg 99300

cggagtgctc gcgcgaggag gcgctgcggc tgctggtgcg ccgcttcggg cgcgacttcg 99360

ccgtcagcga ggagggctac gtcttccgcg tgcaggacat ggacttgcgc ggcgtgtccg 99420

cgcgactggg gctcgcgccc tgcgcgagcc tggaggagct gcgccgagcg gtggagcgcg 99480

accgcgcgct gatgaggcgg ctgcgcgcgg agggcgccgt gcgcctcgcg tgcgagtgcg 99540

tgggataccc gcgccagaac gcggtggagc tcataaataa tatgcgcttt caaataacgg 99600

aagaaggcgc ggtggcgaac tttgagctgg cgaacgcgag ctgtctcggc aacccgaccg 99660

cggagtccat cttcgcgagc ttcgcgcagt tcgtgccggt cttcaacgtg ctctcggcga 99720

tcgcgcgcgc gcagccatga tcgtggcggc cttcgacctt ggcacgcgca accccgcgcg 99780

caccgtgctg gaggtgctcg acggcacggt gcgcgtggtg gacgtggcca agctggactg 99840

gagccgcgac tgggagaagc gcgtgcaccg cgacgtgacc gccttccccg cgaacgtggt 99900

gctcgtggag cgccagtgca agatgtcgcc tttttctaag ttcatatact tcatacgcgg 99960

gctgctctac gacgggcggc gccgcacgcg cgtgctcgcg gtgccgccgg ccatgaccgg 100020

cagcacctac cggcagcgca agcgccgctc ggtgcgcacc ttcctcgcgc tcgcggagag 100080

cttcggcatc ctggacgccg tgcccgcgcg gaagaagctc gacgacgtcg cggacagctt 100140

caacatggcc atcaattacg tgctccgaac aaactgaaat acgactggaa cgaataagtc 100200

atgctggcgc tgttcgagtt cctgcggtcc gtggaggact gctaccggcg caccatcttc 100260

aacttccaca tcgcgcacag cgccgaggcg ggcgatgtct acggcgtgct gcgcgaccgc 100320

attttggcgg ccacgcgctt cgaggaggta gcgccgccag ggctcgcgga cgcgctggcc 100380

aaggtggtct actgcgacat aagcaccacc aagcacctgg tcaaccacgc ggccttcgcg 100440

gcgcgcgcgc ggccggcgcg gcgcggaggc agcctcgcgc agttcttcga cgtgcacgtg 100500

ggcgaggacg cggagagccg ccgcaccgcg gagatcttcg accgcgagcg ctcctcgctg 100560

gtctcgtacg tgaagaccac ggccaagcgc tgcaagatcg actacggcga gatcaagcgc 100620

accatccacg gcgggcggca gacctacttc tcggggcggc gctcggacga cttcctgagc 100680

accaccgtgc gcgcggaccc gagcaagccc tggatcaagt ccatctccaa gcagctgcgc 100740

gtggacatcc tgcaccacgc gatctgcacg cgcggcaaga gctccatcct gcagaccatc 100800

gagatcgtgc tcacgaaccg cacctgcgtg aagatattca aggactcgac catgcacata 100860

atcctctcca aggacgaccg cgagcgcggg ctcgcggacc tcgcggacaa gctcttcggg 100920

acctacgcga ccaccttccg cgtcatcgcg gccatcaccg gcaacgcctg cttcgcggcg 100980

gtggcggacg cggccgcgcg cgtggtcgcg ctcccggacg cggacgcgaa gctggcggcg 101040

gtgcgcgggc tcgcggagtg ctacggcgtg cgcaacttca aaatcggcat gttcaacctc 101100

accttcacgg gcgccatcga gcacacggtc ttcccctcgc tgatccccgc ggagagcaag 101160

atcaagttct tcaagggcaa gaagcttaac atcgtcgcgg tgcgctccac cgaggagggc 101220

cgcgagtgcg tggagcaggc gcaggcgctg ctcgcggcca tgcgcgagcg ctccgcgcgg 101280

ctcgcggccg cggacgtggc caccgcgagc gtggacttcc tcaaggagct gctggggcca 101340

tagtgaaata atactgattt cttaaatatg gagcaggcgc tcggatacaa gtttttgttg 101400

cccgacccca aggacgacgt ctactaccgc ccgctccact tccagtatga gtcatacgcc 101460

aacttcatca agcaccggct taaggacatc ctcacggtgc ggcgcacgct gctcaccttc 101520

aagaacggca ccgagtccat cgtgctcgag atcgacgacg tgaagatctc ggcgccggag 101580

ttctcgccca tcgtggccag catcaagggc cacagctacg aggcgctggt caccttcacg 101640

gtgaacatct accggcacgt gatgaccaag gacggcctca ccgttaccaa gatcaacagc 101700

tacgagggca ccgactcgca cctcgtcaag ctcccgctgc tcatcggcta cgggaacaag 101760

aacgcgctgg acccctccaa gttcgtggtc ccgaacgcca tcggcggcgt cttcatcaac 101820

aagcagtcca tcgagaagct cggcatcaac atgatcgaga agatcaccac ctggcccaag 101880

ttccgcgccg tgaaggccaa ctccttcacg ctctccttct cctcgatctc gcccgtgcac 101940

gtgatgcccg cgcggtaccg acactacaag atcctgctcg acgtgaacca gcccgacaac 102000

ttcgtgatct cctccgcgaa gaccttcatc accgtgaacg tgatcgtgat ggtgcagttc 102060

ctcgcggacg tcacgctcga gttcgtggcg cgcaacctct gcttcgacat gccgcccgag 102120

gccgcgcacc tggccaccgc gctcgtggag agcgcgaaga ccgtgcccgc gggcgcggac 102180

gtggccgagt acgtgaacgc gctcatcgcg gccgagcacg cgaagcagaa gtcgacgctg 102240

tccaaggagg agttccgcta cgagatgctc agcaacttcc tcccgcacat gcaggacagc 102300

gccaaccagc tcaagggcct gtacctgctc tcgctggtgc gcaagatggt cttctgcgtg 102360

ttcttcccga accggtaccc ggaccgcgac tcgctggtct gccaccgcgt gtacacctac 102420

gggcgctact tcgaggcgct ggccatggac gagctcgaga cctacatcgg gaacatccgc 102480

aacgacatcc tcgcgaacca caagaaccgc ggcacctgca ccgtgaacat ccacgtgctg 102540

accacgcccg gcttcaacca cgccttcgcg gcgctgctca gcggcaagtt ccgcaagtcc 102600

gacggcagct tccgcacgca cccgcactac tcctggatgc agagcatctc catcccgcgc 102660

agcgtgggct tctaccccga gcaggtcaag atctcgaaga tgttcaaggt gcgcatgtac 102720

caccccagcc agtacggctt cttctgcgcc tcggacgtgc ccgagcgcgg gccgcaggtc 102780

gggctcatct cgcagctctc cgtgctcgcc tccatctcga acatccgcac cgcggacttc 102840

gtcgagctca ccaagcgcgt ctgcgactac gtgcgctcct accccgcgcg cgacatcagc 102900

tacttcgaga ccgggttcgc ggtcaccgtc gagaacgcgc tcgtggcctc gctgaacccc 102960

gcgatcgtgg acgcgttcgt gctcgacctg cgccggcgca agcggctcgg cttcttcggg 103020

aaccgcgaga tcggcgtcgc gctcgtgcgc gaccgcatga acgaggtgcg catcaacttc 103080

ggcgcgggcc ggctcatccg cccgctgctc gtggtcgaga acggcgtgct cgtcatggac 103140

gcggaggcgg agcggctcga gcgcgacctc gccgcgatga ccttctcgga cgtgctgcgc 103200

gagttcccgc acgtgatcga gatcgtggac gtggagcagt tcagcttcag caacgtctgc 103260

gactccgtgc agcgcttccg cacgctgccg cccgaggagc gcgcgctctt cgacttctgc 103320

gacttcccgg ccgagttccg cgacgggtac gtggcctcct cgctcgtggg catcaaccac 103380

aactccgcgc cgcgcgccat cctcggctgc gcgcaggcca agcaggccat ctcctgcctg 103440

agcgcggacc tgcgcaacaa ggtcgacaac ggcatccacc tcatgttcgc ggagcggccc 103500

atcgtggtca gcaaggcgct ggagacctcc aagatcgcgg acaactgctt cgggcaccac 103560

gtcaccatcg cgctcatgtc cttccgcggc atgaaccagg aggacggcat catcctgaag 103620

cggcagttcg cggagcgcgg cgggctcgac atcctcacct gcaagaagta ccaggtcgag 103680

atcccgctcg agaacttcaa caaccgcgag cgcgtgcgct ccgcggcgta ctccaagatc 103740

gacgtcaacg gcgtggtgcg cctgaacgcc ttcctcgagc agggcgacgc catcgcgcgg 103800

aacgtgtcct cgcgcacgct cgacgacgac ttcgtcgccg acaaccagat cagcttcgac 103860

atcgcggagc ggtactcgga catctacgcc gcgcgcgtgg agcgcgtgca ggccgacctc 103920

accgacaagg tcaaggtgcg cgcgctgacc gtgcgcgagc gccgcgccat cctcggggac 103980

aagttcacca cgcgcaccag ccagaagggc acggtcgcgt acgtggccga cgagactgag 104040

ctgccctacg acgagaacgg gatcgcgccg gacgtgatca tcaactcgac ctccatcttc 104100

tcgcggaaga cgctctccat gctcatggag gtcatcctca ccacggccta cgggcacaag 104160

cccttcgccg aggacggctc caaccgcccg atctgcttcc ccagcaccaa cgagaccgac 104220

ttcgagacct acatcgagtt cgcgcggcgc tgctacgcgc tctcgcaccc cgaggccgcc 104280

gcggacgacc ccgagttcga gcaccgcgtc ttctgcgagc gcgtgctctt cgaccccgag 104340

accgacgagc ccttcgcggc gcgcgtcttc ttcgggccgc tgtactacct gcgtctgcgg 104400

cacctcacgc tggacaaggc cacggtgcgc tgccgcgggc gcaagaccaa gctcatccgg 104460

caggccaacg agggccgccg ccgcggcggc ggcatcaaga tcggcgagat ggagcgcgac 104520

tgcatgatct cgcacggcgc ggccttcacc gtcgccgaga tcctgcgcga ctccgaggag 104580

gacgcgcagg aggtgctcgt ctgcgagaac tgcggcgaca tcgcggcgcg gctcaacggc 104640

acgcacgtct gcatccgctg ctccaagatg agcctctcgc cggtgctcac gcgcatggac 104700

tccacgcacg tgagcaaggt cttcaccacg cagatgaacg cgcgcggcat aaagatccgc 104760

gtggagttcg agaagcagga cccctgcttc tacgggactc cgaaacggtt cagcctcgcg 104820

cccgacgagt cgctgttctc gccggaggac tgaacccgcc gtcgcgaccg cgtcgcgacg 104880

actagcttat cgttcgactg atgcgaaacg cgcggcggcg ccgcgactta gcttatctcg 104940

actgatgcga acgcgcgacc tctcgcgact ttctagcttc tcagactgat gctaccatat 105000

cgcggcgtgc tggccccacc accagggctt ctcgccgtgg ctgacgcggg gctggctgcg 105060

acgcgcgctg cagtagctgc gcgcgcccca gtcgccgcgc acgtgcgccg ggggcaggct 105120

cccgtccagc gcgtgccgcg tcacctcggc gccgggccgg cggcacgtgt gcacgtccgt 105180

cttgttggag acgagcaccg cgtactgccg catggtctct atgtgatgct ccaagtgctt 105240

gcccgccatc cggttggact cgcagcacgt ttttgcttcg gctaaggttt tttctagagg 105300

ggatagtagc ttatccacgc gctcgggcag gacgcacgcg gagccgtcga accctacttt 105360

gaacggggtc accttgatgt tcccgtcgta gcggtcccac agcatcctga ggtaggttgt 105420

accgtcgggg tctgggtctg tccacactct aagcttttcg ctacagcggc cgtcgtacgt 105480

aagacggtct ctacgctcgt agtagtttct gcttatgttg ttggggtctc catgctcgta 105540

gtagtataaa tcgtacgcgc ctggcttttt taagtcgttt tcgtcgttgc tgacgtgtat 105600

cacgtcggga taataggata tcctaactgc actacaatct atagtatttg gtctagtaag 105660

ctgttcgaga tcaccttgtt catcatgatc tactgatttg tacacggcac cgtcgtgttc 105720

cgacggacgt atgaatatgt ccatggtaaa cgatgtaccc actttggaaa acgtatccca 105780

tgcagtaaag catagtccgt ccattataaa ctcaggaaca ctcataacaa atcgaaatct 105840

gtgaagtttt tcgaacacca cttttacatg gtctttgtca cgaacatcat tgccgtttac 105900

ttcagacatg aattgaagga acgctaaaga gtttcttgtt tcttcatgaa tctttccatt 105960

atacgtccat ccagtttcta gaattctata tatgcttttt gcatcgaccc cgtaccacca 106020

gtacatggga actccgaaat atatagctgg gtttgagtac caatgggcaa gagtgcccat 106080

tgcgtttaaa aagtcttgac aaaaaaatgc agtttttctg tcgataactt gacttggact 106140

acgttcgtgg acatcgtaca tgtccataat tggttcattg gtaacggtta catgacccgt 106200

cattatcttt ttaacaatca taagatacag tttgcctaaa gtcgaaatat gtataacgtt 106260

aatttttaca tgttctccta acgtaattgc gtttttactt agccattcgt cgtctacaaa 106320

aatcttacga tacataggat ttctctctac gtatcttcta aagtatagat ttaccggtct 106380

accggcgaca ttagcgccat ctatagcagg agcaagctgt atgtatcgtc gtataatgtc 106440

tcgtataagc tttctgtctt ctctgggaat acacgacacg gaacttagag actggtgcca 106500

gtgtctttca accaaagact tgaacctagc aaccaacgcg ttgtcactct ccatttataa 106560

ttaaataatt atcccaactt cgtatgttaa tccttattac cagatagcac cgctccttcc 106620

tctccaccac gtactatcta aaggatacct gtaagggtaa tgtctggata acgggcgtgt 106680

gagccaagac gtgttatggt gtcttcccca ccaacggtcc acttctctaa ctaccggagt 106740

gctagacgtt gtcgatccca ctactgttgt ttctccatta cctgtaatct ttgaagcgca 106800

acaagtgtta gtctttgcca aatcttctaa cggcttaatt aggtcgttaa gtctgtcaat 106860

atccatgcac tgaggtgtat cgttaccagt ttccccaact ttgggaggaa cttcctgttt 106920

agtgtccaaa taacccataa acctgtctct aagcattctt ctgtacgtgc ttttgtcatt 106980

gtctatgtct cccaaaaacc tgtgatttac gcatccgttg tacgtaagtc tgtcccttcg 107040

ctctcgctcg ttatttccta cttcttctat tgtactgtaa tgttgatagt ccaagtaata 107100

gccactgttt tcatgatttc ttgtaaatat aatcggtgtt ttattattga catcgtgttg 107160

cctactgtac gtatcttcca tggatctagg aacttgtcta gaaaattgag gactagaaat 107220

acgccttcca aatcctggat gataaaccaa acgcaatgca ctacagtcga catcgtcact 107280

gtctctagtt atcccatcaa caactccttc tttgtgatgc tccactgttt taaagttaac 107340

tcctctgtat atgttgagtg ttaaaaaaat atccacattg aacgcagttc catattttgt 107400

tattttatcc cacgacgtat aacacaaacc atccataatg aattccggaa ccgatactac 107460

aaaattagta tcgaacttat caaacgaaat gtttactcgc ggttgtgctt cgtatttttt 107520

gtcatacaca tctgtcatgt attgtacaaa atctatagct cctctagcat cgggcatgct 107580

aacgtctgga aaatcatttt ttaactgttc tagtacgaac tgttgatttt ggtcatctct 107640

ccaccagtac attggcaatc ctatcacaag agacttattt ttataataat ttgctacaga 107700

agctatatgc cacatgaaat tatagcaaaa ataatccatc tgtatgttta aaaccggttt 107760

actagtctgc tgagagtagc tatccatgat agtgtttccc tcgccaatac ttcctgacat 107820

tattctgtaa acaaccatta acaaaaatct tcctaccgtt gttatgttgt caaaagttct 107880

tatgttttga gcactttcga gtaaccatat gttattttca aatatacttt tgtaaactgg 107940

atttctgtcc acataactct ttaaaaatag atttactgga aggccgcttg ggttatctcc 108000

ctgtataggc ggcgcttgct ttatgtattc gcgtaacaaa tctcttacaa cttttctagt 108060

tcttctaggt atacatgacc tattattcaa aggctttgtc cagttagcgt ttataaacgt 108120

tgtaaagtca ctgactagct tctccattta taattaaata attacagacg gcaacacagc 108180

ggttatctaa tatctgctgt atcctgtctg tacatctatt tttctgttga gatcaagaag 108240

agctttacgt agactctcca agtgtctttc tagtctgtct aaccggttac ctgtttctct 108300

gcagcaatca gttatagttt tgtaactgtc taacaagctt acgaggcgct cttccacact 108360

ttctttagtt ggagctccag ccgcgtacac tccgttggtt gaattgcctg tatcatcagg 108420

ctgagtcaat aggttttctc cgtcattttc atccatattg agtccaacga acacaaacga 108480

gtaagtgttc ctctatttaa agtattgatt ttagaaaaag gcaagcctcg ctgccctgat 108540

tcggcggcaa acacgggttg aacacgcgga agtcgctcgc ggccgtgaag atctcgtccg 108600

cgcacgcctc cacgctcgcg aagcgcccag gcgagacgcc gtcgtgcgag cggaacccga 108660

actccgaggc cgccaccgcc gcgcccttga agagcacgca gcgccacttc ttgcgcacgt 108720

cgaaggcctc gtcgttgggg tcgaacacgc gccggtccac gcgcgggccg cccgccgtgc 108780

gcgcgaactc cagcgccgcg ttcgccgcgt tgaactcgcg gatgttgtcg tagttctcgt 108840

agacggccca gagctgcagc gccacgaaca tggcggccgc cgccgcgagg gccacgcaga 108900

gcgcggacac cgcgtccatc ttttatgtgc agaattattc gttggcgcgg agctcgcgca 108960

gctccgcggc gcgcagccgc gcgaaggctg ctttgagcgc gcgcagcagc tcctcggtgt 109020

ccgcgcgcag catgtcgaag cggtggtagc tgtccaggcg cgcgcggcag ccgaagaagc 109080

gtgcgacgca cgcggtgacg atgtcgttca cgtagagcac gcccgaggcc gtgcagtaca 109140

cggagcgcgg ctcgcgcggg tccggcggca cgtccacggc gaccgcgtgc gcggccacgt 109200

cctcgagcac cttgcgctcg agcacggcga ggaagtcgcg cagctggcgg cggttgtcca 109260

gccaggcgta ggtggtcgcg aagagcgtga gccgcccgcg cggcgcgatc gcggtgtagg 109320

gcgcgtaccc gcggaactcc cgggggtgca cgaccttgac gttctcgtgc tcgcgacgga 109380

aggcctcggt gtcgagcagc gccgcgagcg cgtccacgag cttgtcggag acctccacgc 109440

ccgcgccgaa ggcgatgagc tcgatcttct gctcgctctt ggggcggaag tcgtggaagg 109500

tgtgcagcag catctcgcgg agctgcggcg gcttctcgac ggcctcgagc gcgtcgccgc 109560

ggacgaggaa gtagtcgagg tcgtgcagcg agacgtgctg cccggcggcg ctctgcacaa 109620

acttgaggaa gacgcagagg cccgcgcggc gctcgagcac gtcctcgacg tgcgcgtgga 109680

atacgtgccg cgagggcatg gcctcgatcg cggagagcca ctcctcgttg acgcaggtgg 109740

tggtgttctc cagcaccacg ccctgcgtga gcgcgggcca ctgcaggtgg aaggcgaact 109800

cgtgcttgat gagcgaggcc acggccgggt ccaggtccac ggccagcgcg gcctcgccga 109860

cgaggggagc gtccgccatc acgcggagga cgcctggccc atctcctttt tcgccttttt 109920

attcaggatc attattcttt cgttgacgag gtccatgagc atcttgatgg cggcggccgc 109980

ggccgccgcg tcgccgccgc acatctgcgc gatgcgcgtg agcatgtgca gcagcgcggc 110040

ctcgtttagg tcctcctcca tttagaggcc gtgagggcgc gcgtcgtcgc gacgagggga 110100

cgcctcccgc ggcagcgtgg tgcgcacggc gaaggcgagc agcgcgccgg cgcactgcgt 110160

gagcacacac tccgcgagcg cgacgaggag ctcggagggc gcgagcacca tttagaggcg 110220

cgcgcgggtt taattgccgc cgtcagagtc ggcatcatcg cccttgtcgc cgccgtcctt 110280

gcagtcgccc ttggtctcgg cgtcgacgat gtcggcgagc cgcgtcttca tgtgcgagaa 110340

ctgcgcgagc aggatgccgg ggtcgagaca gcgcttgacg acgctctcgt cggcgaagtc 110400

gtagcagatg cgctcctggt tctggcagaa caccgagtct tcgatgatca acaccctcct 110460

ggtcccggcc gaccgcatga tggccatggc ccggatgagc ctcttcttcg atccgcgtat 110520

ggacatggac cggagcacgt tctccacgtc ggagtcggag acgttgcagc agcagaggtg 110580

cgtgatgctg gcgcgcccgt tgacggggat gtgcttgtag gtctggcaga gcagcaccag 110640

cgacacgttg atgtgccgcc cgtagttcat gaggcccaag agtgtgggcg accgcgtctg 110700

cgtgtcgccc atatcgtcga gaatgatgag gaacttctgc ttcttcgtct gcgcgtgccg 110760

ctcgatcttg cgcttggcga ccgagaggtt gtactcgagc tcctcgtgcg tggtgacctt 110820

gtggatgtgg tccggccaca cgaagccgtc gtaggcggcg ttgtagacgg gcgtgaagag 110880

caggatgtgc ttgaagcggc gcacgagcgt gcggaagagc gagagcaggt aggcggtctt 110940

gccggagccg gagccgccga cgagcgccat cctgaagggc gcctcgatga gactctcccg 111000

cttgaagcgc acctcctgca cgacatccat cgtatattta ctgtcactaa attaccggct 111060

ccgagaaata tagaaattag agcctcctag agcacaccga ggcgcatcgg caagatggca 111120

cataacacgt tcgaaaacga tagcgagtcg gcagctaaca accagtacgt ggcgtcagtc 111180

aagcgccaga aaatgattcg gcgatacatt aagatgttct tccggttcgt tacggcgata 111240

gctatcattg tcctggctat tctagttgtg attctgtcgc tatctctaga cgaatgtctg 111300

cacagagaac accctcatga ctattcacat gtacaaaatt caacatgcga cggcattact 111360

ttaggtggtg aaaagtgtct cagacttaat ttgccagcaa cgtgggaaga tgctaataga 111420

caatgtggta atcttgggtt ttacctacca tctactggcc ttgaaaagaa atttccttgg 111480

cttgtgacct atctcgacgg aacttgggga aacactcaga actccgtatt tggaccaacc 111540

ggtgacttgc agaatgtcat aggaccgaaa gaatacaaat atttttgtgt gtccgattag 111600

atgattataa tctaataaat gggttgctgt aaggtcccta accgccagtc tataaggact 111660

ttgaaaaagg cgtcctgtcc ggtcgccagt ctcgtcacca ttctctccct agtcaccagc 111720

ctcggtgcga tagtcagata caccaatttt tttctaaaag aagcatgtga cgaaggatgg 111780

atgcccataa aaaacatatg cattttaaac acgcactttg aagccaccaa tgacgatgcc 111840

cacaggatat gtgaaaacct agacggaaag ccgccggcca tccctaaccc tactctgtta 111900

aagggtgtca cagttctcac cggcgaaaag aaattttgga tgacccatca cgaagactat 111960

actactgtgt ttgagcatat agacgatagg acgactccta aaaacacaga ctatgacagt 112020

aaaaaacaca cttgtttgat gagcgaggac ggattgatac accataactg catgatgaac 112080

gtgactgtgg tatgcatgaa ggagatgcac ggataactga aaatatactg tttgaacgca 112140

aagacgccat gtcgcgactt caaatactga cctcatttgg acaaatcttc gcacccgacg 112200

aagctcggct gcgcgagatc gcgcgtgatt tgggaatatg caccataaaa cgcgcattcg 112260

gcgacatgct gtacggcttt atagacttcg acccggtgcc cctgacccaa gtaaacatgc 112320

tcatgtccaa ctgctacttc gcggtcaacg gcaacctgct tccgtgcacg gaggacttcc 112380

ggctcagact cccggcaacg gagatctctg cggcctacct gacgagaacg ggacggacga 112440

tcctgtgcgg caaagacttc aacatagtag cgccgtcggg gttcaagccg tccatgcggc 112500

tgcgcgacct cagtcacgtg tctgcgcttg tagagatcct ggaagtctac gacgagtccg 112560

gggagtacca attcgtgctc ggccccagcg cgcagttcat gctgcggctg atggagaagg 112620

agaacgtctg tctgttcggc agcgggtggt gcatagtgga cctgcgcaag ctggacgtac 112680

ccatataatc agcatccttg tttttatcct gtctttttat cagtttttta gctagttaaa 112740

acataaatag taaagctaaa aagaggagtt ctggagtctt gcaacaacca ggatgaaggc 112800

ggtgttgttg ctggcgttac tgggagcgtt caccaacgca gcgcctttgt tagaaagcca 112860

gcgttctaac agtgaggaaa aagcaaattt ctgctcgacg cataatgatg aagtgtacgc 112920

caggttcagg cttcagatgc gcgtgggtgt acgacacagt ccgctctaca ctcccagcaa 112980

catgtgcatg ctggacatag aagactccgt tgaggacata gaagagtcca cagaaaaaga 113040

atacgcgtct acggccacgg gtgaggcggc cggagtgaac gtgtcagtgg cactagtggg 113100

agaaggcgtg agcataccgt ttagttacat aggccttgga ttcaacccgt cgcttgaaga 113160

tagctacctg tacgtcaacg tctcgtcacg agctccttgg gttaaacaga cttcggacct 113220

atccgcgaac ggcggctggg gtatcaaaca ggttctagaa aaagagttac tggccatcca 113280

aatagggtgc gacaaccaaa aatttcccga agaacccaca actacacccc cctcacctgt 113340

cactacaacg ctttcctcaa caactccaga tctgaatgaa gaaaacacag aaaatacgcc 113400

gacgaccacc ggcgccagtg tagacagaaa gcgcaatcca gctgacattg acttctcgct 113460

gctcgtggac ccccgatgcg tgacctctgt agacctgcac gtcgagctca gggacgcgtg 113520

catagactac aaacaagagt cgccgttgtc gctgaagggg aaatatggag acggcgaact 113580

agtaaaaaag gagattaaag acgtgggaaa gaatcacaat atgtgcagtc ttaacctcaa 113640

ccctggcaat tgagctgttt ttattcggca atataatagg tgattattga acattaaaca 113700

aaacttatcc cacaacgccg caacaatgga agtgctggtg atcatctcta ttatcgtcgc 113760

cgtaatatgc ttgaccggag cggtaatgta cctccttatt gaactcggct tagccgccga 113820

gcgcgctaac aaacgcgcgc gcgtgaagaa aaatatgcgc aaattagcca ctcaattggg 113880

aaatggatct gtcgactccg gcataggcat aggcccgtgc ataatgtcgc gcaccatgga 113940

ctctggaccc agtcgctggg acagcgacag tgaggatgac ggggacagcc tgtccacgac 114000

gtccaccagc ggagggggga ctctcacccg agtgtgggtt gggagcgccg ggcctatgta 114060

cgaaaacttc tgcgggaacg gcacccgcca ctcccccacc aacgaccctg gctaccactc 114120

gcgggagact ctctgcagcg gacctccccg tcaggcgccg gcgctaccgc ccaccccgaa 114180

gcccgacgag gtaacggtgg acgtggggcc cggtcccgac gaccaacacg gtccgtacga 114240

ggaacctgat cccattcccc cgcaggaacc cgagccgccg gtgcagattg aggtaaccat 114300

caacgggccc ggtggagaag gcgaggcgga aggagaattt ttctacgacg agtagccgcc 114360

aaaactgaat aactatcggg cttcgtaaac gcgcagacat gccgctgttc cggaagctca 114420

tggtttcgcg ctccctggtc aaggaatgtc tgactctgga cttccggcag ggcgagcgtc 114480

tccctacgcg atgcttcctc ccggtgcccg cggggacgac attccacaga gtctgcgaca 114540

cctcgccgct gacggacgaa gtctcccggc acgtgcagga gcccgtcatg ggcaccggac 114600

gggtccagta ctactacttc gagagcggcc agggcatgat cggcgacaac gcgggcatgg 114660

cgcgcatgct cgtgtgcacg cggtcggcgt acaacggcgg cgacgtcgtc gtgcggtcca 114720

cgcggagcag agcagacaag accgtggtcg cgccctgcca gggcatggcg ctgctgctga 114780

gccccttctg cgccttcgac atcacgccgg tcgagagcgg ctccgcgata ttcgcggagg 114840

tcatcgtcac cgcgcccagc atggactacg tcgaggcggt caccggcacg ggcgaggcgg 114900

ccgtgcggat attcaactcg caccacccgc tctggccgcg acacggctcg aacgtctgct 114960

tcgcgctgcg gttgctgcga gacgtgcgca cgggcgagcg cgtggtcgag cagatgttca 115020

tggacgggcg ctggcacacc gtgctgagga cgtcctgcgg caacaaggtc tgcgtgcccg 115080

ccgacctcgt gggccagacg aacctcgagg aggtgccctt ctgcgacgtg acgcccgaga 115140

tcatgcgccg cgcgctggcg atcgacccgc cgtacgaggc cgtggcgcac ccgcaccgct 115200

gcgtgtacgg cgccatggac gtccggtgcg cgaacgagta cctcgtgtac tgcaccttca 115260

agacggagcc gacacggcgc agcacgtcct cgccgggccc ggacagcccg ctgtcgcccg 115320

cgactccgtc gacctcgcgg gccgcggccg cgcgcgtccc cacgacgccg caggaagtgg 115380

cctcgccgac cacgaggctc ctggagacct gtctgcgcga cgccctcgac ggactctgac 115440

ccgaaggacc caccgtccac tcacattcca ctgccagaca actcaagctt tttctgcatc 115500

tacctcgcta ataattgaat tgttatagga caaacaggcg cactcgagca caatggcgtg 115560

ttttatcgaa ttgttagact ccatcttcaa ccgacgccac cgtaatttcg ggccggagga 115620

catgtacagg ccctctgacg ccccgccccc caaatcgcac acgcctcgca ctccccgcac 115680

cccgcggacc cagtgtcccg gacacccgcg gcgacaaagc tcctctccca tctacggcgc 115740

ttatgtggac tccctgccga ggaacagaaa gcggttccag aatcaacaca gttgtcccgg 115800

agattacgag cggtgtcaac tctcggacac catcagcctg gatgcgacgc tactcacggt 115860

tacagtgacg tccatctcca gcatatccag ctctagtagc tcagactcta tctctctggg 115920

gcagtgcaga ctgtccatgg tgtccgcaac atcaacctcc acctccacaa ccttctcctc 115980

ctcggaatga gcgccacact tatttttgta taatagtttg tattgaacct tagagacatc 116040

cacaaatagt taggaagcat gagtagttca agtagcgaga ccacccctaa gcccaagccc 116100

atccctgctc ctcccatgac tcaggaggag tttaacaaag aagtgaagaa acgaaaagaa 116160

cagaaaaagg aaaaatctag aaccgttgaa cgtgagtcag aaaccgtaac tgtatcttcc 116220

gacggatcag agataaaaaa gacttacgag cgcgagtctg agagaacaac cgaaacagaa 116280

aagaacaaca cgtcaaccga tgataataag cagaacaccc ctgtagagaa accagaggaa 116340

accaagcctg cttctactcc tgaaggtgtg aagccagccg agactcctgc cccgactact 116400

gacccccaac ctactacaca accacccgca gaatcaaacc ctggaagtca acccgcacct 116460

gcttcagaac caacccccgc acctgagcct gcaccggaac ccactcagcc tgcatcagta 116520

actcaacccg ctccaacacc agagccaagt ccagccccta agcctactcc ggcttctgaa 116580

ccaaccccag catctgagcc tacttctgct ccagaaccta caccatccgc agaaccaact 116640

cctcaaccaa ctgtagaaac accaccatct gctccagcac caactcccga ggcccaacca 116700

cccgccaaca gcaatcccac tactgaaact accactggta ccagcacctc ctaagtgagt 116760

acgtaagcat ttcggagtaa cgtcgtagca agcgctagtc cgccgcgagc ggttctcgca 116820

agttttttcg ggtaaaaagc gtacaccgtc gccttgtcgc ggcggtgtac gcttttttca 116880

cgcccttttt gcaaaattta aattgtaccc gcgccggctc taggaaagat ggcgtgcctc 116940

agagtgttcc tggcggtgct cgcgctgtgc gggagcgtgc actcggcgca atggatcggc 117000

gagcgcgact tctgcacggc ccacgcgcag gacgtcttcg cgcggctgca ggtgtggatg 117060

cgcattgacc ggaacgtgac cgccgcggac aacagctcgg cctgcgcgct ggcgatagag 117120

acgccgccga gcaacttcga cgcggacgtc tacgtcgccg cggccggcat aaacgtcagc 117180

gtgtccgcga tcaactgcgg cttcttcaac atgcgccagg tagagacgac gtacaacacg 117240

gcacgccggc agatgtacgt gtacatggac tcctgggacc cttgggtgat cgacgacccc 117300

cagccgctct tcagccagga gtacgaaaac gaaacgcttc cgtacctgct ggaggttctg 117360

gagctagcga ggctgtacat tcgcgtgggc tgcacggtgc ccggagagca gcccttcgag 117420

gtgatcccgg ggatcgacta cccgcacacc ggcatggagt ttctccagca cgttctacgg 117480

ccgaaccgcc ggttcgctcc ggcgaagctg cacatggacc tcgaggtgga ccaccggtgc 117540

gtgagcgccg tccacgtgaa ggcgttcctg caggacgcct gtagcgcccg caaggcgcgg 117600

acgccactct acttcgcggg gcatggctgc aaccatccag atcgccggcc aaaaaaccca 117660

gtaccgcgcc ctcagcacgt atcgtcgccg atctccagga agtgcagcat gcagacggcg 117720

cgctaagggc gctcaccgcg ctgacggcgg ccgtggtgtg cgcgatcgcc atcgcgctcg 117780

agcgcggggc ggaggccgac gccgtggacc ttatccttat aaaattttca atgatatgct 117840

agtttttatg cgaccttcct tagaaaattc ggaattcaaa aatgaaataa aacggcgttt 117900

agcacgcata ttattaatac cgaccaccat ggcaggcgtc cgcagctgcc agaagaaagt 117960

cccttctact gcgggctcca tgtcatttca acggggcaac cggagcatcc agccggcgat 118020

gtccgaggcg ttgcagaatg atttcagcta caacccgcga ccgcctccgc cgagcgcaga 118080

agagattgac ttcttctgcg tggacatgcg caaagtactg atggaaattg aggccaagcc 118140

cagcagctcc aagtaccccg atttcatcac ccggttgaca gcagcccgcc gtgcacgccg 118200

gcgcgcaagc gcaacggctt cggccgcaag gcactgaaca aaacccaggt gccgcagcag 118260

gccaagcgtg acggctactc ccgctaatgc agtccacaca cttcacacac tacatcagca 118320

ctcaagctta taatcactac acaatgaatc agcccaccac gtgcgaagca cacacataaa 118380

atcacccacc tgtcctgatc gttcccaata ctcccaatca ccgtgcttta cacgcacgtt 118440

aatcaccctt tccttccttc atgcgttcct gatcgttcct cctccttaat cacacacaca 118500

ccccgtaatt ttgtactttt gtactttaat ttgtacactt tacacactga ctttgtactg 118560

cctttgtact ttatttttgt actgaaattg gacgatactt atctttgtat tcacatccaa 118620

gttttgcaaa ttccacagcc ggtagcgaaa agtgaaatcg taccgtttta ggcttcgatc 118680

cccctcccgc gcgaagactc gccagcatgg actctcgtag gctcgctctt gccgtcgcct 118740

tcggaggcgt cctcgccagc atgacacagc gccgccgcct ggcttctctc atcgccagca 118800

tcggccaacg gctgatgggc ggcgacggca tgcgtcgcgt cgccgttcgg ttgatcgacc 118860

agctcatggc cggacccccg gacatcaacg acgaggcctt ccagcgcgag atccgcgtgg 118920

gcgagctctt ccaggcgctc caccgcgtgg tcgagcaggc acgccgagag aagtacttcg 118980

aggtctgcgg cgccggcaac gacgccgacg cgcccgtcgt cgagatggac accgcggccg 119040

cacccccgca gccccagccc gcgcccctcg tggtcacgcc gcagaacgcg ttcatgttcg 119100

tgccgcaagg cagccacgtg cacgtggacg agagcgtgga cccgttcttc ggcatgagcc 119160

cctccatctt cgggcgcgac ctcccccctc agccgcccga ggagctgctg agcgactacg 119220

acccgctcat gagccaggcc ggcgagccgc cgagcccgcg gtcgccctgc gaggccgacc 119280

tctggtgctt cgagacgctc ggcgacagcg acagcgattg agaccgcacc acaccctacc 119340

tcacccaccc cacactccac ctcacctcac cctaacaccc aacacccaac acctcaaccg 119400

gacaatgaag gagtcccaca tttcactgaa ggacgcggat gaagccgcac tcccccacat 119460

gaaggattgg caacggtcaa acatttcacc tgcaatgaag gacgatgcgc ggtcgcattg 119520

gcctgcgacc gacatcgcac acatgaagga cacaattggt ttgttaatcc ggacaatgaa 119580

ggacaaattg tttttgttaa tcaggacaat tagaacacaa tcaaattttt gtacgatcat 119640

aaaatcgata tttgatgcac atatattagt aagtatatta gactaaattc tccggggagg 119700

caagcagttg gatacggcgg ggcggggcac gacgtgcacg gagagttcgg gcgggtcccc 119760

cttcccccca cccccacgca ccacgatgcg cctaatctta gcgctcgtgg cctgcttgtt 119820

ggcggcgccg atgccgttat cgggtcgttc gacaagcact ccaaacacgt ccccctccgc 119880

actcggctcg acgagttcgg aaccaagctc ggaagacgct gtggcttcga gcacaacgac 119940

aagcacactc acaagcacta caagcacact cactatgtcc acaagtgtgg acaccactac 120000

tacctcgggc gctacaacgt ccgcaaacag cactcctgca gcgagtgtga gctcctccac 120060

acccgcaact accgaggcat cgacggcacc aacgacgccg tcgacgccga cgacagtgaa 120120

ggtaacgaag ggcaaggaag acacgaaggc gtctgcctac ctcgttttac taatcacgtt 120180

catggtcatg accacgctcg tgatggtcgt ggtcgtggtc gtggtcgtgt acaaacaggg 120240

actctgtaac tgctgctgta agtttccctg ctgcaaagag ctcaaggact acctcgacga 120300

ggaggagagc gccgggctgt acgacgcctt gacgtggagc cactcagact ccggcctccg 120360

gctcgtcgtg cgcgcggacc ccagatgatg aggatcggat aagatcggcg tgtttttccc 120420

gcccgtcgcg aacattatgc ctctaaatgc cgagaattaa ctgaaattca aacacgcttt 120480

gggactcaac tccgtgaccc acactcaacc atggctggct tcctaggcgc attcagaggc 120540

gtgtgctccg acttatggca gtcgctccgt ggacacggac accactcttc cagctgcccg 120600

cgacgacgcg ccaacagcat ggacgaccgc gaccggcgcc gacaccgcca ccgcgagatc 120660

cccaacagct cggcgtcgct gaacagcgac ccgatgccgc aacgcagtgc gggtgcgcgc 120720

cggcactacg actgccgccc ctcggaaaag agcagacact cctccgacaa gcaccactcg 120780

gcggaccgac accactcggc ggaccgacac caatcggcgg acagggacag acaccgtcgc 120840

agtcgcaaga actacgactc gcacccgtcg cgcaggaacc gcaactacga gcgggcggac 120900

taccagagac acccctcaca aacccaccca gacgcccccg cgcagacctc gacgctcaag 120960

gtgacctccc taagcaccag ctgcagcacc ctgtcccaac atcactacga gacccccgac 121020

cacatctacg acatcccgga agacagtcgc ggggcgtcgg ctccccctcg cgcggacctc 121080

gcgctccccc cgctcgccat gcccaaatcc aagccgcgtc gcacgcgccc ggcgtccatg 121140

aacgactgcc tgatgaagca ctgcggcgcc ggcagaccca acctccaaga cgacatatgc 121200

acactatgta ctgatataga gacacagctg agcgcactag agaagtctct ggagtcagag 121260

ctcaacttct atcgtcgcta catacaagac actaagacat tgctcgccac gcgagcagca 121320

aacatcggca gcaaagctct gatctacacc gacgactaca acggcagtgg cgacgtcggc 121380

gaaaaggagc actgctcgga ggagtgctgc aaagtggagg aagttctgtg agaaagtgcg 121440

tttttctgta atgtgaaata agatagcctt atgtgtgcac agacatggcg aacaggctcg 121500

tgtttctcga ccccgagacc ctagccgagg ccgacggcat ccccggctat ggggtgttcg 121560

agcccggcaa gaagaaatgc atcttcacaa agatccgcac cagcgtcgca ctcgcgtgcc 121620

ggtacgccgt ctcggacggc ggcctcatcg acgagttcgt catggctaca tacgggacca 121680

gacgcgcgtg ccggctcgtc cggcacctga cgataggcgc ggagggcgtg atgacccggc 121740

ccgccagcaa ctgcgcgccg cacatggtgc tcatctgcct cagaggcgtg gccgccgtgt 121800

ccagcgagga catgggcttc ggtcgctgca tcatggagcg cggcaccatg ttcatggtca 121860

agtccgcgca cagcgccgtc gtctgcggca accccgcctg cgagctgctc gtcctcttct 121920

acgactactt cacccccatc ccccggccgc tctccggaga cgaggtgctg ttcacccgcg 121980

acctcgcgca cgtggactac gcccccgagt cggcggtcgt cttcaagatg gattacaacc 122040

tcgagaccga cgtggccacg ctgtttgtcg gggggtacat attccgcgcc aagggcctga 122100

tgatggagac gcgcgaacaa gtgggcgacg agtgcgactg ctgccgccac agctcgccgg 122160

tgctcgtcat ggatcgcgag aagatgatgt cgtcgctgcg catgatcccc agcatcgtgc 122220

ccggccagcg ggagatttgg cttcgcgagc gcggctgggc cgtcctcgag acggacgccc 122280

gcggacactg cgagcccggc gtcctgaggc tggcgctcgc cggcctgcgg ctgttcgcag 122340

gatgcctgcg ctccgtcgtg gggcggcgcg agctgtcgct gttctgctac ggcgtcgctc 122400

ccaagttcgg cggggagttc gaggacgcgc cgcgccccat ggagatcgac ggttagttgt 122460

ttttatccct gtacatacgc cgcaaactga aactttaggg caccgcgtaa tagtgcacga 122520

acgcccagtg gaccgcttcc gcagccatgg aaaacaacga cggcaacgaa cgcaacaacg 122580

aacacccgca cgttcgagaa ttcaaggagg cgtccctgta cgggtttctg gtggcggccg 122640

cggacgtgac cgtcgaagac gtgcaccggt accttcagtt cggcgcggac gtgaactaca 122700

ggggcgcgta cctgtgcacg ccgctgcacg cgtacctgca gtccggctgc gaaaagcgcc 122760

tagacgtcgt ggacgcgctg ctggacgccg gcgcagacat caacgccaag gagatctgcg 122820

gtctcacgcc cgtgcacctg tacgcgagct acgcggacgt ggacgtagag ttcatgcgcg 122880

ggctcatcga gcgcggcgcg agcgtgtgcg gcgagagctc ggtcacgggc tgcctgtact 122940

cgtacctgta cacacacagc gtggacggcg gcgcgcgcct ggacgtggtc gagctgctcg 123000

tgcaggcggg cgcggacgtg aacgtccgcg gcgaggcgcg caagacgccg ctgcacgtgc 123060

actgcgcggg cttcgaggtg gattcggaca tcgtggatct gctgctgcgc gcgggcgcgg 123120

accccgaggc gctcgacgaa cacgggctca cgcccgcgga cgtgctcgtg aagtccgtgg 123180

gcgccaacgt ggagacgctg cggctcttcc tcgacgcggg cgtgagcgtg gccacgtcgc 123240

gcgacgcgcg cggacgcacg ccgctgcacc accacgcaga ctccttccgg gcgagtgcgg 123300

gcatcgtgcg cgaactgctc gccgccggct gcgacgcggc ggccgccgac gacctcggaa 123360

acacgcccct gcacagcctc gccaccttct gctcgtgccg gcgctcggtg ctcgaccagc 123420

tcatcgccgg cggcgcggac atcaacgccc gcaaccacta cggccacacc tgtctgtact 123480

acgcgtccat ctacaacccc tccgtctgct cgcggctcat cgccgcgggt gcggacgtga 123540

ccgcgcgcac gccggacgga cgcacgccgc tctcgggcat gatcatgcgc aagcacacgc 123600

gcgccgtgcg cgccgccctg gcgacgcggc ctcccgcgga cgccgtcgcc gcgtcgctgg 123660

acgtcgcagt acagcccgag cccacggacg ccactcgcgc gtgcgtgcgg tacgtggtgc 123720

tctgcggcgg cacgctctcg gcgcgcgtgc ggtcgcgaca cgcggacttc gtgcgagagt 123780

gcgaaagcga ggtggtcgtg ctcagaacca ccgtggtggg gctgcccggc acctcgctgc 123840

tggacatcgt gcgtgcggcg cagccgccgc cggtactgct ctccccgcgc gtgcaccacg 123900

tgctgcagaa gctgtgcgtg tacgcggagt tggtggacgc gcggctgcgc gagatgcggc 123960

acaagaccaa cctcgtggac gcggtgtcgc ggctcgtgtg tccgtgcgcg ctgccgccgg 124020

aggtggtgcg cggcatcctc gtgcacgtgc cgatagacag cctgcggcac acgttgaccc 124080

tcggcgtggc gcaggcctcg cgtttccttc cctcgcataa atgaaatatt attttttgtg 124140

gtagaccgga tctccccgat ggaccccgcc ggacaacgac tgcgcgcgcc agggccgtgg 124200

cgcctgaacc cgccgaccgc ggccgcgctg gaaagcgcgc tgctgcggcc cgcggcgtcg 124260

gcgggcgccg accgctgcgc gaacgcgcac gtggaccgcc gcaacatggg cgtcggcgag 124320

ggccgcgagg tgcccgcgga cgtcgagggg ctcatgaccg agatccacct gcggtacgga 124380

atgacgcgcg tccaccggaa cgttcacttc gtgcagttct ggcacggcga gcacgtgcgc 124440

cggcgccccg cgcgacacgt gttcacggtc tggatctgcc tcagcggcga ggtgcgcatc 124500

tacgcagagt gctgccaggc ggggcacggc ttcgtgctct gccgacagat ggcggcaggg 124560

tacatgttcg tgaccgaacc cacggactcg gtcacggtct cggtgccgca ccgactgcgc 124620

aactcgcggt cgccggtgtg gctggcggcg gtcttcgcca cgcggcactt cgagccgctg 124680

ccgccgccca tgtacgccgt gcccgggcac gtggtgctcg cgcgcagcgc ctccatgctc 124740

tgcgactgct ggccgtcgga cccgcggcgc cgcaacgtga tcttctacat gcggctgtcg 124800

ggcgcgatgg tgcgcgtggt cgtgccgggc gcggagctcg agatcgagtg cacctcgggg 124860

ttccggccgg accacttctc catcaacgac gagtgcgtgt gctgcgagcg tccgcacgtc 124920

gcgcgaaccg cggtgtggac gctggcggag atttgccgcg gcgccacggt ggtgctcgcg 124980

ccgccactgc cccgcgaccg cgccgcgggg ctgctcgcgg agatccgcct ggcctcgctg 125040

cgatgggtgc gcgtgcgtgc ggtccgcagc ggcagagaaa gcgtgggccc gttcccctcg 125100

gtggtgtggg cggcggtctt ctccgccgtt cggctcttcc tggacggaac cgtgcctgcc 125160

ttcccggcgt gtgtggagaa tggacgcgcg gcgtacggca tggtgtacgt gcccccggag 125220

gagccgcgga tggacgggct ctgtgtgttc ccgacgcccg ccgagccggc ggcgctcttc 125280

gtccgcggag accaggtgct tgaggccggc gcggccgccg ccataatcgc ggccgctgag 125340

aagcgcgtcc aggccgccaa tgggtctcct gctgccgcgg aggaggacat aggtgcggcg 125400

gccgatgccg ccgcagagag cgtggagcag gaccagcgcg tcgagttcga ccttgggcct 125460

gggcctgacc ccagccaaga agcgcccgcg gacgcgcagc gtgccgattc ggacgacgac 125520

accggctccg agaccgagac cggcgacgag agtgtgggcg gcgaggatga cagcgactcc 125580

tcctcctctt actcggtgat gtcggacgac gaaaacgaca gcggcgacga gggctggggc 125640

gactctagcg actccggcat cgaggacgac gacggcggtg tcggccaggc cgccgaggaa 125700

gaagaggagg aagagcgcga cgtcctcggc gcagcggccc agatgctcgg agactgaccg 125760

gtggtgaaaa cataaaaata aactgttcaa cacttgtact ccgggcacca acactactat 125820

ccatacccac cctccctcca cacactacaa tggcaaacag agaagagatt gacgcctccg 125880

ccgtcatggc tgcctacctc gcgagagagt acgcggcggc tgtagaagaa cagctgacgc 125940

cgcgcgagcg cgatgcgctc gaagcccttc gcgtttccgg cgaggaggtc cggtcgccgc 126000

tgctgcaaga actctcgaac gcgggcgagc accgcgccaa ccccgaaaac tcgcacatcc 126060

ccgccgccct cgtctccgcg cttctcgaag cccccacctc ccccggccgc atggtcactg 126120

cgattgagct ctgcgcgcag atgggccggg tatggacgcg cggccgccag ctcgtcgaat 126180

tcatgcggct cgtgtacgtg ctcctagacc gtctgccgcc cacggccgac gaggacctca 126240

gcacctggct gcaggccgtc gcgcgcgtgc acggcacgcg gcgccgcctg caccgcgttc 126300

tcggcgtcgg ggccgtcatg gcaggcgtcg gtatgctgct gctcggcgtg cgcgtgttgc 126360

ggcgcacata actttttatc tcggctcaaa ctgaaatacg acattggact acgaaaccta 126420

tgattttgct cacggccgcg cgagatagga taataaataa cctttgagca actaacatgg 126480

ccgatgagag agaggccgac ggcgcgctgt tccggtacct ggagagcgag gaccgtccgg 126540

acgtggagca catgcgccgg ctgctggacg agggtgcgga cgtgaactac gcgggcccgc 126600

gcgggtacgc gccgctgcac atgctcatgc gcggcaaccc gctagacccc gacgcggtgc 126660

gactgctgct cgccgcgggc gcggacgtga acgcgacatc gctctgcggg ttcacgccgc 126720

tgcactccta catgtgcttc gggaccgtga cgccagacac gctgcgtgcg ctcatgcgcc 126780

acggcgcgag cgtcagcgac ctcgagcgca acatcaacgc gctgatcgag tacttcaacc 126840

gcgacggctg catgggcggc gcggaggcga ccgtgatcgc actgctggtg gagcacggcg 126900

cgcacgtgaa cgccaaagac gaccttggac gaacgccgct gcacatctac ctgtccggct 126960

tcttcgtgtc ggcaccggtg gcgctcgcgc tgatcgcgct cggcgcgaac ccgaacgcca 127020

cggacgcgta cgggcgcacg ccactgcacg ccttcctgcg ctcccgcgac gtggaccccg 127080

ctgtgctgaa gacgctcatc gccgcgggcg cagacccgct cgcgcgcgac atcatccggc 127140

gcacggcgct gcactaccac tgcgagtcct tcaagacgcg cgctagtgtt atagagacgc 127200

tggtggccgc cggctgcgac cccgcgagca cagacctgct cgacaacacg gcgctgcaca 127260

gcatggccat gggcagctcc tgccgcgcct cgctgatccg cccgctgctg gccgcgggcg 127320

tgtccgtgaa cgcgcgcaac gcgcggctgc agacgccgct gcacctcgcg gccgtgttca 127380

acccgccggc ctgcgcgcgg ctgctggccg cgggcgcgga ccccgcgctc gcggacctgg 127440

acgagacaac gccgctgctg agcatggtgc ggcacaactg cgcacgcgcg ctgcgcacgg 127500

cgctgccctt ggcgccggac gcgctggtgg ccggcgcggt gaaccgcgtg aacgcgcgca 127560

cgccgagcgc ggccacgcga gagtgcgtga tggcgctggc gctgcgcggc gcgctggacc 127620

tgctgagcgc ggagagcgtt gccacccacg cggccgcgat ccgcgcctgc gaggcggagg 127680

tcgcgctgct gcggcgcacg cgcctgggcg cgccgccgac gacgctcttc gcgctgctga 127740

caggacgacc gaacacgctg gtttccgcga aggcggcgcg acgcgcgatg gcggacgtgt 127800

gtgtctaccg cgcggcgctg gccgcgcgcg tggagcgcgt gcgccgcaag tcctcgctgg 127860

tcgagcgcct caccgccatg gtgtgtccgt gcgctctgcc gccagagcta gtgacgcgca 127920

tcctcgcgct cctgaccgtg gaggaactcg cttgcgcaat gcgcaaataa taatgaacta 127980

taactaggct tattagaggc actatttgtg cagagtcgtt agttatagtt agtgtactta 128040

caattggaat gtcgaagaac aaaattctgg tgtgttttgt aattattctt acttatacat 128100

tatacacaga tgcgtattgt gttgagtatg aggaaagtga ggaagataaa caacagtgcg 128160

gtagtagtag taattttcct gcgagtttac cgcacatgct tagagaactc agggcagcgt 128220

tcggaaaggt aaaaactttc ttccagatga aagaccaact gaacagtatg ctactcacac 128280

agtcgctcct cgacgacttc aaaggctacc tcgggtgtca ggcactttct gagatgatac 128340

agttttactt ggaagaggtg atgccgcagg cggaaaatca cgggccggac atcaaagagc 128400

acgttaactc gctgggagaa aaactcaaaa cgctgcgtct tcgactgcgt cgctgccacc 128460

gcttcctgcc gtgtgagaac aagagtaagg ccgtggagca agtcaaacgt gtgttcaaca 128520

tgctgcagga acgaggtgtt tacaaggcca tgagcgagtt cgacatattc atcaactaca 128580

tagaatcata catgactact aaaatgtaaa aatgtataca acttttagtt atcgttcgga 128640

ttctcgtatc gttctgcata ctatgtatat aaaatgtata ttaacatagt tacagttaca 128700

gttacagcta tatttttatg ctcacaagat gctatataat tgaaaggaaa ttgttcactc 128760

tctgtcaggg cgccatggac tttctaggcg ccgcgcttca cgactacgtt gccgatgcgc 128820

ccaaggtctg cgccgaggag gtgcggcggc tgctggccgc aggcgcctct gtggagtacg 128880

cgggcgagtt cgggaagacc gcgctgcacc agtacatggg ccgttccggc gcggaccccg 128940

ccgtcgtgcg cgcgctgctg gacgccggcg cgcgcgtgga cctcccggag acctgctgcg 129000

gctgcacgcc cgtgcacctc tgcctcatgg ccgccaatat cgacgtggag gttctccgca 129060

tgctcgtcca cgagggccgc gtcgaggact gcggccgcgc cgagctcgcc tccgtggtgc 129120

tcaaggagtt cgtggtgaac cgcgccttcg acgagaacgt caccgagcga gtgatgcgcg 129180

ttcttgtggc cgcgggcgcg gacgtgaacg ccgccagcgt ggtcgaccgc acgccgctgc 129240

acgtctgcct cacgggcatg tccacgcacc cgggcaccat cgccgcgctg ctgcgcttcg 129300

gcgcggacgt gaacgccgtg gacctctgcg gcatgtcgcc gctggcggtg ctcgtgcgct 129360

cgcgcgcggc gaccgcagag ctggtgcgca tgctgctcga cgcgggcgca gacgcacacg 129420

ctgtcgacag tcgcctggac tcgctgctgc accagcactt tcagtccgcg cgcccgcggc 129480

cggaggtggt gcgcgagctc atccgccacg gctgctcgcc gcgggcgcgg aaccgaatcg 129540

gcaacacgcc gctgcacgag gccgcaaaac actcctcctg caaacactcg ctggtggggc 129600

cgctgctggc tgccggcgcg agcgtggacg cgcgaaataa cacgggcagg acgccgctcc 129660

acttggcggt ggcgtccaac ccgcgcgcgt gccgccggct gatcgcgctt ggggcggacg 129720

tggtcgcgcg cagttacgcg ggcgtcacgc cgctggcgca gctgatcgcg gacaataact 129780

ccgcgctggt gaccgcggcg ctgaacacgc agcccgagcc gcgggccgtg gcagagtcgc 129840

tgcgagcgac cacgcccgtc ggcgagacag cgtgctcgcg gctctgtgtg gcgtacgtgg 129900

tggcgcgcgc gccgagcgag gtcctcggcg agcccgagcg cgccctgcac gcggccttcg 129960

tggcggagtg cttagcggag gtagcggcca tacacgccgt gcgctgcggc acacctccgg 130020

tctcgctgct ggagatcctg gtggccgcgc gcccgccgcg gagcctgctc tcgcgccgcg 130080

cgtggcggct ggccagccgg acgacagttt accgcgcgcc gctccgtgca cgcatcgcgg 130140

ccatgcgcca tcgctcgcga ctggtggagc gcgcgctgcg cacgctgcgc ggctgcgtgc 130200

tcccgcgcga ggtgctggag cgcgtgctgc ggtgtctgtc cacacaggac ctgcgggcct 130260

ccggactggc cgagtagctt tttctgagat aagtgaataa acatggtggg attcgatcgc 130320

gccgccaacg ccacgccatg gacgccgccg agatggagga tctcgacatc aacgcggagt 130380

cggcgctgta cgactacttc atcctgaacg cggacagagc ccgcgtgggc gaggtggtta 130440

tgcttctcgc acagggcgcg gaaataaact acgcggacag cttcgacaag acgccgctgc 130500

acctgtactt gcacacgcga cacccgcgct cggacgtgat tctggcgctg atggaggcgg 130560

gcgcggtcgt ggacacgccg gagcgctgct gcggcgcgac cgcggcgcac ctgtacatcc 130620

tcaacgcggc caaggtcgac ctgtcggtgc tggaggccat gctgacctgg ggcgtgcgcc 130680

agaacgacca gcactcggag cggctgctct cgagcttgtt gcgcgagtac gtggtgaccc 130740

gcgcctactc ggatcagacc gagccgatca tggacttgct catcggcatg ggcgccgacg 130800

tggacatgcc ggtcggcgtg agtcgcacgg cgctgcacgc ctgccttacg ggcctgaacg 130860

cgaacccgtg catgattcgc gcgctgcttc ggcgcggcgc cagcgtgacc gcaaaagaca 130920

cctacgagat gacgccgctg gcggtgctgc tgaagtccgc gagcgcgacg ccggagctcg 130980

tgcgcatcct cgtggaggca ggctccgacg tgagcgccac cgacttccgc ctcaacggca 131040

tgctgcacca gcacgcgcag tccacgcgcc cgcgcgcgag cgtcatgcgc gagctcatcc 131100

ggctggggtg cagcccagcg gccaaaaaca tgtttgggaa cacgccgatg cacatgctgg 131160

ccatggaaag ctcctgccgc cgctcactga tcctcccgct gctggaggca gggctttccg 131220

tgaacgagga gaacccgcac tacggcaccg tgcctctgca cgtggcctcg gggtacgaca 131280

acacgcaggg ctgcctcaag ctcctccggc atggaggaga ccccaccgtc gtgtcggccg 131340

ccggacgcac gccgctctcg aacatgctcg tcaaacgcaa ccacgtggcg gtcgccggcg 131400

cgctgtcgac gcacccgagc gcggcagtag tcgtgcaggc tctcgagcag gctctcgaga 131460

acgtgctgaa cgccgggccc agcgaggcct cgcggctcgc cgtggccttt gtggtggcgc 131520

gcgccggcgc atccgcgcta ccggaggccg tgcgccgtct gcacgagggc tttgtcgccg 131580

actgcgagcg cgaagtcgag ctgctttccc gcaccatgct cggcacaccg gccgtgagcg 131640

cgctggtcgt gctggtcagc aaggaggtct ttggcactgt tatctcctcg cgtgcgctgc 131700

gcgtcgtgcg ggaggtccgc gtgtacgcaa ggccgctccg cgaggcgctc ataaatctgc 131760

gccacaaatg ccgcttagtt tccagcctta aaaggcaggt gggaccttgc tcgctgcccg 131820

gcgaactggt ggagcgcgtg ctcgcgaccg tgccactgac cgacttgcgc cgctcgtgcg 131880

gccgccgcgc gcccgagtaa ctgcccgtcc cgttgctacg cgactcgaga ctgcccgctg 131940

tttttctttc cccgtttctt cttattagga gttgttgccc gcctccatga tcctcgcacg 132000

cgccggcggg caacctcgca cgcccgcggc ggccgcggcc gccgccgagg acggcgagca 132060

cagtgatcgc cggaagcgca agcgcaagac gcccaactgc gaagacgccg acaactccga 132120

cgacgagcta gcgcagacgc cgtgcgaccg cgagtggccg gactgtcgcg cgagctcgat 132180

cacgagctcc gactcggtct ctctcggcga cgagatctac ctgcgatacg tggcctcgca 132240

ggtggacttc gcgcagacct gggccccgcc agtgcggctg ctgcgcttct tcgggaactt 132300

ctcgaaggaa acgctcaacc gcatgtcgcg gcgcgggtac gtgaaccgct cctacttcca 132360

gatggcgcac gcgcgcttct cgcccaccaa cgacgacatg taccacatgg ccacgggcgg 132420

gtacggcatc gtgttccgct tcgaccgcta cgtggttaag tacgtcttcg agcaccgcaa 132480

cggcatgtcc gagatggacg cctctacgga gtacacggtg ccgcggttcc tgcgcaataa 132540

cctcaagggc gacgagcgcg agttcgtggt ctgcgcgctg gccatggggc tgaactaccg 132600

gctgggcttc ctgcactcgc tgtaccggcg cgtgctgcac acgctgctgc tgctcatgcg 132660

cgtggaggaa ggccagcggc cctcggtgga gatgtccaag aagccgctgc tgcgctggtt 132720

cgaggcgcgc aaggacagcg agtccttcgt gcgcctgatc tcgtacttct acccctcggc 132780

cgtgcagagc aacgtgaacc tgatcaacaa cttccaccac ctggtgcact tcttcgagca 132840

cgagaagcgc gcgcggtacg tgttcgaccg cggggccgtg atcgtgttcc ctctggcgcg 132900

cgggtccgcg gactcgatct cgccggaggc ggcggcggcg ctgggcttcg cgccgcactc 132960

ggagttcctc aagttcgtgt tcctgcagat cgcgctgctg tacctgaaga tctacgagct 133020

cccgggctgc acgaacttcc tgcacgtgga cctgaagccc gacaacgtgc tcatcttcga 133080

cagtgcgcgc gcgctcagcg tgaccgcggc cggcgcgact ttccgcttcg aggagcccgt 133140

gcgcgcggcg ctgaacgact tcgacttcgc gcgcgtggcc accatcgaga accgcaagat 133200

cgcgggcagc gtccgcgtgc cgcagaactg gtactacgac ttccacttct tcgcgcacac 133260

gctgctgcgc gcgtacccgc acatcgccgc ggaggacccg ggcttccacg cgctgctctc 133320

ggagctcacg gtctcgtgct cgcgcgggac ctgcgaccgc ttccggctgc gcgtgtcctc 133380

gccgcacccc atcgagcacc tcgcgcggct ggtgcgccgc gacgtcttct cccgctggat 133440

aaatgccgcc gcggacgccc ccgacgccgc cgcactctcc tgagcccacg cccgcggcgc 133500

cgggctcgct gtacgacgtc ttcctcgcgc gcttcctgcg ccggctggcc gcgcgcgcgg 133560

cgccggcctc ggccgcctgc gccgtgcgcg tgggtgcggt gcgcggccgc ctgcggaact 133620

gcgagctagt ggtgctgaac cgctgccacg cggacgcggc cggcgcgctc gcgctagcct 133680

ccgcggcgct cgccgagacg ctggcggagc tcccgcgcgc ggacaagctc gccgtcgcgc 133740

tcgagctggg cgtggacccc gagcacccgg agctgacgcc ggaccccgcc tgcgcaggcg 133800

agagcgcact cgcacagaac atcgacatcc agacgctgga cctgggcgac tgcggagacc 133860

ccaaaggccg ccgactgcgc gtggcgctgg tgaacagcgg ccacgcggcc gcgaactgcg 133920

cgctcgcgcg cgtggcgacc gcgctgacgc gccgcgtgcc cgcgagccgg cacggcctcg 133980

cggagggcgg cacgccgccg tggacgctgc tgctggcggt ggccgcggtg acggtgctcg 134040

gcgtggtggc ggtttcactg ctgcggcgcg cgctgcgggt acgctaccgc ttcgcgcggc 134100

cggccgcgct gcgcgcgtag ccgcgcaaaa tgtaaattat aacgcccaac ttttaagggt 134160

gaggcgccat gaagttgctc gtcggcatac tagtagccgt gtgcttgcac cagtatctgc 134220

tgaacgcgga cagcaacacg aaaggatggt ccgaagtgct gaaaggcagc gagtgcaagc 134280

ctaggccgat tgttgttcct gtaagcgaga cgcacccaga gctgacttct cagcggttca 134340

acccgccgtg tgtcacgttg atgcgatgcg gcgggtgctg caacgacgag agcttggaat 134400

gcgtccccac ggaagaagta aacgtgacga tggaactcct gggggcgtcg ggctccggta 134460

gtaacgggat gcaacgtctg agcttcgtag agcataagaa atgcgattgt agaccacgat 134520

tcacaaccac gccaccgacg accacaaggc cgcccagaag acgccgctag aactttttat 134580

ggaccgcaga tccaaacgat gatgcgatca ggtcatgcgg aagaaggcgc cacggagcaa 134640

agtgaaaaag gaccgcctag cagtcgagac cctcccgccg cagccgcgga caccccacac 134700

ccgccttcca cccgccagac gccaacaccg cagccaacaa gcatgcaccc ctcgccgcgc 134760

aggctgctcg gcgcgctcgc gctggtggcg ctgggcttcc tcctcggcgg gctcttccgc 134820

cccgcggcgc cgccgctgcc ggccgccctc gtggaggcgg gccccgtccg cgcgaacggc 134880

tccgcctcgg tgacctgcct gaccgtcggc ggcgacgggc ggcacatggc ggtggtcgcg 134940

cacggcggcg ggacgctctc gccggtgtac ccgctcgccg ccggcatgca cgcgaccttc 135000

gcctcgctgc gcaagggcgc gctgctgctg aacgtcgcga ccgtgcacat ctacgacgtg 135060

cgcgcgctcg ggccggagtt cgagctgacc tgcgtcgcgg tggcgggcgg ctacaacgcg 135120

gcctgggcgg ccgcgcggcc cgcggccgag tggcgccgcc agctggcgcg gatgcaccgc 135180

tcggagctgt gaccctctcc ctcccggtct cccatccgtt tttgtaatcg gccttagtag 135240

attagaccag catcccgcgc ccttgtccgc cgcccttcgc tcgctcacga gcgaatcagt 135300

caattgatta tttttatcgc ccgcccgctc actccggtaa gggaacgcgg ttaacccact 135360

cacgagaaca agcgaccgcc actcacttga ggtaagggaa cggttacggt caactcactc 135420

acgagaacaa gttgactcac tcctcgaggt agagaacgag agaacaagtg accgtactca 135480

ctcacgagaa caagttgacg caccgctcac cgaggaaggg aacagagaac aagtaacagt 135540

aaccgttacc tcactcgcca ctcctcggaa taatagaacg agagaacgag agaacgagtt 135600

aaccgttgct cactcgctca ctcggtgtga gagaacaagt aacgttgctc actcgctcac 135660

tcggtgtgag agaacaagag aacgagtagc tgttgctaac tcaatcaccc ctcggagtaa 135720

gagaacaaga gcagtcaact acccactcag tcttggatga gaggcagagg acgagttgac 135780

gagttgaaca gttaatcctc actcactcag agcgagagag cgagagagtg gaggacgagt 135840

taacaagtca atcctcactc agagtgagag agtgagagag tggaggacga gttaatggtt 135900

aacagttatc accactcaga gtgagagcgg aggacgagtc aaccactcgc tcgcccactc 135960

cgagttagag agggaaccag tgcgagttaa cgcgcacacg agcgagagaa cgtaaactcg 136020

ctcgcgcgct cgctcggcta accgtcggcc tctcccaaaa ctcttcgtaa aactttcccg 136080

atgacagttc accctccaaa actttgtaaa actaaactgt tcggaggtcg gtctgctgcc 136140

tctctaactc tccgtaaaac gtttgtaaac tgtcggaggt cggtgacccg ctcaaccgtc 136200

cgcgaaaact tttcgcaggc agtgtctgcc tctctcggac tctccgcaaa cactttcgcg 136260

gaacctcgga gggtggtcga cctctctcca aactcttgca aaactttttc gcggaaccgt 136320

tggaggccag tcctccctcc aaactctttg taaaatcttt tcgaggccag tcctcctctc 136380

caaaacgttc cgcaaaatct ttgggaggtc ggcctctcct ctccagaacg ttccgtaaaa 136440

ctcttggagg ccgcccgcgg cacgcgaggc ggaggatccg gagggtgtcg acctccctca 136500

aaaactttgt aaaaactttt tataaaactt tccgcggaac ctcggagagt aggtcgacct 136560

ctctcaaaac tcttataaaa cttttccgcg gaaccgttgg aaggtaggtc gacctctctc 136620

aaaactctta taaaactttt ccgcggaacc gttggaggca ggtcggcctc tcaaactctt 136680

tgcgagaact cttcgcgaga actcttcgat aactttagga ggtcaggtcg acctcccaaa 136740

acttttgcga gaactctctg taaaacttta ggaggtcggt acctccctca aaacttttta 136800

taaaactttt cgcggaacct ccggagacgg gccgccgccc gcgaccgcgg gagcggagag 136860

gccgacctcc cgagacgttc cgcgttaccg tcggggtagg cgtcctctcg agaacgccaa 136920

aagacttcgt gcaaaaactt ttcggagggg cgcggagggc gggtcagctc ccgcgaactc 136980

ccgcagaacc ttttcgcgcg accgcgaagg ccggccgcct ctcccacact ctcaagagct 137040

tttcggagga gaggaagggc aggtcgcccc cacctccgac gctttgtaaa aacgtttacg 137100

cggaacctcg gaggcaggtc gcctccctcg aaaactcctc gcgaaacctt taaaaacttt 137160

ttgcgaaaac ttttcggagg atgtcggagg gcgggcggct cttccaaacc tccgcagaac 137220

cttttcgcgc aaccgttgga agacaggtcg gcctctctcg aaaactttta aaactttgta 137280

aacgcgttgg cgggaccgtc gcgggagagc ggccgcccgc ggcacgcgag aggaggaacc 137340

gttggaaggc agtcggcctc tcccgaaaac tttttataaa aacttttccg cggaaccgtt 137400

ggaggcaggt cggcctctct cagagtctaa aaactttttg cgggactcgg acggcgcggt 137460

cacccgacca cctgactcct gtctacccga ctacttgact tctgtttccc tgactcccga 137520

ctccctgact cccgactccc tgactcccga ctccctgact cccgactccc tgactcccga 137580

ctccctgact cccgactccc tgactcccga ctccctgact cccgactccc tgactcccga 137640

ctccctgact cccgactccc tgactcccga ctccctgact cccgactccc tgactcccga 137700

ctccctgact cccgactccc tgactcccga ctccctgact cccgactccc tgactcccga 137760

ctccctgact ccctgactcc agagcgaggt ctcgcggctg cggggtgccg cctccgcgga 137820

gtcgcgttcc cgcggacgcc cgtcctcgaa agcattcagc agttccagcc tctgccgtag 137880

ctcctcccgc aggaactcct ggtccgcgtt ctcgcggcag cgcggctcag ccgccgcggg 137940

agccggccgc cgccccggcg aagccgcgga tccgctgttc cggcgaaggc aggacagaca 138000

ttttttccag cccataaatt aaaaagaaca agaaattaca tgtgaaaaaa tttgaggttg 138060

atttattgac gaaacgttca actaaataca atcctaaaag tttttatcat catgataatt 138120

ttctgttgat tctttttaat ttatgggctg gaaaaaatgt ctgtcctgcc ttcgccggaa 138180

cagcggatcc gcggcttcgc cgg 138203

<210> 3

<211> 188455

<212> ДНК

<213> Искуственная последовательность

<220>

<223> Синтетический полинуклеотид

<400> 3

ggtttaatat ttttgtgaga ccatcgaaga gagaaagaga taaaactttt ttacgactcc 60

atcagaaaga ggtttaatat ttttgtgaga ccatcgaaga gagaaagaga taaaactttt 120

ttacgactcc atcagaaaga ggtttaatat ttttgtgaga ccatcgaaga gagaaagaga 180

taaaactttt ttacgactcc atcagaaaga ggtttaatat ttttgtgaga ccatcgaaga 240

gagaaagaga taaaactttt ttacgactcc atcagaaaga ggtttaatat ttttgtgaga 300

ccatcgaaga gagaaagaga taaaactttt ttacgactcc atcagaaaga ggtttaatat 360

ttttgtgaga ccatcgaaga gagaaagaga taaaactttt ttacgactcc atcagaaaga 420

ggtttaatat ttttgtgaga ccatcgaaga gagaaagaga taaaactttt ttacgactcc 480

atcagaaaga ggtttaatat ttttgtgaga ccatcgaaga gagaaagaga taaaactttt 540

ttacgactcc atcagaaaga ggtttaatat ttttgtgaga ccatcgaaga gagaaagaga 600

taaaactttt ttacgactcc atcagaaaga ggtttaatat ttttgtgaga ccatcgaaga 660

gagaaagaga taaaactttt ttacgactcc atcagaaaga ggtttaatat ttttgtgaga 720

ccatcgaaga gagaaagaga taaaactttt ttacgactcc atcagaaaga ggtttaatat 780

ttttgtgaga ccatcgaaga gagaaagaga taaaactttt ttacgactcc atcagaaaga 840

ggtttaatat ttttgtgaga ccatcgaaga gagaaagaga taaaactttt ttacgactcc 900

atcagaaaga ggtttaatat ttttgtgaga ccatcgaaga gagaaagaga taaaactttt 960

ttacgactcc atcagaaaga ggtttaatat ttttgtgaga ccatcgaaga gagaaagaga 1020

taaaactttt ttacgactcc atcagaaaga ggtttaatat ttttgtgaga ccatcgaaga 1080

gagaaagaga taaaactttt ttacgactcc atcagaaaga ggtttaatat ttttgtgaga 1140

ccatcgaaga gagaaagaga taaaactttt ttacgactcc atcagaaaga ggtttaatat 1200

ttttgtgaga ccatcgaaga gagaaagaga taaaactttt ttacgactcc atcagaaaga 1260

ggtttaatat ttttgtgaga ccatcgaaga gagaaagaga taaaactttt ttacgactcc 1320

atcagaaaga ggtttaatat ttttgtgaga ccatcgaaga gagaaagaga aagagatagt 1380

tagtctagat atttttctta gtacaaaagt caatgtttta aaatatatgg acaagaattt 1440

gtctgtataa aaacttgtgt gaaattttgt accaaagaaa aaatgtgagc agtatcccta 1500

catggatttt actagatcat ttatatacaa aaaatattat acgatctacg ttttattata 1560

tgattttaac gtgtaaatta taaacattat tttatgatat acaattgtct ggtaacctag 1620

atgggcatag gggatgttga taagctcgac gagtatatgt tgttggacgt tattgtttaa 1680

gaaatagttg atgcatcaga aagagaataa aaaatatttt agtgaaacca tcgaagagag 1740

aaagagataa aactttttta cgactccatc agaaagaggt ttaatatttt tgtgagacca 1800

tcgaagagag aaagagaata aaaatatttt atgactccat tgaagagaga aagagaaaat 1860

gagaatgaga ataaaaatat tttagtgaca ccatcagaaa gaggtttaat atttttgtga 1920

gaccatcgaa gagagaaaga gaataaaaat attttatgac tccattgaag agagaaagag 1980

aaaatgagaa tgagaataaa aatattttag tgacaccatc agaaagaggt ttaatatttt 2040

ttatgagacc atcaaagaga gaaagagaat aaaaatattt ttgtaaaact ttttttatga 2100

gaccatcaaa gagagaaaga gaataaaaat atttttgtaa aacttttttt atgagaccat 2160

caaagagaga aagagaataa aaatattttt gtaaaacttt ttttatgaga ccatcaaaga 2220

gagaaagaga ataaaaatat ttttgtaaaa ctttttttat gagaccatca aagagagaaa 2280

gagaataaaa atatttttgt aaaacttttt ttatgagacc atcaaagaga gaaagagaat 2340

aaaaatattt ttgtaaaact ttttttatga gaccatcaaa gagagaaaga gaataaaaat 2400

atttttgtaa aacttttttt atgagaccat caaagagaga aagagaataa aaatattttt 2460

gtaaaacttt ttttatgaga ccatcaaaga gagaaagaga ataaaaatat ttttgtaaaa 2520

ctttttttat gagaccatca aagagagaaa gagaataaaa atatttttgt aaaacttttt 2580

ttatgagacc atcaaagaga gaaagagaat aaaaatattt ttgtaaaact ttttttatga 2640

gaccatcaaa gagagaaaga gaataaaaat atttttgtaa aacttttttt atgagaccat 2700

caaagagaga aagagaataa aaatattttt gtaaaacttt ttttatgaga ccatcaaaga 2760

gagaaagaga ataaaaatat ttttgtaaaa ctttttttat gagaccatca aagagagaaa 2820

gagaataaaa atatttttgt aaaacttttt ttatgagacc atcaaagaga gaaagagaat 2880

aaaaatattt ttgtaaaact ttttttatga gaccatcaaa gagagaaaga gaataaaaat 2940

atttttgtaa aacttttttt atgagaccat caaagagaga aagagaataa aaatattttt 3000

gtaaaacttt ttttatgaga ccatcaaaga gagaaagaga ataaaaatat ttttgtaaaa 3060

ctttttttat gagaccatca gaaagaggtt taatattttt gtgataccct gaaaggaaat 3120

aggaatagga ataggaatag tgtcataatc gtatcacact attgagacag aaaaagaaga 3180

agtcgcgaga ggtaactttt tgtgaatgta gttaagaaca tttttgtttt gcaaaccgga 3240

atatagtgtc cggtacactt ttttaattcg tggtgtgcct gaatcgttcg attaacccta 3300

ctcatccaat ttcagatgaa tagagttatc gattcagaca cacgctttga gttttgttga 3360

atcgatgagt gaagtatcat cggttgcacc ttcagatgcc gatccgtcga catacttgaa 3420

tccatccttg acctcaagtt cagatgattc cttgcacatg tctccgatac gaacgctaaa 3480

ctctagattc ttgacacatt ttgtatcgac gatcgttgaa ccgatgatat cttcgtaact 3540

cactttctta tgagagatgt tagacccgag tactggatgg gtcttgatgt cgctgtcttt 3600

ctcttcttcg ctacatctga tgtcgataga cacctcacag tctttgatca tagcaagagc 3660

ttcttcatga gtgatcgcgg gagagtcctt accttgtcct ggggacacgc tggacaatct 3720

agcattcact gtgtttccat cagcggattc tgagatggat ttaatctgag gacatttggt 3780

gaatccaaag ttcattctca gacctccacc gatgatggag taataagtgg taggaggatc 3840

tacatcctcg actgatgtgg aatcatcttc tgattccacc tcgggatctg gatctgactc 3900

ggactctgta atttccgtta cggattggca aatcttatca ttggtcggtg tttggtcttg 3960

ctttgtgact ttgataataa catcgattcc catatgatgt ttgttttctt cttccgtaca 4020

cgaggaggag gatgaggatg attgctgaag actggcaggc atagcagctg ccgccaggca 4080

catgcatgcc agtacgatat attgtttcat aattgctatt gattgagtac tgttctttat 4140

gattctactt ccttaccgtg caataaatta gaatatattt tctactttta cgagaaatta 4200

attattgtat ttattattta tgggtgaaaa acttactata aaaagtgggt gggtttggaa 4260

ttagtgatca gtttatgtat atcgcaacta ccgggcatat ggctatcgac atcgagaaca 4320

ttaccacatg ataagagatt gtatcagttt cgtagtcttg agtattggta ttactatata 4380

gtatatagat gtcgcccact agagttactg tctccgaatg cggcatgata gtatcattct 4440

ttgctttcgt taactgtttg gaggaagaat ctttgttatt gcatttaatc tcgaaattca 4500

gagtgcacac ctttctcctg taaagaaacc tgaagtcgct accttattaa gaacggagaa 4560

gtatccatca cgaaagacgg gatcgcagtc tttatgattc atagtaatag ttagttccga 4620

cgttgagatg gattcgctga gaccggtagt ggtcgtccga gtacacgacg tgtcgttgac 4680

gggatacaga ttaatttcca catcgatata gttaaaggta tttctgggta cgggttcgca 4740

tttatctgcg gaagagacgg tgtgagaata tgttccgaga ccacacggag aacagatgac 4800

gtctccggat actccgtatc ctattccaca ttttgtttgg gaaacacatg ccttgcatcc 4860

ggatgatcct ttgagaagac aataatatcc gggagagcat tcacagattc tattgtgagt 4920

cgtgttacac gatcgcgtct tccgttacaa cttagacaag cgggtaaatg attattgcga 4980

gatgtgaagg tacccgaacc acacggcgta catcgtgtgt tagtcttgct atcgcataat 5040

ctggaagcgt atgttcccgg acacaaatta tggcgtttgt attcgttgtc tttacacttt 5100

ccatcggatg gtgcatgcgg tgctatatct cttccgttta ttattataca tgagagaaac 5160

aatatatacg agtataatac ggacttcatg atttaataat gtagtaatcg tcgtcttgtt 5220

cctgtttcct acttctccaa tcatatagat attttctttc tatcatggat aatatttgta 5280

atggttcttt ccgtacaaca tactgtttag atgatattgc gcataatttc cggaggcaaa 5340

tacgatagtc tagattgacc gatggtagac tctaatttat tgagtgcttt gtcgacgagt 5400

ttacttttac gctccatcga tagatggcac tgttctatga gatcgtcgta catgggaaat 5460

gaaatgtgtc tgtctgaatg tatggcttta agatagctgt gataccgtat acaggtcggt 5520

gtcggagatt cgaatctctt taaggcgact tatgtcacga tgatggaatc tatcttatcg 5580

aatgatatat ttttcataaa tacactttta tagtcctcgt ttaaacagaa tttactatgt 5640

agttccgcga atgactcgtc ccttaatagg cagtaggcta gtatcttttt tacgtagtaa 5700

tcgtcgtagg gagagacatc ttgtagaaca acgatttaat cataggtaga gatactttca 5760

gtctgtggtg gatgatgtca ttcacaacat ccgccttgta tatgatgttt ctgttttcaa 5820

acaccaagtc gaataccgtc tttagtcgga aggttgatgt cgtatccgat gtatgaggca 5880

acattgttgt tacaattttg aaaggcggta ttatagtatt cgtctttctg aatgtcgaac 5940

ctatctaata gataccgtag tatattgaga gtgtatcctt gattatgttt tatgaataga 6000

taaagtagat gttgtccttc ttccttttgt tcgtgccaat tgagtaacat tatgagaata 6060

tgacctgttg cacaatcgtt ccatgatggg tgtacaatca agattattac gtatcctcga 6120

gataaaagag catacaccac acgaggacta tgtttggtat actgttgaag gtaagtgtgt 6180

aaccgcgtta atgtttgctc cataatctat tatcgcgtag atgaatcgct tctcggctcg 6240

catcttagtg tgacttgact tgtaataatt gctttcgtag aacgtggata tgtgtttaca 6300

gtagtaatga agagaagtga gttcatcctc gtcggcgcaa ttagggtcgg atcctttgta 6360

cagaacgtaa tagtttaagc tcccattgaa tttatatcta agataacaca gcaatagatc 6420

ggatgattta ctaaagtcat caatggtgtc cgttagtata tcaaagatct tgttatcgat 6480

tgatagtggt catccttgct atcaaagtta cgcatgccgt ggtgtaacaa tatctttaat 6540

acagatggat taaatcgtgt attcatcgta tagcaatgta atggagagtt acctcgttta 6600

ttcagatcgc agtgtttaat aactagctta aacagatgag acgatgtatc cacatcaaag 6660

aacgtaaaat acatatgaca gacattgttg acagaaacgt gaccttcatt cttaccgtcg 6720

tccataaata cgttaggtat aaaccacata ctatcgcgaa cgatgctcac aatctcgtcc 6780

atctcataat gatttacttt ttcataatta aagatgtgaa agaaaaacag aacaatatat 6840

ttttttagta atgtttatgc gagacatata aaataaactc cgtgtttatg atgccggtaa 6900

atgtttttat catcttggac ggaatcgatt ttgtaatatg tcatggaaac aaatgaaaca 6960

ggacattatc gctccatgat aaattattta atggagtaat aaagtatctc catgggtaat 7020

ttcgaaatca agttatcgtc tgtattaatg ttgtccacta tggagtcgat cctctcattg 7080

ttctttacag tttctgtaat gatggacgtt agttcttttt tgtaccattt gatgtcggat 7140

tctttgcgta tctcagtctg tggcgtttgc ttcgtttaaa gaatatatca aacatggaga 7200

cgcctgatat gtagacattc ttcattctat taatgtctgc tctatagcgc tttagttcct 7260

tatgacgacc ggagatatca tactttactt tagaaggaaa atcatcatct aggattaagg 7320

cgtatctgat acaggcgaat aatggttcag gatatagata gcgtatatct ctattaaatg 7380

cgtcaatcat agtctctaga gtgggatggt aactcagtaa taaatcaact atcctcgttt 7440

tgttttctct tctgtaactg cttttctgga tggccgtatt gattatcgag cgtttacttt 7500

agaaggaaaa tcatcatcta ggattaaggc gtatctgata caggcgaata atggttcagg 7560

atatagatag cgtatatctc tattaaatgc gtcaatcata gtctctagag tgggatggta 7620

actcagtaat aaatcaacta tcctcgtttt gttttctctt ctgtaactgc ttttctggat 7680

ggccgtattg attatcgagc gtgatgttgt aacactcgct ccatattcca ataaccgctt 7740

tgcaaattgt atattattga catcgaccgc gtaatatagt agagttatcg atcatatcta 7800

tatcatccat gtacttgctt agtatatcaa atacatctat cagtatggtt tcataacagt 7860

gatacccgca attattaaat ctcgataata tcagaccgta catacataga cggccattgt 7920

tcgatacgtg atttacagcc gcgtgtccat attttccacg ataaacctta cgacgtttac 7980

atcgacgaga ttattattaa caaagtagtc gtgcagagga tagttgttgt ccgttatcta 8040

acatgcatcg aacgaccata tcgccgtaat gtaagtagtt tatcaacatg gcttgtacat 8100

cctgttgtct aaatctcttt agaatgttat cgatgatgta gtggttatat tctctggaat 8160

cgtacgaagt aatactacgc attacgtcga caagagtatg acgtctctca ataagaagat 8220

taacgatttc catgtctaca ttatatgggg ttactctaaa tcgcttgttt agataatacg 8280

cctctaatat agggctgacg tcgtatactc tacacgtgtc cacatccttt attaataata 8340

atttaacaat ctctatatct atggttgagc aagaccagta gtattggatg ggtaaagatc 8400

ctccttcgtc tctgccatgg atggaaacat tgttatcgat caaacattta attacatcct 8460

tggatagaga ttgagattct ctatgagacg atatatagta atgaagagag ttcttacaca 8520

tatcactgtc gtacatacag gtacgaaata cgtaaccggt gctgtaacat tctgatttaa 8580

gaagccatag caatacttct ggtctcggat taggcgtcgt tacgtatata tccaccaatc 8640

cgagaccatt gattgcataa ttcgtattct tggacggacg tatccgttta tccacaatta 8700

ggtattttag cagacgtaag tcgatattat acgaatacag atcgaaatca tttatattcg 8760

acttgagttc gttagaggaa ttcgaatagc tggatatcag tagatgcaca atctgagatt 8820

tgacgtatct atgcttactg tatactccta gcggagttaa tccttcgttg tttctacaaa 8880

gtctctcgac tccgcgagag agtaacagcc gaacaatctt aatgtctgta tcgcatttat 8940

tgaagacgta acaatgtagc gcattgtttc ctcgtctatc tatatgtttt gataagttgt 9000

gacacgtttc aatctctggt tttatttttt tgtacgtcac atcttcatcc agtagacgac 9060

atagaatagt gcactctcta ccacaataat ccatagctat tctggtgcta attattccta 9120

tttcacgaag gcaatcattc ctcataagat gataaaaagt gtagtgagag agcatgaagg 9180

agatttagta tttagcagtg cggatatgat ccaagagggt gagatagtcg ttctcgttca 9240

gaatctttcg cagcataagt agtatgtcga tatacttatc gttgaagact cttccagaga 9300

cgatagctga ttgagtacaa agtccaatga ttgcacgaag ttcttcggcg gttttcatgg 9360

agtcatttct gatgaaacat ttaatgatct ccacgcaatt gtcccacgga agtgaatcct 9420

tcaactcacc accaaagagc tccgttgcat cagttctgaa agagatgaga agcctgtaga 9480

gagaccctgc gctttctcta tgggtccatc tatgagaaac ccacaggatg tattcagtca 9540

gacaatgtct gacgtcggcc acggtattca gggagtcctt agtagcgtgg caatgacagg 9600

gactgaactt ggcacaagga aaggccattg tgaaggtaga cctgtagccg tttatgctaa 9660

tagagggctt taatttccat tttttaatgg gttgtggatg aggaatgaga gtgatatcat 9720

attgagatac gtagttatgt agaggtgtat ttcctatatt atttactttc ggtttcatat 9780

tttaccaact ctttaataaa tttcttttca cgatgcatct tattaaatga cgttttctca 9840

taagtggaca tatagatgca gaagtaatga agaaaagtat tacctctatc atctacataa 9900

ttagggtctg ctcctttttt taacaactta tacagtacgt agtagtagtt tatcggtttt 9960

aaatcaagtc tagaatatat agtggattaa tatattttta tattagctaa agctatctat 10020

actatcagaa agcatatcat tctcaacttc atcatgagtt aaatatttgt gtaatggatg 10080

tcatgaacat taaacgtatt catgacatac tcctttaata ggttttttaa aacagatgat 10140

tcaaatcctt cattcattag ataacagtgt aacggagtcg taccttctac tagtttgttt 10200

atatcacagc attctacaaa cagtctaaac aatagagaag acggacagac tttaacgtat 10260

aaatgacaca tgttatcgat attcgttgat gaattattat taaacgtagt tatgataaat 10320

gattctaacg acatctctcg ctagagataa aatctagtat cgtatcatac tcgcatagca 10380

tagtttttca taattaatac aatatttaaa agacttattc agaaagtatt ttaatacatg 10440

tatcatcgat ggagatccat atgaggagtc acttgtagtt cttcagtagt aataacagtg 10500

ctatcatcga tagtataatt atatgttgtt gtaattggag taactgttgg tagttcttcc 10560

gtggaatcaa taattatact aacagcaata gtataattat ataaatatgt tccgttgata 10620

tcacatattt taatgaactc atttctaaca ccctcagcta tatctgtcca attaaatgta 10680

gccaacaatc tactacgttc tctttgattg actacttgta cggtagcgac gctacactat 10740

ctttattgtc ttctacatgc tccaattgaa tgtcatgata caacgcagtt tttcttatgc 10800

atgtttcata acaccacgaa catgtcgcag taagataatt tctgtaaatt catgattgcc 10860

ggtcataaac aagcccgtca ataattgtgg ctatatattc agtttataga gcaaaataat 10920

taagcacaat agcgcttaat ctcaaaatat gttatgttta tttttttcat attaaacata 10980

ctggttaaaa tcctctaaag gctgatcttc atctataaat caagatcata attacattta 11040

gacagtggtt tcatgtttat aaaaatgttc tttttgtgtg aataaggaat atactaatca 11100

ataatcaacc atcgacccca ttacgatagt atgcaggcaa ccccccatta gagaggtacg 11160

tgtaatcagt ctctccagtt ttagtatttt tataagtcat tgttacataa acggctttta 11220

aacagtctcc tcgataataa gccatatctg gaaatttatt aaatactcga gtcattttac 11280

gcacggtcaa aaaagtaagt aatgtcgacg acttcttaca ttctatagaa acacctagaa 11340

tactcatttt cttttggaaa atatcctcag actctgattt gaacaatgca cgacctatag 11400

taaaccgtga ccaataagtt atattagtca atggtatatc caaaccatca ggtgtggata 11460

gtacgccgat agtccagtct ttggtatcga tagtgtagtt attgaactga gaagttaccg 11520

tatagtcttt ttggtcatct ctaaacaagg aaactaatac ctctacacta ttgaacgatt 11580

tatcttccgt aatgggtgga ataacgggaa tataaagtgg actagcgatg gatgaagtca 11640

cgaatataag acacgctatt aatccgtata tcatcatttt gatattactt ataataacga 11700

tttgtttaat ttttagttta tactattaat tgtaaatgat attattattt tttttaagta 11760

ttatcagctt tagtttatac tattactatt tgtaatattt agacatagat aaacgtgata 11820

aaagtctatt tgtttatatt tattgcggat agcagtattt ccctataaaa agtatacgtc 11880

ctgtgttgtc tttaatcatg tacatgaatg gatggtttat gtagaccttc gtacgatata 11940

ccatcgaaaa gttagtcata aatactcctg taacggccga tgcttctgta tactcctcat 12000

taacatctat aaacgtcgta tgtagaaatt tttctacagt gatagtttca ttacacatct 12060

tgctaaaatc tgcataatat ccgaatatat tagtaagtcc taaattttct aaaatcggta 12120

ccagattata cggttctgtc atttccactt taaactttgg catatacaag tctatacttt 12180

tagtagataa cataccacac cattttttaa atttttcatc tgttatattt ttttctatgt 12240

tatatatacc ttctatgtcg tccggtagta taattaccat actagagttt ccctcgtatg 12300

gaatatcgat aatagagaat cctccgaata attcattaat atgtacatat tgcaagttat 12360

tctcggtacc caccatcata tcaacgctgg taactatatt cttagaaata taaaacttgt 12420

ctgtatatgt aagatgttta gaaaatggat atttccacat tgctttaaaa tggacggcgc 12480

taacaactgt catacgagta ttaatggata gcggactagt caataaggaa ttaattttac 12540

catttgtcat cgtcttaacc cattcgttga ttagttcctt tgtttggtta gcattattaa 12600

agtttacagt ttgaaaatcg tcttttattt tttgtaggaa ggaggcgtgg aactcgatac 12660

tatcgctacc gtatatttta tttgcggtag ctagtgtcgc acaatacgga atatctacgt 12720

ccatgtcatt attgtcatcc ttcttatcat cgggtgtatt ctcattcata ttctctatat 12780

attttgatag ttgttcagct gtagaaccag ctgctccatg atttagaata gataaagtag 12840

ataaaataga aactggagaa atcaaaacat tttcatcagg gtgttttaag attagttctt 12900

taaagatatc catggtatag accaaacaat aacgataacg atatatatca taaataaata 12960

atgttaaatt tcagtttatg tttgtacccc gtattcatac ttaacaaatt ggtattgcgt 13020

acacaatcaa tcatattaca taccattaat aatgcaagca taaaaaatcg ttagtagatg 13080

tttctaaata taggttccgt aagcaaagaa tataagaatg aagcggtaat gataaaatca 13140

atcgttatct aaaatgatca tactcattta ttttattcta ttatattaac acatacattt 13200

ttaacagcaa cacattcaat attgtattgt tatttttata ttatttacac aattaacaat 13260

atattattag tttatattac tgaattaata atataaaatt cccaatcttg tcataaacac 13320

acactgagaa acagcataaa cacaaaatcc atcaaaaatg ttgataaatt atctgatgtt 13380

gttgttcgct gctatgataa tcagatcatt cgccgatagt ggtaacgcta tcgaaacgac 13440

atcgccagaa attacaaacg ctacaacaga tattccagct atcagattat gcggtccaga 13500

gggagatgga tattgtttac acggtgactg tatccacgct agagatatcg acggtatgta 13560

ttgtagatgc tctcatggtt atacaggcat tagatgtcag catgtagtat tagtagacta 13620

tcaacgttca gaaaacccaa acactacaac gtcatatatc ccatctcccg gtattatgct 13680

tgtattagta ggcattatta ttattacgtg ttgtctatta tctgtttata ggttcactcg 13740

acgaactaaa ctacttatac aagatatggt tgtgccataa tttttataaa ttttttttat 13800

gagtattttt acaaaaatgt ataaagtgta tgtcttatgt atatttataa aaatgctaag 13860

tatgcgatgt atctatgtta tttgtattta tctaaacaat acctctacct ctagatatta 13920

tacaaaaatt ttttatttcg gcatattaaa gtaaaatcta gttaccttga aaatgaatac 13980

agtgggtggt tccgtatcac cagtaagaac ataatagtca aatacagtat ccgattgaga 14040

ttttgcatac aatactagtc tagaaagaaa tttgtaatca tcttctgtga cgggagtcca 14100

tatatctgta tcatcgtcta gtttatcagt gtcccatgct atatttctgt tatcatcatt 14160

agttaatgaa aataactctc gcgcttcaga aaagtcaaat attgtatcca tacatacatc 14220

tccaaaacta tcgcttatac gtttatcttt aacgatacct atacctagat ggttatttac 14280

taacagacat tttccagatc tattgactat aactcctata gtttccacat caaccaagta 14340

atgatcatct attgttatat aacaataaca taactctttt ccatttttat cagtatgtat 14400

atctatatca acgtcgtcgt tgtagtgaat agtagtcatt gatctattat atgaaacgga 14460

tatgtctaga acggcaattg ttttacgtcc agttaacact ttctttgatt taaagtctag 14520

agtctttgca aacataatat ccttatccga ctttatattt cctgtagggt ggtataattt 14580

tattttgcct ccacatatcg gtgtttccaa atatattact agacaatatt ccatatagtt 14640

attagttaag ggtacccaat tagaacacgt acgcttatta tcatcatttg gatcgtattt 14700

cataaaagtt attgtgttat cgatgtcaac acattctaca ttttttaatc gtctatatag 14760

tatttttctg atattttcta taatatcaga attgtcttcc atcggaagtt gtatactatc 14820

ggaatcagtt acatgtttaa ataattctct gatgtcattc cttatacaat caaattcatt 14880

attaaacagt ttaatagtct gtagaccttt atcgtcgtaa atatccattg tcttattagt 14940

tacgcttatt tttatgtgtt ttacgttgct ttattatatt ttataagaat gattgtttga 15000

cgaatcacga gaactattaa gacacattat taggtatata ttataaaaaa gtttttgatt 15060

acgatgttat aagaggaaag aggacacatt aacatcatac atcaattaac tacattctta 15120

taacatcgta atcaaaagaa ttgcaatttt gatgtataac aactgtcaat gggttatgga 15180

attgtatatt acatattata cggtatgttg gtaacgacaa ataccggtcg gtaattgtct 15240

gccggtgtaa tagaattata tatatctatc tattacaccg gccttgtata cataataata 15300

agttgtggta gtatgatctc catatttata atttaggact ttgtattcag tatttttgga 15360

atcataaaaa ataaaaaaaa gttttactaa tttaaaattt aaaaagtatt tacatttttt 15420

tcactgttta gtcgcggata tggaattcga tcctgccaaa atcaatacat catctataga 15480

tcatgtaaca atattacaat acatagatga accaaatgat ataagactaa cagtatgcat 15540

tatccgaaat attatatcaa tatcacaaaa ataaatccac atttggctaa tcaatttcgg 15600

gcttggaaaa aacgtatcgc cggaagggac tatataacta acttatctag agatacagga 15660

atacaacaat caaaacttac tgaaactata cgtaactgtc aaaaaaatag aaacatatat 15720

ggtctatata tacactacaa tttagttatt aatgtggtta ttgattggat aaccgatgtg 15780

attatcaatc aatattaaga gggttggtaa attggtacat agctaataat acctatactc 15840

caaatacacc caataataca acaaccattt ctgagttgga tatcatcaaa atactggata 15900

aatacgagga cgtgtataga gtaagtaaag aaaaagaatg tggaatttgc tatgaagttg 15960

tttactcaaa acgatagata ctttggttta ttggattcgt gtaatcatat attttgcata 16020

acatgtatca atatatggca tagaacacga agagaaaccg gtgcgtcgga taattgtcct 16080

atatgccgta cccgttttag aaacataaca atgagcaagt tttataagct agttaactaa 16140

taaataaaaa gtttaatttg ttgacgacgt atgtcgttat tttttctcgt ataaaagatt 16200

aatttgattc taatataatc tttagtattg gataaatatc aattcaaatt aattccatta 16260

gattatatca taaataaaaa tagtagcacg cactacttca gccaaatatt cttttttgaa 16320

acgccatcta tcgtagtgag gacacaagtg aacctataat tatcaaattt attagtatca 16380

gtcacatgaa ggactttctg tagagtgacg attccactat ctgtggtacg aacggtttca 16440

tcttctttga tgccatcacc cagatgttct ataaacttgg tatcctcgtc cgatttcata 16500

tcctttgcca accaatacat atagctaaac tcaggcatat gttccacaca tcctgaacaa 16560

tgaaattctc cagaagatgt tacaatgtct agatttggac atttggtttc aaccgcgtta 16620

acatatgagt gaacacaccc atacatgaaa gcgatgagaa ataggattct catcttgcca 16680

aaatatcact agaaaaaatt tatttatcaa ttttaaaggt ataaaaaata cttattgttg 16740

ctcgaatatt ttgtatttga tggtatacgg aagattagaa atgtaggtat tatcatcaac 16800

tgattctatg gttttatgta ttctatcatg tttcactatt gcgttggaaa taatatcata 16860

tgcttccaca tatattttat tttgttttaa ctcataatac tcacgtaatt ctggattatt 16920

ggcatatcta tgaataattt tagctccatg atcagtaaat attaatgaga acatagtatt 16980

accacctacc attatttttt tcatctcatt caattcttaa ttgcaaagat ctatataatc 17040

attatagcgt tgacttatgg actctgaaat cttagacgat gtacagtcat ctataatcat 17100

ggcatattta atacattgtt ttatagcata gtagttatct acgatgttag atatttttct 17160

caataaatca atcacataat ctaatgtagg tttatgacat aatagcattt tcagcagttc 17220

aatgttttta gattcgttga tggcaatggc tatacatgta tatccgttat ttgatctaat 17280

gttgacatct gaaccggatt ctagcagtaa agatactaga gattgtttat tatatctaac 17340

agccttgtga agaagtgttt ctcctcgttt gtcaatcatg ttaatgtctt taagataagg 17400

taggcaaatg tttatagtac taagaattgg gcaagcataa gacatgtcac aaagaccctt 17460

tttgtatgta taagtgtaaa aattataaca tccatagttg gatttacata ggtgtccaat 17520

cgggatctct ccatcatcga gataattgat ggcatctccc ttcctttttt agtagatatt 17580

tcatcgtgta agaatcaata ttaatatttc taaagtatcc gtgtatagcc tctttattta 17640

ccacagttcc atattccact agagggatat cgccgaatgt catatactca attagtatat 17700

gttggaggac atccgagttc attgttttca atatcaaaga gatggtttcc ttatcatttc 17760

tccatagtgg tacaatacta cacattattc cgtgcggctt tccattctcc aaaaacaatt 17820

tgaccaaatc tacatcttta ttgtatctat aatcactatt tagataatca gccataatta 17880

ctcgagtgca acatgttaga tcgtctatat atgaataagc cgtgttatct attcctttca 17940

ttaacaattt aacgatgtct atatctatat gagatgactt aatataatat tgaagagctg 18000

tacaatagtt tttatctata aaagacggct tgattccgtg attaattaga catttaacaa 18060

cttccggacg cacatatgct ctcgtatccg actttgaata cagatgagag atgatataca 18120

gatgcaatac ggtaccgcaa tttcgtagtt gataatcatc atacgcgtat cagtactcgt 18180

cctcataaag aacactgcag ccatttttta tgaacaaatc aataatttta ggaacaggat 18240

cattgtcatt acataatttt ctataactga acgatggttt tcacatttaa cactcaagtc 18300

aaatccatgt tctaccaaca cctttatcaa gtcaacgtct acatttttgg atttcatata 18360

gctgaatata ttaaagtcat ttatgttgct aaatccagtg gcttctagta gagccatcgc 18420

tatatccttt aactttaaca tgtctactat ttgtgtattc ttctaatggg gtaagctgtc 18480

tccaattttt gcgtaatgga ttagtgccac tgtctagtag tagtttgacg acctcgacat 18540

tattacaatg ctcattaaaa aggtatgcgt gtaaagcatt attcttgaat tggttcctgg 18600

tatcattagg atctctgtct ttcaacatct gtttaagttc atcaagagcc acctcctcat 18660

tttccaaata gtcaaacatt ttgactgaat gagctactgt gaactctata cacccacaca 18720

actaatgtca ttaaatatca tgtcaaaaac ttgtacaatt attaataaaa ataatttagt 18780

gtttaaattt taccagttcc agattttaca cctccgttaa ccccactttt tacaccactg 18840

gacgatcctc ctccccacat tccaccgcca ccagatgtat aagttttaga tcctttatta 18900

ctaccatcat gtccatggat aaagacactc cacatgccgc cactaccccc tttagaagac 18960

atattaataa gacttaagga caagtttaac aataaaatta atcacgagta ccctactacc 19020

aacctacact attatatgat tatagtttct atttttacag taccttgact aaagtttcta 19080

gtcacaagag caatactacc aacctacact attatatgat tatagtttct atttttatag 19140

gaacgcgtac gagaaaatca aatgtctaat ttctaacggt agtgttgata aacgattatc 19200

gtcaatggat acctcctcta tcatgtcgtc tattttctta ctttgttcta ttaacttatt 19260

agcattatat attatttgat tataaaactt atattgctta ttagcccaat ctgtaaatat 19320

cggattatta acatatcgtt tctttgtagg tttatttaac atgtacatca ctgtaagcat 19380

gtccgtacca tttattttaa tttgacgcat atccgcaatt tctttttcgc agtcggttat 19440

aaattctata tatgatggat acatgctaca tgtgtactta taatcgacta atatgaagta 19500

cttgatacat attttcagta acgatttatt attaccacct atgaataagt acctgtgatc 19560

gtctaggtaa tcaactgttt tcttaataca ttcgatggtt ggtaatttac tcagaataat 19620

ttccaatatc ttaatatata attctgctat ttctgggata tatttatctg ccagtataac 19680

acaaatagta atacatgtaa acccatattt tgttattata ttaatgtctg cgccattatc 19740

tattaaccat tctactaggc tgacactatg cgacttaata caatgataaa gtatactaca 19800

tccatgttta tctattttgt ttatatcatt aatatacggc ttacaaagtt ttagtatcga 19860

taacacatcc aactcacgca tagagaaggt agggaataat ggcataatat ttattaggtt 19920

atcatcattg tcattatcta caactaagtt tccatttttt aaaatatact cgacaacttt 19980

aggatctcta ttgccaaatt tttgaaaata tttatttata tgcttaaatc tatataatgt 20040

agctccttca tcaatcatac atttaataac attgatgtat actgtatgat aagatacata 20100

ttctaacaat agatcttgta tagaatctgt atatctttta agaattgtgg atattaggat 20160

attattacgt aaactattac acaattctaa aatataaaac gtatcacggt cgaataatag 20220

ttgatcaact atataattat cgattttgtg atttttcttc ctaaactgtt tacgtaaata 20280