Трансгенные генетические метки и способы применения - RU2016143384A
Код документа: RU2016143384A
Формула
1. Выделенный полипептид, который по меньшей мере на 95% идентичен последовательности полипептида внеклеточного домена полипептида Her2, содержащего последовательность аминокислот с 563 по 652 последовательности, представленной в SEQ ID NO: 23, соединенного с трансмембранным доменом, причем указанный выделенный полипептид специфично связывается с антителом, которое связывается с эпитопом в домене IV Her2, и при этом указанный выделенный полипептид не включает полноразмерный зрелый Her2.
2. Выделенный полипептид по п. 1, отличающийся тем, что указанный полипептид Her2 содержит такие аминокислоты как глутаминовая кислота в положении 580, аспарагиновая кислота в положении 582, аспарагиновая кислота в положении 592, фенилаланин в положении 595 и глутамин в положении 624 последовательности, представленной в SEQ ID NO: 23.
3. Выделенный полипептид по п. 2, отличающийся тем, что указанный полипептид Her2 содержит аминокислоты 563-652 последовательности, представленной в SEQ ID NO: 23.
4. Выделенный полипептид по любому из пп. 1-3, отличающийся тем, что указанный трансмембранный домен содержит аминокислоты 653-675 последовательности, представленной в SEQ ID NO: 23.
5. Выделенный полипептид по любому из пп. 1-3, дополнительно содержащий лидерный пептид, который обеспечивает экспрессию на поверхности клеток.
6. Выделенный полипептид по п. 5, отличающийся тем, что указанный лидерный пептид содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 17.
7. Выделенный полипептид по любому из пп. 1-3, 6, отличающийся тем, что указанное антитело представляет собой трастузумаб.
8. Выделенный полипептид, который по меньшей мере на 95% идентичен последовательности полипептида внеклеточного домена полипептида Her2, содержащего последовательность аминокислот с 563 по 652 последовательности, представленной в SEQ ID NO: 23, соединенного с трансмембранным доменом, причем указанный выделенный полипептид специфично связывается с антителом, которое связывается с эпитопом в домене IV Her2, и при этом указанный выделенный полипептид не включает полноразмерный зрелый Her, и при этом внеклеточный домен полипептида Her2, содержащий последовательность аминокислот с 563 по 652 последовательности, представленной в SEQ ID NO: 23, соединен с трансмембранным доменом последовательностью, содержащей аминокислоты GGGSGGGS (SEQ ID NO: 45).
9. Выделенный полипептид по п. 8, отличающийся тем, что указанный полипептид Her2 содержит такие аминокислоты как глутаминовая кислота в положении 580, аспарагиновая кислота в положении 582, аспарагиновая кислота в положении 592, фенилаланин в положении 595 и глутамин в положении 624 последовательности, представленной в SEQ ID NO: 23.
10. Выделенный полипептид по п. 9, отличающийся тем, что указанный полипептид Her2 содержит аминокислоты 563-652 последовательности, представленной в SEQ ID NO: 23.
11. Выделенный полипептид по любому из пп. 8-10, отличающийся тем, что указанный трансмембранный домен содержит аминокислоты 653-675 последовательности, представленной в SEQ ID NO: 23.
12. Выделенный полипептид по любому из пп. 8-10, дополнительно содержащий лидерный пептид, который обеспечивает экспрессию на поверхности клеток.
13. Выделенный полипептид по п. 12, отличающийся тем, что указанный лидерный пептид содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 17.
14. Выделенный полипептид по любому из пп. 8-10, 13, отличающийся тем, что указанное антитело представляет собой трастузумаб.
15. Выделенная нуклеиновая кислота, кодирующая полипептид по любому из пп. 1-14.
16. Выделенная нуклеиновая кислота по п. 15, дополнительно содержащая промотор.
17. Выделенная нуклеиновая кислота по п. 15 или 16, дополнительно содержащая трансген.
18. Выделенная нуклеиновая кислота по п. 17, отличающаяся тем, что указанный трансген содержит полинуклеотид, кодирующий химерный антигенный рецептор.
19. Выделенная нуклеиновая кислота по п. 18, отличающаяся тем, что указанный химерный антигенный рецептор содержит антигенсвязывающий домен, спейсерный участок, трансмембранный домен и по меньшей мере один стимулирующий домен.
20. Выделенная нуклеиновая кислота по любому из пп. 18-19, отличающаяся тем, что указанный полинуклеотид, кодирующий трансген, соединен с нуклеиновой кислотой, кодирующей полипептид Her2 по п. 1, с помощью саморасщепляющегося линкера.
21. Выделенная нуклеиновая кислота по п. 20, отличающаяся тем, что указанный саморасщепляющийся линкер представляет собой линкер Т2А, содержащий последовательность LEGGGEGRGSLLTCG (SEQ ID NO: 26).
22. Выделенная нуклеиновая кислота по любому из пп. 18-19, 21 отличающаяся тем, что указанный химерный антигенный рецептор содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 2.
23. Выделенная нуклеиновая кислота по любому из пп. 18-19, 21 отличающаяся тем, что указанный химерный антигенный рецептор содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 25 (CD20CAR).
24. Клетка-хозяин, содержащая выделенную нуклеиновую кислоту по любому из пп. 15-23.
25. Клетка-хозяин по п. 24, отличающаяся тем, что указанная клетка-хозяин выбрана из группы, состоящей из CD8 Т-клеток, CD4 Т-клеток, CD4 наивных Т-клеток, CD8 наивных Т-клеток, CD8 клеток центральной памяти, CD4 клеток центральной памяти и их комбинаций.
26. Клетка-хозяин по п. 24 или 25, отличающаяся тем, что указанная клетка-хозяин является аутологичной.
27. Клетка-хозяин по любому из пп. 24-25, отличающаяся тем, что указанная клетка-хозяин является антигенспецифичной.
28. Клетка-хозяин по п. 24, отличающаяся тем, что указанная клетка-хозяин представляет собой клетку-предшественника Т-лимфоцитов.
29. Клетка-хозяин по п. 24, отличающаяся тем, что указанная клетка-хозяин представляет собой гемопоэтическую стволовую клетку.
30. Клетка-хозяин по любому из пп. 24-25, отличающаяся тем, что указанная клетка-хозяин представляет собой клетку-предшественника Т-лимфоцитов.
31. Клетка-хозяин по любому из пп. 24-25, отличающаяся тем, что указанная клетка-хозяин представляет собой гемопоэтическую стволовую клетку.
32. Композиция, содержащая клетку-хозяина по любому из пп. 24-31.
33. Способ изготовления композиции, включающий:
a) введение выделенной нуклеиновой кислоты по любому из пп. 15-23 в клетку-хозяина; и
b) культивирование указанных клеток-хозяев в среде, содержащей по меньшей мере один фактор роста.
34. Способ по п. 33, отличающийся тем, что указанный фактор роста выбран из группы, состоящей из ИЛ-15, ИЛ-7, ИЛ-21, ИЛ-2 и их комбинаций.
35. Способ по п. 33 или 34, дополнительно включающий отбор клеток, которые экспрессируют полипептид Her2t.
36. Способ по любому из пп. 33-34, отличающийся тем, что указанные клетки отбирают перед культивированием клеток в среде.
37. Способ по любому из пп. 33-34, отличающийся тем, что указанные клетки отбирают с применением антитела, которое связывается с доменом IV Her2.
38. Способ по п. 37, отличающийся тем, что указанное антитело представляет собой трастузумаб.
39. Способ по любому из пп. 33-34, 38, дополнительно включающий введение второй выделенной нуклеиновой кислоты, кодирующей химерный антигенный рецептор, соединенный со второй генетической меткой.
40. Способ по п. 39, дополнительно включающий отбор клеток, экспрессирующих вторую генетическую метку.
41. Способ по п. 39, отличающийся тем, что указанная вторая генетическая метка содержит EGFRt.
42. Способ лечения пациента, страдающего раком, экспрессирующим опухолевый антиген, включающий введение эффективного количества композиции по п. 32, причем клетки указанной композиции экспрессируют химерный антигенный рецептор, который содержит антигенсвязывающий домен, связывающийся с опухолевым антигеном, экспрессируемым на раковой клетке, и генетическую метку.
43. Способ лечения пациента, страдающего раком, экспрессирующим опухолевый антиген, включающий введение эффективного количества композиции по п. 32 и антитела, которое специфично связывается с генетической меткой, при этом клетки указанной композиции экспрессируют химерный антигенный рецептор, который содержит антигенсвязывающий домен, связывающийся с опухолевым антигеном, экспрессируемым на раковой клетке, и генетическую метку.
44. Способ по любому из пп. 42-43, отличающееся тем, что указанное антитело представляет собой герцептин или эрбитукс.
45. Способ по любому из пп. 42-43, отличающееся тем, что указанное антитело конъюгировано с цитотоксическим агентом.
46. Способ по любому из пп. 42-43, отличающееся тем, что указанное антитело содержит детектируемую метку.
47. Применение композиции по п. 32 для лечения рака, содержащего опухолевый антиген, который распознается химерным антигенным рецептором на поверхности клеток.
48. Применение композиции по п. 32 для лечения рака, содержащего опухолевый антиген, который распознается химерным антигенным рецептором на клетках композиции, и антитела, которое специфично связывается с генетической меткой.
49. Применение по любому из пп. 47-48, отличающееся тем, что указанное антитело представляет собой герцептин или эрбитукс.
50. Применение по любому из пп. 47-48, отличающееся тем, что указанное антитело конъюгировано с цитотоксическим агентом.
51. Применение по любому из пп. 47-48, отличающееся тем, что указанное антитело содержит детектируемую метку.
