Технологии мультимеризации - RU2015143166A
Код документа: RU2015143166A
Формула
1. Биспецифическое связующее средство, состоящее из двух гибридных белков, каждый из которых содержит:
первый компонент антитела, который связывает первый антиген;
второй компонент антитела, который связывает второй антиген; и,
компонент димеризации, содержащий элемент человеческого гепатоцитарного ядерного фактора-1 альфа (HNF-1α).
2. Связующее средство по п. 1, где первый и второй антигены не являются идентичными.
3. Связующее средство по п. 1, где первый антиген представляет собой опухолевый антиген.
4. Связующее средство по п. 3, где опухолевый антиген представляет собой GD2.
5. Связующее средство по п. 1, где второй антиген присутствует на Т-клетках.
6. Связующее средство по п. 5, где второй антиген представляет собой CD3.
7. Связующее средство по п. 1, где компонент димеризации содержит аминокислотные остатки 1-32 человеческого HNF-1α.
8. Фармацевтическая композиция, содержащая биспецифическое связующее средство по любому из пп. 1-7, и фармацевтически приемлемый носитель.
9. Гибридный белок, содержащий-, в направлении от 5'-3', первый компонент антитела, второй компонент антитела, и компонент димеризации, содержащий элемент человеческого гепатоцитарного ядерного фактора-1 альфа (HNF-1α).
10. Гибридный белок по п. 9, где элемент HNF-1α содержит аминокислотные остатки 1-32 человеческого HNF-1α.
11. Гибридный белок по п. 9, где первый и второй компоненты антител представляют собой scFv.
12. Гибридный белок по п. 11, где первый scFv связывается с опухолевым антигеном, а второй scFv связывается с антигеном, присутствующим на Т-клетках.
13. Гибридный белок по п. 12, где опухолевый антиген представляет собой GD2.
14. Гибридный белок по п. 12, где антиген, присутствующий на Т-клетках представляет собой CD3.
15. Димерное биспецифическое связующее средство, состоящее из двух гибридных белков по п. 14.
16. Фармацевтическая композиция, содержащая димерное биспецифическое связующее средство по п. 15, и фармацевтически приемлемый носитель.
17. Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая гибридный белок по любому из пп. 9-14.
18. Вектор, содержащий последовательность нуклеиновой кислоты по п. 17.
19. Клетка-хозяин, содержащая вектор по п. 18.
20. Клетка-хозяин по п. 19, где клетку выбирают из группы, состоящей из бактериальных клеток, дрожжевых клеток, клеток насекомых, или клеток млекопитающих.
21. Клетка-хозяин по п. 20, где клетку-хозяина выбирают из группы, состоящей из клеток E.coli, Pichia pastoris, Sf9, COS, HEK293 и CHO.
22. Способ получения димерного биспецифического связующего средства, включающий в себя культивирование клетки-хозяина по п. 21 при условиях, подходящих. для экспрессии димерного биспецифического связующего средства, и извлечение димерного биспецифического связующего средства.
23. Способ предоставления композиции биспецифического антитела с высокой аффинностью, содержащей средство биспецифического антитела, которое включает первый и второй компоненты антител, который включает в себя предоставление по меньшей мере одного из таких первого и второго компоненты антител в виде гибрида с компонентом димеризации, состоящим из элемента димеризации человеческого HNF-1α, таким образом, что гибрид компонент антитела - компонент димеризации обладает способностью к образованию гомодимера.
24. Способ по п. 23, где компонент димеризации содержит аминокислотные остатки 1-32 человеческого HNF-1α.
25. Способ уничтожения опухолевых клеток, способ, включающий в себя стадии
контактирования опухолевых клеток с биспецифическим связующим средством, состоящим из двух гибридных белков, каждый из которых содержит, в направлении от 5' к 3', первый компонент антитела, который связывается с опухолевым антигеном, второй компонент антитела, который связывается с CD3 на Т-клетках, и компонент димеризации содержащий элемент человеческого HNF-1α, таким образом, что биспецифическое связующее средство способно к димеризации с образованием гомодимера, причем контактирование выполняют при условиях и в течение времени, достаточных, чтобы Т-клетки, с которыми связался гомодимер, опосредовали уничтожение опухолевых клеток.
26. Способ по п. 25, где компонент димеризации содержит аминокислотные остатки 1-32 человеческого HNF-1α.
27. Способ по п. 25, где первый и второй компоненты антител представляют собой scFv.
28. Способ по любому из пп. 25-27, где опухолевый антиген представляет собой GD2.
29. Способ ингибирования роста опухоли, способ, включающий в себя стадии
контактирования опухоли с биспецифическим связующим средством, состоящим из двух гибридных белков, каждый из которых содержит, в направлении от 5' к 3', первый компонент антитела, который связывается с опухолевым антигеном, второй компонент антитела, который связывается с CD3 на Т-клетках, и компонент димеризации, содержащий элемент человеческого HNF-1α, таким образом, что биспецифическое связующее средство способно к димеризации с образованием гомодимера, причем контактирование выполняют при условиях и в течение времени, достаточных, чтобы Т-клетки, с которыми связался гомодимер, ингибировали рост опухоли.
30. Способ по п. 29, где компонент димеризации содержит аминокислотные остатки 1-32 человеческого HNF-1α.
31. Способ по п. 29, где первый и второй фрагменты антитела представляют собой scFvs.
32. Способ по любому из пп. 29-31, где опухолевый антиген представляет собой GD2.
33. Биспецифическое связующее средство, состоящее из двух гибридных белков, каждый из которых содержит, в направлении от 5' к 3',
первый компонент антитела, который связывается с опухолевым антигеном,
второй компонент антитела, который связывается с CD3 на Т-клетках, и
компонент димеризации, содержащий элемент человеческого HNF-1α, таким образом, что биспецифическое связующее средство способно к димеризации с образованием гомодимера;
где гомодимер характеризуется более длительным временем полужизни в сравнении с иным сравниваемым, биспецифическим связующим средством, которое не содержит компонента димеризации.
34. Биспецифическое связующее средство по п. 33, где компонент димеризации содержит аминокислотные остатки 1-32 человеческого HNF-1α.
35. Биспецифическое связующее средство по п. 33, где первый и второй компоненты антител представляют собой scFv.
36. Биспецифическое связующее средство по любому из пп. 33-35, где опухолевый антиген представляет собой GD2.
