Антитело против глипикана-3 и его применение - RU2018105963A
Код документа: RU2018105963A
Формула
1. Антитело, специфично распознающее глипикан-3, где антитело имеет вариабельную область легкой цепи и вариабельную область тяжелой цепи, и
CDR1 вариабельной области легкой цепи имеет аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 67, SEQ ID NO: 69;
CDR2 вариабельной области легкой цепи имеет аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 68, SEQ ID NO: 70;
CDR3 вариабельной области легкой цепи имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 20;
CDR1 вариабельной области тяжелой цепи имеет аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 60, SEQ ID NO: 62, SEQ ID NO: 64;
CDR2 вариабельной области тяжелой цепи имеет аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 61, SEQ ID NO: 63, SEQ ID NO: 65, SEQ ID NO: 66, SEQ ID NO: 71;
CDR3 вариабельной области тяжелой цепи имеет аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 72.
2. Антитело по п. 1, где антитело включает
антитело (a) (P7D4), вариабельная область легкой цепи которого имеет CDR1 с последовательностью SEQ ID NO: 16, CDR2 с последовательностью SEQ ID NO: 18 и CDR3 с последовательностью SEQ ID NO: 20, или вариабельная область тяжелой цепи которого имеет CDR1 с последовательностью SEQ ID NO: 10, CDR2 с последовательностью SEQ ID NO: 12 и CDR3 с последовательностью SEQ ID NO: 14;
антитело (б) (am4), вариабельная область легкой цепи которого имеет CDR1 с последовательностью SEQ ID NO: 16, CDR2 с последовательностью SEQ ID NO: 18 и CDR3 с последовательностью SEQ ID NO: 20; или вариабельная область тяжелой цепи которого имеет CDR1 с последовательностью SEQ ID NO: 60, CDR2 с последовательностью SEQ ID NO: 61 и CDR3 с последовательностью SEQ ID NO: 14;
антитело (в) (am14), вариабельная область легкой цепи которого имеет CDR1 с последовательностью SEQ ID NO: 16, CDR2 с последовательностью SEQ ID NO: 18 и CDR3 с последовательностью SEQ ID NO: 20, или вариабельная область тяжелой цепи которого имеет CDR1 с последовательностью SEQ ID NO: 62, CDR2 с последовательностью SEQ ID NO: 63 и CDR3 с последовательностью SEQ ID NO: 14;
антитело (г) (am20), вариабельная область легкой цепи которого имеет CDR1 с последовательностью SEQ ID NO: 16, CDR2 с последовательностью SEQ ID NO: 18 и CDR3 с последовательностью SEQ ID NO: 20; или вариабельная область тяжелой цепи которого имеет CDR1 с последовательностью SEQ ID NO: 64, CDR2 с последовательностью SEQ ID NO: 65 и CDR3 с последовательностью SEQ ID NO: 14;
антитело (д) (am35), вариабельная область легкой цепи которого имеет CDR1 с последовательностью SEQ ID NO: 67, CDR2 с последовательностью SEQ ID NO: 68 и CDR3 с последовательностью SEQ ID NO: 20; или вариабельная область тяжелой цепи которого имеет CDR1 с последовательностью SEQ ID NO: 10, CDR2 с последовательностью SEQ ID NO: 66 и CDR3 с последовательностью SEQ ID NO: 14;
антитело (е) (am42), вариабельная область легкой цепи которого имеет CDR1 с последовательностью SEQ ID NO: 69, CDR2 с последовательностью SEQ ID NO: 70 и CDR3 с последовательностью SEQ ID NO: 20, или вариабельная область тяжелой цепи которого имеет CDR1 с последовательностью SEQ ID NO: 10, CDR2 с последовательностью SEQ ID NO: 66 и CDR3 с последовательностью SEQ ID NO: 14;
антитело (ж) (Т2-23), вариабельная область легкой цепи которого имеет CDR1 с последовательностью SEQ ID NO: 16, CDR2 с последовательностью SEQ ID NO: 70 и CDR3 с последовательностью SEQ ID NO: 20, или вариабельная область тяжелой цепи которого имеет CDR1 с последовательностью SEQ ID NO: 10, CDR2 с последовательностью SEQ ID NO: 71 и CDR3 с последовательностью SEQ ID NO: 72;
антитело (з), которое распознает ту же самую антигенную детерминанту, которую распознает любое из антител (а)-(ж).
3. Антитело по п. 2, где аминокислотная последовательность вариабельной области тяжелой цепи антитела (a) (P7D4) представлена в положениях 1-121 SEQ ID NO: 4; или аминокислотная последовательность вариабельной области легкой цепи антитела представлена в положениях 137-247 SEQ ID NO: 4;
аминокислотная последовательность вариабельной области тяжелой цепи антитела (б) (am4) представлена в положениях 1-121 SEQ ID NO: 25; или аминокислотная последовательность вариабельной области легкой цепи антитела представлена в положениях 137-247 SEQ ID NO: 25;
аминокислотная последовательность вариабельной области тяжелой цепи антитела (в) (am14) представлена в положениях 1-121 SEQ ID NO: 27; или аминокислотная последовательность вариабельной области легкой цепи антитела представлена в положениях 137-247 SEQ ID NO: 27;
аминокислотная последовательность вариабельной области тяжелой цепи антитела (г) (am20) представлена в положениях 1-121 SEQ ID NO: 29; или аминокислотная последовательность вариабельной области легкой цепи антитела представлена в положениях 137-247 SEQ ID NO: 29;
аминокислотная последовательность вариабельной области тяжелой цепи антитела (д) (am35) представлена в положениях 1-121 SEQ ID NO: 31; или аминокислотная последовательность вариабельной области легкой цепи антитела представлена в положениях 137-247 SEQ ID NO: 31;
аминокислотная последовательность вариабельной области тяжелой цепи антитела (е) (am42) представлена в положениях 1-121 SEQ ID NO: 33; или аминокислотная последовательность вариабельной области легкой цепи антитела представлена в положениях 137-247 SEQ ID NO: 33; или
аминокислотная последовательность вариабельной области тяжелой цепи антитела (ж) (Т2-23) представлена в положениях 1-121 SEQ ID NO: 35; или аминокислотная последовательность вариабельной области легкой цепи антитела представлена в положениях 137-247 SEQ ID NO: 35.
4. Антитело, специфично распознающее глипикан-3, где антитело представляет собой гуманизированное моноклональное антитело, содержащее вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи, где его вариабельная область тяжелой цепи содержит CDR1 с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 73, CDR2 с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 74 и CDR3 с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 75; или вариабельная область легкой цепи которого содержит CDR1 с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 76, CDR2 с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 77 и CDR3 с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 78.
5. Антитело по п. 4, вариабельная область тяжелой цепи которого имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 58 или вариабельная область легкой цепи которого имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 59.
6. Нуклеиновая кислота, кодирующая антитело по любому из пп. 1-5.
7. Экспрессионный вектор, содержащий нуклеиновую кислоту по п. 6.
8. Клетка-хозяин, которая содержит экспрессионный вектор по п. 7, или в геном которой интегрирована нуклеиновая кислота по п. 6.
9. Применение антитела по любому из пп. 1-5 для получения лекарственного средства направленного действия, конъюгата антитело-лекарственное средство или полифункционального антитела, которое специфично направлено на опухолевые клетки, экспрессирующие глипикан-3; или
для получения средства для диагностики опухоли, экспрессирующей глипикан-3; или
для получения иммунных клеток, модифицированных химерным антигенным рецептором.
10. Многофункциональный иммуноконъюгат, содержащий антитело по любому из пп. 1-5 и связанную с ним функциональную молекулу; при этом указанная функциональная молекула выбрана из группы, состоящей из молекулы, направленной на маркер поверхности опухоли, молекулы, подавляющей опухоль, молекулы, направленной на маркер поверхности иммунной клетки, или детектируемой метки.
11. Многофункциональный иммуноконъюгат по п. 10, где молекула, направленная на маркер поверхности опухоли, представляет собой антитело или лиганд, который связывается с маркером поверхности опухоли; или молекула, подавляющая опухоль, представляет собой противоопухолевый цитокин или противоопухолевый токсин; и, предпочтительно, цитокин включает IL-12, IL-15, IFN (интерферон)-бета и TNF (фактор некроза опухоли)-альфа.
12. Многофункциональный иммуноконъюгат по п. 10, где детектируемая метка включает флуоресцентную метку или хромогенную метку.
13. Многофункциональный иммуноконъюгат по п. 11, где антитело, которое связывается с маркером поверхности опухоли, относится к антителу, которое распознает антигены, отличные от глипикана-3, причем указанные отличные антигены включают EGFR, EGFRvIII, мезотелин, HER2, EphA2, Her3, ЕрСАМ, MUCl, MUC16, CEA, клаудин 18.2, фолатный рецептор, клаудин 6, WT1, NY-ESO-1, MAGE 3, ASGPR1 или CDH16.
14. Многофункциональный иммуноконъюгат по п. 10, где молекула, направленная на маркер поверхности иммунной клетки, представляет собой антитело, связывающееся с маркером поверхности Т-клетки, которое может образовывать бифункциональное антитело, активирующее Т-клетки, с антителом по любому из пп. 1-5.
15. Многофункциональный иммуноконъюгат по п. 14, где антитело, связывающееся с маркером поверхности иммунной клетки, представляет собой антитело против CD3.
16. Многофункциональный иммуноконъюгат по п. 15, где многофункциональный иммуноконъюгат представляет собой слитый пептид и дополнительно содержит линкерный пептид между антителом по любому из пп. 1-5 и связанной с ним функциональной молекулой.
17. Нуклеиновая кислота, кодирующая многофункциональный иммуноконъюгат по любому из пп. 10-16.
18. Применение многофункционального иммуноконъюгата по любому из пп. 10-16 для получения антинеопластического средства, или для получения средства для диагностики опухолей, которые экспрессируют глипикан-3; или для получения иммунных клеток, модифицированных химерным антигенным рецептором; предпочтительно, иммунные клетки включают Т-лимфоцит, NK (естественные киллеры)-клетку или NKT-лимфоцит.
19. Химерный антигенный рецептор, содержащий антитело по любому из пп. 1-5, где химерный антигенный рецептор содержит антитело по любому из пп. 1-5, трансмембранную область и внутриклеточную сигнальную область, которые последовательно связаны; при этом внутриклеточная сигнальная область выбрана из группы, состоящей из последовательностей внутриклеточной сигнальной области CD3ζ, FcεRIγ, CD27, CD28, CD137, CD134, MyD88, CD40 или их комбинации.
20. Химерный антигенный рецептор по п. 19, где трансмембранная область содержит трансмембранную область CD 8 или CD28.
21. Химерный антигенный рецептор по п. 19, где химерный антигенный рецептор содержит следующие последовательно связанные антитело, трансмембранную область и внутриклеточную сигнальную область:
антитело по любому из пп. 1-5, CD8 и CD3ζ;
антитело по любому из пп. 1-5, CD8, CD137 и CD3ζ;
антитело по любому из пп. 1-5, трансмембранная область молекулы CD28, внутриклеточная сигнальная область молекулы CD28 и CD3ζ; или
антитело по любому из пп. 1-5, трансмембранная область молекулы CD28, внутриклеточная сигнальная область молекулы CD28, CD137 и CD3ζ.
22. Химерный антигенный рецептор по п. 19, где антитело представляет собой одноцепочечное антитело или доменное антитело.
23. Химерный антигенный рецептор по п. 19, где химерный антигенный рецептор содержит:
SEQ ID NO: 49 или аминокислотную последовательность, представленную в положениях 22-346;
SEQ ID NO: 50 или аминокислотную последовательность, представленную в положениях 22-447;
SEQ ID NO: 51 или аминокислотную последовательность, представленную в положениях 22-491;
SEQ ID NO: 52 или аминокислотную последовательность, представленную в положениях 22-494;
SEQ ID NO: 53 или аминокислотную последовательность, представленную в положениях 22-536;
аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 85;
аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 86; или
аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 87.
24. Нуклеиновая кислота, кодирующая химерный антигенный рецептор по любому из пп. 19-23.
25. Экспрессионный вектор, содержащий нуклеиновую кислоту по п. 24.
26. Вирус, содержащий вектор по п. 25.
27. Применение химерного антигенного рецептора по любому из пп. 19-23, или нуклеиновой кислоты по п. 24, или экспрессионного вектора по п. 25, или вируса по п. 26 для получения генетически модифицированных иммунных клеток, направленных на опухоль, экспрессирующую глипикан-3.
28. Применение по п. 27, где опухоль, экспрессирующая глипикан-3, включает рак печени, меланому, светлоклеточный рак яичников, опухоль желточного мешка и нейробластому.
29. Генетически модифицированная иммунная клетка, которая трансдуцирована нуклеиновой кислотой по п. 24, или экспрессионным вектором по п. 25, или вирусом по п. 26; или имеет химерный антигенный рецептор по любому из пп. 19-23, экспрессируемый на ее поверхности.
30. Иммунная клетка по п. 29, дополнительно несущая экзогеннную кодирующую последовательность для цитокинов; и предпочтительно, цитокины включают IL-12, IL-15 или IL-21.
31. Иммунная клетка по п. 29, также экспрессирующая другой химерный антигенный рецептор, который не содержит CD3ζ, но содержит внутриклеточный сигнальный домен CD28, внутриклеточный сигнальный домен CD 137 или их комбинацию.
32. Иммунная клетка по п. 29, дополнительно экспрессирующая хемокиновый рецептор; и предпочтительно хемокиновый рецептор включает CCR2.
33. Иммунная клетка по п. 29, дополнительно экспрессирующая миРНК, которая может снижать уровень экспрессии PD-1, или белок, который блокирует PD-L1.
34. Иммунная клетка по п. 29, дополнительно экспрессирующая предохранитель; причем предохранитель предпочтительно включает индуцируемую каспазу-9, усеченный EGFR или RQR8.
35. Иммунная клетка по п. 29, где иммунная клетка включает Т-лимфоциты, NK-клетки или NKT-клетки.
36. Применение генетически модифицированной иммунной клетки по любому из пп. 29-35 для получения лекарственного средства, ингибирующего опухоль, при этом опухоль представляет собой опухоль, экспрессирующую глипикан-3.
37. Фармацевтическая композиция, содержащая антитело по любому из пп. 1-5 или нуклеиновую кислоту, кодирующую указанное антитело; или
иммуноконъюгат по любому из пп. 10-16 или нуклеиновую кислоту, кодирующую указанный конъюгат; или
химерный антигенный рецептор по любому из пп. 19-23 или нуклеиновую кислоту, кодирующую указанный химерный антигенный рецептор; или
генетически модифицированную иммунную клетку по любому из пп. 29-35.
